Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Субпопуляции стареющих культур неспорообразующих бактерий: разделение в криогелях и морфо-физиологическая характеристика

Диссертация: Субпопуляции стареющих культур неспорообразующих бактерий: разделение в криогелях и морфо-физиологическая характеристика
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплена обширная информация о кардинальных перестройках метаболизма культур микроорганизмов при их длительном культивировании в питательной среде. Проблемы, связанные с изучением стареющей или отвечающей на воздействие стрессоров, например, таких как исчерпание в среде источников питания микробной популяции, являются предметом постоянного внимания… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Ответ микроорганизмов на стрессовые воздействия
      • 1. 1. 1. Переход бактерий в гипометаболическое состояние при старении культур. Физиолого-биохимические и морфологические изменения
      • 1. 1. 2. Индукция покоящегося состояния у бактерий аутоиндукторами группы алкилрезорцинов
      • 1. 1. 3. Типы клеточных поверхностей бактерий в связи с их адгезивными свойствами
    • 1. 2. Криотропное гелеобразование
      • 1. 2. 1. Криогели, образующиеся при реакциях поликонденсации
      • 1. 2. 2. Криогели с физической сеткой полимерной фазы
    • 1. 3. Области применения материалов на основе полимерных криогелей
      • 1. 3. 1. Криогели в биологии
      • 1. 3. 2. Разделение бактериальных популяций в модифицированных криогелях
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
  • 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
    • 2. 1. Объекты и материалы
      • 2. 1. 1. Бактериальные штаммы и условия культивирования
      • 2. 1. 2. Ауторегуляторные факторы микроорганизмов
      • 2. 1. 3. Полимерные криогели
    • 2. 2. Микробиологические и биохимические методы анализа
      • 2. 2. 1. Оценка жизнеспособности бактерий при длительном инкубировании и голодании
      • 2. 2. 2. Тест К
  • §-иге для определения числа жизнеспособных, но некультивируемых клеток
    • 2. 3. Химические методы анализа
      • 2. 3. 1. Хроматографическое определение алкилрезорцинов
    • 2. 4. Физические методы анализа
      • 2. 4. 1. Электронная микроскопия
      • 2. 4. 2. Элементный анализ проб культуральной жидкости
  • 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
    • 3. 1. Изменение морфологии клеток при переходе в гипометаболическое состояние
    • 3. 2. Определение гексилрезорцина в суспензиях бактериальных клеток с помощью ВЭЖХ
    • 3. 3. Физиологические изменения грамположительных и грамотрицательных клеток в условиях длительного культивирования в присутствии факторов анабиоза
    • 3. 4. Изменение активности конститутивных ферментов в клетках стареющей популяции микроорганизмов и при действии гексшрезоргщна
    • 3. 5. Изменение активности и биосинтеза /?-галактозидазы при действии гексилрезорцина
    • 3. 6. Гель-хроматография клеток бактерий в ЛВС криогелях с привитыми алифатическими группировками
    • 3. 7. Разделение по гидрофобности криогелями ЛВС клеток с предварительным внесением алкилрезорцинов
    • 3. 8. Гель-хроматография клеток бактерий в агарозных криогелях с привитыми алифатическими группировками
    • 3. 9. Гель-хроматография в агарозных криогелях с привитыми заряженными группировками
    • 3. 10. Морфология гипометаболических клеток микроорганизмов после разделения в криогелях
    • 3. 11. Элементный анализ клеток бактерий в гипометаболическом состоянии после разделения в криогелях
  • 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Субпопуляции стареющих культур неспорообразующих бактерий: разделение в криогелях и морфо-физиологическая характеристика (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплена обширная информация о кардинальных перестройках метаболизма культур микроорганизмов при их длительном культивировании в питательной среде. Проблемы, связанные с изучением стареющей или отвечающей на воздействие стрессоров, например, таких как исчерпание в среде источников питания микробной популяции, являются предметом постоянного внимания исследователей. Следствием стресса является переход активно делящихся клеток к состоянию пролиферативного покоя или метаболического покоя у репродуктивно покоящихся форм. Анализ данных литературы позволяет сделать вывод о том, что гетерогенность стареющих культур неспорообразующих бактерий обусловлена разнообразием в популяции клеток различного физиологического состояния, таких как диссоциативные формы микроорганизмов, цистоподобные рефрактерные клетки [Дуда, Эль-Регистан], гипометаболические, некультивируемые формы [Kolter et al., 1993].

