Усовершенствование дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота

Усовершенствование системы контроля эпизоотического процесса бруцеллеза остается для ветеринарной науки и практики до сих пор важнейшей проблемой.

Особенно актуально это в связи с тем, что, с одной стороны, постоянно разрабатываются новые методы диагностики и специфической профилактики инфекционных болезней животных, с другой — резко изменяются эпизоотические и социально-экономические условия ведения животноводства (Е.С.Орлов, 1967; П.А.Три-ленко, 1976; Г. А. Объедков, 1986; А. А. Новицкий, 1989; И.А.Коси-лов, 1992; С. К. Димов, 1993; С. И. Джупина, 1994, А. Г. Падалица с соавт., 1997 и др.).

В управлении эпизоотическим процессом бруцеллеза важная роль принадлежит средствам специфической профилактики с рациональными схемами их использования.

Так, было установлено, что высокой противоэпизоотической эффективностью обладают схемы реиммунизации крупного рогатого скота живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма В. abortus 82 либо по гомологичному фону, либо по фону первичной прививки живой вакцины из агглютиногенного штамма В. abortus 19 с интервалом 1−2 года. Наряду с этим была доказана необходимость использования в неблагополучных стадах рациональной поствакцинальной диагностики, обеспечивающей максимальную реализацию провоцирующих свойств вакцин в ранние сроки после прививок.

Особое значение в этой связи приобретает эпизоотологичес-кий мониторинг, представляющий собой систему наблюдений, анализа, оценки и прогноза изменений эпизоотической ситуации.. — 5.

В.В.Сочнев с соавт, 1991; С. И. Ддупина, 1994; В.й.Сайченко, 1995; В. М-Авилов с соавт., 1997 и др.).

При этом для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, в разное время использовались различные диагностические средства и методы. Был накоплен определенный научный и практический опыт (К.М.Салмаков, 1964, 1977, 1987; Л. В. Дегтяренко с соавт., 1978, 1988, 1991; И. П. Никифоров с соавт., 1980, 1997; Л. В. Дегтяренко, 1989, 1995; И. А. Косилов, 1992; В. Г. Ощепков, 1990 и др.).

Однако в ветеринарной практике оставалась проблема: далеко не всегда можно было сделать на основе оценки характера официально утвержденных серологических реакций РА и РСК однозначный вывод о благополучии или неблагополучии того или иного стада по бруцеллезу.

В этой связи очевидна необходимость оптимальной схемы эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота по бруцеллезу для зон с широким применением вакцины из штамма 82.

Сравнительно недавно в качестве дифференциального диагностического теста положительно зарекомендовала себя РИД с 0-ПС антигеном (В.М.Чекишев с соавт., 1993).

Однако до настоящего времени не было обобщенных объективных результатов сравнительного изучения указанного и ранее известных средств и методов для использования в дифференциальной поствакциналь ной диагностике.

Цель исследований — усовершенствовать схему дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота и на ее основе разработать и реализовать в производстве критерии эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглютиногэнного штамма В. abortus 82.

Задачи исследований:

— провести комплексное изучение эффективности нового диагностического метода (РИД с 0-ПС антигеном) в сравнении с ранее известными для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82;

— с учетом полученных результатов оптимизировать схему дифференциальной поствакцинальной диагностики и на ее основекритерии эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82;

— апробировать разработанные критерии в производственных условиях.

Научная новизна — На основе результатов комплексного изучения эффективности РИД с О-ПС антигеном в сравнении с ранее известными диагностическими методами разработана оптимальная схема дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, а на ее основе — объективные критерии эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, с доказанной эффективностью. Установлена ведущая роль в них РИД с О-ПС антигеном, усовершенствованы методики ее постановки и учета.

Изучены нестандартные ситуации при использовании различных средств и методов поствакцинальной дифференциальной диагностики и предложены рациональные пути их решения.

Практическая значимость — Внедрение разработанной схемы дифференциальной поствакцинальной диагностики (с ведущей ролью в ней РИД с О-ПС антигеном.) в значительной степени повышает противоэпизоотическую, противоэпидемическую и экономическую эффективность системы мероприятий по профилактике и ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота.

Апробация работ — Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: всероссийских координационных совещаниях по проблеме бруцеллеза и туберкулеза с.-х. животных (Омск, 1995, 1996) — научно-практической конференции «Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири» (Новосибирск, 1995), научно-практической конференции, посвященной 65-летию Иркутской НИВС (Иркутск, 1997), Международной Международной научно-практической конференции «Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы» (Гродно, 1997) и ученых советах ИЭВСиДВ (Новосибирск, 1991;1997).

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном заседании научных сотрудников ИЭВСиДВ (1998).

Внедрение результатов исследований — Разработана и внедрена в ветеринарную практику оптимальная схема поствакцинальной дифференциальной диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Результаты исследований вошли в Методические указания по дифференциальной эпизоотической оценке стад крупного рогатого окота, привитого вакциной из штамма 82, Наставление по применению тест-ситемы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, Наставление по применению вакцины из живой, сухой из штамма 82, Ветеринарные правила ВП 13.3.1302−96, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ, а также в план противобруцеллезных мероприятий по Новосибирской области на 1995;97 гг.

