Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Разработка комплексной технологии получения высокоочищенного препарата эпидермального фактора роста на основе рекомбинантных штаммов Saccharomyces cerevisiae

Диссертация: Разработка комплексной технологии получения высокоочищенного препарата эпидермального фактора роста на основе рекомбинантных штаммов Saccharomyces cerevisiae
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Одним из наиболее часто используемых для этих целей микроорганизмов являются ЭассЬаготусез сегеу’Шае. В частности, получены реком-бинантные штаммы дрожжей, способные синтезировать и секретировать эпидермальный фактор роста человека (чЭФР) в культуральную жидкость. ЭФР — кислотоустойчивый и гидрофобный пептид с молекулярной массой около бкДа, является одним из ростовых факторов, обнаружен… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
  • 1. Пептидные ростовые факторы
    • 1. 1. Основные свойства ростовых факторов
      • 1. 1. 1. Бифункциональность
      • 1. 1. 2. Индукция синтеза других ростовых факторов
      • 1. 1. 3. Несколько мест синтеза ростовых факторов
      • 1. 1. 4. Связь с протоонкогенами
      • 1. 1. 5. Физиологическая роль в организме
    • 1. 2. Механизм действия
  • 2. Эпидермальный фактор роста
    • 2. 1. Физиологическая роль в организме в норме
    • 2. 2. Физиолоогическая роль ЭФР при патологии
  • 3. Методы получения высокоочищенного препарата
    • 3. 1. Структура ЭФР
    • 3. 2. Биотехнологические методы синтеза ЭФР
    • 3. 3. Основные способы выделения ЭФР
    • 3. 4. Использование аффинной хроматографии для получения и очистки ЭФР
  • 4. Увеличение продуктивности рекомбинантных штаммов З. сегеу'мае
    • 4. 1. Технология получения гетерологических протеинов в сегемз/ае
    • 4. 2. Питание и рост 5. сегемв/'ае
    • 4. 3. Повышение стабильности плазмид
  • МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
  • 1. Получение ЭФР-обогащенной фракции из подчелюстных желез мышей-самцов
  • 2. Очистка ЭФР хроматографией на биогеле и ИОХ
  • 3. Хроматографические методы очистки ЭФР-обогащенной фракции
  • 4. Культивирование рекомбинантных штаммов S. cerevisiae
  • 5. Получение ЭФР-обогащенной фракции из культуральной жидкости S. cerevisiae
  • 6. Иммунизация животных
  • 7. Определение титра антител против ЭФР в иммунной сыворотке
  • 8. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки иммунизированных животных
  • 9. Получение иммуносорбентов
  • 10. Выделение ЭФР из культуральной жидкости S. cerevisiae методами иммуносорбции
  • 11. Хранение рекомбинантных штаммов S. cerevisiae
  • 12. Обработка дрожжевых клеток ультразвуком
  • 13. Получение гидролизата казеина — компонента питательной среды
  • 14. Получение суспензий клеток различных слоев эпидермиса
  • 15. Гель-фильтрация
  • 16. Диск-электрофорез
    • 16. 1. Дисковый электрофорез по методу R.T.Swank
    • 16. 2. Дисковый электрофорез по Шелудько Н. С
  • 17. ВЭЖХ (аналитический вариант)
  • 18. Аминокислотный анализ
  • 19. Определение биологической активности ЭФР
    • 19. 1. in vivo
    • 19. 2. in vitro
  • 20. Определение включения меченных предшественников в клетках различных слоев эпидермиса
  • 21. Определение влияния ЭФР на репликативную активность клеток различных слоев эпидермиса
  • 22. Определение радиоактивности клеток
  • 23. Определение белка, ДНК, РНК, триптофана, свободных аминогрупп, статистическая обработка результатов
    • 23. 1. Определение белка
    • 23. 2. Определение ДНК
    • 23. 3. Определение РНК
    • 23. 4. Определение триптофана
    • 23. 5. Определение свободных аминогрупп
    • 23. 6. Статистическая обработка результатов
  • РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
  • 1. Методы выделения и очистки ЭФР
    • 1. 1. Характеристика препарата ЭФР, полученного из слюнных желез мышей-самцов
    • 1. 2. Характеристика препарата ЭФР, полученного из культуральной жидкости рекомбинантных штаммов S. cerevisiae с помощью хроматографической очистки
    • 1. 3. Характеристика препарата ЭФР, полученного с помощью аффинной хроматографии из культуральной жидкости рекомбинантных штаммов S. cerevisiae
    • 1. 4. Сравнение препаратов ЭФР, получаемых различными методами
  • 2. Влияние ЭФР на пролиферативную активность клеток различных слоев эпидермиса
  • 3. Особенности культивирования рекомбинантных штаммов S. cerevisiae
    • 3. 1. Культивирование рекомбинантных штаммов на среде Yeast Nitrogen Base (YNB) с Casein hydrolisate acids «Difco»
    • 3. 2. Влияние замены YNB на искусственно-композиционную среду
    • 3. 3. Замена Casein hydrolisate acids «Difco"Ha гидролизат казеина
    • 3. 4. Сравнение способов культивирования между собой
  • 4. Поддержание и хранение рекомбинантных штаммов З. сегеу/з/'ае
    • 4. 1. Периодические пересевы
    • 4. 2. Хранение при различных температурных режимах
    • 4. 3. Хранение под глицерином или вазелиновым маслом
    • 4. 4. Сравнение способов хранения между собой

Разработка комплексной технологии получения высокоочищенного препарата эпидермального фактора роста на основе рекомбинантных штаммов Saccharomyces cerevisiae (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. В последние годы большой интерес для практической медицины вызывают работы, направленные на изучение ростовых факторов пептидной природы, которые специфически стимулируют синтез ДНК и пролиферацию клеток. Имеющиеся в литературе данные позволяют предполагать, что лекарственные препараты на основе пептидных ростовых факторов могли бы найти широкое применение в качестве ранозаживляющих средств. Кроме того, обнаруженная бифун-кциональность некоторых из них, то есть способность, с одной стороны, стимулировать рост нормальных клеток, а с другой — тормозить пролиферацию трансформированных, предполагает возможность получения на их основе противоопухолевых препаратов.

В настоящее время основным способом получения веществ пептидной природы являются биотехнологические методы. Получаемые с помощью генной инженерии штаммы микроорганизмов продуцируют реком-бинантные белки и пептиды, такие как инсулин, гормон роста, интерлей-кин, ростовые факторы и т. д.

Одним из наиболее часто используемых для этих целей микроорганизмов являются ЭассЬаготусез сегеу’Шае. В частности, получены реком-бинантные штаммы дрожжей, способные синтезировать и секретировать эпидермальный фактор роста человека (чЭФР) в культуральную жидкость [59]. ЭФР — кислотоустойчивый и гидрофобный пептид с молекулярной массой около бкДа, является одним из ростовых факторов, обнаружен в некоторых тканях человека и животных и играет важную роль в поддержании нормального гомеостаза организма. Однако, несмотря на то, что в нашей стране также получены рекомбинантные штаммы Э. сеге//5/ае — продуценты чЭФР, до настоящего времени комплексной технологии получения этого пептида не разработано.

