Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Клонирование гена эндонуклеазы I бактериофага Т7 и создание штаммов-суперпродуцентов

Диссертация: Клонирование гена эндонуклеазы I бактериофага Т7 и создание штаммов-суперпродуцентов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

PinPointXA-2T7(cll4) показал полное сохранение всех структурных и регуляторных элементов экспрессии целевого белка. Однако дальнейшее использование pQE-30T7(cl22) и PinPointXA-2T7(cll4) показало крайне слабую наработку целевого белка и даже отсутствие таковой в бактериальной культуре. Поскольку при анализе белкового продукта индуцированных бактериальных культур, содержащих конструкции pET-3aT7… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Строение четырёх-нитевого перекреста (структуры Холлидея). 10 1.1.1. Особенности строения структуры Холлидея
    • 1. 2. Молекулярные основы генетической рекомбинации
    • 1. 3. Обзор структуры ферментов, ответственных за разрешение структуры Холлидея
      • 1. 3. 1. Глобальная молекулярная структура резолваз
      • 1. 3. 2. Молекулярная организация активного центра резолваз
      • 1. 3. 3. Молекулярная структура комплекса ДНК-перекрест-резолваза
        • 1. 3. 3. 1. Кинетика ассоциации Т4 эндонуклеазы VII со структурой Холлидея
        • 1. 3. 3. 2. Кинетика ассоциации Т7 эндонуклеазы I со структурой Холлидея
    • 1. 4. Характеристика эндонуклеазы I бактериофага Т
      • 1. 4. 1. Молекулярная структура эндонуклеазы I бактериофага Т
      • 1. 4. 2. Связывание Т7Е1 со специфическим субстатом
      • 1. 4. 3. Активный центр Т7 эндонуклеазы
    • 1. 5. Гетерологичные системы экспрессии в бактерии Е. соїі
    • 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
      • 2. 1. Объекты исследований
      • 2. 2. Выделение и очистка ДНК бактериофага Т
      • 2. 3. Выделение и очистка плазмидной ДНК
      • 2. 4. Выделение и очистка нуклеиновых кислот
      • 2. 5. Микровыделение плазмидной ДНК
      • 2. 6. Полимеразная цепная реакция
      • 2. 7. Электрофоретическое фракционирование ампликонов и исходных молекул нуклеиновых кислот
      • 2. 8. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами
      • 2. 9. Создание ДНК-перекреста
      • 2. 10. Расщепление ДНК-перекреста эндонуклеазой I бактериофага
      • 2. 11. Автоматическое секвенирование ДНК ферментативным методом
      • 2. 12. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей
      • 2. 13. Приготовление компетентных клеток E. col
      • 2. 14. Трансформация компетентных клеток E. coli плазмидной ДНК
      • 2. 15. Экспрессия Т7 эндонуклеазы
      • 2. 16. Выделение Т7 эндонуклеазы
      • 2. 17. Аффинная хроматография белкового экстракта
      • 2. 18. Электрофоретическое фракционирование белков в денатурирующих условиях
      • 2. 19. Основные реактивы, использованные в работе
      • 2. 20. Составы использованных стандартных водных растворов
    • 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
      • 3. 1. Амплификация гена эндонуклазы I бактериофага Т
      • 3. 2. Клонирование гена Т7 эндонуклеазы I в плазмидную векторную конструкцию pKRX
      • 3. 3. Клонирование гена эндонуклеазы I бактериофага Т7 в экспрессирующую векторную молекулу рЕТ-За
      • 3. 4. Клонирование гена эндонуклеазы I бактериофага Т7 в экспрессирующие векторные молекулы pQE-ЗО и
  • PinPointXA
    • 3. 5. Клонирование гена эндонуклеазы I бактериофага Т7 в экспрессирующую векторную молекулу рЕТ
    • 3. 6. Экспрессия рекомбинантной векторной молекулы рЕТ
    • 22. ЬТ7(с17)
    • 3. 7. Аффинная хроматография клеточного лизата индуцированной культуры, содержащей рекомбинантную молекулу рЕТ
    • 22. ЬТ7(с17)
    • 3. 8. Исследование ферментативной активности очищенного белкового продукта из клеточного лизата рЕТ-22ЬТ7(с17)

Клонирование гена эндонуклеазы I бактериофага Т7 и создание штаммов-суперпродуцентов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность работы. Рекомбинационный процесс является основой непостоянства генома, это источник новых комбинаций существующих единиц наследственности (Holliday, 1964, 1974). Четырёх-нитевой перекрест или так называемая структура Холлидея образуется в результате взаимодействия двух молекул ДНК в том месте, где их последовательности отличаются высокой степенью подобия. Точка перекреста (обмена нитями между двумя молекулами) способна самопроизвольно мигрировать в пределах участка высокой гомологии между молекулами (Hsieh, Panyutin, 1995). Однако, миграция точки перекреста на протяжённом участке невозможна без соответствующего ферментативного аппарата. В силу спиральной формы молекул, при продвижении в любую сторону точки перекреста, неизбежно будут возникать отрицательные или положительные сверхвитки на обеих взаимодействующих сторонах. Данное обстоятельство накладывает существенные ограничения как на скорость миграции перекреста, так и на конечное расстояние, которое способен пройти этот комплекс. В разрешении возникающей ситуации принимают участие перекрест-расщепляющие ферменты (junction resolving enzymes) или резолвазы (Lilley, White, 2001). Протяжённость участка, на котором взаимодействующие молекулы способны произвести обмен цепями, зависит от ориентации относительно перекреста точки разрешения.

