Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Биотехнологические подходы к повышению информативности серологической диагностики сифилиса

Диссертация: Биотехнологические подходы к повышению информативности серологической диагностики сифилиса
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Наибольшее внимание привлекли данные о наличии противотрепонем-ных иммуноглобулинов в сыворотках крови больных с доказанной сифилитической инфекцией (вторичный и ранний скрытый сифилис). Доказательство наличия специфического инфекционного процесса основывалось на комплексе клинико-лабораторных данных, полученных при стационарном обследовании. Исходя из наших предположений (глава 5), все из данных… Читать ещё >

Содержание

  • СОКРАЩЕНИЯ
  • ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Характеристика возбудителя сифилиса
    • 1. 2. Инфекционная иммунология сифилиса
    • 1. 3. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса
    • 1. 4. Иммуноферментный анализ в диагностике сифилиса
    • 1. 5. Реакция иммунофлюоресценции в диагностике сифилиса
    • 1. 6. Методы разделения иммуноглобулинов
      • 1. 6. 1. Физико-химические методы
      • 1. 6. 2. Бактериальные Fc-рецепторы
    • 1. 7. Аффинная хроматография
  • ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Характеристика использованных антигенов
      • 2. 1. 1. Характеристика цельноклеточного антигена патогенной трепонемы
      • 2. 1. 2. Искусственные аналоги антигенов T. pallidum
      • 2. 1. 3. Характеристика культурального трепонемного антигена
      • 2. 1. 4. Характеристика кардиолипинового антигена
    • 2. 2. Характеристика конъюгатов
    • 2. 3. Иммуноферментный анализ
    • 2. 4. Реакция иммунофлюоресценции
    • 2. 5. Аффинная хроматография
    • 2. 6. Метод иммуноблотинга
    • 2. 7. Характеристика контрольных панелей сывороток
    • 2. 8. Характеристика контрольной панели слюны
    • 2. 9. Стандартные серологические реакции
      • 2. 9. 1. Реакция микроприципитации
      • 2. 9. 2. Быстрый плазмореагиновый тест (RPR-тест)
      • 2. 9. 3. Реакция связывания комплемента
      • 2. 9. 4. Реакция пассивной гемагглютинации
    • 2. 10. Общеклинические лабораторные исследования
    • 2. 11. Статистическая обработка результатов
  • ГЛАВА III. Разработка и оптимизация ИФА на основе искусственных аналогов трепонемных антигенов
    • 3. 1. Изучение искусственных аналогов трепонемных антигенов
    • 3. 2. Сравнительная характеристика полистироловых планшетов
    • 3. 3. Изучение зависимости результатов ИФА от разведения исследуемого материала
      • 3. 3. 1. Изучение влияния разведения сыворотки крови на результаты ИФА
      • 3. 3. 2. Изучение влияния разведения слюны на результаты ИФА
    • 3. 4. Изучение влияния на результаты ИФА длительности контакта исследуемого материала с иммуносорбентом при комнатной температуре
    • 3. 5. Изучение влияния сроков хранения иммуносорбентов на результаты ИФА
  • ГЛАВА IV. Разработка и применение ИФА на основе кардиолипинового антигена
    • 4. 1. Выявление рабочей концентрации кардиолипинового антигена для его сорбции на твердую фазу
    • 4. 2. Результаты исследования кардиолипинового антигена в ИФА
  • ГЛАВА V. Разработка и оптимизация методов серологической диагностики сифилиса на основе нативных трепонемных антигенов
    • 5. 1. Разработка модифицированного метода IgM-РИФ-абс
      • 5. 1. 1. Сравнительное характеристика конъюгатов на основе белка
  • А и G
    • 5. 1. 2. Исследование культурального трепонемного антигена в
    • 5. 1. 3. Оптимизация условий проведения аффинной хроматографии
    • 5. 2. Изучение фракций культурального трепонемного антигена
  • ГЛАВА VI. Апробация разработанных серологических методов и обоснование алгоритмов диагностики сифилиса
    • 6. 1. Оценка диагностической значимости определения специфических сывороточных антител к белковым антигенам T. pallidum методом ИФА
    • 6. 2. Оценка диагностической значимости выявления методом ИФА противотрепонемных секреторных IgA-антител к белковым антигенам T. pallidum
    • 6. 3. Оценка диагностической значимости выявления IgM-антител модифицированным методом РИФ-абс
    • 6. 4. Построение линейных дискриминантных функций для решения задач дифференциальной диагностики скрытого сифилиса и серорезистентности

Биотехнологические подходы к повышению информативности серологической диагностики сифилиса (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность работы. Сифилис, как и другие инфекции, передаваемые половым путем, имеет медико-социальную значимость. Это связано с тем, что помимо экономического ущерба для общества, связанного с нарушением трудоспособности человека, заболевание таит в себе «отсроченную опасность», в виде нарушения репродуктивного здоровья больного. Заболевание может привести к рождению потомства, неполноценного как физически, так и умственно, тяжелых поражений нервной системы и различных внутренних органов и т. д. [4, 6,18, 35, 143,168, 202].

В последние годы существенно изменилась клиника сифилиса: увеличилось число атипичных, малосимптомных, скрытых форм заболевания, а также серорезистентности после лечения сифилиса, что создает значительные трудности для диагностики инфекции [21, 28, 36, 97, 108].

В таких условиях большое значение приобретает эффективная диагностика данной инфекции. В связи с этим в настоящее время наиболее актуальной проблемой является внедрение в практику высокочувствительных и специфичных методов, позволяющих выявить заболевание, как на ранних сроках его развития, так и скрытое его течение.

Традиционные методы серодиагностики сифилиса (MP, РВ, РПГА), используемые в настоящее время, к сожалению, не могут служить источником истинной информации о наличии инфекции, а также надежным критерием излеченности. Даже применение таких высокочувствительных методов как иммуноферментный анализ и реакции флюоресценции, по-прежнему являющейся «золотым стандартом» лабораторной диагностики сифилиса, не гарантирует достоверной постановки диагноза, поскольку результаты нескольких стандартных реакций, поставленных одновременно, могут оказаться противоречивыми^, 28, 36].

В связи с этим, в настоящее время наиболее острой проблемой является разработка и внедрение в практику тестов и методов, позволяющих выявить заболевание на ранних сроках его развития, скрытое течение инфекционного процесса, а также корректной и обоснованной интерпретации результатов, полученных с их помощью.

Развитие биотехнологии сделало возможным получение искусственных аналогов микробных, в том числе и трепонемных, антигенов и их использование для диагностических целей и моноклональных антител, которые позволяют выявлять различные классы и подклассы иммуноглобулинов. Именно эти два направления (применение искусственных аналогов антигенов и выявление различных классов антител), в настоящее время, являются наиболее перспективными в решении проблем совершенствования диагностики сифилиса [47, 48, 51].

Несомненно, метод иммуноферментного анализа позволяет наиболее широко и полно использовать достижения, перечисленные выше. При этом «метод обладает такими достоинствами, как: позволяет проводить массовые обследования, возможность автоматизации процесса, простота в постановке, короткое время анализа.

Другим возможным решением проблемы улучшения качества диагностики сифилиса, может стать усовершенствование реакции иммунофлюоресценции. В данном методе в качестве антигена используется цельноклеточная патогенная трепонема, что является полным набором антигенных структур микроорганизма. Соответственно данным методом можно регистрировать антитела к антигенам, не использующимися другими диагностическими методами. Например, к таким антигенам следует отнести липополисахаридный компонент внешней мембраны T.pallidum.

Таким образом, основываясь на вышеизложенном, целью нашего исследования стала разработка методов на основе ИФА и РИФ, позволяющих констатировать наличие или отсутствие сифилитической инфекции в диагностически сложных ситуациях.

В рамках этой цели мы ставили перед собой следующие задачи:

1. Разработать и оптимизировать ИФА с использованием искусст венных аналогов трепонемных антигенов для исследования сывороток крови и слюны на сифилис, а также изучить с его помощью динамику и спектр антител в процессе лечения заболевания и при серорезистентности после проведенной терапии;

2. Изучить возможность использования для серодиагностики сифилиса культурального и кардиолипинового антигенов в ИФА;

3. Изучить возможность использования и оптимизирования процесса аффинной хроматографии с целью элиминации иммуноглобулинов класса G из сывороток крови;

4. Обосновать алгоритм установления серорезистентности после ранее перенесенной сифилитической инфекции с использованием разработанных модификаций серологических методов.