В связи с этим целью настоящей диссертации явилась разработка научно-методических основ универсальной комплексной технологии получения пептидов с использованием рекомбинантных штаммов-продуцентов 5. сегеу’Шае на примере эпидермального фактора роста человека. В задачи настоящего исследования вошли:

1. Отбор наиболее продуктивных дрожжевых рекомбинантных штаммов-продуцентов чЭФР в качестве биотехнологического средства производства.

2. Определение параметров экзогенной биорегуляции микроорганизмов-продуцентов, адаптация на этой основе процессов культивирования и оптимизация состава питательной среды.

3. Разработка способов хранения и консервации рекомбинантных штаммов 8. се№ 181ае, обеспечивающих высокий уровень их секретирующей способности.

4. Разработка методов выделения и очистки чЭФР;

5. Исследование биологической активности получаемого пептида и его стандартизация.

Научная новизна исследования состоит в комплексном подходе к технологии получения пептида, включающем оптимизацию условий культивирования, хранения, консервации рекомбинантных штаммов сегеч-з1ае, оригинальные методы выделения, фракционирования, очистки и стандартизацию чЭФР. Подобраны среды, обеспечивающие увеличение скорости роста и продуктивности штаммов З. сегеи/'з/ае. Разработан способ выделения чЭФР, позволяющий сократить число стадий очистки и увеличить выход пептида (Патент РФ № 2 108 343). Впервые с помощью методики на клеточном уровне показана способность ростового фактора увеличивать пролиферативную активность только стволовых базальных клеток эпидермиса.

Практическая значимость. Разработана универсальная комплексная технология получения препарата эпидермального фактора роста человека на основе оптимизации условий культивирования, хранения, консервации рекомбинантных штаммов 5. сегемгё/ае, оригинальных методов выделения, фракционирования, очистки и стандартизации ростового фактора. Предлагаемые научно-методические подходы могут быть использованы для получения широкой номенклатуры пептидов. Разработан лабораторный регламент, позволяющий получать чЭФР в препаративных количествах со степенью чистоты, соответствующей мировым стандартам, что открывает возможности для создания на его основе лекарственных и диагностических средств нового поколения.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

выводы.

1. Проведенный микробиологический и биохимический скрининг 24 рекомбинантных штаммов ЗассЬаготусеэ сегеч’тае позволил отобрать 5 наиболее продуктивных и стабильных штаммов-продуцентов, секретирую-щих 1−2мг чЭФР на л культуральной жидкости.

2. Установлены параметры экзогенной биорегуляции рекомбинантных штаммов & сегеу’мае в процессе глубинного культивирования. Показано, что наибольший выход рекомбинантного пептида наблюдается в середине логарифмической фазы роста. Оптимизирован состав питательной среды, позволяющий увеличить выход чЭФР штаммами-продуцентами в среднем в 2,5 раза.

3. Предложены способы консервации и хранения штаммов-продуцентов рекомбинантного пептида в течение длительного времени под 15% раствором глицерином или вазелиновым маслом при 4−5^С с периодическими пересевами (1 раз в два года), обеспечивающие сохранение их секретирующей способности.

4. Разработаны два метода выделения и очистки эпидермального фактора роста человека из культуральной жидкости рекомбинантных штаммов Я сеге^Шае, позволяющие получать биологически активный пептид со степенью чистоты не менее 99% как с помощью хроматографи-ческих процедур, так и с использованием методов иммуносорбции.

5. Отработаны методы стандартизации рекомбинантного чЭФР, включающие в себя аминокислотный анализ, диск-электрофорез в ПААГ, аналитический вариант ВЭЖХ, определение биологической активности.

6. Создана оригинальная методика оценки активности чЭФР с помощью биотест-системы на клеточном уровне. Установлена способность чЭФР увеличивать метаболическую активность базальных клеток и необходимое время контакта клетки-мишени с биологически активным веществом для запуска пролиферативного процесса.

7. Разработан и апробирован лабораторный регламент получения чЭФР. На основе проведенных исследований предложены научно-методические подходы, позволившие разработать комплексную технологию получения и оценки высокоочищенных пептидов на примере рекомбинант-ного эпидермального фактора роста человека.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Интерес, вызванный к ростовым факторам в последние годы, как веществам, влияющим на многие физиологические процессы организма человека, послужил отправным моментом для множества работ, направленных на получение, выделение очистку, описание биологических свойств и далее на создание биотехнологических источников данных белков. Несомненно, одним из наиболее известных ростовых факторов является эпидермальный фактор роста, пептид, обладающий широким спектром действия на большинство органов и тканей человека, включая общеизвестные — ускорение открытия глаз и прорезывания зубов у новорожденных мышей, снижение секреции желудочных кислот и ускорение регенерации эпидермиса. Изменение концентрации этого вещества в тканях и биологических жидкостях, а также связь рецептора биологически активного пептида с протоонкогенами, все эти свойства достаточно привлекательны для того, чтобы не прекращались попытки создания на основе ЭФР лекарственных и диагностических средств. Данная работа, а именно разработка комплексной технологии получения высокоочищеннного препарата фактора роста эпидермиса на основе рекомбинантных штаммов сеге^мае призвана обеспечить достаточное количество фактора роста для исследований такого рода.

На первом этапе работы был отработан метод получения ЭФР из подчелюстных желез мышей-самцов. Проверена биологическая активность ростового фактора в культуре фибробластов. Получаемый препарат по всем исследуемым параметрам соответствовал аналогичным характеристикам, описанным для высокоочищенного ростового фактора в литературе. Данный пептид служил этанолоным образцом при разработке методов выделения и очистки ЭФР из культуральной жидкости рекомбинантных штаммов, а также был использован для иммунизации кроликов.

На следующем этапе был разработан метод получения рекомби-нантного ЭФР из культуральной жидкости с помощью хроматографичес-ких процедур. Этот метод состоял из следующих этапов: очистки на колонке с С-18 силикагелем супернатанта, отделенного от биомассы центрифугированиемВЭЖХ и рехроматографии ЭФР-содержащей фракции в обращенной фазе в изократическом режиме. Обладая определенными недостатками — трудоемкостью и дорогостоимостью, тем не менее данный способ позволяет получать биологически активный ЭФР (выход 85%) со степенью чистоты 99%.

