Определение микробной загрязненности антибиотиков и других лекарственных средств, обладающих бактерицидным действием

Предварительные условия

Перед проведением опыта готовят растворы для анализа и питательные среды. Критериями для выбора растворителя являются скорость растворения препарата и отсутствие у самого растворителя антимикробных свойств.

• 1. Готовят 1 л 0,5% раствора антибиотика или 10% суспензию таблеток с антибиотиком. Таблетки для приготовления суспензии растирают в стерильных фарфоровых ступках.
• 2. В качестве растворителя для некоторых антибиотиков (феноксиметилпенициллина, ампициллина, тетрациклина) применяют 1/15 М фосфатный буфер рН 7,8−8,0; для оксациллина — 0,9% раствор NaCl.
• 3. Питательные среды МПА, Сабуро, Эндо, кровяной агар разливают в чашки Петри.

Постановка опыта

Приготовленный раствор антибиотика немедленно фильтруют по 250 мл через каждый из 4 мембранных фильтров. Фильтры 5 раз отмывают от антибиотика, используя по 100 мл растворителя. Затем фильтры кладут в чашки Петри на следующие среды:

на МПА с инактиватором — для определения общего количества микроорганизмов. Инкубируют посевы при 370С в течение 3 суток.

на среду Сабуро — для определения общего количества дрожжевых и плесневых грибов. Инкубируют посевы при 240С в течение 5 суток.

на среду Эндо с инактиватором для определения бактерий из семейства Enterobacteriaceae. Инкубируют посевы при 370С в течение 3 суток.

на кровяной агар с инактиватором — для обнаружения S. аureus. Инкубируют посевы при 370С в течение 3 суток, обнаруживают зоны гемолиза вокруг колоний.

Приготовленные из таблеток суспензии по 0,2 мл засевают при помощи шпателя сплошным газоном на поверхность питательных сред параллельно в 3 чашки Петри. Подсчитывают количество выросших колоний. Результаты записывают в протокол и делают заключение (таблица 6).

Таблица 6 — Форма протокола для определения микробной загрязненности лекарственных средств.