Научная новизна работы определяется следующими положениями:

— Впервые получены новые данные о биотехнологических свойствах иммуносорбента на основе синтетического трепонемного пептида из области липопротеина Трр41.

— Впервые предпринята попытка конструирования авторских вариантов ИФА, предназначенных для выявления антитрепонемных секреторных IgA слюны и для выявления антикардиолипиновых антител сыворотки.

— Впервые адаптирован процесс аффинной хроматографии с рекомби-нантным аналогом стрептококкового белка G для конструирования модификации метода РИФ-абс, с целью высокоэффективного одномоментного удаления всех субизотипов иммуноглобулинов класса G из исследуемых сывороток крови.

• Практическая значимость работы.

Биотехнологические параметры разработанных авторских вариантов серологической диагностики сифилиса могут быть использованы при проведении научных исследований, а также в практической работе медицинских лабораторий для повышения качества диагностирования сифилиса.

Разработанный алгоритм дифференциальной диагностики серологической резистентности позволяет улучшить качество медицинской помощи категории пациентов с данной патологией в дерматовенерологических учреждениях.

Апробация результатов исследования.

Результаты работы доложены на Конференции молодых ученых Смоленской государственной медицинской академии (Смоленск, 2002), Заседании Общества дерматовенерологов г. Смоленска (Смоленск, 2003), Юбилейной конференции, посвященной 80-летию кафедры микробиологии Военно-медицинской академии им. С. М. Кирова (Санкт-Петербург, 2003), Заседании Санкт-Петербургского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И. И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2004), Конференции Российско-Шведского проекта «Кон* троль и профилактика инфекций, передаваемых половым путем» (Санкт.

Петербург, 2004), Научной конференции с международным участием «Современные средства иммунодиагностики, иммунои экстренной профилактики актуальных инфекций» (Санкт-Петербург, 2004).

Результаты исследований внедрены в учебный процесс и диагностическую работу кафедр кожных и венерических болезней и микробиологии Военно-медицинской академии, а также на кафедре дерматовенерологии Смоленской государственной медицинской академии.

Положения выносимые на защиту.

1. Установленные параметры ИФА для выявления спектра антитрепо-немных иммуноглобулинов к белковым липопротеинам могут использоваться для повышения информативности серологической диагностики сифилиса;

2. Диагностическая эффективность ИФА с кардиолипиновым антигеном, авторского варианта РИФабс.-IgM, а также обнаружения специфических секреторных IgA слюны при сифилисе требует дополнительного изучения.

3. Применение линейно-дискриминантной функции позволяет дифференцировать наличие инфекционного процесса от длительно сохраняющихся положительных результатов тестов.

Структура и объем диссертации

.

Диссертация изложена на 184 страницах машинописного текста и включает введение, 6 глав, заключение, выводы, приложение, благодарности, а также список использованной литературы, содержащий 116 источников на русском языке и 91 на иностранных языках. В текст включены 37 таблиц и 15 рисунков.

ВЫВОДЫ.

1. Оптимальными условиями постановки ИФА для выявления субизотипов антител к белковым антигенам возбудителя сифилиса являются: а) при получении иммуносорбента — полистироловые планшеты «Costar» и «Nunc" — концентрация антигенов р15 — 4 мкг/млр17 — 4 мкг/млsifl3 — 5 мкг/млр47 — 4 мкг/мл, длительность сорбции 24 часа при 4 °C, рН сорбирующего карбонатно-бикарбонатного буферного раствора 9,6- б) при взаимодействии исследуемой пробы с иммуносорбентом — разведение исследуемой сыворотки крови 1:10- разведение образцов слюны 1/81- результаты изучения специфических секреторных IgA слюны отличаются выраженной вариабельностью и зависимостью от показателя вязкости биологического материала, что не позволяет рекомендовать данную процедуру для использования в клинической практике;

2. Антитела IgG3 и IgM, направленные к антигенам 15, 17, 41 и 47 кД после лечения элиминируются в течение трех месяцев. Уровни антител класса IgG к антигену 41 кД по сравнению с антителами к антигенам 15, 17 и 47 кД снижаются в более ранние сроки. Сохранение позитивности результатов ИФА в отдаленные после лечения сроки чаще всего связано с антителами к антигену 17 кД.

3. Использование культурального трепонемного антигена в ИФА отличается значительным числом ложноположительных результатов, что исключает успешность его использования на практике;

Выявление антикардиолипиновых иммуноглобулинов в ИФА позволяет дифференцировать сифилитическую инфекцию и другие состояния, предполагающие образования аутоантител к фосфолипидам, по уровням оптической плотности. Возможность качественной дифференцировки вышеназванных состояний требует дальнейшего изучения;

4. Оптимальными режимами проведения аффинной элиминации сывороточных иммуноглобулинов класса G являются: скорость подвижной фазы во время прохождения сыворотки крови — 0,6 мл/мин, объем наносимой на колонку сыворотки — 1 мл. Результаты клинического испытания разработанного метода демонстрируют необходимость продолжения работы по окончательной оптимизации протокола постановки IgM-РИФ-абс.

5. Применение ЛДФ с использованием следующих показателей: уровень IgGl-антител к антигену 41 кД, количество серологических маркеров в ИФА, уровень IgGl-антител к антигену 17 кД, динамика комплекса серологических реакций, уровеньОЗ-антител к антигену 41 кД, может использоваться для установления причины серологической резистентности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

На сегодняшний день, на практике все большее внимание уделяется проблеме внедрения новых методов серологической диагностики сифилиса. При этом, в научной литературе подчеркивается необходимость усовершенствования уже существующих и известных на практике методов. Не вызывает сомнений потребность уточнения подходов к корректной интерпретации результатов исследований, полученных с их помощью.

Это связано с тем, что используемые в настоящее время методы серодиагностики, в первую очередь РСК, не могут служить источником высоко достоверной информации о наличии сифилитической инфекции и носят зачастую противоречивый характер [6, 28, 36, 168]. В особенности данный факт, проявляется при диагностике таких форм заболевания как скрытый сифилис, врожденный сифилис, серорезистентность, количество которых в силу различных причин, как экономических, так и социальных, в последнее время увеличивается [21, 35, 62, 84].

В современной инфекционной иммунологии существуют несколько подходов к повышению информативности серологической диагностики. Во-первых, с развитием биотехнологии стало возможным получение искусственных аналогов микробных антигенов и их использование в диагностических препаратах [29, 49, 73]. Во-вторых, дополнительного преимущества позволяют добиться методы раздельного выявления классов и подклассов специфических иммуноглобулинов при различных инфекционных заболеваниях [32, 51, 58, 157, 162]. В третьих, отдельное внимание уделяется изменению трактовки результатов серологического тестирования в свете новейших достижений в фундаментальной иммунологии.

В целях реализации вышеперечисленных подходов нами были сформулированы основные задачи исследования. В качестве антигенов для конструирования авторских вариантов методов серологической диагностики использовался представительный перечень трепонемных антигенов, включающий патогенных и культуральных трепонем, рекомбинантные и синтетические аналоги трепонемных липопротеинов.

Для разработки более информативных модификаций тестов в серологической диагностике сифилиса, были выбраны два базовых метода — ИФА и РИФ. Процедуры оптимизации авторских модификаций серологических методов и их практическая апробация проводились с использованием клинического материала, полученного от пациентов ведущих дерматовенерологических стационаров Санкт-Петербурга и Смоленска. С целью объективизаV ции выводов при анализе фактических результатов экспериментов использовались многочисленные методы статистического анализа, включая методы многомерной статистики.

Приоритет, который был предоставлен ИФА, достаточно очевиден: простота постановки, короткое время анализа, реальная возможность автоматизации, потенциально более высокая чувствительность, инструментальный учет результата, исключающий субъективизм. Метод ИФА позволяет наиболее широко и полно использовать достижения биотехнологии, к которым стоит отнести такие как получение искусственных аналогов природных антигенов возбудителей, фракционирование и очистка нативных антигенов, моноклональные антитела против различных классов и подклассов иммуноглобулинов человека.