Пристальное внимание уделяется изучению внеклеточных ауторегуляторов, обеспечивающих межклеточную коммуникацию при формировании стрессового ответа микробной популяции, как единого организма. В аспекте контроля роста микробной популяции представляет интерес функции ауторегуляторов (аутоиндукторы анабиоза — факторы di), выявленных у ряда бактерий идрожжей, представленные алкилоксибензолами (АОБ) (Эль-Регистан, 1988; Батраков с соавт., 1993; Мулюкин с соавт., 1996). По достижении определенного концентрационного уровня АОБ влияют на переход микробной культуры к стационарной фазе и развитие в клетках гипометаболического, а затем анабиотического состояний, сопряженных с повышением устойчивости клеток к неблагоприятным и повреждающим воздействиям (Эль-Регистан, 1988; Демкина и др., 2000; Лойко и др., 2003).

Изменения условий среды обуславливают у популяций микроорганизмов мобилизацию потенциальных возможностей для формирования адаптивного ответа (Головлев, 1999; Феофилова и др., 2000). Следует отметить, что стратегия переживания микроорганизмами неблагоприятных воздействий не ограничивается образованием специализированных метаболически покоящихся форм (экзоспоры, цисты, акинеты). В последние годы большое внимание уделяется изучению способов переживания, неблагоприятных условий неспорообразующими бактериями за счет перехода их в состояние «вегетативного» покоя и образования цистоподобных форм [Мулюкин с соавт., 1997]. Однако остается еще недостаточно изученным вопрос о морфо-физиологических особенностях этих форм неспорообразующих микроорганизмов. Актуальным является выявление в стареющих микробных популяциях гипометаболических клеток, изучение свойств фракций клеток в этих гетерогенных популяциях, полученных с помощью разделения, в частности, методом гель-хроматографии на различных видах криогелей с высокой разрешающей способностью. Данные этих исследований могут оказаться полезными для выяснения механизмов возникновения морфотипов разного физиологического и биохимического статуса под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды.

Цель и задачи исследований. Целью работы является выявление особенностей диссоциации стареющей культуры, неспорообразующих бактерий с оценкой морфо-физиологических свойств субпопуляций и анализ хроматографического разделения клеток в соответствии с их физиологическим статусом в немодифицированных, гидрофобизованных и заряженных криогелях.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Охарактеризовать морфотипы клеток и метаболическую активность стареющих популяции грамотрицательных {Micrococcus'luteus, Lactobacillus plantarum, Staphylococcus epidermidis 8P-A3) и грамположительных неспорообразующих бактерий {Escherichiacoli К12, Salmonella typhimurium ТА 100) в соответствии с морфотипами и метаболическойактивностью и определить соотношение субпопуляций для различных бактерий в условиях длительного культивирования.

2. Выявить основные морфотипы, характеризующие субпопуляции в стареющих бактериальных культурах^ Методом газовой хроматографии, проанализировать возможность синтеза ауторегуляторных факторовиндукторов гипометаболизма^. в частности, гексилрезорцина, у исследуемых бактерий различной грампринадлежности:

3. Оценить, возможность! разделения смешанных, культур бактерий на индивидуальные в криогелях на основе поливинилового спирта, модифицированного гидрофобными алифатическими группировками.

4. Изучить возможность разделения стареющей популяции бактерий на субпопуляции в агарозных криогелях с привитыми гидрофобными и зарядовымигруппировками.

5. Охарактеризовать физиолого-биохимические и морфологические параметры бактерий в? субпопуляции гипометаболических клеток, полученной после выделения гель-хроматографией на агарозных криогелях.

Положения, выносимые на защиту: 1. Стареющие популяции включают субпопуляции вегетативных, гипометаболических и мертвых клеток в различных соотношениях в культурах различных видов: бактерий. Клетки гипометаболической субпопуляции характеризуются ультрамелкими. размерам, конденсированной цитоплазмой, измененным элементнымсоставом, снижением^ активности конститутивных ферментов, увеличением активности бета-галактозидазы и продукцией ауторегулятора — гексилрезорцина.

2. Модифицированный гидрофобными группировками криогель на основе поливинилового спирта позволяет эффективно разделять смесь разноразмерных клеток в смешанных культурах (бациллы/стафилококки), но не делит разноразмерные вегетативные и гипометаболические клетки в монокультурах бактерий.

3. Немодифицированныйагарозный криогель эффективно разделяет гипометаболические и вегетативные клетки одной бактериальной культуры, гидрофобизация агарозы алифатическими группировками не влияет на эффективность разделения. Внесение зарядовых группировок увеличивает степень разделения субпопуляций.