Для уменьшения числа стадий, а следовательно и трудоемкости был разработан альтернативный метод для выделения и очистки чЭФР на основе иммуносорбции. В этот метод входили два основных этапа: -приготовление иммуносорбента и собственно сам процесс выделения и очистки рекомбинантного пептида. Иммунизация кроликов ЭФР, выделяемым как из подчелюстных желез мышей, так и, из культуральной жидкости рекомбинантных штаммов хроматографическим методом, позволила получить поликлональные антитела, которые после очистки были иммобилизованы на нерастворимом матриксе. Дальнейшие опыты показали, что присоединенные к сефарозе иммуноглобулины сохраняли свою специфическую связывающую активность, что позволило использовать полученный таким образом иммуносорбент для выделения и очистки чЭФР из культуральной жидкости в одну стадию. К недостаткам этой схемы можно отнести наличие длительного этапа приготовления иммуносорбента. Вместе с тем данный метод позволяет во-первых, значительно упростить способ очистки пептида, во-вторых — получать высокоочищенный биологически активный чЭФР (степень очистки не менее 99%) — и наконец — рекомендовать этот метод для выделения ростового фактора практически из любых источников.

Известно, что конечный выход продукта зависит не только от способа его получения, но также от штамма-продуцента. В связи с этим на следующем этапе работы было исследовано влияние различных питательных сред на жизнеспособность, скорость роста, сохранение плазмидсо-держащих клеток и уровень секреции чЭФР. Разработан метод получения одного из компонентов питательной среды — гидролизата казеина. Замена Casein hydrolisate acids («Difco») на получаемый гидролизат казеина позволила повысить продуктивность рекомбинантных штаммов, что связано, как отмечалось в литературе [51], с неоднозначным влиянием Casein hydrolisate acids на способность клеток синтезировать рекомбинантный продукт. В процессе работ были отобраны наиболее продуктивные дрожжевые штаммы.

Важным этапом работы с микроорганизмами является необходимость поддержания их способности секретировать ЭФР. Исследованы различные способы сохранения и консервации штаммов S. cerevisiae. Оптимальным методом был признан метод длительного хранения культур под глицерином или вазелиновым маслом при 4−5^С. Данный способ консервации позволяет сохранять рекомбинантные штаммы практически без потери их свойств уже в течение 5 лет.

Предполагаемая возможность использования ЭФР в качестве рано-заживляющего препарата являлась одной из причин исследования этого пептида на пролиферативную активность клеток различных слоев эпидермиса. Отработана методика получения фракций эпидермальных клеток, что позволило изучить их метаболическую активность. Отмечено сохранение способности к репликации ДНК лишь у базальных клеток. При изучении влияния ЭФР на способность клеток, находящихся на разных этапах дифференцировки, к активации синтеза было установлено, что, во-первых, ростовой фактор может стимулировать репликацию ДНК только в стволовых клетках, не утративших способность к пролиферативной активностии во вторых контакт биологически активного вещества с клеткой-мишенью необходимый для запуска пролиферативной активности должен быть не менее трех часов.

В результате проведенных исследований разработана следующая схема технологического процесса получения пептидов:

Схема технологического процесса получения пептидов на примере чЭФР.