Способность резолваз различать спаренные и неспаренные основания в молекулах ДНК находит применение для обнаружения однонуклеотидного полиморфизма, составляющего значительную долю вариабельности человеческих геномов (Lishanski, 2000; Lishanski et al., 2000; Yang et al., 2003; Pule et al., 2008). Причем, несмотря на то, что методов выявления однонуклетидных замен предложено довольно много, ряд из них характеризуются невысокой специфичностью, тогда как считается, что разрешение образующихся четырех-нитевых структур Холлидея крайне чувствительно к спариванию / неспариванию азотистых оснований. Одним из таких важных ферментов является эндонуклеаза бактериофага Т7, производимая единственной фирмой New Englands Biolabs, Inc. (США) и характеризующаяся высокой стоимостью. В этой связи представляет интерес клонирование гена данной эндонуклеазы, создание на его основе штамма-суперпродуцента, обеспечивающего наработку функционально активного белка.

Цель работы — создание бактериального (Escherichia coli) штамма-суперпродуцента эндонуклеазы I бактериофага Т7 и использование рекомбинантного фермента для разрешения структур типа Холлидея и изучения однонуклеотидных замен.

Для выполнения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Амплификация, клонирование и секвенирование гена бактериофага Т7, кодирующего эндонуклеазу I.

2. Создание генно-инженерных конструкций на основе экспрессирующих векторных молекул, несущих ген t7el в различных штаммах E.coli.

3. Получение штаммов-продуцентов эндонуклеазы Т7Е1 на основе культуры клеток E.coli.

4. Создание штамма-суперпродуцента эндонуклеазы Т7Е1 на основе вектора рЕТ22-ЬТ7.

5. Оптимизация условий очистки целевого белкового продукта.

6. Оценка специфической ферментативной активности очищенного белкового экстракта, включая разрешение структур типа Холлидея и детекцию однонуклеотидных замен по конечной точке и в режиме реального времени.

Научная новизна. Показано, что рекомбинантная Т7Е1 эндонуклеаза способна разрешать четырех-нитевые перекресты или структуры Холлидея, а также различать спаренные и неспаренные азотистые основания, в том числе, в режиме реального времени, что позволяет рекомендовать данный фермент для выявления однонуклеотидного полиморфизма ДНК человека.

Научно-практическая значимость работы. Создан штамм-суперпродуцент фермента Т7Е1, находящего новое применение в анализе полиморфизма ДНК. Оптимизация отдельных стадий технологии получения и очистки рекомбинантной Т7 эндонуклеазы I из штаммов E. coli обеспечивает наработку функционально активного фермента в количестве до 50 мг/л жидкой культуры.

Конкурсная поддержка работы. Данная работа проводилась в рамках государственного контракта № 02.740.11.0290 по ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009;2013 годы.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на школе-семинаре молодых ученых УНЦ РАН и Волго-Уральского региона по физико-химической биологии и биотехнологии «Биомика — наука XXI века» (Уфа, 2007), на IV Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (Казань, 2009), на II школе-конференции молодых учёных «ЭкоБиотех-2011» (Уфа, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, входящих в Перечень ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 105 страницах, содержит 28 рисунков и 4 таблицы. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы, включающего 155 работ.

выводы.

1. Амплифицирован, клонирован и секвенирован ген бактериофага Т7, кодирующий эндонуклеазу I.

2. Проведенное сравнение различных созданных генно-инженерных конструкций, оптимизированных для экспрессии в различных штаммах E. coli, позволило установить, что в отношении уровня экспрессии и эффективности очистки оптимальна конструкция, находящаяся под контролем промотора и терминатора РНК полимеразы Т7 и содержащая на N-конце рекомбинантного гена t7el полигистидиновый домен в штамме E. coli, несущем дополнительную pLys-плазмиду, кодирующую Т7-лизоцим, являющийся естественным ингибитором Т7-РНК-полимеразы, для исключения «подтекания» промотора.

3. Создан штамм-суперпродуцент E. coli BL21(DE3)pLysE / рЕТ-22ЬТ7(с17) для наработки эндонуклеазы I бактериофага Т7, в котором целевой фермент экспрессируется в составе слитного белка, содержащего на N-конце домен из шести последовательно расположенных остатков гистидина.

4. Разработан метод очистки, позволяющий получить до 50 мг фермента Т7 эндонуклеазы I из 1 литра культуры клеток E. coli BL21(DE3)pLysE / рЕТ-22ЬТ7(с17).

5. Показано, что синтезированный белковый препарат Т7Е1 обладает ферментативной эндонуклеазной активностью по отношению к олигомерным ДНК-перекрестам и способен в виде неспаренных участков выявлять однонуклеотидные замены.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Рекомбинационный процесс — одна из причин непостоянства генома, результатом которого является возникновение новых комбинаций единиц наследственности. Структура Холлидея образуется в ходе рекомбинации между двумя молекулами ДНК на участке с высокой гомологией. Ферментами, обслуживающими данный процесс, являются различные резолвазы, призванные устранять положительные и отрицательные сверхвитки при миграции точки обмена цепями.

Повышенная гибкость резолваз в выборе субстрата ферментативной активности вместе со строгой специфичностью к разветвлённым и неспаренным участкам агрегатов нуклеиновых кислот позволяет рассматривать эти ферменты в качестве инструмента выявления однонуклеотидного полиморфизма, а также как составную часть диагностической системы ДНК-типирования личности (Lishanski, 2000;

Lishanski et al., 2000; Yang et al., 2003; Pule et al., 2008). Межмолекулярные взаимодействия резолваз со своими биологическими субстратами до настоящего времени недостаточно изучены. Так, для шести ферментов определён активный центр, ответственный за гидролиз фосфодиэфирных связей (Rafferty et al., 2003; Raaijmakers et al., 1999; Hadden et al., 2001), получена кристаллическая структура комплекса ДНК-фермент для нескольких резолваз бактериального типа (Giraud-Panis, Lilley, 1998; Chan et al., 1998; Biertumpfel et al., 2007; Hadden et al., 2007). Однако знания по кинетике разрешения структуры Холлидея (Hadden et al., 2007), механизма специфического связывания с широким кругом субстратов остаются на уровне предположений (Bennett, West, 1995; Duckett et al., 1995; Pohler et al.,.