Научная новизна. Впервые проведена" визуализация гипометаболических наноформ у бактерий (.М. 1и1ет, Ь. р1ап1агит 8Р-АЗ, Е. соЫ К12, ?? ергйегтгсИз, & 1урЫтипит ТА100) методами трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопииВпервые показано образование капсулоподобных структур у клеток, длительно инкубированных культур Е. соН. Предложен и разработан новый метод гель-хроматографии клеток бактерий в криогелях, открывающий" новые перспективы использования криотропного гелеобразования для решения вопросов, как фундаментальной микробиологии, так и биотехнологии. Впервые на, криогелях достигнуто эффективное разделение клеток стареющей популяции в соответствии с их метаболическим статусом: Выявлена возможность разделения клеток бактерий на криогелях по распределению гидрофобных зон и заряда на клеточной поверхности.

Практическая значимость. Выполненные исследования позволили получить следующие практически значимые результаты. 1. Разработан новый метод гель-хроматографии в криогелях, который, позволяет эффективно разделять клетки с разным метаболическим статусомв монокультурах, а также клетки разных видов бактерий из смешанных культур. 2. Разработана методология анализа стареющих культур бактерий' и гипометаболического состояния^ наиболее характерного для бактерий в условиях естественной среды их обитания, составлен протокол испытаний. Изучение процессов перехода к гипометаболизму дает ценные данные для оптимизации биотехнологических процессов, как с известными микроорганизмами, так и с представителями еще не используемых видов бактерий в микробиологической промышленности.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследования. Научные положения диссертации и выводы базируются на результатах собственных исследований автора. Электронно-микроскопические исследования проводили на базе Института биохимии и физиологии микроорганизмов РАН (г.Пущино-на-Оке) в лаборатории цитологии микроорганизмов" «- в центральной биотехнологической службе (Zentrale Biotechnologishe Betrieb) Университета Юстуса-Либиха г. Гиссен, Германия**, и на кафедре зоологии беспозвоночных биолого-почвенного факультета Казанского (приволжского) федерального университета. Исследования на сканирующем' электронном микроскопе проводили в лаборатории Центра электронной микроскопии КФУ. Работа в течение 20 042 010гг. проводится в соответствии с планом НИР Казанского государственного университета «Молекулярно-генетические, клеточные и популяционные основы функционирования живых систем».

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на VI международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды» (Пермь, 2005), XIII международной конференции «Ферменты микроорганизмов: структура, функции, применение» (Казань, 2005), 60-й научной студенческой конференции биологического факультета ННГУ (Н.Новгород, 2007), УП Научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов научно-образовательного центра Казанского государственного.

Автор выражает благодарность зав. лабораторией цитологии микроорганизмов ИБФМ РАН д.б.н. В. И. Дуде за предоставленную возможность проведения измерений и участие в обсуждении результатов.

Автор выражает благодарность д-ру М. Хардту за возможность проведения измерений в университете Юстуса-Либиха университета «Материалы и технологии XXI века» (Казань, 2007), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008), Ш международной конференции «Микробное разнообразие: нынешняя ситуация, стратегия взаимодействия, биотехнологический потенциал» (1СОМГО 2008) (Пермь-Н.Новород-Пермь, 2008), 12-й Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология — наука XXI века» (Пущино-на-Оке, 2008), Всероссийской научной конференции «Изменяющаяся окружающая среда и устойчивое развитие регионов: новые методы и технологии исследований» (Казань, 2009), XIV международной конференции «Ферменты микроорганизмов в биотехнологии и медицине» (Казань, 2009), XVII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из которых одна в журнале «Микробиология», одна принята к печати и одно методическое руководство.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, методической части — описания материалов и методов исследований, раздела экспериментальных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 119 страницах машинописного текста, включает 5 таблиц, 24 рисунка. Библиография содержит 123 наименования российских и зарубежных авторов.

выводы.

1. Культуры неспорообразующих бактерий как грамположительных (.Micrococcus luteus, Lactobacillus plantarum, Staphylococcus epidermidis 8P-АЗ), так грамотрицаетльных {Escherichia coli K12, Salmonella typhimurium TAJ 00) через 180 суток культивирования состоят из вегетативных, гипометаболических и мертвых клеток, в соотношении 1:7:2, соответственно. При переходе к гипометаболизму зафиксировано уменьшение размеров клеток в 5 раз, переход палочковидных форм в кокковидные, а также снижение метаболической активности.

2. Установлена возможность синтеза ауторегулятора гексилрезорцина (до 14 мкг/мл) стареющими бактериальными популяциями различной грампринадлежности на 120 сутки культивирования.

3. Смешанные популяции бацилл и стафилококков эффективно разделяются в криогелях поливинилового спирта, модифицированных гидрофобными группировками.

4. Агарозный криогель, модифицированный гидрофобными группировками, позволяет эффективно разделять стареющую культуру бактерий на субпопуляции вегетативных и гипометаболических клеток, вне зависимости от степени гидрофобности геля. Агарозный криогель с привитыми зарядовыми группировками давал возможность эффективно разделять гетерогенные субпопуляции в зависимости от величины заряда геля.