Показать весь текст

Список литературы

  1. И.П., Голубев В. И. Методы выделения и идентификации дрожжей М.: Пищевая промышленность, 1979. 120С.
  2. Н.Б., Альтман И. Б., Луценко C.B., Смирнов В. А., Назимов И. В., Эшкинд Л. Г., Ситегина Е. А., Ажаев A.B. Секреция в периплазму ре-комбинантного эпидермального фактора роста человека в клетках Е. coli // Биорг.Химия. 1992. Т.18. С.767−776.
  3. Бем Э. Двойная радиальная иммунодиффузия по Ухтерлони // Иммунологические методы / ред. Х.М.Фримель- пер. с нем. А.Н.Маца- под ред. М. А. Фроловой М.:"Мир", 1979. С.31−37.
  4. Благосклонный М. В. Факторы роста и клеточные механизмы поведения доброкачественных и злокачественных опухолей и нормальных тканей // Успехи современной биологии, 1991. Т.111. № 2. С.260−275.
  5. H.H. Интерлейкин 1: закономерности синтеза, биологическая активность//Успехи современной биологии. 1988. Т. 106. № 1(4). С. 102−114.
  6. Т., Гергей Я. Гидролиз пептидов и белков // Аминокислоты, пептиды и белки / ред. Р. С. Незлин М.:"Мир", 1976. 364С.
  7. Л.В., Чередеев А. Н. Итоги науки и техники. Иммунология. 1.27: Межрегуляторная роль моноцитов в норме и при иммунопатологии. М.: ВИНИТИ. 1991. 220С.
  8. М.И. Роль инсулина и инсулинподобных ростовых факторов в стимуляции синтеза белка и нуклеиновых кислот // Успехи современной биологии. 1988. Т.106. № 2(5). С.226−238.
  9. Э.Г., Карманов М. И. Новый способ иммунизации животных // Авт. свидетельство № 1 018 643 МКИ А61 К 39/395 1981.
  10. С.И., Стойка P.C. Молекулярные механизмы в действии полипептидных факторов роста М.:"Наука", 1985. 240С.
  11. Н.Е., Герштейн Е. С. Клинические перспективы исследования рецепторов эпидермального фактора роста в опухолях человека // Клин.лаб.диагностика. 1996. № 1. С.9−12.
  12. Г. Ф. Биометрия М.:"Высшая школа", 1980. 190С.
  13. М.С., Арцимович Н. Г. Интерлейкины как биологически активные полифункциональные молекулы // Успехи современной биологии. 1991. Т.111. Вып.1. С.34−47.
  14. М.С., Майский И. Н. Система лимфокинактивированных киллеров // Вопр. онкологии. 1988. T.XXXIY. № 2. С. 140−150.
  15. Т.К., Голубева С. Ф., Евстигнеева Р. П. Способ получения белкового гидролизата-Авт.свидетельство № 294 828 МКИ С07 В 7/00 1979
  16. H.H., Сорокин А. Д., Сорокин А. Б. Эпидермальный фактор роста Л.:"Наука" Ленингр. отд-ние, 1987. 200С.
  17. Л.А. Аминокислотный анализ // Хроматография белков и нуклеиновых кислот М.:"Наука", 1985. С.515−527.
  18. Ю.М. Факторы роста, вторичные мессенджеры и онкогены //Успехи современной биологии, 1991. Т.111. Вып.1. С.19−33.
  19. С.М., Никитина З. К., Кушелевская И. М. Тест-система контроля за биотехнологическим производством ЭФР из рекомбинантных штаммов //Биомедицинские технологии, 1996. Вып. № 36. С.43−47.
  20. P.C., Кусень С. И. Трансформирующие факторы роста //Успехи современной биологии, 1988. Т.106. Вып.1 (4). С.69−84.1."71./
  21. А. Колориметрические методы определения ДНК, РНК и белка // Методы вирусологии и молекулярной биологии / ред. К. Хабель и Н. П. Салзман М.:"Мир", 1972. С. 184−193.
  22. Н.С. Белковый состав микрофибрил кролика, определенный методом диск-электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия // Цитология, 1975. Т. 17. № 10. С.1148−1154.
  23. С.В. Цитокины плаценты в регкуляции иммуноэндокринных процессов при беременности // Успехи современной биологии, 1994. Т.114. № 2. С.223−239.
  24. И.А. Фактор некроза опухоли как полипептидный фактор роста //Успехи современной биологии, 1993. Т. 113. № 5. С.617−625.
  25. В.И. Макрофаги: новая функция рострегулирующая // Успехи современной биологии, 1990. Т. 109. № 1. С. 106
  26. Adachi Н., Kurachi Н., Homma Н., Adachi К., Imai Т., Sakata М., Matsuza-wa Y., Miyare A. Involvement of EGF in inducing adiposity of aged female mice //J.Endocrinol., 1995. V.146. N3. P.381−393.
  27. Axen R., Porath J., Ernback S. Chemical coupling of peptides and proteins to polysaccharides by means of cyanogen halides//Nature, 1967.V.214. P.1302.
  28. Balakrishnan C. Topical application of epidermal growth factor // Plast. Re-constr.Surg., 1995. V.98. N1. P.185.
  29. Barr P.J., Power M.D., Lee-Ng C.T., Gibson H.L., Luciw P.A. Expression of active human immunodeficiency virus reverse transcriptase in Saccharomyces cerevisiae //Bio.Technology, 1987. V.5. N5. P.486−489.
  30. Вагу B.M., Shu M.A., Zhang X., Kennedy T.G. Regulation of rat endometrial stromal cell urokinase type plasminogen activator (UPA) saecretion by epidermal growth factor// Biol.Reprod., 1996. V.54. S1. P.80.
  31. Baulida J., Kraus M.H., Alimandi M., DiFiore P.P., Carpenter G. All ERBB receptores other EGFR are endocytosis impaired // J.Biol.Chem., 1996. V.271. N9. P.5251−5257.
  32. Bell G.Y. Hibrid DNA synthesis of epidermal growth factor Пат.4 783 412 США. МКИ C12N5/00- Заявл. 3.06.87- Опубл. 8.11.88.
  33. Bernardini N., Bianchi F., Lupetti M., Dolfia A. Immunohistochemical localisation of epidermal growth factor, transforming growth factor type a and their receptor in the human mesonephros and metanephros // Dev.Dynam., 1996. V.206. N3. P231−328.
  34. Bhartiya D., Sklarsh J.W., Maheshwari R.K. Interferon and interferone inducer (poly l: C) enhance wound healing in mice and rats // J.Biochem., 1991. V.15. Suppl.15f. P.494.
  35. Brown G.L., Curtsinger L.lll., Brightwell J.R. Enhancement of epidermal regeneration by biosynthetic epidermal growth factor // J.Exp.Med., 1986. V.163. P.1319.
  36. Brown G.L., Nanney L.B., Griffen J. Enhancement of wound healing by topical tratment with epidermal growth factor// N.Engl.J.Med., 1989. V.321. P.76.
  37. Brzozowski Т., Konturek S.J., Pytko-Polonczyk J. Capsaicin-sensetive neurous interact with epidermal growth factor on healing of acute gastric lesions in rats // Gastroenty., 1996. V.110.N4. A71.
  38. Buret A., Hardin J.A., Olson M.E., Chin A., Gall D.G. Effects of oraly administrated epidermal growth factor during E. coli infection in rabbits // Gastroenty., 1996. V.110. N4. A793.1."i CI I i Zr
  39. Burgess A.W., Lloyd C.J., Nice E.C. Murine epidermal growth factor hete-rogenity on high resolution exchange chromatography // EMBO J., 1983. V.2. P.2065−2069.
  40. Burton K. Stady of conditions and mechanism of the difenilamine reaction for the colorimetric estimation of deoxyribonucleic acid // Biochem.J., 1956. V.62. N2. P.315−323.
  41. Bussineau C.M., Shuster J.R. Genetic stability of pritein expression systems in yeast // Dev.Biol.Stand., 1994. V.83. P.13−19.
  42. Calabro A., Milani S., Paladini I., Orsini B., Savadori. G., Surrenti C. Role of epidermal growth factor in peptic ulcer healing // Dig.Dis.Sci., 1995. V.40. N11. P.2497−2504.