В качестве одного из путей совершенствования данной методики для серодиагностики сифилиса, мы избрали использование различных по природе антигенов (искусственные аналоги антигенов патогенной трепонемы, нативный антиген культуральной трепонемы, кардиолипиновый антиген) с изучением диагностических свойств иммуносорбентов на их основе. Помимо этого, проводилось исследование специфических секреторных иммуноглобулинов класса, А слюны, как вариант возможного повышения информативности серологической диагностики данного заболевания.

Ранее в работах по совершенствованию ИФА-диагностики сифилиса уже была проведена оценка иммунореактивности и диагностической значимости четырех рекомбинантных белков, соответствующих природным антигенам возбудителя сифилиса молекулярной массой 15, 17, 41 и 47 кД, а также девятнадцати синтетических пептидов, имитирующих иммунодоминантные участки данных антигенов. В результате этого эксперимента был выявлен наиболее иммунореактивный пептид — Sifl3 из области естественного антигена молекулярной массой 41 кД, как обеспечивающий наилучший показатель P/N. Для синтетических пептидов из области антигенов 15, 17 и 47 кД была получена меньшая иммунореактивность, чем для их рекомбинантных аналогов, поэтому в работе мы использовали рекомбинантные аналоги трепонемных антигенов 15 кД (р15), 17 кД (р17) и 47 кД (р47) и синтетический аналог антигена 41 кД — Sifl3.

Аргументацией пристального изучения синтетического пептида является тот факт, что в целом данная разновидность аналогов природных антигенов практически не исследована. На сегодняшний день лишь показана высокая иммунореактивность в ИФА синтезированного антигена Sifl3, но исследования свойств твердофазного иммуносорбента на его основе не проводилось.

Для конструирования на основе Sif 13 сенсибилизированной твердой фазы нами была определена оптимальная концентрация данного антигена, которая составила 5 мкг/мл.

Для исследования диагностических возможностей полученного иммуносорбента, мы изучили влияние следующих факторов: сорбционные свойства планшетовдополнительное время контакта исследуемого образца с сенсибилизированной поверхностью твердой фазы при комнатной температуреразведение исследуемого материала, а также сроки хранения сенсибилизированных планшетов при различных температурных условиях.

Результаты изучения позволили выявить оптимальные параметры использования иммуносорбента на основе Sifl3: установили наилучшие марки твердой фазы («Nunc» и «Costar»), оптимальное разведение исследуемой сыворотки крови (1:10), показали, что время контакта иммуносорбента с исследуемым материалом при комнатной температуре не должен превышать 10 мин, что по срокам хранения не уступают иммуносорбентам на основе рекомбинантных антигенов (6 месяцев). Данные факты позволили прогнозировать дальнейшее изучение и успешное применение синтетических антигенов.

Особенно ценными представляются результаты использования авторских вариантов ИФА в области изучения динамики трепонемоспецифических антител в процессе антибиотикотерапии сифилиса. В частности обнаружено, что при первичном сифилисе в результате лечения удается добиться снижения реактивности парных сывороток крови в ИФА. При обнаружении антител подкласса IgG3 и класса IgM к антигенам 15, 17, 41 и 47 кД наблюдается полная негативация результатов ИФА через три месяца с момента окончания лечения. IgGl подкласс антител, в особенности к антигенам 17 и 47 кД, продолжает сохраняться на диагностически значимых уровнях и в более поздние сроки.

При вторичном свежем сифилисе после назначения противомикробного лечения полной негативации результатов ИФА не происходит. В течение трех месяцев от момента окончания лечения наблюдается отрицательная динамика уровней антител, в первую очередь к антигену 41 кД (количество положительных образцов снижается с 89,9 до 17,4%). Из числа противотрепо-немных антител, направленных к антигенам 15, 17 и 47 кД эффективно элиминируются после лечения только IgG3 и IgM. IgGl подкласс иммуноглобулинов продолжает обуславливать позитивность исследуемых образцов в трехмесячные сроки после завершения терапии (к антигену 15кД в 24,6% случаев, к антигену 17 кД в 55,1%, к антигену 47 кД в 30,4%).

Группа больных вторичным рецидивным сифилисом характеризуется относительной консервативностью при выявлении специфических антител в динамике и после лечения. Закономерными являются различия в темпах не-гативации при определении антител, представленных различными подклассами. IgG3 и IgM-антитела, направленные к антигенам 15, 17, 41 и 47 кД, перестают определяться уже с третьего месяца после окончания терапии. IgGl-антитела, в ряде случаев, продолжают выявляться и после лечения (к антигену 15кД в 40,3% случаев, к антигену 17 кД в 61,1%, к антигену 47 кД в 40,3%). Наиболее заметна отрицательная динамика иммуноглобулинов, специфичных антигену 41 кД. Только 5,6% пациентов выявляются как позитивные в ИФА с антигеном 41 кД после лечения.

При раннем скрытом периоде сифилиса наиболее выраженным было снижение доли положительных проб, реагирующих с антигеном 41 кД (с 94,4% при первичном исследовании до 3.7% через три месяца после окончания лечения). Сохранение после лечения иммунореактивности сывороток крови с антигенами 15, 17 и 47 кД (к антигену 15кД в 14,8% случаев, к антигену 17 кД в 42,6%, к антигену 47 кД в 18,5%) связано с иммуноглобулинами IgGl.

Больные поздним скрытым сифилисом отличаются обнаружением в их сыворотке крови антител исключительно IgGl подкласса. К антигенам 17 и 47 кД IgGl-антитела определяются в 100% случаев. В результате лечения добиться эффективного снижения специфических иммуноглобулинов, направленных к антигенам 17, 41 и 47 кД, не удается. Кроме того, к антигену 47 кД в 66,7% образцов при позднем скрытом сифилисе присутствуют антитела IgG4 подкласса, что позволяет дифференцировать заболевание в этот период от раннего скрытого сифилиса. ;

На основе сведений о динамике различных по антигенной направленности и класс-принадлежности иммуноглобулинов, предпринята попытка дифференциальной диагностики серологической резистентности. Так как, наиболее остро проблема верификации причины серорезистентности проявляется в группе беременных, для первоначальных экспериментов был отобран клинический материал от данной категории пациентов.

Показано, что пациенты с диагнозом вторичный и ранний скрытый сифилис проявляют выраженную иммунологическую реактивность в ИФА с искусственными аналогами трепонемных антигенов. В сыворотке крови больных присутствуют специфические иммуноглобулины как минимум к трем липопротеинам из числа белков с молекулярной массой 15, 17, 41 и 47 кД. Группа беременных с клиническим диагнозом «серорезистентность» отличается гетерогенностью по результатам исследований в ИФА. В 42,3% случаев в сыворотке крови пациентов определяются антитела не более чем к двум трепонемным антигенам (17 и 47 кД), что позволяет исключить возможность сохранения в их организме жизнеспособного возбудителя.

С целью большей объективизации фактических данных был выполнен расчет линейных дискриминантных функций, позволяющих с высокой степенью вероятности определить целесообразность назначения дополнительной специфической терапии, при сохранении положительных серологических реакций в отдаленные, после проведения первоначального лечения сифилиса, сроки.

Как оказалось при исследовании специфических IgA-антител слюны, результаты ИФА отличались выраженной вариабельностью, по сравнению с сывороткой крови, белковой фракции слюны, концентрация которой варьирует в большом диапазоне. Соответственно, подобрать оптимальное рабочее разведение, единое для всего исследуемого материала, практически невозможно. Как выяснилось, сопоставимость результатов анализа в большой степени зависит от физических свойств исследуемого материала, в частности от вязкости слюны. Для проведения исследования слюны на выявление IgA-антител может быть целесообразным определение оптимального значения ее вязкости для получения сопоставимых результатов серологических реакций.