5. В субпопуляции гипометаболических клеток, характеризующихся утолщением клеточной стенки, конденсацией цитоплазмы и формированием капсулоподобной структуры, зафиксировано снижение активности конститутивных щелочной фосфатазы и протеиназ и увеличение активности индуцибельной бета-галактозидазы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

На основе анализа полученных результатов и сравнения их с литературными данными мы пришли к ряду заключений. Для микробных сообществ в процессе старения характерно образование диссоциативных форм, отображающих различные этапы стратегии переживания неблагоприятных условий. Часть популяции гибнет, однако большая часть клеток бактерий постепенно встает на путь переживания неблагоприятных условий за счет перестройки метаболизма и адаптивных изменений морфологии клеток. Перестройка метаболизма проявляется в виде инактивации части ферментативных систем, запуском синтеза ауторегуляторных триггерных молекул, изменением молекулярного состава, зарядовых и гидрофобных характеристик клеточной поверхности. Данные литературы подтвердились в ряде биохимических, хроматографических и микроскопических тестов.

Морфологические изменения направлены в сторону уменьшения размеров, и как следствие площади поверхности клеток бактерий. Также начинаются перестройки клеточной оболочки, утолщение клеточной стенки, появление защитных образований вокруг клеток бактерий. Для всех четырех культур микроорганизмов проведена электронно-микроскопическая визуализация изменений состояния клеток.

Все вышеперечисленные изменения послужили основой разделения клеток на субпопуляции в соответствии с физиологическим статусом и, на более поздних этапах культивирования, с переходом к гипометаболизму. Криогели, благодаря возможности формирования пор заданного диаметра путем криотропного гелеобразования, стали основой эффективного разделения субпопуляций. Гель-хроматографическое разделение использует изменение поверхности клеток в состоянии гипометаболизма. Неспецифическая сорбция вегетативных клеток бактерий в криогелях более чем на 70% превышала ее значение у гипометаболических форм.

Разработанный метод гель-хроматографического разделения клеток гетерогенных популяций бактерий оказался эффективным для клеток с различным строением поверхности, исключая один вид микроорганизмов, & ер! с1егт1сИз, который, ввиду образования плотных агрегатов клеток, забивал поры криогеля. Все остальные исследованные микроорганизмы не имели ограничений проходимости через криогель в виде неподходящего диаметра пор.

Анализ полученных путем гель-хроматографии фракций клеток микроорганизмов на разных этапах старения популяции выявил значительные изменения в морфологии клеток, как и предполагалось ранее. Данные в основном соответствовали литературным источникам, однако для исследованных видов микроорганизмов отсутствовало описание гипометаболических форм.