1996; White, Lilley, 1997b, 1998; Giraud-Panis, Lilley, 1998; Deciais, Lilley,.

2000; Fogg et al., 2001). Наиболее перспективным направлением решения поставленных вопросов нам видится использование в экспериментах не природных, нативных четырёх-нитевых перекрестов, а модельных синтетических субстратов, молекулярное строение которых в высокой степени подобно структуре Холлидея. Изучение взаимодействия резолваз с промежуточными продуктами рекомбинации и применение полученных данных в методике детекции однонуклеотидного полиморфизма осложнено также и тем обстоятельством, что коммерчески доступен только один фермент этого класса — эндонуклеаза I бактериофага Т7, производимая фирмой New Englands Biolabs, Inc. (США). В этой связи представляет интерес клонирование гена данной эндонуклеазы, а также создание на его основе штамма-суперпродуцента, обеспечивающего наработку функционально активного белка.

В целях получения штамма-суперпродуцента Т7 эндонулеазы I ген t7el, кодирующий данную полипептидную последовательность, был клонирован в ряд плазмидных векторов. Первой была получена рекомбинантная молекула pKRXT7-El, созданная на основе клонирующего вектора pKRX. Данная плазмидная молекула была проверена на предмет вставки гена t7el при помощи рестрикционного анализа и специфической амплификацией с праймерами к данному гену. Все последующие рекомбинантные экспрессирующие плазмиды, упомянутые в работе, содержат копию гена t7el амплифицированную из pKRXT7-El. Так, для создания экспрессирующей плазмидной конструкции, содержащей ген эндонуклеазы I бактериофага Т7, в работе на разных этапах были использованы такие векторные молекулы как рЕТ-3, рЕТ-15, рЕТ-22, рЕТ-26, рЕТ-44, pQE-30, PinPointXA-2. Наиболее удачными (с точки зрения сохранения направления рамки считывания гена t7el, наличия полной.

83 последовательности целевого гена при условии отсутствия мутаций, изменяющих аминокислотную последовательность) оказались лишь некоторые клоны. Среди них можно выделить рЕТ-22ЬТ7(с17), pQE.

30Т7(с122) и PinPointXA-2T7(cll4). В случае pQE-30T7(cl22) и PinPointXA.

2Т7(с114) применялся рестриктазно-лигазный метод направленного клонирования. Анализ с помощью секвенирования вставки гена t7el и прилегающих районов в рекомбинантных конструкциях pQE-30T7(cl22) и.

PinPointXA-2T7(cll4) показал полное сохранение всех структурных и регуляторных элементов экспрессии целевого белка. Однако дальнейшее использование pQE-30T7(cl22) и PinPointXA-2T7(cll4) показало крайне слабую наработку целевого белка и даже отсутствие таковой в бактериальной культуре. Поскольку при анализе белкового продукта индуцированных бактериальных культур, содержащих конструкции pET-3aT7, pQE-30T7(cl22) и PinPointXA-2T7(cll4), не обнаружено полипептидной цепи с молекулярной массой и ферментативной активностью соответствующей Т7Е1, было осуществлено клонирование целевого фрагмента в вектор рЕТ-22. Анализ с помощью секвенирования последовательности вставки гена t7el и прилегающих районов рЕТ-22ЬТ7(с17) не выявил критических изменений, способных влиять на экспрессию целевого белка. В отличие от рекомбинантных молекул pET-3aT7, pQE-30T7(cl22) и PinPointXA-2T7(cll4), в образцах рЕТ-22ЬТ7(с17), подвергавшихся индукции, уверенно обнаруживался дополнительный полипептидный продукт. Выделенный и очищенный экстракт Т7Е1 показал специфическую по отношению к модельному ДНК-перекресту активность, сопоставимую с активностью коммерчески доступного аналогичного фермента (New England Biolabs,.

США). Последнее утверждение было подтверждено в ходе анализа динамики уровней флуоресценции в ходе совместной инкубации Т7Е1 и ДНК.

84 перекреста, а также по результатам последующего сравнительного гель-электрофореза продуктов ферментативной активности коммерческого фермента и синтезированного препарата Т7Е1.