  43. Callegari C. Amniotic fluid epidermal growth factor may be a marker for fetal renal function // Pediat.Res., 1995. V.37. N4. A198.
  44. Carpenter G. Regulation of epidermal growth factor receptor activity during the modulation of protein synthesis //J.Cell.Physiol., 1979. V.99. P.101−106.
  45. Caruso A., Cutuli V.M.C., de Bernardis E., Amico-Roxas M. Protective action of epidermal growth factor and A fraction from Triticum vulgare extract in mouse tail necrosis//Pharmacology Lett., 1997. V.60. N11. P. L175-L180.
  46. Chen Y.P., Kirk N., Piper P.W. Effects of medium composition on Mf-alpha-1 promoter directed secretion of a small protease inhibitor in Saccharomyces cerevisiae batch fermentation // Biotechnol.Lett., 1993. V.15. N3. P.223−228.
  47. Cohen I.K., Crossland M.C., Garrett A., Diegelmann R.F. Topical aplication of epidermal growth factor onto partial thikness wounds in human volunteers does not enhance reepithelization // Plastic and Reconstructive Surgery, 1995. V.96. N2. P.251−254.
  48. Cohen S., Carpenter G. Human epidermal growth factor: isolation and chemical and biological properties /7 Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1975. V.72. P.1317−1321.
  49. Coppella S.J., Dhuriati P. a-factor directed expression of the human epidermal growth factor in Saccharomyces cerevisiae // Biotechnology and Bioingeneering, 1989. V.33. N7. P.976−983.
  50. Dagogo J.S. Salivary epidermal growth factor concentration in thyrotoxicosis // Nutrit., 1995. V.11. N5. P.643−645.
  51. Dagogo J.S. Epidermal growth factor (EGF) in human saliva: effect of age, sex, race, pregnancy and sialogogue // Scand.J.Gastroenterol., 1986. V.124. Suppl. P.47−54.
  52. DeCicco L.A., Panzeter P.L., Cashman R.E., Ringer D.P. Changes in the binding capacity of hepatic membranes for EGF during multistage hepato-carcinogenesis in rats // Bioc.Biop.R., 1996. V.228. N1. P.69−74.
  53. Deuel T.F. Polypeptide growth factors roles in normal and abnormal cell growth//Annual. Rev. Cell. Biol., 1987. V.3. P.443−492.
  54. Doolittle R.F., Hunkapiller M.W., Hood L.E., DeVare S.G., Robbins K.C., Aaronson S.A., Antoniades H.N. Simian sarcoma virus one gene, v sis, is derived from the gene (or genes) encoding a platet derived growth fawctor // Science, 1983. V.221. P.275.
  55. Dvorak D.W., Abbas G., Ali T., Stevenson S., Welling B. Repair of chronic tympanic membrane perforation with long-term epidermal growth factor // Laryngoscop, 1995. V.105. N12. P. 1300−1304
  56. Ebert M., Friess H., Korc M., Buchler M.W. Altered expression of the human epidermal growth factor (her) family in acute pancreatits suggests a prominent role for her-1 // Gastroenty., 1995. V.108. N4. P. A351.
  57. Ebisu S., Takagi H., Kadawaki K., Yamagata H., Udaka S. The efficient of human epidermal growth factor by Bacillus brevis // Ann.NY.Acad., 1996. V.782. P.115−122.
  58. Farriol M., Schwartz S. Epidermal growth factor: is its application in nutrition feasible? // Nutr. Hosp., 1995. V.12. N2. P.69−73.
  59. Fieschko J.C., Egan K.M., Ritch T., Koski R.A., Jones M., Bitter G.A. Controlled expression and purification of human immune interferon from high cell density fermentation of Saccharomyces cerevisiae II Biotechnol.Bioing., 1987. V.29. N9. P.1113−1121.
  60. Fisher D.A. Epidermal growth factor in the developing mammal // Mead. Johnson.Symp.Perinat.Dev.Med., 1988. V.32. P.33−40.
  61. Fries G., Perneczky A., Kempski O. Glioblastoma associated circulating monocytes and the realease of EGF // J. Neurosurgery, 1996. V.85. N4. P.642−647.
  62. Fuse Y., Mizuno I., Sakamoto M., Katayama T. Epidermal growth factor in urine from patients with urothelial tumours // Urol.Int., 1992. V.48. P.261−264.
  63. Girdler N.M., McGrurk M., Aquals S., Prince M. The effect of epidermal growth factor mouthwash on cytotoxic induced oral ulceration -aphase-1 clinical trial//Am.J.CI.Onc., 1995. V.18. N5. P.403−406.
  64. Goodlad R.A., Playford R.J. Epidermal growth factor and intestinal growth // Gastroenty., 1995. V.108. N4. P.1330
  65. Gopal C.V., Broad D., Lloyd D. Bioenergetic consequences of protein overexpression in Saccharomyces cerevisiae // Appl.Microbiol.Biotechnol., 1989. V.30. N2. P.160−165.
  66. Gow C.B., Phillips P.A., Chandler K.D., Moore G.P. Hormonal, fluid and electrolyte responses of sheep during chronic intravenous infusion of epidermal growth factor//Am.J.Physiol., 1993. V.265. R203−210.
  67. Grant S.L., Gow C.B., Phillips P.A. Action of EGF on circulatory homeostasis in rat// Kidney Int., 1996. V.50. N4. P.1392.
  68. Grau M., Tebar F., Ramirez I., Soley M. EGF administration decreases liver glycogen and causes mild hyperglycaemia in mice // Biochem.J., 1996. V.315. part.1. P.289−293.
  69. Gresik E.W. The granular convoluted tubule (GCT) cell of rodent submandibular glands//Microsc.Res.Tech., 1994. Jan. V.27. N1. P.1−24.
  70. Gumucio J., Feldkamp C., Bernstein I.A. Studies on localization of «histi-dine rich peptide material present in epidermis of new born rat // J.Invest. Dermatol., 1967. V.49. N6. P.545−551.
  71. Gustafsson M.K.S. Never ending growth and GF2 Icytoche evidence for the presence of epidermal growth factor in tapeworm // Hydrobiol., 1995. V.305. N1−3. P.229.
  72. Guzman K. Epidermal growth factor regulates expression of the mucous phenotype of rat tracheal epitelial cells // Bioc.Biop.R., 1995. V.217. N2. P.412−418.
  73. Harper R.A., Piercr J., Savage C.R. Purification of human epidermal growth factor by monoclonal antibody affinity chromatography // Methods in enzimolo-gy, 1987. Academic Press.Inc. V.146. P.3−11.
  74. Hissey P.H., Tompson K.J., Bawden I. Single-step monoclonal antibody affinity purification of human urogastrone from urine // J.Immunol.Methods., 1985. V.78. P.211−216.
  75. Hjelm H., Hjelm K., Sjoquist J. Protein A from Staphilococcus aureus. Its isolation and its use as an immunosorbent for isolation of immunoglobulins // FEBS Letters, 1972. V.28. N1. P.73.
  76. Hodgson J. Expression systems a users guide // Bio. Technoiogy, 1993. V.11. N8. P.887−893.
  77. Hoilenberg M.D., Gregory H. Epidermal growth factor urogastrone: biological activity and receptor binding of derevatives // J.Mol.Pharmacol., 1980. V.17. P.314−320.
  78. Holiiaay L.A., Savage C.R., Cohen S., Pueit D. Conformation and folding thermodynamics of epidermal growth factor and derivatives // J. Biochemistry, 1976. V. I5. P.2624−2633.