Полученные из культур разных возрастов фракции анализировали методами трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии. Визуализировали как клетки, не фракционированные на криогелях, так и обогащенные гипометаболическими формами фракции, полученные после гель-хроматографии. Анализ многочисленных ультратонких срезов выявил стабильные изменения клеток, перешедших в состояние гипометаболизма. Значительные изменения размера и формы клеток, а также появление капсулоподобных защитных образований описано для кишечной палочки впервые.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Camper, А. Effects of Motility and Adsorption Rate Coefficient on Transport of Bacteria through Saturated Porous Media Text. / A. Camper, J. Hayes, P. Sturman, W. Jones // Applied and environmental microbiology.-1993.- V. 59, № 10.- P. 3455−3462.
  2. Caro, A. Viability and Virulence of Experimentally Stressed Nonculturable S. typhimurium Text. / A. Caro, P. Got, J. Lesne, S. Binard, B. Baleux // Applied and environmental microbiology.- 1999.- V. 65, № 7.- P. 3229−3232.
  3. Cascone, M. G Cryogenic approaches in protein engineering / M.G. Casgone, M. Laus, D Ricci, R.S. del Guerra // J. Mater Sei. 1995 Vol. 6. — P.71.
  4. Chorney, J. A colorimetric method for the determination of the proteolytic activity of duodenaj juice / J. Chorney, K.M. Tomarelli // J. Biochem 1947. Vol. 177. P.501−505.
  5. Daganl, R. High-swelling collagen sponges produced by the cryotropic gelation method / R. Dagani // Chem. Eng. News. 1997. Vol. 75 — P.26.
  6. Fujimura T. Electron microscopic studies of cross-linked Polyacrylamide cryogels / T. Fujimura, I. Kaetsu // Bioengineering. 1982. Vol. 37 — P. 102.
  7. Fujimura T. Study of cryogels systems / T. Fujimura, I. Kaetsu // Bioengineering. 1987. Vol. 29 — P. 71.
  8. Fukushima, D. Poly (vinyl alcohol) cryogels / D. Fukushima // J. Am. Oil Chem. Soc. Vol. 58.- 1981.- P.346.
  9. Ishihama, A. Adaptation of gene expression in stationary phase bacteria Text. / A. Ishihama// Curr.Opin.Genet.Develop.- 1997.- V.7.- P.582−588.
  10. Kaprelyants, A.S. Dormancy in non-sporulating bacteria / A.S. Kaprelyants, J.C. Gottschal, D.B. Kell // FEMS Microbiol Rev. 1993. Apr- 10(3−4) — P. 27 185.
  11. Kogure, K. A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria / K. Kogure, U. Simudu, N. Taga // Can. J. Microbiol.- 1979.- V. 25, — P. 415−420.
  12. Kolter, R. The stationary phase of bacterial life cycle Text. / R. Kolter, D. Siegle, A. Torno //Ann.Rev.Microbiol.- 1993.- V.47.- P. 855−874.
  13. Kudela, V. Encyclopedia of Polymer Science and Engineering. Vol. 7 Text. / V. Kudela. New-York: Wiley.- 1987. — P. 783.lo.Kaetsu, I. Cryostructuration of polymer systems /1. Kaetsu, M. Kumakura, M. Yoshida // Biotechnology. 1979. Vol. 21 — P. 34−45.
  14. Kaprelyants A.S. Do bacteria need to communicate with each other for growth? / A.S. Kaprelyants, D.B. Kell // Trends Microbiol.- 1996.- V.4.- P. 237 241.
  15. Kolter, R. The stationary phase of bacterial life cycle / R. Kolter, D. Siegle, A. Torno // Ann.Rev.Microbiol.- 1993.- V.47.- P. 855−874.
  16. Konstantinova, N.R. Cryotropic gelation of ovalbumin solutions / N.R. Konstantinova, V.l. Lozinsky // Food Hydrocolloids Vol.11, № 2, — 1997. -P.113−123.
  17. Kudela, V. Encyclopedia of Polymer Science and Engineering. Vol. 7 / V. Kudela. New-York: Wiley.- 1987. — P. 783.
  18. Kumakura M. Polymeric cryogels in bioseparation / M. Kumakura, I. Kaetsu // J. Appl. Biochem. 1983. vol. 5 — P. 165, P. 348.
  19. Kumakura M. Polymeric technology / M. Kumakura, I. Kaetsu // J. Chem. Technol. Biotechnol. 1983. Vol. 33B — P. 95.
  20. Kuraakura M. Dynamics of Biopolymers /M. Kumakura, I. Kaetsu // J. Appl. Plym. Science 1983. Vol. 28-P. 375.
  21. Kumakura M. Polymeric cryogels / M. Kumakura, I. Kaetsu // Polymer. J. -1984. Vol. 16-P. 113.
  22. Kumakura M. Polymeric cryogels for cell immobilization / M. Kumakura, I. Kaetsu, T. Kobayashi // Enzyme Microb. Technol. 1984. Vol. 6 — P. 23.