Показано (в том числе и в режиме реального времени), что рекомбинантная эндонуклеаза Т7Е1 способна разрешать четырех-нитевые перекресты или структуры Холлидея, а также различать спаренные и неспаренные азотистые основания. Данное обстоятельство позволяет рекомендовать полученный фермент в качестве детектирующего агента однонуклеотидного полиморфизма ДНК человека.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Ал.Х., Губайдуллин И. И., Чемерис А. В. Сайт-направленный мутагенез углеводсвязывающих участков лектинов бобовых растений с использованием инвертированной ПЦР // Молекулярная биология. 2007а. Т. 41. № 5. С. 940−942.
  2. Ал.Х., Губайдуллин И. И., Куликова О. Л., Чемерис А. В. Филогения и генетическое разнообразие клубеньковых бактерий, вступающих в симбиоз с астрагалом нутовым // Микробиология. 2007b. Т. 76. № 1. С. 129−131.
  3. Ч.Р., Шиммел П. Р. Биофизическая химия: в 3-х т. М.: Мир. 1984. Т. 1.336 с.
  4. Ariyoshi М., Vassylyev D.G., Iwasaki Н., Nakamura Н., Shinagawa Н.,
  5. Morikawa К. Atomic structure of the RuvC resolvase: a Holliday junction-specifc endonuclease from E. coli II Cell. 1994. V. 78. P. 1063−1072.
  6. Ban C., Yang W. Structural basis for MutH activation in E. coli mismatch repair and relationship of MutH to restriction endonucleases // EMBO J. V. 17. P. 1526−1534.
  7. Bennett R.J., West S.C. Structural analysis of the RuvC-Holliday junction complex reveals an unfolded junction // J. Mol. Biol. 1995. V. 252. P. 213— 226.
  8. Biertumpfel C., Yang W., Suck D. Crystal structure of T4 endonuclease VII resolving a Holliday junction //Nature. 2007. V. 449(4). P. 616−621.
  9. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA//Nucl. Acids Res. 1979. V. 7. P. 1513−1523.
  10. Bolt E.L., Sharpies G.J., Lloyd R.G. Identification of three aspartic acid residues essential for catalysis by the RusA Holliday junction resolvase // J. Mol. Biol. 1999. V. 286. P. 403−415.
  11. Bond C.S., Kvaratskhelia M., Richard D., White M.F., Hunter W.N. Structure of Hjc a Holliday junction resolvase from Sulfolobus solfataricus II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V. 98. P. 5509−5514.
  12. Bowater R.P., Wells R.D. The intrinsically unstable life of DNA triplet repeats associated with human hereditary disorders // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 2001. V. 66. P. 159−202.
  13. Carlstrom G., Chazin W.J. Sequence dependence and direct measurement of crossover isomer distribution in model Holliday junctions using NMR spectroscopy // Biochemistry. 1996. V. 35. P. 3534−3544.
  14. Center M.S., Richardson C.C. An endonuclease induced after infection of Escherichia coli with bacteriophage T7. I. Purification properties of the enzyme // J. Biol. Chem. 1970. V. 245. P. 6285−6291.
  15. Ceschini S., Keeley A., McAlister M.S.B., Oram M., Phelan J., Pearl L.H., Tsaneva I.R., Barrett T.E. Crystal structure of the fission yeast mitochondrial Holliday junction resolvase Ydc2 // EMBO J. 2001. V. 20. 6601−6611.
  16. Chan S.N., Vincent S.D., Lloyd R.G. Recognition and manipulation of branched DNA by the RusA Holliday junction resolvase of Escherichia coli II Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 1560−1566.
  17. Chao Y.P., Law W., Chen P.T. et al. High production of heterologous proteins in Escherichia coli using the thermo-regulated T7 expression system // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002. V. 58. P. 446−453.
  18. Cheatham T.E., Kollman P.A. Molecular dynamics simulation of nucleic acids//Annu. Rev. Phys. Chem. 2000. V. 51. P. 435−471.
  19. Churchill M.E., Tullius T.D., Hallenbach N.R., Seeman N.C. A Holliday recombination intermediate is twofold symmetric // Proc. Natl Acad. Sei. USA. 1988. V. 85. P. 4653−4656.
  20. Clegg R.M., Murchie A.I.H., Diekmann S., von Kitzing E., Kemper B., Lilley D.M.J. The solution structure of the four-way DNA junction at low-salt conditions: a fluorescence resonance energy transfer analysis // Biophys. J. 1994. V. 66. P. 99−109.
  21. Clegg R.M., Murchie A.I.H., Zechel A., Carlberg C., Diekmann S., Lilley, D.M.J. Fluorescence resonance energy transfer analysis of the structure of the four-way DNA junction // Biochemistry. 1992. V. 31. P. 4846D4856.
  22. Clewell D.B., Helinski D.R. Supercoiled circular DNA-protein complex in Escherichia colt purification and induced conversion to an open circular DNA form // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1969. V. 62. P. 1159−1166.
  23. Cohen S.N., Chang A.C.Y., Hsu L. Nonchromosomal antibiotic resistance in bacteria Genetic transformation of E. coli by R-factor DNA // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1972. V. 69. P. 2110−2114.
  24. Connolly B., Parsons C.A., Benson F.E., Dunderdale H.J., Sharpies G.J., Lloyd R.G., West S.C. Resolution of Holliday junctions in vitro requires the Escherichia coli ruvC gene product // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1991. V. 88. P. 6063−6067.
  25. Constantinou A., Davies A.A., West S.C. Branch migration and Holliday junction resolution catalyzed by activities from mammalian cells // Cell.2001. V. 104. P. 259−268.
  26. Cooper J.P., Hagerman P.J. Gel electrophoretic analysis of the geometry of a DNA four-way junction//J. Mol. Biol. 1987. V. 198. P. 711D719.