Определение вязкости взятых на анализ образцов может значительно затруднить повседневную работу диагностической лаборатории, поскольку данная методика достаточно трудоемка и при массовом поступлении материала на исследование вызовет дополнительные сложности. По всей видимости, исследование слюны на специфические секреторные иммуноглобулины класса А, преждевременно рекомендовать для применения в рутинной диагностике сифилиса. v.

Раздел работы, посвященный изучению возможности конструирования ИФА-тест-системы на основе кардиолипинового антигена, обоснован необходимостью переформатирования неспецифических трепонемных реакций, которые используют данный вариант антигена, для проведения массового скринингового обследования.

Как выяснилось, данный подход перспективен для последующего его изучения и определения его оптимальных характеристик. В тоже время стоит подчеркнуть, что для достижения возможности максимально специфично прогнозировать наличие сифилитической инфекции, опираясь на результаты, полученные данным методом, необходим расчет наиболее корректной ОП крит. С этой целью целесообразно проведения исследования большого количества образцов, как от здоровых людей, так и от пациентов с самой различной патологией, чтобы достоверно выявить, в каких случаях возможно продуцирование клетками организма аутоантител.

Попытка разработки нового диагностического метода (ИФА) на основе цельноклеточного культурального трепонемного антигена выявила серьезные недостатки при клинической апробации. Наиболее существенным негативным свойством являлась крайне низкая специфичность результатов тестирования сывороток крови от здоровых доноров.

Другим возможным решением проблемы улучшения качества диагностирования сифилиса, может стать усовершенствование реакции иммунофлюоресценции. Длительное время, неоспоримым доказательством наличия заболевания считался положительный результат постановки высокоспецифичной РИФ-абс. Но возникли проблемы, связанные с длительно сохраняющимися положительными результатами реакции. Как доказали последующие исследования, они обусловлены наличием IgG антител, которые способны продуцироваться в организме, годами после проведенного лечения. Применяющаяся в качестве антигена цельноклеточная патогенная трепонема является уникальным набором антигенных структур, антитела к которым могут не учитываться другими диагностическими методами и «маскироваться» имеющимися IgG антителами. В частности, к таковым следует отнести иммуноглобулины класса М к ЛПС антигену внешней мембраны T.pallidum.

Возможность верификации врожденной инфицированности возбудителем сифилиса большинством исследователей ассоциируется с необходимостью детекции специфических иммуноглобулинов класса М. На практике при выявлении антител класса М могут возникать сложности, связанные с конкуренцией в серологических реакциях данных иммуноглобулинов с антителами класса G (IgG). Для исключения подобных явлений на предварительном этапе исследуемые сыворотки крови истощают от иммуноглобулинов G. Все из предложенных на сегодняшний день методов удаления IgG не могут быть адаптированы для практического использования в связи с крайней методической сложностью, трудоемкостью и дороговизной. Перечисленные трудности могут быть устранены путем внедрения в практику методов обнаружения IgM-антител, направленных к липополисахаридным антигенам T. pallidum, и отражающих наличие Т-независимого иммунного ответа. Предлагается модификация метода РИФабс.-IgM, предполагающая исследование сывороток крови с предварительно истощенной фракцией IgG. Для удаления иммуноглобулинов из сыворотки крови используется рекомбинантный аналог Fc-рецептора стрептококка группы G.

Наибольшее внимание привлекли данные о наличии противотрепонем-ных иммуноглобулинов в сыворотках крови больных с доказанной сифилитической инфекцией (вторичный и ранний скрытый сифилис). Доказательство наличия специфического инфекционного процесса основывалось на комплексе клинико-лабораторных данных, полученных при стационарном обследовании. Исходя из наших предположений (глава 5), все из данных пациентов должны были давать в РИФ положительные результаты. Тем не менее, в одном случае вторичного сифилиса (25%) и двух случаях раннего скрытого сифилиса (29%) специфические иммуноглобулины класса М не выявлялись. Наиболее вероятной причиной выявленных фактов, мы считаем возможность неконтролируемого разведения исследуемых образцов в процессе жидкостной хроматографии, которое приводит к снижению концентрации искомых антител за пределы разрешающей способности использованного метода детекции. В этой связи корректный анализ результатов использования IgM-РИФ-абс. в группе пациентов с серорезистентностью не представлялся возможным.

Таким образом, результаты фактического клинического испытания разработанного метода обнаружения IgM-антител к антигену патогенной T. pallidum демонстрируют необходимость продолжения работы по окончательной оптимизации протокола постановки реакции. Основное внимание необходимо уделить факторам, влияющим на разбавление исследуемых биологических образцов, а также методам их контроля.

Последняя глава работы посвящена обоснованию алгоритма серодиагностики сифилиса с учетом разработанных методов и полученных результатов после их апробации.