  23. Kumakura M. Cryotropic gel-formation / M. Kumakura // Polymer. Adv. Technol.-2001. Vol. 12-P. 415.
  24. Lozinsky, V.l. Poly (vinyl alcohol) cryogels employed as matrices for cell immobilization. 3. Overview of recent research and developments / V.l. Lozinsky, F.M. Plieva // Enzyme Microb. Technol. Vol. 23.- № ¾.- 1998. — P. 227−242.
  25. Lozinsky, V.l. Study of cryostructuration of polymer systems. XII. Poly (vinyl alcohol) cryogels: influence of low-molecular electrolytes / V.I.Lozinsky,
  26. V.Domotenko, A.L.Zubov, LA. Simenel // J. Appl. Polym. Vol. 61, № 11 .-1996.-P.1991−1998.
  27. Lozinsky, V.I. Study of cryostructuration of polymer systems. XVTI. Poly (vinyl alcohol) cryogels: dynamics of the cryotropic gel-formation / V.I.Lozinsky, L.G. Damshkaln // J. Appl. Polym. Sci. Vol. 77, № 9.- 2000.- P. 2017−2023.
  28. Lozinsky, V.I. Study of cryostructuration of polymer systems. XXI. Cryotropic gel-formation of the water-maltodextrin systems / V.I. Lozinsky, L.G. Damshkaln, C.R.T. Brown, I.T. Norton // J. Appl. Polym. Sci. Vol. 83, № 8.-2002.-P. 1658−1667.
  29. Lozinsky, V.I. Swelling behavior of poly (vinyl alcohol) cryo-gels employed as matrices for cell immobilization / V.I. Lozinsky, A.L. Zubov, E.F. Titova. // Enzyme Microb. Technol.- Vol. 18, № 6.- 1996.-P. 561−569.
  30. Lozinsky, V.I. The potential of polymeric cryogels in bioseparation / V.I. Lozinsky, F.M. Plieva, I. Yu. Galaev, B. Mattiasson // Bioseparation Vol. 10, № 4−5.- 2002.- 163−188.
  31. Masuda, K. Distribution and chemical characterization of regular arrays in the cell walls of strains of the genus Lactobacillus Text. / Masuda K. and T. Kawata // FEMS Microbiol.- 1983.- V. 20. P. 145−150.
  32. Roszak, D.B. Survival strategies of bacteria in the natural environment / D.B. Roszak, R.R. Colwell // Microbiol. Rev.- 1987.- V.51, № 3.- P.365−379.
  33. Sara, M. S-layer proteins Text. / M. Sara, U. B. Sleytr // Bacteriol. 2000. -P.859−868.
  34. , I. / I. Smith, R. Slepecky, P. Setlow (ed.). // American Society for Microbiology, Washington, D.C.- 1989.
  35. Stammen, J.A. Effect of polymer architecture on the performance in bioseparation process / J.A. Stammen, S. Williams, D.N. Ku, R.E.Guldberg // Biomaterials.- Vol. 22.- 2001.- R 799.
  36. Sutani K. Physico-chemical properties of cryotropic gel-formation / K. Sutani, I. Kaetsu, K Uchida // Radiat. Physical Chem., 2001. Vol. 61. — P. 49.
  37. Suzuki, E. Bull. Chemical Science / E. Suzuki, N. Nagashima // Chemical Science.- Vol. 55.- 1982. P.44.
  38. Tanaka, T. In structure and Dynamics of Biopolymers // T. Tanaka. Dordrecht: Martinus Nijhoff.- 1987. — P. 237.
  39. Savina, I. N., Graft polymerization of acrylic acid onto macroporous Polyacrylamide gel (cryogel) initiated by potassium diperiodatocuprate / I. N. Savina, I. Y. Galaev, B. Mattiasson, // Polymer 2005,46, 9596 9603.
  40. Svec, F. New designs of macroporous polymers and supports: from separation to biocatalysis / F. Svec, J. M. Frechet // Science 1996, 273, 205 211
  41. Sonnenfeld, E.M. Structural differentiation of the Bacillus subtilis 168 cell wall / E.M. Sonnenfield, T.J. Beveridge, R.J. Doyle, (1985) // Can. J. Microbiol., 31, 875−877.
  42. Stammen, J.A. Effect of polymer architecture on the performance in bioseparation process / J.A. Stammen, S. Williams, D.N. Ku, R.E.Guldberg // Biomaterials. 2001. Vol. 22 — P. 799.
  43. Stolp, H. Bacteriolysis / H. Stolp, M.P. Starr // Annu. Rev. Microbiol.- 1965 -V. 19.-P. 79−105.
  44. Strancar, A., CIM Convective Interaction Media: A New Stationary Phase for Biochromatography / A. Strancar, A. Podgornik, M. Barut // BlOforum Int. 2002,3, 152−153.
  45. Suzuki, M. An approach to artificial muscle using polymer gels formed by micro-phase separation./M. Suzuki, O. Hirasa// Adv. Polym. Sci. 110, pp. 241−261.//Adv. Polym. Sci. 1993. V. 110. P. 241.
  46. Yoshi, F. The influence of freezing of reacting mass on the properties of cross-linked gels // Appl. Biochem. Biotechnol. 1983. Vol. 8 — P. 115.