  27. Cooper J.P., Hagerman P.J. Geometry of a branched DNA structure in solution // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1989. V. 86. P. 7336−7340.
  28. Cox M.M. Recombinational DNA repair of damaged replication forks in Escherichia coli: questions // Annu. Rev. Genet. 2001. V. 35. P. 53−82.
  29. Cox M.M., Goodman M.F., Kreuzer K.N., Sherratt D.J., Sandler S.J., Marians K.J. The importance of repairing stalled replication forks // Nature. 2000. V. 404. P. 37−41.
  30. Day R., Bennion B.J., Ham S., Daggett V. Increasing temperature accelerates protein unfolding without changing the pathway of unfolding // J. Mol. Biol.2002. V. 322. P. 189−203.
  31. Declais A.-C., Lilley D.M.J. Extensive central disruption of a four-way junction on binding CCE1 resolving enzyme // J. Mol. Biol. 2000. V. 296. P. 421−433.
  32. Declais A.-C., Lilley D.M. New insight into the recognition of branched DNA structure by junction-resolving enzymes // Curr. Opin. Struct. Biol. 2007. P. 86−95.
  33. Declais A.-C., Fogg J.M., Freman A.D.J., Coste F., Hadden J.M., Philips S.E.V., Lilley D.M.J. The complex between a four-way junction DNA and T7 endonuclease I // EMBO J. 2003. V. 22. P. 1398−1409.
  34. Dickman M.J., Ingleston S.M., Sedelnikova S.E., Rafferty J.B., Lloyd R.G., Grasby J.A., Hornby D.P. The RuvABC resolvasome // Eur. J. Biochem. 2002. V. 269. P. 5492−5501.
  35. Duckett D.R., Murchie A.I.H., Diekmann S., von Kitzing E., Kemper B., Lilley D.M.J. The structure of the Holliday junction and its resolution // Cell. 1988. V. 55. P. 79−89.
  36. Duckett D.R., Panis M.E.G., Lilley D.M.J. Binding of the junction-resolving enzyme bacteriophage T7 endonuclease I to DNA: separation of binding and catalysis by mutation // J. Mol. Biol. 1995. V. 246. P. 95−107.
  37. Eichman B.F., Ortiz-Lombardia M., Aymami J., Coll M., Ho P. S. The inherent properties of DNA four-way junctions: comparing the crystal structures of Holliday junctions // J. Mol. Biol. 2002. V. 320. P. 1037−1051.
  38. Eichman B.F., Vargason J.M., Mooers B.H.M., Ho P. S. The Holliday junction in an inverted repeat DNA sequence: sequence effects on the structure of four-way junctions // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P. 3971−3976.
  39. Elborough K.M., West S.C. Resolution of synthetic Holliday junctions in DNA by an endonuclease from calf thymus // EMBO J. 1990 V. 9. P. 29 312 936.
  40. Flores-Rozas H., Kolodner R.D. Links between replication recombination and genome instability in eukaryotes // Trends Biochem. Sci. 2000. V. 292. P. 196−200.
  41. Fogg J.M., Kvaratskhelia M., White M.F., Lilley D.M.J. Distortion of DNA junctions imposed by the binding of resolving enzymes: a fluorescence study // J. Mol. Biol. 2001. V. 313. P. 751−764.
  42. A.D., Aravind L., Koonin E., Moss B. (2000). Bacterial-type DNA Holliday junction resolvases in eukaryotic viruses // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P. 8926−8931.
  43. Giraud-Panis M.-J.E., Lilley D.M.J. T4 endonuclease VII: importance of a histidine-aspartate cluster within the zinc-binding domain // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 33 148−33 155.
  44. Giraud-Panis M.-J.E., Lilley D.M.J. Structural recognition distortion by the DNA junction-resolving enzyme RusA // J. Mol. Biol. 1998. V. 278. P. 117 133.
  45. Grady W.M. Genomic instability and colon cancer // Cancer Metastasis Rev. 2004. V. 23(1−2). P. 11−27.
  46. Graham D.E. The isolation of high molecular weight DNA from whole organisms or large tissue masses // Anal. Biochem. 1978. V. 85. P.609−613.
  47. Hadden J.M., Convery M.A., Declais A.-C., Lilley D.M.J., Phillips S.E.V. Crystal structure of the Holliday junction-resolving enzyme T7 endonuclease I at 2.1 A resolution//Nat. Struct. Biol. 2001. V. 8. P. 62−67.
  48. Hadden J.M., Declais A.C., Carr S.B., Lilley D.M.J., Phillips S.E.V. The structural basis of Holliday junction resolution by T7 endonuclease I // Nature. 2007. V. 449(4). P. 621−625.
  49. Hadden J.M., Declais A.C., Phillips S.E.V., Lilley D.M.J. Metal ions bound at the active site of the junction-resolving enzyme T7 endonuclease I // EMBO J. 2002. V. 21(13) P. 3505−3515.
  50. Hanahan D. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids // J. Mol. Biol. 1983. V. 166(4). P. 557−580.
  51. Hannig G., Makrides S.C. Strategies for optimizing heterologous protein expression in Escherichia coli // Trends Biotechnol. 1998. V. 16. P. 54−60.
  52. Hays F.A., Vargason J.M., Ho P. S. Effect of sequence on the conformation of DNA Holliday junctions // Biochemistry. 2003. V. 42. P. 9586−9597.
  53. Hays F.A., Watson J., Ho P. S. Caution! DNA crossing: crystal structures of Holliday junctions // J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 49 663−49 666.
  54. Hickman A.B., Li Y., Mathew S.V., May E.W., Craig N.L., Dyda F. Unexpected structural diversity in DNA recombination: the restriction endonuclease connection //Mol. Cell. V. 5. P. 1025−1034.
  55. Ho P. S., Eichman B.F. The crystal structures of DNA Holliday junctions // Curr. Opin. Struct. Biol. 2001. V. 11. P. 302−308.