  79. Horn M.J., Jones D.B. A rapid colorimetric method for the determination of tryptophane in proteins and food //J. Biol. Chem., 1945. V.157. N1. P.153−160.
  80. Huang J.C., Papasakelarion C., Dawood M.Y. Epidermal growth factor and basic fibroblast growth factor in peritoneal fluid of women with endometriosis.// Fert.Sterii., 1996. V.65. N5. P.931−934.
  81. Ichikawa K., Komiya K., Suzuki K., Nakahara T., Jigami Y. The effects of culture conditions on the secretion of human iysozyme by Saccharomyces cerevisiae 11 Agric. Biol. Chem., 1989. V.53. N10. P.2687−2694.
  82. Imanishi H., Scaly W.E., Campbell D.F.Jr. FNO-(3 alters the cytotoxic effect of hydrogen peroxide in cultured hepatocytes // Bioch.Biophys.Res. Com., 1997. V.230. N1. P.120−125.
  83. Janz D.M., Vanderkraak G. Supression of apoptose by gonadotropin. 17-beta-estradiol and epidermal growth factor in rainbow trout preovulatory ovarin follicles // Gen.Comp.Endocrinol., 1997. V.105. N2. P.186−193.
  84. Jaworek J., Konturek S.J., Bieianski W., Biiski J., Hladij M. Release and binding of epidermal growth factor in the pancreas of rats // int.J.Pancreatoi., 1992. Feb. V.11. N1. P.9−17.
  85. Jin K.H., McCarey B.E., Schultz G.S. In vivo fluoremetric measurment of epidermal growth factor-FiTC binding to rabbit corneas // Inv.Ophtal.Vis.Sci., 1995. V.36. N4. P.800.
  86. Jones D.E., Tranpatterson R., Cui D.M., Davin D., Estell K.P., Miller D.M. Epidermal growth factor secreted from salivary gland is necessary for liver re-generation//Am.J.Physiol.Gastrintest.LiverPhysiol., 1995. V.31. N5. G872-G878.
  87. Jones R.P., Gadd G.M. Ionic nutrition of yeast physiological mechanisms involved and implications for biotechnology // Enzyme Microb.Tecchnol., 1990. V.12. N6. P.402−418.
  88. Juhl C.O. Epidermal growth factor as adjunctive treatment in relation to sclerothrapy in the esophagus an experimental studu in minipigs // Dan.Med. B., 1996. V.43. N3. P.286
  89. Jung K.H., Park M.H., Moon H. M., Rhee J.S. Production of the hepatitis B surfase antigen by recominant Saccharomyces cerevisiae II Biotechnol.Lett., 1991. V.13. P.857−862.
  90. Kajikama K., Yasui H., Sumigoshi H., Nakayama H., Ayhaw A., Yokozaki H., Ito N., Tahara E. Expression of epidermal growth factor in human tissues // Virchows Archiv A Pathol.Anat., 1991. V.418. P.27−32.
  91. Kato M., Jackler R.K. Repair of chronic Tympanic membrane perforation using epidermal growth factor // Otolaringol. Head Neck Surg., 1996.
  92. Kelly E.J., Newell S.J., Jackson P., Grey S.F. Does insulin like growth factor mediate epidermal growth factor induced growth retardation in human? // Gastr., 1996. V.110. N4. A810.
  93. Kikuchi M. and Ikehara M. Conformational features of signal seqences and folding of secretory proteins in yeasts // Trends Biotechnol., 1991. V.9. N6. P.208−211.
  94. Kissmeyernieisen P., Vinter-Jensen L, Smerup M. Effect of long term epidermal growth factor treatment on the normal rat colon // Gut, 1996. V.38. N4. P.582−586.
  95. Kiyohara Y., Komada F., Iwakawa S. improvement in wound healiing by epidermal growth factor (EGF) ointment: II Effect of protease inhibitor, nafa-mostat. one stabilization and effieacy of EGF in burn // J.Pharmacobiodyn., 1991. V.14. P.47.
  96. Kobayashi R., Reeve J.R., Walsh J.H. Isolation and partial characterization of canine epidermal growth factor (urogastrone) // Biochem.J., 1985. V.229. P.611−619.
  97. Koch J.H., Fifis T., Bender V.J., Moss B.A. Molecular species of epidermal growth factor carrying immunosuppressive activity // J.Cell.Biochem., 1984. V.25. P.45−59.
  98. Komoriya A., Hortsch M., Meyers C., Smith M., Kanety H., Shlessenger J. Biologically active synthetic fragments of epidermal growth factor: localization of major receptore-binding region // Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1984. V.81. P. 1351−1355.
  99. Konturek P., Brzozowski T., Ernst H., Drozdowich D., Ihim A., Konturek S.J., Hahn E.G. Expression of epidermal growth factor and transforming growth factor type a during ulcer heaiing time sequence study // Gastroenty., 1996. V.110. N4. A160.
  100. Konturek P.C., Brzozowski T., Majra J., Slivovski Z., Ernst H., Hahn E.G., Konturek S.J. Expression of epidermal growth factor and transforming growth factor type a during recovery from stress damage // Gastroenty., 1996. V.110. N4. A813.
  101. Konturek P.C., Dembinski A., Ernst H., Warzecha Z., Konturek S.J., Hahn E.G. Transforming growth factor type |31 and epidermal growth factor in cerulin induced pancreatits in rat // Gastroenty., 1996. V.110. N4. A407.
  102. Kotula L., Curtis P.J. Evalution of foreign gene codon optimization in yeast: expression of a mouse Ig kappa chain // Bio/Technology, 1991. V.9. N12. P.1386−1389.
  103. Lajas A.I., Pozo M.J., Salido G.M., Singh J., Pariente J.A. Secretory activity and trophic effects of EGF in the rat pancreas // Arch.Phys.B., 1996. V.104. N3. P.293−299.
  104. Lanfranco L., Santucci L., Calabro A., Orsini B., Federici B., Morelli A. EGF modulates pepsinogen secretion in guinea pig gastric chief cells // Gastroenty., 1996. V.11. N4. P.945−958.
  105. Lee Y.P., Tarahashi T. An improved colorimetric determination of amino acids with the use ninhydrin //Anal. Biochem., 1966. V.14. N1. P.71−76.
  106. Lindegaard T.C., Vinter-Jensen L., Overgaard T. Effect of epidermal growth factor (EGF) on acute radiation damage to mouse intestine and epidermis in vivo // Eur.J.Cancer, 1995. V.31A. Suppl.5. N828. P. S173.
  107. Malkovsky M., Soudel P.M., Strober W., Dalglush A.G. Interleukins in acquired disease//Clin, and Exper.lmmunol., 1988. V.74. N2. P.151−161.
  108. Mann N.S., Brawn P.N., Weaver B. Angigenesis and histologic severity in acute erosive gastrits: effect of epidermal growth factor // Gastroenty., 1996. V.110. N4. A185.
  109. Masui H., Kawamoto T., Sato J.D., Wolf B., Sato G., Mendelson J. Growth inhibition of human tumor cells in athymic mice by anti-epidermai growth factor receptor monoclonal antibodies // Cancer Res., 1984. V.44. P.1002−1007.
  110. Masuyama H., Hiramats. Y., Kudo T. Effect of epidermal growth factor on placental amino acid transport and regulation of epidermal growth factor receptor expression of hepatocyte in rat // J.Perin.Med., 1996. V.24. N3. P.213−220.
  111. Matoitsy A.G. Keratinization// J.invest.Dermatol., 1976. V.67. N1. P.20−25.
  112. Matrisian L.M., Larsen B.R., Finch J.S., Magun B.E. Further purification of epidermal growth factor by HPLC // Anai.Biochem., 1982. V.125. P.339−351.