  47. , С.Г. Тирозол — ауторегуляторный фактор dl Saccharomyces cerevisiae / С. Г. Батраков, Г. И. Эль-Регистан, Н. Н. Придачина, В. А. Ненашева, А. Н. Козлова, М. Н. Грязнова, И. Н. Золотарева // Микробиология.- 1993.- Т. 62, № 4.- С. 633−638.
  48. , Е.Ю. Криоденатурация коллагена / Е. Ю. Баукова и др. // Высокомолекулярные соединения. 1993. Т. 35А- С. 233.
  49. , Т.И. Влияние состава среды и условий культивирования на спорообразование хемолитотрофных бактерий Текст. / Т. И. Богданова, А. Л. Мулюкин, И. А. Цаплина, Г. И. Эль-Регистан, Г. И. Каравайко // Микробиология.- 2002.- Т.71, № 2.- С.187−193.
  50. , Р.Х. Дифференциальная экспрессия генов в культивируемых и некультивируемых формах Salmonella typhimurium / Р. Х. Бошнаков, Ю. М. Романова, Н. А. Зигангирова, А. Л. Гинцбург // Вестник РАМН.- 2001.-№ 11 .- С.8−12.
  51. , С.Н. Теоретические основы биотехнологии. Биохимические основы синтеза биологически активных веществ Текст. / С. Н. Бутова,
  52. И.А. Типисева, Г. И. Эль-Регистан. Под общей редакцией И. М. Грачевой // М.- Элевар.- 2003.- 554с.
  53. , И.Ю. // Успехи химии. 1995. Т. 64. № 5. С. 505.
  54. , ЕЛ. Введение в биологию стационарной фазы бактерий: механизм общего ответа на стрессы / E.JI. Головлев // Микробиология.-1999.- Т.68, № 5.- С.623−631.
  55. , E.JI. Другое состояние неспорулирующих бактерий. / E.JI. Головлев // Микробиология.- 1998.- Т.67, № 6.- С.725−735.
  56. , ЕЛ. Метастабильность фенотипа у бактерий I E.JI. Головлев // Микробиология.- 1998.- Т.59, № 2.- С.149−155.
  57. , Е.В. Репродуктивные покоящиеся формы Arthrobacter globiformis / E.B. Демкина, B.C. Соина, Г. И. Эль-Регистан, Д. Г. Звягинцев // Микробиология.- 2000.- Т. 69, № 3.- С. 377−382.
  58. В.И. Сетчатые полимеры / В. И. Иржак, Б. А. Розенберг, Н. С. Ениколопян Москва: Наука, 1974. — 248 С.
  59. , A.C. Структурно-функциональные изменения в бактериальных и модельных мембранах под действием фенольных липидов / A.C. Капрельянц, М. К. Сулейменов, А. Д. Сорокина // Биол. Мембраны.- 1987.- Т. 4, № 3.- С. 254−261.
  60. Куприянова-Ашина, Ф. Г. Действие мембранотропных физиологически активных веществ на рост культуры Saccharomyces cerevisiae Текст. / Ф.Г.
  61. Куприянова-Ашина, А. И. Колпаков, А. Ю. Луцкая, Г. И. Эль-Регистан, А. Н. Козлова, М.В. Дужа//Микробиология.- 1995.- Т.64, № 5.- С.596−600.
  62. , В.И. Криотропное гелеобразование растворов поливинилового спирта / В. И. Лозинский // Успехи химии. Т67, № 7.-1998.-С. 641−655.
  63. , В.И. Термочувствительные криогели на основе сшитого поли(МДЧ-диэтил-акриламида) / В. И. Лозинский, Е. А. Калинина, В. Я. Гринберг, Н. В. Гринберг, В. В. Чупов, H.A. Платэ // Высокомолекул. соед. -39А, № 12.- 1997.-С. 1972−1978.
  64. , В.И. Криогели на основе природных и синтетических полимеров: получение, свойства и применение / В. И. Лозинский // Дис. докт. хим. Наук М.: ИНЭОС РАН.- 1994. — 682с.
  65. , В.И. Криогели на основе природных и синтетических полимеров: получение, свойства и области применения / В. И. Лозинский // Успехи химии.- Т.71, № 6.- 2002 С. 559−585.
  66. , К.А. Иммобилизация клеток E.coli в макропористые криогели на основе полиакриламида / К. А Луста, Н. Г. Старостина, Н. Б. Горкина и др. // Прикл. биохим. микробиол. 1988. Т.24, № 4. С. 504−513.
  67. , М.С. Роль МАРК- и Р13К-зависимых сигнальных каскадов в регуляции пролиферации эмбриональных стволовых клеток мыши / М. С. Лянгузова / С. Петербург 2007
  68. , Е. С. Гетерогенность популяции бактерий и процесс диссоциации / Е. С. Милько, Н. С. Егоров // МГУ. Электронный ресурс. -1991.- С. 143.- Режим доступа: www.chronos.msu.ru/RREPORTS.htm Дата доступа: 15.02.2009.
  69. , А.Л. Обнаружение и изучение динамики накопления ауторегуляторного фактора di в культуральной жидкости и клетках Micrococcus luteus / А. Л. Мулюкин, А. Н. Козлова, А. С. Капрельянц, Г. И. Эль-Регистан // Микробиология.- 1996.- Т. 65, № 1.- С. 20−25.