  56. Holliday R. A mechanism for gene conversion in fungi // Genet. Res. 1964. V. 5. P. 282−304.
  57. Holliday R. Molecular aspects of genetic exchange and gene conversion // Genetics. 1974. V. 78. P. 273−287.
  58. Hsieh P., Panyutin I.G. DNA branch migration. In Eckstein F., Lilley D.M.J // Nucleic Acids and Molecular Biology. 1995. V. 9. P. 42−65.
  59. Huang J., Villemain J., Padilla R., Sousa R. Mechanisms by which T7 lysozyme specifically regulates T7 RNA polymerase during different phases of transcription // J. Mol. Biol. 1999. V. 293. P. 457−475.
  60. Hyde H., Davies A.A., Benson F.E., West S.C. Resolution of recombination intermediates by a mammalian activity functionally analogous to Escherichia coli RuvC resolvase // J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P. 5202−5209.
  61. Inouye M., Arnheim N., Sternglanz R. Bacteriophage T7 lysozyme is an N-acetylmuramyl-L-alanine amidase // J. Biol. Chem. 1973. V. 248. P. 7247−7252.
  62. Iwasaki H., Takahagi M., Shiba T., Nakata A., Shinagawa H. Escherichia coli RuvC protein is an endonuclease that resolves the Holliday structure // EMBO J. 1991. V. 10. P. 4381389.
  63. Jana S., Deb J.K. Strategies for efficient production of heterologous proteinsin Escherichia coli II Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005. V. 67. P. 289−298.94
  64. Joo C., McKinney S.A., Lilley D.M.J., Ha T. Exploring rare conformational species and ionic effects in DNA Holliday junctions using single-molecule spectroscopy // J. Mol. Biol. 2004. V. 341. P. 739−751.
  65. Kelly S.J., Li J., Setlow P., Jedrzejas M.J. Structure flexibility and mechanism of the Bacillus stearothermophilus RecU Holliday junction resolvase // Proteins. 2007. V. 68. P. 961−971.
  66. Kemper B., Garabett M. Studies on T4 head maturation. Purification and characterisation of gene-49-controlled endonuclease // Eur. J. Biochem. 1981. V. 115. P. 123−131.
  67. Kerr C., Sadowski P. D. The involvement of genes 3 4 5 and 6 in genetic recombination in bacteriophage T7 // Virology. 1975. V. 65. P. 281−285.
  68. Kreuzer K.N. Interplay between DNA replication and recombination in prokaryotes // Annu. Rev. Microbiol. 2004. V. 59. P. 43−67.
  69. Kovall R.A., Matthews B.W. Structural functional and evolutionary relationships between }i-exonuclease and the type II restriction endonucleases //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V. 95(14). P. 7893−7897.
  70. Kvaratskhelia M., White M.F. Two Holliday junction resolving enzymes in Sulfolobus solfataricus //J. Mol. Biol. 2000. V. 297. P. 923−932.
  71. Kwan K.Y., Moens P.B., Wang J.C. Infertility and aneuploidy in mice lacking a type IA DNA topoisomerase III beta // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. V. 100(5). P. 2526−2531.
  72. Lilley D.M.J. Structures of helical junctions in nucleic acids // Quart. Rev. Biophys. 2000. V. 33. P.109−159.
  73. Lilley D.M.J., White M.F. Resolving the relationships of resolving enzymes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. P. 9351−9353.
  74. Lilley D.M.J., White M.F. The junction-resolving enzymes // Nature Rev. Mol. Cell. Biol. 2001. V. 2. P. 433−443.
  75. Lishanski A. Screening for single-nucleotide polymorphisms using branch migration inhibition in PCR-amplified DNA // Clin. Chem. 2000. V. 46(9). P. 1464−1470.
  76. Lishanski A., Kurn N., Ullman E.F. Branch migration inhibition in PCR-amplified DNA: homogeneous mutation detection // Nucleic Acids Res. 2000. V. 28(9). P. 42.
  77. Liu J., Declais A.-C., Lilley D.M.J. Electrostatic interactions and the folding of the four-way DNA junction: analysis by selective methyl phosphonate substitution // J. Mol. Biol. 2004. V. 343. P. 851−864.
  78. Liu J., Declais A.-C., Lilley D.M.J. Mechanistic aspects of the DNA junction-resolving enzyme T7 endonuclease I // Biochemistry. 2006. V. 45. P. 393— 442.
  79. Liu J., Declais A.-C., McKinney S.A., Ha T., Norman D.G., Lilley D.M.J. Stereospecific effects determine the structure of a four-way DNA junction // Chem. Biol. 2005. V. 12. P. 217−228.
  80. Lombard D.B., Chua K.F., Mostoslavsky R., Franco S., Gostissa M., Alt F.W. DNA repair genome stability and aging // Cell. 2005. V. 120(4). P. 497−512.
  81. MacDonald M., Hassold T., Harvey J., Wang L.H., Morton N.E., Jacobs P. The origin of 47 XXY and 47 XXX aneuploidy: heterogeneous mechanisms and role of aberrant recombination // Hum. Mol. Genet. 1994. V. 3(8). P. 1365−1371.
  82. MacMaster R., Sedelnikova S., Baker P.J., Bolt E.L., Lloyd R.G., Rafferty J.B. RusA Holliday junction resolvase: DNA complex structure — insights into selectivity and specificity // Nucleic Acids Res. 2006. V. 34. P. 55 775 584.
  83. Makarova K.S., Aravind L., Koonin E.V. Holliday junction resolvases and related nucleases: identifcation of new families phyletic distribution and evolutionary trajectories //Nucleic Acids Res. 2000. V. 28. P. 3417−3432.
  84. Makrides S.C. Strategies for achieving high-level expression of genes in Escherichia coli // Microbiol. Rev. 1996. V. 60. P. 512−538.
  85. Mao C., Sun W., Seeman N.C. Designed two-dimensional DNA Holliday junction arrays visualized by atomic force microscopy // J. Am. Chem. Soc. 1999. V. 121. P. 5437D5443.
