Другие методы. 
Современные методы исследования клетки

Метод рентгеноструктурного анализа основан на явлении дифракции рентгеновских лучей и дает возможность определить пространственное расположение молекул. Применяется для изучения структуры белков, нуклеиновых кислот и других веществ, входящих в состав цитоплазмы и ядра клетки.

Метод дифференциального центрифугирования основан на разной скорости осаждения (седиментации) отдельных частиц под действием центробежной силы и используется для разделения внутриклеточных структур. Коэффициент седиментации (S) определяется скоростью движения макромолекул в поле с ускорением, равным I, измеряется в единицах, называемых СВЕДБЕРГАМИ. Для определения S используется центрифугирование при высокой скорости (30 000−60 000 об./мин). Исследуемый материал предварительно измельчают в гомогенизаторе. При скоростной седиментации используется среда одинаковой плотности. Компоненты клетки, вначале равномерно распределенные по всему объему пробирки, при центрифугировании оседают каждый со своей скоростью. В результате, содержимое пробирки разделяется на фракции (слои), из которых нижняя представлена самыми тяжелыми структурами, а верхняя — самыми легкими (рис. 5).

В последующем фракции (макросомальную и микросомальную) разделяют на отдельные компоненты, используя методы седиментации в градиенте плотности среды. Наиболее распространенным компонентом для получения градиента среды является сахароза. В процессе центрифугирования субклеточные структуры, входящие в одну фракцию, концентрируются в виде отдельных зон в той части пробирки, где молярная концентрация сахарозы обеспечивает такую плотность раствора, при которой дальнейшее оседание частиц уже не происходит (рис. 6). Помимо перечисленных методов в цитологии используются и так называемые пограничные методы:

Ї гибридизация нуклеиновых кислот на срезах;

Ї иммуноцитохимия с при менением моноклональных антител на световом и электронно-микроскопическом уровне;

Ї микрохирургия и др.

Вопросы для самоконтроля.

• 1. Как называется часть светового микроскопа, которая фокусирует лучи света от осветителя на объекте исследования?
• А) тубус б) объектив в) конденсор г) головка
• 2. Выберите верный вариант схемы подготовки материала для исследований под световым микроскопом.
• 3. Каким светом светится хлорофилл при освещении в УФ-лучах?
• А) красный б) зеленый в) желтый г) фиолетовый
• 4. В каком растворе промывают кусочки органов и тканей при методе культивирования клеток и тканей?
• А) раствор Хенкса б) раствор Петри в) раствор Браше г) раствор Тиндаля
• 5. Какое звено есть в схеме изготовления препаратов для светового микроскопа, но нет в схеме изготовления препаратов для электронного микроскопа?
• А) изготовление препаратов б) обезвоживание в) пропитка
• г) контрастирование
• 6. Какого цвета изображаемый объект при фазовоконтрастном микроскопировании?
• А) красно-черное б) черно-белое в) черное г) бесцветное
• 7. Во сколько раз разрешаемая способность электронного микроскопа выше чем человеческого глаза?
• А) 106 б) 108 в) 99 г) 103

Вставьте пропущенные слова:

• 1) Объекты, изображенные на экране, можно фотографировать и получать
• 2) основан на явлении дифракции рентгеновских лучей и дает возможность определить пространственное расположение молекул.
• 3) основана на том, что некоторые вещества и структуры способны светиться (флуоресцировать, люминисцировать) при поглощении световой энергии.
• 4) Сканирующий микроскоп создает и способен охватывать большие поверхности.