  70. , А.Л. Образование покоящихся форм Bacillus subtilis и Micrococcus luteus / А. Л. Мулюкин, К. А. Луста, М. Н. Грязнова, А. Н. Козлова, М. В. Дужа, В. И. Дуда, Г. И. Эль-Регистан // Микробиология,-1996.- Т. 65, № 6.- С. 782−789.
  71. , А.Л. Образование покоящихся форм у неспорообразующих микроорганизмов / А. Л. Мулюкин // Автореферат дисс. канд. биол. наук. М.: Ин-т микробиологии РАН.- 1998.- 26 с.
  72. , Ю. А. Два новых внеклеточных адаптогенных фактора Escherichia coli К12 Текст. / Ю. А. Николаев // Микробиология.- 1997.- Т. 66, № 6.- С. 785−789.
  73. , Ю.А. Сравнительное изучение двух новых внеклеточных протекторов, образуемых клетками Escherichia coli при повышенной температуре / Ю. А. Николаев // Микробиология.- 1997.- Т. 66, № 7.- С. 790 795.
  74. Г. А. О химической природе ауторегуляторного фактора d Pseudomonas carboxydoflava / Г. А. Осипов, Г. И. Эль-Регистан, В. А. Светличный, А. Н. Козлова, В. И. Дуда, А. С. Капрельянц, В. В. Помазанов // Микробиология.- 1985.- Т. 54, № 2.- С. 186−190.
  75. , С.П. Студнеобразное состояние полимеров / С. П. Папков. -Москва: Химия.- 1974 — 256 с.
  76. , Ф.М. Применение криогелей поливинилового спирта в биотехнологии. VI. Биоаффинные сорбенты на основе сверхмакропористого носителя для работы с вирусными частицами / Ф. М. Плиева, Е. И Исаева, В. И Лозинский // Биотехнология 1998. № 5 — С. 3237.
  77. Н.В. Тейхоевые кислоты актиномицетов и других грамположительных бактерий Текст. / Н. В. Потехина // Успехи биол.хим.-2006.- Т. 46.- С. 225−278.
  78. Л.З. Основы криохимии полимеров / Л. З. Роговина, Г. Л. Слонимский // Успехи химии. 1974. Т 43 — С. 342−351.
  79. C.B. Нековалентное криоструктурирование в полимерных системах / С. В. Рогожин, В. И. Лозинский, Е. С. Вайнерман, Л. В. Домотенко, А. М. Мамцис, С. А. Иванова, М. И. Штильман, В. В. Коршак // Докл. АН СССР 1984. Т.278, № 1 — С. 129−133.
  80. , Л. В. Некультивируемые формы Francisella tularensis Текст. / Л. В. Романова, Б. Н. Мишанькин, Н. Л. Пичурина, С. О. Водопьянов, С. Р. Саямов // Журнал микробиологии.- 2000.- № 2.- С. 11−15.
  81. , Ю. М. Генетический контроль индукции некультивируемого состояния у патогенных бактерий Текст. / Ю. М. Романова, А. Л. Гинцбург // Микробиология.- 1996.- № 3.- С. 16−18.
  82. , Ю.М. / Ю.М. Романова, А. Л. Гинцбург // Молекулярная генетика.- 1993.- № 6.- С.34−37.
  83. , М. Избранные методы исследования крахмала / М. Рихтер, 3. Аугустас, Ф. Ширбаум. Москва: Пищевая промышленность, 1975. — 65 С.
  84. , В.А. Изучение содержания мембраноактивных ауторегуляторов при литоавтотрофном росте Pseudomonas carboxydoflava / В. А. Светличный, А. К. Романова, Г. И. Эль-Регистан // Микробиология.-1986.-Т. 55, № 1.- С. 55−59.
  85. , О.И. Окисление водорода иммобилизованными в силикагель и криосиликагель клетками олиготрофных бактерий / О. И. Слабова, Д. И. Никитин, В. И. Лозинский, В. К. Кулакова, Е. С. Вайнерман, С. В. Рогожин // Микробиология. 1988. Т.57,№ 6 — С. 940−944.
  86. , В.В. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ / В. В. Смирнов, С. Р. Резник, М. А. Василевская // Киев.- Наукова Думка.- 1982.- 280 с.
  87. , О.Е. Высокомолекулярные соединения / О. Е. Филиппова. Б. м.: Б. и.- 2000. — 42 С.
  88. , А.С. Низкомолекулярные микробные ауторегуляторы / А. С. Хохлов // М.- Наука.- 1988.
  89. , В.Г. Оценка токсического действия 2,4,6-тринитротолуола на клетки Escherichia coli К 12 методом проточной цитофлуориметрии / В. Г. Черепнев, Б. М. Курененко, Г. Ю. Яковлева, Н. А. Дениварова // Микробиология 2007- Т.76.- N3 — С.1−6.
  90. , М.С. Влияние алкилрезорцинов на состав и численность микробного сообщества Текст. / М. С. Щетинникова, А. С. Асафова, А. Б. Маргулис, О. Н. Ильинская // Материалы XIV
  91. Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов».- Секция «Биология».- Москва: МГУ.- 11−14 апреля 2007.- С. 123−124.
  92. Шиц А. А. Энцилопедия полимеров / А. А. Шиц // Советская энциклопедия, Москва 1972. — 594.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!