  86. Mashal R.D., Koontz J., Sklar J. Detection of mutations by cleavage of DNA heteroduplexes with bacteriophage resolvases // Nat. Genet. 1995. V. 9. P. 177−183.
  87. McKee B.D. Homologous pairing and chromosome dynamics in meiosis mitosis // Biochim. Biophys. Acta. 2004. V. 1677(1−3). P. 165−180.
  88. McKim K.S., Jang J.K., Manheim E.A. Meiotic recombination and chromosome segregation in Drosophila females // Annu. Rev. Genet. 2002. V. 36. P. 205−232.
  89. McKinney S.A., Declais A.-C., Lilley D.M.J., Ha T. Structural dynamics of individual Holliday junctions //Nat. Struct. Biol. 2003. V. 10. P. 93−97.
  90. Middleton C.L., Parker J.L., Richard D.J., White M.F., Bond C.S. Substrate recognition and catalysis by the Holliday junction resolving enzyme Hje // Nucl. Acids. Res. 2004. V. 32. P. 5442−5451.
  91. Mizuguchi H., Nakatsuji M., Fujiwara S., Takagi M., Imanaka T. Characterization and application to hot start PCR of neutralizing monoclonal antibodies against KOD DNA polymerase // J. Biochem. 1999. V.126. P.762−768.
  92. Moffatt B.A., Studier F.W. T7 lysozyme inhibits transcription by T7 RNA polymerase // Cell. 1987. V. 49. P. 221−227.
  93. Morrison C., Vagnarelli P., Sonoda E., Takeda S., Earnshaw W.C. Sister chromatid cohesion genome stability in vertebrate cells // Biochem. Soc. Trans. 2003. V. 31(1). P. 263−265.
  94. Murchie A.I.H., Clegg R.M., von Kitzing E., Duckett D.R., Diekmann S., Lilley D.M.J. Fluorescence energy transfer shows that the fourway DNAjunction is a right-handed cross of antiparallel molecules // Nature. 1989. V. 341. P. 763−766.
  95. Newman M., Lunnen K., Wilson G., Greci J., Schildkraut I., Phillips S.E.V. Crystal structure of restriction endonuclease Bgll bound to its interrupted DNA recognition sequence // EMBO J. 1998. V. 17. P. 5466−5476.
  96. Ni Y, Chen R. Extracellular recombinant protein production from Escherichia coli // Biotechnol. Lett. 2009. V. 31. P. 1661−1670.
  97. Nishino T., Komori K., Tsuchiya D., Ishino Y., Morikawa K. Crystal structure of the archaeal Holliday junction resolvase Hjc and implications for DNA recognition // Structure. 2001. V. 9. P. 197−204.
  98. Oram M., Keeley A., Tsaneva I. Holliday junction resolvase in Schizosaccharomyces pombe has identical endonuclease activity to the CCE1 homologue YDC2 //Nucl. Acids Res. 1998. V. 26. P. 594−601.
  99. Ortiz-Lombardia M., Gonzalez A., Erijta R., Aymami J., Azorin F., Coll M. Crystal structure of a DNA Holliday junction // Nat. Struct. Biol. 1999. V. 6. P. 913−917.
  100. Overmars F.J.J., Altona C. NMR study of the exchange rate between two stacked conformers of a model Holliday junction // J. Mol. Biol. 1997. V. 273. P. 519−524.
  101. Panyutin I.G., Hsieh P. The kinetics of spontaneous DNA branch migration // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 2021−2025.
  102. Parkinson M.J., Lilley D.M.J. The junction-resolving enzyme T7 endonuclease I: quaternary structure and interaction with DNA // J. Mol. Biol. 1997. V. 270. P. 169−178.
  103. Parkinson M.J., Pohler J.R.G., Lilley D.M.J. Catalytic and binding mutants of the junction-resolving enzyme endonuclease I of bacteriophage T7: role of acidic residues //Nucleic Acids Res. 1999. V. 27. P. 682−689.
  104. Pingoud A., Jeltsch A. Structure and function of type II restriction endonucleases // Nucleic Acids Res. 2001. V. 29. P. 3705−3727.
  105. Plank J.L., Hsieh T.S. A novel, topologically constrained DNA molecule containing a double Holliday junction: design, synthesis, and initial biochemical characterization // J. Biol. Chem. 2006. V. 281(25). P. 17 510−17 516.
  106. Powling A., Knippers R. Recombination of bacteriophage T7 in vivo // Mol. Gen. Genet. 1976. V. 149. P. 63−71.
  107. Pohler J.R.C Giraud-Panis M.-J.E. & Lilley D.M.J. T4 endonuclease VII selects and alters the structure of the four-way DNA junction- binding of a resolution-defective mutant enzyme // J. Mol. Biol. 1996. V. 260. P. 678−696.
  108. Raaijmakers H., Toro I., Birkenbihl R., Kemper B., Suck D. Conformational flexibility in T4 endonuclease VII revealed by crystallography: implications for substrate binding and cleavage//J. Mol. Biol. 2001. V. 308. P. 311−323.
  109. Raaijmakers H., Vix O., Toro I., Golz S., Kemper B., Suck D. X-ray structure of T4 endonuclease VII: a DNA junction resolvase with a novel fold unusual domain-swapped dimer architecture // EMBO J. 1999. V. 18. P. 1447−1458.
  110. Rodier F., Kim S.H., Nijjar T., Yaswen P., Campisi J. Cancer and aging: the importance of telomeres in genome maintenance // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2005. V. 37(5). P. 977−990.
  111. Sadowski P. D. Bacteriophage T7 endonuclease. I. Properties of the enzyme purified from T7 phage-infected Escherichia coli B // J. Biol. Chem. 1971. V. 246. P. 209−216.
  112. Saito A., Iwasaki H., Ariyoshi M., Morikawa K., Shinagawa H. Identification of four acidic amino acids that constitute the catalytic centre of the RuvC Holliday junction resolvase // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 7470−7474.
  113. Sawers G., Jarsch M. Alternative regulation principles for the production of recombinant proteins in Escherichia coli II Appl. Microbiol. Biotechnol. 1996. V. 46. P. 1−9.