В целом результаты работы свидетельствуют о преимуществах разработанных методов серологической диагностики сифилиса и перспективности их использования для решения трудных диагностических задач в дерматовенерологической практике.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Аберкромби Д и др. Аффинная хроматография: Методы. М.: Мир, 1988. -205 с.
  2. С. Хроматографическое разделение энантиомеров. М.: Мир, 1991.-268 с.
  3. В.А., Тихонова Л. И., Машкиллейсон А. Л. и др. Заболеваемость сифилисом: опыт истории, эпидемиологический анализ, прогнозы // Заболевания передаваемые половым путем. 1995. — № 4. — С. 22 -25.
  4. В.А., Прохоренков В. И., Новиков А. И. и др. Сифилис. Иллюстрированное руководство / Под ред. проф. В. И. Прохоренкова. М.: Медицинская книга, 2002. — 300 с.
  5. В.А., Резайкина А. В., Тихонова Л. И. Характеристика эпидемиологических закономерностей распространения ЗППП // Вестн. дерматологии и венерологии. 1998. — № 1. — С. 4−8
  6. Е. Р. Приобретенный сифилис: медико социальные вопросы: Дисс.. д-ра мед. наук. — СПб, 2001. — 333 с.
  7. К. Р. Сифилис, его диагностика и лечение. М.: Медицина, 1971.-431 с.
  8. К. Р. Ошибки в диагностике сифилиса. М., 1952. — 192 с.
  9. В. Н. Иммунолюминисцентный анализ в диагностике сифилиса // Иммунолюминисценция в медицине. М.: Медицина, 1977. — С. 72−79
  10. П.Беднова В. Н., Дмитриев Т. А., Бабий А. В. и др. Новая тест-система иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. 1995. — № 1. — С. 19−20.
  11. В.Н., Коляденко В. Г., Павлова Е. В. и др. Новый сорбент для постановки РИФ- абс на сифилис // Вестн. дерматологии и венерологии. -1992.- № 6.-С. 37−39
  12. П.Беднова В. Н., Милонова Т. И., Дмитриев Г. А., Бабий А. В. Новая тест-система ИФА на сифилис // Вестн. дерматологии и венерологии. 1994. -№ 4.-С. 51
  13. М.Безвершенко И. А. Аффинная хроматография. Киев: Наук, думка, 1978. -205 с.
  14. В.Д., Ходырев А. П., Тотолян А. А. Стрептококковая инфекция. -М.: Медицина, 1978. 294 с.
  15. Е.А. Хроматографическое и электрофоретическое определение стероидов и биогенных аминов в биологических объектах: Дисс. .к-та хим. наук. СПб, 2004. 201 с.
  16. К.К., Лосева O.K., Доля О. В. Современная тактика ведения беременных и детей, больных сифилисом // Инфекции передаваемые половым путем. 1999. — № 2. — С. 14−17.
  17. К.К., Лосева O.K., Доля О. В., Туманова Е. Л. Ранний врожденный сифилис: клиника, патоморфология, диагностика, лечение, профилактика // Рус. мед. журн. 1998. — т.6, № 15. — С. 985−993
  18. К.К., Цераиди Н. Ф. Серологические и иммунологические аспекты сифилиса и СПИДа // Вестн. дерматологии и венерологии. 1991. — № 11.-С. 30−34
  19. К.К., Шепаренко М. В., Яцуха М. В. О классификации врожденного сифилиса // Заболевания передаваемые половым путем. -1995.- № 4.-С. 33−36
  20. Н.И., Иваненко И. П., Громыко А. И., Тихонова Л. И. Современная ситуация по болезням, передающимся половым путем в России и тенденции ее развития // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. — № 1.-С.4−7
  21. И.В., Смирнова В. Г., Орлина Э. А. и др. Диагностическая тест-система для выявления антител к возбудителю сифилиса // Клин. лаб. диагностика. 1997. — № 4. — С. 24, 33−36
  22. О.В. Оценка современных методик лечения сифилиса у беременных: Автореф-т дисс. .канд. мед. наук. М., 2001. — 25 с.
  23. В.Г. Иммунология: Учебник. М.: Нива России, 2000. — 488 с.
  24. Дж. П., Арал С. О., Хайл Д. В. и др. Естественное течение сифилиса. Изучение динамики передачи и контроля инфекции // Заболевания передаваемые половым путем. 1998. — № 5. — С. 3−17
  25. А.П. Реакция иммунофлюоресценции в ликвордиагностике сифилиса и значение количественного метода реакции иммунофлюоресценции при сифилисе // Вестн. дерматологии и венерологии. 1980. — № 9. — С. 62−65
  26. В.Н., Кирмане Р. Э., Первушина Н. В., Шур А.А. Некоторые клинико-иммунологические аспекты серо^езистентного сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. 1991. — № 9. — С.32−33
  27. А.А., Кочнева Р. В., Сиволобова Г. Ф. и др. Исследование сывороток больных сифилисом методом иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных антигенов // Иммунология. 1998. -№ 4.-С. 20−23
  28. И.В. Получение моноклональных антител к легким цепям иммуноглобулинов человека и их использование в иммунодиагностике: Автореф-т дисс. .канд. биол. наук. СПб, 1996. — 21 с.
  29. Т.В. Рецепторные белки стрептококков: клонирование генов, характеристика и практическое использование белков, экспрессируемых в Е. coli: Дисс. д-ра биол. наук. СПб, 1998. — 251с.
  30. С.Н. Особенности течения и исходы беременности у женщин, больных сифилисом: Дисс.канд. мед. наук. СПб, 1999. — 148 с.
  31. С.И. Критерии диагностики, иммунокоррекция и реабилитация больных с серорезистентностью после лечения сифилиса: Автореф-т дисс. д-ра. мед. наук. СПб, 1996. — 38 с.
  32. Дин П., Джонсон У., Мидл Ф. Аффинная хроматография: методы. М.: Мир, 1988.-278 с.
  33. Г. А. Тест-системы в лабораторной диагностике сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. 1996. — № 6. — С. 34−36
  34. Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса: ч.1 // Вестн. дерматологии и венерологии. 1996. -№ 2. — С. 29−32
  35. Г. А., Брагина Е. Е. современные методы лабораторной диагностики сифилиса: ч.2 // Вестн. дерматологии и венерологии. 1996. -№ 3. — С. 34−38
  36. С.И. Сифилис. Саратов, 1993. — 68 с.
  37. Г. Н. Клиническая иммунология и аллегология. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2003. — 604 с.
  38. Е.Б., Бельгесов Н. В., Тихменева И. Б. и др. Обследование доноров крови в профилактике сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. -1996.-№ 3.-С. 39−40
  39. A.M. Совершенствование диагностики сифилиса на основе модифицированного иммуноферментного анализа: Дисс. к-та мед. наук. -СПб, 2000.-202 с.
  40. A.M., Колобов А. А., Федосеева С. В. и др. Изучение динамики трепонемоспецифичных антител в процессе лечения сифилиса // Материалы научной конференции и VIII съезда Российско-Итальянского общества по инфекционным болезням, СПб. 2002 — С. 135−136
  41. A.M., Ходосевич Е. В., Теличко И. Н. и др. Серологическая диагностика сифилиса: возможности повышения информативности // Журнал акушерства и женских болезней. т. LII, специальный выпуск, 2004.-С. 126−127
  42. М.А., Лосева O.K., Коробейникова Э. А. и др. Сифилис и беременность // Вестн. дерматологии и венерологии. 2000. — № 6. — С. 6366
  43. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля, пер. с нем. А. П. Тарасова. М.: Медицина, 1987. — 472 с.
  44. Иммуноферментный анализ для диагностики сифилиса (пособие для врачей-серологов) // сост. Дмитриев Г. А., Беднова В. Н., Киселева Г. А. и др. -М., 1998. 16 с.
  45. А.А. Жидкостная хроматография v в медицине // Соросовский образовательный журнал. -2000. т.6, № 11. — С. 35−41
  46. С., Сильм X., Виндеревских Г., Шевчук О. Усовершенствование методов диагностики сифилиса при помощи определения антител к специфическим белкам возбудителя // Заболевания передаваемые половым путем. 1998. — № 4. — С. 21−22
  47. А.В. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии.- М.: Химия, 1986.-272 с.
  48. В.Б. Моноклональные нтитела против иммуноглобулинов человека: Дисс. д-ра мед. наук. СПб, 1996. — 296 с.
  49. В.Б., Самойлович М. П., Крутецкая И. Ю. и др. Моноклональные антитела к подклассам IgG человека: получение и исследование специфичности // Иммунология. 1998. — № 4. — С. 27−31
  50. А.В. Разработка и клиническая оценка методики постановки иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса: Автореф-т дис. к-та.мед.наук. М., 1986. — 16 с.
  51. Г. А. Практическое руководство по энзимологии / Учеб. Пособие. М.: Высш. Школа, 1971. — 352 с.