  113. Mattiia A.L., Perheentupa J., Salmi J., Viinikkal L. Human epidermal growth factor in urine, but not in saliva and serum, depend on thyroid state // Life Sci., 1987. V.41. N25. P.2739−47.
  114. McCuskey R.S., Nishida J., McDonnell D., Williams C., Koldovsky O. Effect of milk- borne epidermal growth factor on hepatic microcirculation and kupffer cell function in suckling rats // Biol.Neonat., 1997. V.71. N3. P.202−206.
  115. Meiion J.K., Cook S., Chambers P., Neal D.E. Transforming growth factor type a and epidermal growth factor levels in bladder cancer and their relationship to epidermal growth factor receptor // Br.J.Cane., 1996. V.73. N5. P.654−658.
  116. Mooney D.J., Kaufmann P.M., Sano K., Schwerideman S.P., Majahod K., Schoo B., Vacanti J.P., Langer R. Localized delivery of epidermal growth factor improves the survival of transplanted hepatocytes // Biotech.Bio., 1996. V.50. N4. P.422−429.
  117. Moor S., Stein W.H. Chromatorgafic determination of amino acids by the use of automathic recording equipment // Methods in enzymology, 1963. V.6. P.819−831.
  118. Mount C.D., Lukas T.J., Orth D.N. Purification and characterization of epidermal growth factor (p-urogastron)and epidermal growth factor fragments from large volumes of human urine // Arch.Biochem.Biophys., 1985. V.240. P.33−42.
  119. Nascimento C.G., Gyenes A., Halloran M.S., Merryweather J., Valenzuela P., Stkimer V.S., Masianz F.R., Randolph A. Characterization of recombinant human epidermal growth factor in yeast // J.Biochem., 1988. V.27. P.797−802.
  120. Nexo E., Hansen H.F. Binding of epidermal growth factor from man. rat and mouse to the human epidermal growth factor receptor // J.Biochem. Biophys.Acta., 1985. V.843. P.101−106.
  121. Niall M., Ryan G.B., CTBrein B.M. The effect of epidermal growth factor on wound healing in mice //J.Surg.Res., 1982. V.33. P.164.
  122. Ohlsson B., Jansen C., Ihse I. Epidermal growth factor induces cell proliferation in mouse pancreas and salivary glands II Pancreas., 1997. V.14. N1. P.94−98.
  123. Okamoto S., Yoshikawa K., Obata Y., Shibuya M., Aoki S., Yoshida J., Takahashi T. Monoclonal antibody aganist the fusion juncton of a deletion-mutant EGFR // Br.J.Canc., 1996. V.73. N11. P.1366−1372.
  124. Pawlik W.W., Sendur R., Czarnobilsri K., Biernat J., Brzozowski T., Konturek S.J. Involvement of B-adrenoreceptors in gastric vasodilating, metabolic and protecive effects of EGF // Gastrenty., V.110. N4. A223.
  125. Pena A., Pardo J.P., Ramirez J. Early metavolic effects and mechanism of ammonium transport in yeast // Arch.Biochem.Biophys., 1987. V.253. N2. P.431−438.
  126. Petrides P.E., Bohlen P., Shively J.E. Chemical characterization of the two forms of epidermal growth factor in murine saliva // J.Biochem.Biophys.Res. Communis., 1984. V.125. P.218−228.
  127. Playford R.J., Boulton R., Ghatei M.A., Bloom S.R., Wright N.A., Goodlad R.A. Comparison of the effects of TFR-a and EGF on gastrointestinal proliferation and hormone realese // Digestion., 1996. V.57. N5. P.362−267.
  128. Playford R.J., MarchbankT., Calhan D.P., Calam J., Royston P., Batten J. Hansen H.F. Epidermal growth factor is digested to smaller less active forms in acidic gastric juice //Gastr., 1995. V.108. P.92−101.
  129. Poulsen S.S. On the role of epidermal growth factor in the defence of the gastrintestinal mucosa // Scand.J.Gastrenterol., 1987. V.22. S.128. P.20−21.
  130. Poulsen S.S., Rzygerba. N., Nexo E. Immunohistochemical localisation of epidermal growth factor in the second trimester human fetus // Histochem. C., 1996. V.105. N2. p.111−117.
  131. Purushotham K.R., Zelles T., Blazsek J., Wang P., Paul G.A., Kerr M., Humphreys-Beher M.G. Effect of EGF on rat parotid gland secretory function // Comp.Biochem.Physiol.C.Pharmocol.ToxicoI.End'ocrinoi., 1995. Jan. V.110. N1. P.7−14.
  132. Raaberg L., Nexo E., Poulsen S.S., Jorgensen P.E. An immunologic approach to induction of epidermal growth factor in rats // Pediatr.Rec., 1995. V.37. N2. P.169−174.
  133. Rabkin S.W. Indapamide accentuates cardiac chronotrophic responses to EGF in chick cardiomyocytes //Tissue.Cell,. 1996. V.28. N4. P.469−472.
  134. Rao R.K. Luminal processing of epidermal growth factor in mouse gastrointestinal tract in vivo // Peptides, 1995. V.16. N3. P.505−513.
  135. Raue H.A. Metabolic stability of messenger DNA in yeast a potential target for modulating productivity II Trends Biotechnol., 1994. V.12. N11. P.444−449.
  136. Romanos M.A., Scorer C.A., Clare J.J. Foreign gene expression in yeast //Yeast, 1992. V.8. N6. P.423−488.
  137. Rossini D., Porro D., Brambilla L., Venturini M., Ranzi B.M., Vanoni M., Alberghina L. In Saccharomyces cerevisiae, protein secretion into the growth medium dependes on vironmental factors //Yeast, 1993. V.9. N1. P.77−84.
  138. Sabbadini E., Berczi i. The submandibular gland: a key organ in the neuroimmuno-reguiatory network? // Neuroimmunomoduiaiion, 1995. V.2. N4. P. 184−202.
  139. Salmanian A.H., Gushchin A., Medvedeva T., Nooridal. M.R., Domansky N. Synthesis and expression of the gene for human epidermal growth factor in transgenic potato plants // Biothech.Let., 1996. V.18. N9. P.1095−1098.
  140. Savage C.R., Cohen S. Epidermal growth factor and a new derivative: rapid isolation prosedures and biological and chemical characterization // J. Bioi.Chem., 1972. V.247. P.7609−7611.
  141. Savage C.R., Cohen S. Proliferation of corneal epithelium induced by epidermal growth factor //Exp.Eye Res., 1973. V.15. P.361−366.
  142. Savage C.R., Harper R.A. Purification of human epidermal growth factor from urine // Methods for preparation of media supplements and substrate for serum-free animal ceil Akan.R.Liss.lnc. N.-Y., 1984. P.147−158.
  143. Savage C.R., Inagami T., Cohen S. The primary structure of epidermal growth factor.//J.Bioi.Chem. 1972. V.247. P.7612−7621.
  144. Saxena S.K. Role of epidermal growth factor in intestinal regeneration // Surgery, 1992. V.111. P.318−325.
  145. Schaudies R.F., Savage C.R. Isolation of rat epidermal growth factor: chemical, biological and immunological comparisons with mouse and human EGF // Comp.Biochem.Physiol., 1986. V.84 B. P.497−505.
  146. Sedmak J.J., Grossberg S.E. A rapid, sensevite and versatile assay for protein using coomassie brilliant biue G-250 // Analyt.Biochem., 1977. V.79. P.544−552.
  147. Server A.C., Sutter A., Shooter E.M. Modification of epidermal growth factor affecting ihe stability of its high molecular weight complex // J.Biol. Chem., 1976. V.251. P.1188−1196.