  114. Sha R., Liu F., Seeman N. C. Atomic force microscopic measurement of the interdomain angle in symmetric Holliday junctions // Biochemistry. 2002. V. 41. P. 5950−5955.
  115. Sherratt D.J., Soballe B., Barre F.X., Filipe S., Lau I., Massey T., Yates J. Recombination and chromosome segregation // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2004. V. 359(1441). P. 61−69.
  116. Smith K.C. Recombinational DNA repair: the ignored repair systems // Bioessays. 2004. V. 26(12). P. 1322−1326.
  117. Sorensen H.P., Mortensen K.K. Soluble expression of recombinant proteins in the cytoplasm of Escherichia coli II Microb. Cell Fact. 2005. V. 4. P. 1.
  118. Srinivasan A.R., Olson W.K. Computer models of DNA four-way junctions // Biochemistry. 1994. V. 33. P. 9329−9404.
  119. Stuart D., Ellison K., Graham K., McFadden G. In vitro resolution of poxvirus replicative intermediates into linear minichromosomes with hairpin termini by a virally induced Holliday junction endonuclease // J. Virol. 1992. V. 66. P. 1551−1563.
  120. Studier F.W. The genetics physiology of bacteriophage T7 // J. Virol. 1969. V. 39. P. 562−574.
  121. Studier F.W. Use of bacteriophage T7 lysozyme to improve an inducible T7 expression system // J. Mol. Biol. 1991. V. 219. P. 37−44.
  122. Subramaniam S., Tewari A.K., Nunes-Duby S.E., Foster M.P. Dynamics and DNA substrate recognition by the catalytic domain of lambda integrase // J. Mol. Biol. 2003. V. 329(3). P. 423−439.
  123. Symington L., Kolodner R. Partial purification of an endonuclease from Saccharomyces cerevisiae that cleaves Holliday junctions 11 Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1985. V. 82. P. 7247−7251.
  124. Tajkhorshid E., Aksimentiev A., Balabin I., Gao M., Isralewitz B., Phillips J.C., Zhu F., Schulten K. Large scale simulation of protein mechanics and function // Adv. Protein Chem. 2003. V. 66. P. 195−247.
  125. Terpe K. Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2003. V. 60. P. 523−533.
  126. Terpe K. Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2006. V. 72. P. 211−222.
  127. Thorpe J.H., Gale B.C., Teixeira S.C., Cardin C.J. Conformational and hydration effects of site-selective sodium calcium and strontium ion binding to the DNA Holliday junction structure d (TCGGTACCGA)4 // J. Mol. Biol. 2003. V. 327. P. 97−109.
  128. Thorpe J.H., Teixeira S.C., Gale B.C., Cardin, C.J. Structural characterization of a new crystal form of the four-way Holliday junction formed by the DNA sequence d (CCGGTACCGG)2: sequence versus lattice? // Acta Crystallogr. D. 2002. V. 58. P. 567−569.
  129. Tsujimoto Y., Ogawa H. Intermediates in genetic recombination of bacteriophage T7 DNA. Biological activity and the roles of gene 3 gene 5 // J. Mol. Biol. 1978. V. 125. P. 255−273.
  130. Voth A.R., Hays F.A., Ho P. S. Directing macromolecular conformation through halogen bonds // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. V. 104. P. 61 886 193.
  131. Wardleworth B.N., Kvaratskhelia M., White M.F. Sitedirected mutagenesis of the yeast resolving enzyme Ccel reveals catalytic residues and relationship with the intron-splicing factor Mrsl // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 2 372 523 728.
  132. Watson J., Hays F.A., Ho P. S. Definitions and analysis of DNA Holliday junction geometry // Nucleic Acids Res. 2004. V. 32. P. 3017−3027.
  133. West S.C., Korner A. Cleavage of cruciform DNA structures by an activity from Saccharomyces cerevisiae II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. P. 6445−6449.
  134. Whitby M.C., Dixon J. A new Holliday junction resolving enzyme from Schizosaccharomyces pombe that is homologous to CCE1 from Saccharomyces cerevisiae II J. Mol. Biol. 1997. V. 272. P. 509−522.
  135. White M.F., Lilley D.M.J. Characterization of a Holliday junction resolving enzyme from Schizosaccharomyces pombe II Mol. Cell. Biol. 1997a. V. 17. P. 6465−6471.
  136. White M.F., Lilley D.M.J. Interaction of the resolving enzyme YDC2 with the four-way DNA junction // Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 5609−5616.
  137. White M.F., Lilley D.M.J. The resolving enzyme CCE1 of yeast opens the structure of the four-way DNA junction // J. Mol. Biol. 1997b. V. 266. P. 122−134.
  138. White M.F., Lilley D.M.J. The structure-selectivity and sequence-preference of the junction-resolving enzyme CCE1 of Saccharomyces cerevisiae // J. Mol. Biol. 1996. V. 257. P. 330−341.
  139. White M.F., Giraud-Panis M.-J.E., Pohler J.R.G., Lilley D.M.J. Recognition and manipulation of branched DNA structure by junction-resolving enzymes // J. Mol. Biol. 1997. V. 269. P. 647−664.
  140. Yang Q., Lishanski A., Yang W., Hatcher S., Seet H., Gregg J.P. Allele-specific Holliday junction formation: a new mechanism of allelic discrimination for SNP scoring // Genome Res. 2003. V. 13(7). P. 1754−1764.
  141. Zerbs S., Frank A.M., Collart F.R. Bacterial systems for production of heterologous proteins // Methods Enzymol. 2009. V. 463. P. 149−168.
  142. Zhang, X., Studier, F.W. Mechanism of inhibition of bacteriophage T7 RNA polymerase by T7 lysozyme // J. Mol. Biol. 1997. V. 269. P. 10−27.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!