  52. T.B. Определение спектра и соотношения антитрепонемных антител в диагностике приобретенного сифилиса: Дисс. к-та мед. наук. СПб, 1997. — 230 с.
  53. О.В. Изучение аффинных свойств поверхностного рецепторного белка стрептококка группы G методом высокоэффективной монолитной хроматографии: Дисс. к-та хим. наук. СПб, 2003. — 157 с.
  54. А.Е., Зубжинская Л. Б., Белянин В. Л. Некоторые иммуноморфологические изменения в плаценте при сифилисе у беременных // Инфекции передаваемые половым путем. 2001. — № 1. -С. 23−25
  55. В.Ф., Борисенко К. К., Потекаев Н. С. и др. Динамика трепонемоспецифической иммуноглобулинемии при ранних формах сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. 1990. — № 8. — С. 38−42
  56. А.Д. Твердофазные радиоиммунные и иммуноферментные методы для количественного экспресс-анализа в микробиологии // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1985. — № 4. — С. 100 107
  57. Л.А., Федотов В. П., Логунов В. П. Т-звено иммунитета у больных сифилисом // Вестн. дерматологии и венерологии. 1983. — № 3. -С. 23−27
  58. И.П., Резникова Л. С. и др. Серодиагностика сифилиса. Пермь, 1977.-196 с.
  59. М.В. Эволюция сифилиса. М.: Медицина, 1987. — 157 с.
  60. И.Р., Горланов И. А. О поражении внутренних органов при раннем врожденном сифилисе // Материалы XXXVIII научно-практическая конференция: «Актуальные проблемы дерматовенерологии». Санкт-Петербург, 2003. — С. 29−30
  61. В.М. Справочник методов иммунологии. Кишенев: Штиница, 1982.-304 с.
  62. В.О., Беднова В. Н., Угримов С. А., Дадалка С. Ф. Новый специфический сорбент для РИФ-абс при серодиагностике сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. -1995. № 2. — С. 15−16
  63. И.И. Возможности полимеразной^ цепной реакции в детекции бледной трепонемы у больных сифилисом: Автореф-т дисс. к-та мед. наук. -М., 2002. 18 с.
  64. Н.К., Тихонова Л. И. Заболеваемость сифилисом в Российской Федерации: анализ тенденций и прогноз развития эпидемической ситуации // Инфекции передаваемые половым путем. 2000. — № 5. — С. 35−40
  65. А. Анализ иммунологических данных // Методы исследования в иммунологии: Пер. с англ. М., 1981. — С. 428−461
  66. И.М., Соколовский Е. В., Красносельских Т. В. и др. Причины и факторы, способствующие развитию серологической резистентности после современного лечения сифилиса // Журн. дерматологии и косметологии. 1996. — № 1. — С. 60−66
  67. Н.И., Ермолин Г. А., Чалов В. В. и др. Применение иммуноферментного анализа для регистрации специфичных Ig-M-антител у больных сифилисом // Вестн. дерматологии и венерологии. 1990. -№ 11.-С. 12−16
  68. А.В. РИФ-абс с сывороткой крови, РИФ-ц и РСК на холоде с ликвором в выявлении сифилиса среди соматических больных и декретированных контингентов. Автореф-т дисс. к-та мед. наук. М, 1979. -20 с.
  69. Г. Ф., Вербенко Е. В., Петрова И. Л. и др. К вопросу о серорезистентном сифилисе // Вестн. дерматологии и венерологии. 1983. — № 6.-С. 25−27
  70. Руководство по индикации и идентификации бактериальных (биологических) средств // Под ред. Р. Б. Гольдина. М.: Воен. Издат., 1989.-235 с.
  71. А.В. Заразные дерматозы и венерические болезни. Современные методы лечения. СПб.: Спец. лит-ра, 1997. — 141 с.
  72. В.Б. Применение твердофазного иммуноферментного анализа для диагностики псевдотуберкулеза: Дисс. к-та мед. наук. Ленинград, 1986.-180 с.
  73. В.Б., Вербов В. Н. Применение иммуноферментного анализа для диагностики инфекционных заболеваний. СПб, 1997. — 24 с.
  74. Е.В., Ляхов В. Ф. Значение определения противотрепонемных IgM-антител в серодиагностике сифилиса // Заболевания передаваемые половым путем. 1995. — № 4. — С. 11−14
  75. Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985. — 279 с.
  76. Е.В. Серологическая резистентность после лечения сифилиса (причины и факторы развития, профилактика и лечение): Автореф-т дисс. .д-ра мед. наук. СПб, 1995.-40 с.
  77. М.Е., Гракович М. И., Данилов С. И. и др. Значение определения фракции IgM в диагностике сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. 1994. — № 1.-С. 9−11
  78. .В., Савинов И. М., Виттенберг А. Г. и др. Практическая газовая и жидкостная хроматография. СПб.: Изд-во С.-Петербург, ун-та, 1998. -610 с.
  79. Твердофазный иммуноферментный анализ // Сборник научных трудов. -JL: Изд-во Института им. Пастера, 1988. 160 с
  80. Теория и практика иммуноферментного анализа // A.M. Егоров, А. П. Осипов, Б. Б. Дзантиев, Е. М. Гаврилова. М.: Высш.шк., 1991. — 288 с.
  81. Л.И. Обзор ситуации с ИППП. Анализ заболеваемости сифилисом в Российской Федерации // Инфекции передаваемые половым путем.- 1999.- № 1.-С. 15−20
  82. В.К. ИФА диагностика сифилиса: Информационно-методическое пособие. — Изд. 2-ое. — Кольцово, 1998. — 57 с.
  83. Л.И., Глебова Л. И. Ошибки в диагностике сифилиса // Вестн. дерматологии и венерологии. 1986. — № 10. — С. 75−76
  84. Я. Аффинная хроматография / Пер. с англ. А. В. Козлова. -М.: Мир, 1980.-472 с.
  85. P.P. Перспективы применения белковых фракций трепонемного антигена для диагностики и комплексной терапии сифилиса. СПб, 1995. -24 с.
  86. . Иммуноглобулины. М., 1981. — С. 342−358
  87. М.П. О серологической устойчивости после лечениябольных сифилисом // Вестн. дерматологии и венерологии. 1984. — № 7.-С. 33−34
  88. P.M., Игнатьева Г. А., Сидорович И. Г. Иммунология: Учебник. М.: Медицина, 2000. — 432 с.
  89. Е.В., Смирнова Т. С., Дудко В. Ю. К вопросу об особенностях течения сифилиса у беременных// Материалы XXXVIII научно-практической конференции: «Актуальные проблемы дерматологии». Санкт-Петербург, 2003. — С. 28−29
  90. Р.Л. Серология сифилиса: практический подход // Заболевания передаваемые половым путем. 1997. — № 3. — С. 3−10
  91. Т.М., Борисенко К. К. К вопросу о клинике и диагностике раннего врожденного сифилиса // Инфекции передаваемые половым путем. 1999.- № 4.-С. 13−17
  92. В.В., Павлик JI.B. и др. О врожденном сифилисе // Вестн. дерматологии и венерологии. — 1997. № 1. — С. 41−44
  93. В.И., Ушакова Г. А., Шуйкина Е. Г. Особенности течения беременности, родов, исход для матери и плода у больных сифилисом // Журн. акушерства и женских болезней. 1998. — № 2. — С. 129−130
  94. ИЗ. Элгстоун С. И., Тернер А.Дж. Серологическая диагностика сифилиса // Инфекции передаваемые половым путем. 2001. — № 3. — С. 4−9
  95. В.И. Основы математико-статистического моделирования и применения вычислительной техники в научных исследованиях: лекции для адъюнктов и аспирантов / Под ред. В. И. Кувакина. СПб, 2000. — 140 с.
  96. Янг X. Рекомендации по серологической диагностике сифилиса // Инфекции передаваемые половым путем. 2001. — № 3. — С. 10−12
  97. М.В. Противоэпидемическая работа и заболеваемость венерическими болезнями // Вестн. дерматологии и венерологии. 1990. -№ 9.-С. 33−36
  98. Abrahmsen L., Moks Т., Nilsson В. et al. Analysis of the secretion in the staphylococcal protein A gene // EMBO J. 1985. — Vol.4, № 6. — P. 3901−3906
  99. Abu-Zeid Y.A. Protein G ELISA for detection of antibodies against Toxoplasma SAG1 in dromedaries// J. Egypt. Soc. Parasitol. 2002. — Vol.32, № 1.-P. 247−257
  100. Akerstrom В., Bjorck L. Physicochemical study of protein G, a molecule with unique immunoglobulin G binding properties. //J. Biol. Chem. 1986. -Vol. 261, № 7. — P. 10 240−10 247
  101. Akerstrom В., Brodin Т., Reis К., Bjorck L. Protein G a powerful tool for binding and detection of monoclonal and polyclonal antibodies // J. Immunol. -1985.-Vol. 135, № 4. -P. 2589−2592
  102. Akerstrom В., Nielsen E., Bjorck L. Definition of IgG- and albumin-binding regions of streptococcal protein G // J. Biol. Chem. 1987. — Vol. 262, № 8.-P. 13 388−13 391