  148. Seydel A.S., Miller J.H., Sarac T.P., Ryan C.K., Chey W.Y., Sax H.C. Octreotide diminishes luminal nutrient transport activity, which is reversed by EGF //Am.J.Surg., 1996. V.172. N3. P.267−271.
  149. Shen W.H., Xu R.-J. Stability of epidermal growth factor in the gastrointestinal lumen of cukling and weaned pigs// LifeSci., 1996. V.59. N3. P.197−208
  150. Sherrill J.M., Kyte J. Activation of epidermal growth factor receptor by epidermal growth factor // Biochem., 1996. V.35. N18. P.5705−5718.
  151. Shuster J.R., Moyer D.L., Lee H., Dennis A., Smith B., Merryweather J.P. Yeast mutants conferring resistance to toxic effects of cloned human insulin like growth factor-1 // Gene, 1989. V.83. N1. P.47−55.
  152. Siminoski K., Bernanke J., Murphy R.A. Nerve growth factor and epidermal growth factor in mouse submandibular glands: identical diurnal changes and rates secretagogue-induced synthesis // Endocrinology, 1993. May. V.132. N5. P.2031−2037.
  153. Smith J.A., Ham J., Winslow D.P., O’Hare M.J., Rudland P. S. Use HPLC in isolation and characterization of mouse and rats EGF and examination of apparent heterogeneity //J. Chromtogr., 1984. V.305. P.295−308.
  154. Sporn M.B., Roberts A.B. Peptide growth factors are multifunctional // Nature, 1988. V.332. N6161. P.217−219.
  155. Stern I.B., Sekeripa.K.H. Uptake of C-14 leucine and C-14 histidine by cell suspension of isolated strata of neonatal rat epidermis // J.lnvest.Dermatol., 1972. V.59. N3. P.251.
  156. Stouthamer A.H., Van Verseveld H.W. Microbial energetics should be considered in manipulating metabolism for biotechnological purposes // Trends Biotechnol., 1987. V.5. N5. P.149−155.
  157. Swank R.T., Munkres K.D. Molecular weight analysis of olygopeptides by electrophoresis in polyacrilamide gel with dodecyi sulfate // Anal.Biochem., 1971. V.39. N2. P.462−477.
  158. Taira T., Yoshimura A., lizuka K., Inui K., Oshiden K., Twasaki S., Ideura T., Koshikawa S. Expression of epidermal growth factor and its receptor in rabbits with ischemic acute renal failure // Virchows.Ar., 1996. V.427. N6. P.583−588.
  159. Taira T., Yoshimura A., Inui K., Oshiden K., Ideura T., Koshikawa S., Solez K. Immunochemical study of epidermal growth factor in rats with mercuric chloride-induced acute renal failure // Nephron., 1994. V.67. P.88−93.
  160. Taylor J.M., Mitchell W.M., Cohen S. Epidermal growth factor: Physical and chemical properties II J.Bioi.Chem., 1972. V.247. N18. P.5928−5934.
  161. Tebar D., Soley M., Ramirez I. The antilipolytic effects of insulin and EGF in rat adipocytes are mediated by different mechanisms // Endocrinol., 1996. V.137. N10. P.4181−4188.
  162. Thesleff I., Viinikka L., Saxen L., Lehtonen E., Pertheentupa J. The parotid glands is the main source human salivary epidermal growth factor // Life Sci., 1988. V.43. N1. P.13−18.
  163. Tremblay E., Monfils S., Menard D. Epidermal growth factor influences the developing human stomach // Gastroenty., 1996. V.110.N4. A845.
  164. Tsunada S., Aw T.Y. Epidermal growth factor reverse lipid peroxide indused cytostasis in rat intestine // FASEB J., 1997. V.11. N3. P.1275.
  165. Uematsu S., Mogi M., Deguchi T. IL-ip. IL-6. TNF-a. epidermal growth factor and 32-microglobin levels are elevated in gingival crevicular fluid during human orthodontic tooth movement//J. Dent. Res., 1996. V.75. N1. P.562−567.
  166. Urclea M.S. Design6 chemical synthesis and molecules cloning of a gene for human epidermal growth factor // Methods in enzymology, 1987. Academic Press.Inc. V.146. P.22−41.
  167. Van der Sande C.A.F.W, Kwa M., van Heerikhuizen H., Raue H.A., Planta R.J. Functional analysis of internal trancribed spacer 2 of Saccharomyces cerevisiae ribosomal DNA // J.Molec.Biol., 1992. V.223. N4. P.899−910.
  168. Vasavada A. improving productivity of heterologous proteins in recombinant Saccharomyces cerevisiae fermentations // Adv.Appl.Microbioi., 1995. V.41. P.25−54.
  169. Vaughan F.L., Bernstein i.A. Stadies of proliferative capabilites in isolated epidermal basal and differentiated ceils // J.Invest.Dermatol., 1971. V.56. N6. P.454.
  170. Vaughan F.L., Bernstein i.A. Molecular aspects of control in epidermal differntiation // Moi. and Ceil Biochem., 1976. V.12. N3. P.171−179.
  171. Vinter-Jensen L., Duch B.U., Petersen J.A., Rysiev A., Gregerse. H. Systematic tratment with EGF in rat biochemical properties of the growing small intestine // Regui. Pept, 1996. V.61. N2. P.135−142.
  172. Wahl S.M., Hunt D.A., Wakefieid L.M., McCartney-Francis N» VVahl L.M., Roberts A.B., Sporn M.R. Transforming growth factor type beta indues monocyte chemotaxis and growth factor production // Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1987. V.84. N16. P.5788−5792.
  173. Wang Z.G., DaSilva N.A. Improved protein synthesis and secretiopn through medium enrichment in a stabile recombinant yeast strain // Biotechnol. Bioing., 1993. V.42. N1. P.95−102.
  174. Weinberg R.A.The action of oncogenes in the cytoplasma and nucleus // Science, 1985. V.230. N4727. P.770−776
  175. Whitcomb S.S., Eversole L.R., Lindemann R.A. Immunohistochemical mapping of epidermal growth factor receptors in normal oral soft tissue // Arch. Oral.Biol., 1993. Sep. V.38. N9. P.823−826.
  176. Wise G.E., Zhao L., Lin F. Effects of epidermal growth factor and CSF-1 on expression of c-fos in rat mandibular molars implications for tooth eruption // Cell.Tis.Re., 1996. V.284. N1. P.1−7.
  177. Wittrup K.D., Robinson A.S., Parker R.N., Forrests K.J. Existence of an optium expression level for secretion foreign proteins in yeast // Ann. NY Acad., 1994. V.745. P.321−330.
  178. Yamashita H., Takahashi M., Baggersjoback D. Expression of epidermal growth factor, epidermal growth factor receptor and transforming growth factor type a in the human fetal inner ear // Eur. Arch.Ot., 1996. V.253. N8. P.494−497.
  179. Yasutoshi K., Yoichi O., Tomoka S. Construction and characterization of fusion protein with epidermal growth factor and the cell-binding domain of fibronectin // FEBS Letters, 1992. V.298. N2−3. P. 126−128.
  180. Yir T.T., Tam Y.Y., Kong Y.C., Belew M.C., Porath J. Isolation of the epidermal growth factor from the shrew submaxillary gland // FEBS Letters, 1985. V.187. P.345−348.
  181. Yoshirate Y., Nishikawa K. Production of monoclonal antibodies with specificity for different epitopes of the human epidermal growth factor molecule // Arch.Biochem.Biophys., 1988. V.263. P.437−446.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!