  103. Arshady R. Microcpheres for biomedical applications: preparetion of reactive and labelled microspheres // Biomaterials. 1993. — Vol.14, № 1. — P. 5−15
  104. Baker-Zander S.A., Hook E.W., Bonin P. et al. Antigens of Tr. pallidum recognised by IgG and IgM antibodies during syphilis in humans // J. Infect. Dis.-1985.-Vol. 151, № 2.-P. 264−272
  105. Barbara J.A., Hewitt P., Engright S. Routine blood donor screening for syphilis can reveal recent infection // Vox. Sang. 1993. — Vol. 65, № 3. — P. 243
  106. Baughn R. E, Jorizzo J.L. Adams C.B., Musher D.M. Ig class and IgG subclass response to T. pallidum in patient with syphilis // J. Clin. Immunol. -1988. Vol.8, № 2. — P. 128−129
  107. Bjorck L., Kronvall G. Purification and some properties of streptococcal protein G, a novel IgG-binding reagent // J. Immunol. 1984. — Vol. 133, № 2. — P. 969−974
  108. Bjorck L., Kastern G., Kronvall G. et al. Streptococcal protein G, expressed by streptococci or by Escherichia coli, has separate binding sites for human albumin and IgG // Mol. Immunol. 1987. — Vol. 24, № 4. — P. 1113
  109. Blanco D.R., Champion C.L. Miller J.N., Lovett M.A. Antigenic and structural characterisation of T. pallidum (Nichols strain) endoflagella // Infect. Immun. 1986. — Vol. 56, № 1. — P. 168−175
  110. Blanco D.R., Miller J.N., Lovett M.A. Surface antigens of the syphilis spirochete and their potential as virulence determinants // Emerg. Infect. Dis. -1997. Vol. 3, № 1. — P. 11−20
  111. Boyle M.D.P., Reis K.J. Bacterial Fc receptors. // Biotechnology. 1987. -Vol. 5, № 2. — P. 697−703
  112. Borobio M.V., Martin E., Perea E.J. Specificity of three serological tests for syphilis: VDRL, FTA-abs and TPHA in healthy people, pregnant women and diabetics // Eur. J. Sex. Transmit. Dis. 1984. — Vol. 1, № 3−4. — P. 155−158
  113. Bromberg K., Rawstrom S., Tannis G. Diagnosis of congenital syphilis by combining T. pallidum-specific IgM detection with immunofluorescent antigen detection for T. pallidum // J. Infect. Dis. 1993. — Vol. 168, № 1. — P. 238−242
  114. Carlsson В., Hanson H.S., Wassermann J., Brauner A. Evalution of the fluorescent antibody-absorption (FTA-abs) test specifity // Acta Dermatovenerol.- 1991.- Vol. 71, № 4.-P. 306−311
  115. Coffman L.J., Roper D.K., Lightfoot E.N. High-resolution chromatography of proteins in short columns and adsorptive membranes // Bioseparetion. 1994. -Vol. 4, № 1. — P. 183−200
  116. Colman G., Tanna A., Efstration A. The serotypes of streptococcus pyogenes present in Britain during 1980−1990 and their association with disease.//J. Med. Microbiol. 1993.- Vol.39, № 1.- P. 165−178
  117. Cummings M.C., Lukehart S.A., Marra C. et al. Comparison of methods for detection of T. pallidum in lesions of early syphilis // Sex. Transm. Dis. 1996. -Vol. 23, № 5.-P. 366−369
  118. Dobson S.R., Taber L.H., Baughn R.E. Recognition of T. pallidum antigens by IgM and IgG antibodies in congenitaly infected newborns and their mothers // J. Infect. Dis. 1988. — Vol. 157, № 5. — P. 903−910
  119. Dukamel R.C., Schur P.H., Brendel K. pH gradient elution of human IgGl, IgG2 and IgG4 from protein A sepharose. // J. Immunol. 1989. -Vol. 122, № 4. -P. 1468−1472
  120. Elliasson M., Olsen A., Palmkrautz E. et al. Chimeric IgG binding receptors engineered from Staphylococcal protein A and streptococcal protein G.// J. Biol. Chem. 1988. — Vol.263, № 6. — P. 4323−4327
  121. Fahnestock S.R., Alexander J., Filpula D. Gene for an immunoglobulin-binding protein from a group G streptococcus // J. Bacteriol. 1988. — Vol. 167, № 3. — P. 870
  122. Frick J.M., Kerstrom P., Cooney J. Protein G, surface protein of Streptococcus pyogenes with separate binding sites for IgG and albumin // Mol. Microbiol.- 1994.-Vol. 12, № 1.-P. 143−151
  123. Gene M., Ledger W.J. Syphilis in pregnancy // Sex. Transm. Inf. 2000. -Vol.76, № 2. — P. 73−79
  124. Goward C.R., Murphy Т., Atkinson Т., Barstow D. Expression and purification of a truncated recombinant streptococcal protein G // Biochem. J. -1990.-Vol. 267, № 1.-P. 171−177
  125. Graham D.A., Foster J.C., German A. et al. Evolution of an immunofluorescent antibody test to detect bovine herpesvirus 1-specific IgM // J. Vet. Diagn. Invest. 1999. — Vol.11, № 4. — P. 324−329
  126. Griemberg G., Ravelli M.R., Etcheves P.O. et al. Syphilis and pregnancy. Prenatal control, seroprevalence and false biological positives // Medicina (B. Aires). 2000. — Vol. 60, № 3. — P. 343−347
  127. Green Т., Talbot M.D., Morton R.S. The control of syphilis, a contemporary problem: a historical perspective // Sex. Transm. Inf. 2001. -Vol. 77, № 3.-P. 214−217
  128. Gronenbom A.M., Clore G.H. Identification of the contact surface of a streptococcal protein G domain complexed with human Fc fragment// J. Mol. Biol. -1993. Vol. 223, № 2. — P. 331−335
  129. Guamer J., Greer P.W., Bartlett J. et al. Congenital syphilis in a newborn an immunopathologic study // Med. Pathol. 1999. — Vol. 12, № 1. — P. 82−87
  130. Gupalova T.V., Lojkina O.V., Palagnuk V.G. et al. Quantitative investigation of the affinity properties of different recombinant forms of proteins G by means of high-performance monolithic chromatography // J. Chromatogr. -Vol. 949, № 2.-P. 185−193
  131. Hage D.S. Affinity chromatography: a review of clinical applications // Clin. Chem. 1999. — Vol. 45, № 5. — P. 593−615
  132. Hjerten S., Mohammad J. A simple and inexpensive chromatographic method for the purification of y-globulin from human serum // J. Biochem. Biophys. Methods. 1994. — Vol.28, № 3. — P. 321−327
  133. Hjerten S., Nakazato K. et. al. Reversed-phase chromatography of proteins and peptides on compressed continuous beds.// Chromatogr. 1993. — Vol. 37. -P. 287−294.
  134. Hunter E.F. Direct fluorescent antibody tissue test for T. pallidum (DFAT
  135. TP), p. 69−75. In S.A. Larsen, E.F. Hunter and S.J. Kraus (cd), A manual of tests tbfor syphilis- 8 cd. American Public Health Association, Washington, D.C.
  136. Hunter E.F., Greer R.W. et al. Immunofluorescent staining of Treponema in tissues fixed with formalin // Arch. Pathol. Lab. Med. 1984. — Vol. 108, № 10. -P. 878−880
  137. Ijsselmuiden O.E., van der Suis J.J., Mulder A. et al. An IgM capture-enzyme-linked immunosorbent assay to detect IgM antibodies to treponemes in patient with syphilis // Genitourin. Med. 1989. — Vol. 165, № 2. — P. 79−83
  138. Ito F., George R.W. et al. Specific immunofluorescent staining of pathogenic treponemes with a monoclonal antibody // J. Clin. Microbiol. 1992. -Vol. 30, № 8.-P. 831−838
  139. Kasper C., Freitag R., Tennikova Т., Meringova L. Evalution of affinity filters for protein isolation.// Bioseparetion. 1997. — Vol. 6, № 3. — P. 373−382
  140. Kato K., Lian L.Y., Barsukov I.L. et. al. Model for the complex between protein G and an antibody Fc-fragment in solution // Faculty pharm. Sciences. -1995.-Vol. 3, № 1. P. 79−85
  141. Kehoe M.A. Cell-well associated proteins in Gram-positive bacteria // New Сотр. Biochem. 1994. — Vol. 27, № 2. — P. 217−261
  142. Kim D.K., Lee M.G., Lee J.B. Changes of serum IgG antibody reactivity to protein antigens of T. pallidum in syphilis patients after treatment // J. Korean. Med. Sci. 1989. — Vol. 4, № 2. — P. 63−69
  143. Kitsiouli E., Lekka M.E., Nakos G. et al. Lipids are co-eluted with immunoglobulins G during purification by recombinant streptococcal protein G affinity chromatography // J. Immunol. Methods. 2002. — Vol.271, № 2. — P. 107 111
  144. Kronvall G. A surface component on group А, С and G streptococci with non-immune reactivity for immunoglobulin G// J. Immunol. 1973.- Vol. Ill, № 4.-P. 1401−1406
  145. Larkin J.A., Lit L., Toney J., Haley J.A. Recognizing and treating syphilis in pregnancy // Medscape Womens Health. 1998. — Vol.3, № 1. — P.5
  146. Larsen S.A., Farshy C.E., Pender B.J. et al. Staining intensities in the fluorescent treponemal antibody absortion (FTA-abs) test: association with the diagnosis of syphilis // Sex. Transm. Dis. 1986. — Vol. 13, № 3. — P. 221−227
  147. Larsen S.A., Steiner B.M., Rudolph A.H. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis // Clin. Microbiol. Rew. 1995. — Vol. 8, № 1. — P. 1−21
  148. Lee S.M., Essing N.Z., Lee Т.К. Process development for the recovery and purification of recombinant protein G.// J. Biochem. 1992. — Vol. 26. — P. 213−219
  149. Lefevre J.C., Bertraud M.A., Bauriand K. Evaluation of the captia enzyme immunoassays for detection of immunoglobulins G and M to T. pallidum in syphilis // J. Clin. Microbiol. 1990. — Vol. 28, № 8. — P. 1704−1707
  150. Lewis L.L., Taber L.H., Bauglin R.F. Evaluation of immunoglobulin M Western-blot analysis in the diagnosis of congenital syphilis // J. Clin. Microbiol. 1990. — Vol. 28, № 2. — P. 296−302
  151. Macter-Boehm H., Hoenla R. The significance of serology tests to diagnose the activity of syphilis. The 19S-IgM-FTA-abs-test compared with the syphilis-IgM-ELISA // Laboratorimsmedizin. 1994. — Vol. 18, № 5. — P. 205−208
  152. Marangoni A., Sambri V., Storni E. et al. Treponema pallidum surface immunofluorescence assay for serologic diagnosis of syphilis // Clin. And Diagn. Lab. Immunol. 2000. — Vol. 7, № 3. — P. 417−421
  153. Marin C.M., Alonso-Urmeneta В., Moriyon I. et al. Comparison of polyclonal, monoclonal and protein G peroxidase conjugates in an enzyme-linkedimmunosorbent assay for the diagnosis of Brucella ovis in sheep // Vet Rec. -1998. Vol.143, № 14. — P.390−394
  154. Mavrov G.I., Gaubenko J.V. Clinical and epidemiological features of syphilis in pregnant women: the course and outcome of pregnancy // Gynecol. Obstet. Invest.-2001.-Vol. 52, № 2.-P. 114−118
  155. Morrison-Plummer J., Aldrete J.F., Baseman J.B. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of serum antibody to outer membrane proteins of Treponema pallidum // British J. Ven. Dis. 1983. — Vol.59, № 2. — P. 75−79
  156. Meyer M.R., Baughn R.E. Whole-blood hemagglutination inhibition test for venereal disease research laboratory (VDRL) antibodies // J. Clin. Microbiol. 2000. — Vol. 38, № 9. — P. 3413−3414
  157. Myhre E.B., Kronvall G. Heterogenity on non-immune immunoglobulin Fc reactivity among Gram-positive cocci: description of three major types of receptor for human immunoglobulin G // Infect. Immunol. 1977. — Vol. 17, № 3. — P. 475−482
  158. Obisesan K.L., Ahmed Y. Routine antenatal syphilis screening a case against // Afr. J. Med. Sci. — 1999. — Vol. 28, № 3−4. — P. 185−187
  159. Olsson A., Eliasson M., Guss B. et al. //Europ. J. Biochem. 1987. — Vol. 168, № 2:-P.319−324
  160. Qi Y., Yan Z., Huang J. Chromatography on DEAE ion-exchange and protein G affinity columns in tandem for the separation and purification of proteins// J. Biochem. Biophys Methods. 2001. — Vol. 49, № 3. — P.263−273
  161. Rawston S.A., Mehta S., Marcellino L. et al. Congenital syphilis and fluorescent treponemal antibody test reactivity after the age of 1 year // Sex. Transm. Dis. -2001. Vol. 28, № 7. — P. 412−416
  162. Reis K.J., Ayoub E.M., Boyle M.D.P. Streptococcal Fc receptors. Isolation and partial characterization of the receptor from a group С streptococcus // J. Immunol. 1984.-Vol. 132,№ 5.-P.3091
  163. Reis K.J., Hansson F., Bjorck L. Extraction and characterization of IgG Fc receptors from group С and group G steptococci // Molec. Immunol. 1986. -Vol. 23, № 2.-P. 425−431
  164. Sanchez P.J., McCracken G.H., Wendel G.D. et al. Molecular analysis of the fetal IgM response to T. pallidum antigens: implications for improved serodiagnosis of congenital syphilis // J. Infect. Dis.- 1989. Vol.159, № 3. — P. 508−517
  165. Sanchez P.J., Wendel G.D. Jr., Norgard M.V. IgM antibodies to Treponema pallidum in cerebrospinal fluid of infants with congenital syphilis // Am. J. Dis. Child. 1992. — Vol. 146, № 10. — P. l 171−1175
  166. Sanchez P.J. Laboratory test for congenital syphilis // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. — Vol. 17, № 1. — P. 70−71
  167. Sheffield T.S., Wendel G.D. Jr. Syphilis in pregnancy // Pediatr. Infect. Dis. J. 1999. — Vol. 42, № 1. — P. 97−106
  168. Schmidt B.L., Luder A., Duschet P. et al. Specific IgM tests in syphilis diagnosis // Hautar. zt. 1994. — Vol. 45, № 10. — P. 685−689
  169. Schmitz J.L., Gertis K. S. Laboratory diagnosis of congenital syphilis by immunoglobulin M (IgM) and IgA immunoblotting // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1994. — Vol. 1, № 1. — P. 32−37
  170. Sheedy С., Hall J.C. Immunoaffinity purification of chlorimuron-ethyl from soil extracts prior to quantitation by enzyme-linked immunosorbent assay // J. Agric. Food Chem. 2001. — Vol. 49, № 3. — P. 1151−1157
  171. Sjobring U. Isolation and molecular characterization of a novel albumin-binding protein from group G streptococci // Infect. Immunol. 1992. — Vol. 60, № 7.-P. 3601−3608
  172. Sjobring U., Bjock 1., Kastern W. Streptococcal protein G: gene structure and protein binding properties // J. Biol. Chem. 1991. — Vol. 266, № 3. — P. 399 405
  173. Sjobring U., Falkenberg C., Nielson E. et al. Isolation and characterization of 14-kDa albumin-binding fragment of streptococcal protein G // J. Immunol. -1988. Vol.140, № 5. — P. 1595−1599
  174. Stahl D., Kreft H., Hack H. et al. Serum affinity chromatography for the detection of IgG alloantibodies in a patient with High-titer IgM cold agglutinins // Vox. Sang. 1998. — Vol. 74, № 4. — P. 253−255
  175. Sugiura Т., Imagawa H., Kondo T. Purification of horse immunoglobulin isotypes based on differential elution properties of isotypes from protein A and protein G columns.// J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl. 2000. — Vol. 742, № 2.-P. 327−334
  176. Sundberg L., Porath J. Preparation of adsorbents for biospecific affinity chromatography. Attachment of group-containing ligands to insoluble polymers by means of bifunctional oxines // J. Chromatogr. 1974. — Vol. 90, № 1. — P. 8798
  177. Vieker S., Siefert S. Lemke J, Pust B. Congenital syphilis after reactivation of «healed» material primary infection // Clin. Pediatr. 2000. — Vol.212, № 6. -P. 336−339
  178. Verdoliva A., Pannone F., Rossi M. et al. Affinity purification of polyclonal antibodies using a new all-D synthetic peptide ligand: comparison with protein A and protein G // J. Immunol. Methods. 2002. — Vol.271, № 1. — P. 77−88
  179. Wilkinson D. Screening for syphilis in pregnant woman // Trop. Doct. — 1998.-Vol. 28, № 2.-P. 120
  180. Yamamoto Y. PCR in diagnosis of infection: detection of bacteria in cerebrospinal fluids // Clin. And Diagn. Laboratory Immunology. Vol. 9, № 3. -P.508−514
  181. Yan Z., Huang J. Cleaning procedure for protein G affinity columns// J. Immunol. Methods. 2000. — Vol.237, № 2. — P.203−205
  182. Yan Z., Huang J. Chromatographic behavior of mouse serum immunoglobulin G in protein G perfusion affinity chromatography // J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl. 2000. — Vol.738, № 1. — P. 149−154
  183. Young H. Syphilis. Serology // Dermatol. Clin. 1998. — Vol. 16, № 4. — P. 691−698
  184. Young H. Guidelines for serological testing for syphilis // Sex. Transm. Inf. 2000. — Vol. 76, № 5. — P. 403−405 175
Заполнить форму текущей работой

На отлично!