Основные положения, выносите на защит/ Оптимальные схема поствакцинальной дифференциальной диагностики бруцеллеза и критерии эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

5. ВЫВОДЫ.

1. РИД с 0-ПС антигеном, являясь специфичной серологической реакцией, играет ведущую роль в дифференциальной поствакцинальной диагностике бруцеллеза крупного рогатого скота:

— для оценки эпизоотической ситуации в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых имеет место выявление реагирующих на бруцеллез в РА, РСК с сывороткой крови и КР с молоком (при этом РИД может заменить бактериологический метод);

— для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных в неблагополучных хозяйствах;

— для ранней диагностики бруцеллеза через 1,5−2 месяца после реиммунизации противобруцеллезной вакциной из штамма 82, что ускоряет сроки оздоровления;

— для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств с применением вакцины из штамма 82.

2. Оптимальным режимом постановки РИД с 0-ПС антигеном являются температура (не ниже 18°С) и время учета реакции (24 и 48 часов). Это позволило повысить диагностическую эффективность РИД в среднем на 33,8%.

3. Положительные показания РИД с 0-ПС антигеном в значительной степени (от 70 до 97,5%) коррелируют с высокими титрами антител в РА (200 МЕ и выше), РСК (1:20 и выше), а также в РИГА (200 МЕ и выше) и КР с молоком (1:8 и выше) и подтверждаются выделением от реагирующих животных полевых культур бру-целл. В этой связи в большинстве случаев отпадает необходи.

— 127 мость первичной постановки диагноза бактериологическим методом.

4. При эпизоотической оценке по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, многократно привитого живой вакциной из слабо-агглютиногенного штамма В. abortus 82, основными серологическими методами являются РА, РСК (с официальными S-антигенами) и РИД, а вспомогательными РИГА с сывороткой крови и КР с молоком.

Положительная РИД и высокие титры антител в РА — выше 200 МЕ, РСК — выше 1:20, а также в РИГА — выше 200 МЕ и КР с молоком — выше 1:8 свидетельствуют в большинстве случаев о наличии в таких стадах бруцеллеза.

При отсутствии эпизоотологических показаний дополнительно используется бактериологический метод (исследование биоматериала от животных с максимальными титрами реакций, биопроба, дифференциация выделенных культур).

5. R-антигены выполняют в дифференциальной поствакцинальной диагностике вспомогательную роль.

Их использование позволяет при высоких титрах R-антител, предполагать наличие у привитых животных реакций поствакцинальной природы. Однако это не всегда является решающим моментом в эпизоотической оценке по бруцеллезу такого стада, так как возможна циркуляция в нем полевых диссоциантов бруцелл.

6. В благополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82 выявлены случаи положительного реагирования в РИД (до 0,8%), а также в РА, РСК и КР.

4 П>Г> Leo даже высокие титры), не связанные с бруцеллезом. Такие реакции проявляются на фоне применения различных вакцин, в том числе противосибиреязвенной.

Отсутствие в таких стадах инфекции подтверждается довольно быстрым угасанием реакций, отрицательными результатами бактериологических исследований биоматериала от реагирующих животных, отсутствием эпизоотологических и эпидемиологических показателей.

7. Внедрение в масштабах Новосибирской области разработанной на основе результатов проведенных исследований рациональной системы эпизоотологического мониторинга удалось предотвратить объявление неблагополучными 280 ферм.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Результаты проведенных исследований явились основой для разработки и усовершенствования системы эпизоотологического мониторинга, которая в настоящее время широко внедрена в Новосибирской области и других областях и краях региона Сибири, и вошли в следующие нормативно-технические документы российского уровня:

— Методические указания по дифференциаль ной эпизоотической оценке стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 4 апреля 1995 года (И 13−7-2/270);

— Наставление по применению тест-ситемы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 4 апреля 1995 года (Ы 13−7-2/271);

— Наставление по применению вакцины живой, сухой из штамма 82, утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 26 февраля 1996 года (М 13−3-2/538);

— Ветеринарные правила ВП 13.3.1302−96, утвержденные Департаментом ветеринарии МСХиП РФ 18 июня 1996 года.

4.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Учитывая, что ведущая роль в системе мер борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота принадлежит специфической профилактике, дифференциальная поствакцинальная диагностика имеет решающее значение в повышении уровня ее эффективности.

О помощью применения агглютиногенных вакцин (шт. 19, 104-М, Рев-1 и др.) всегда стояла острая проблема дифференциации больных бруцеллезом животных от вакцинированных (Г.С.Засе-дателева, 1967; П. А. Триленко, 1967; Е. С. Орлов. 1967; Ф. П. Локтева, 1972 и др.).

Не сняло эту проблему и применение слабоагглютиногенных (шт.82, 21 и др.) и инагллютиногенных (Невский-12, 16/4, К-24, и др.) вакцин (И.И.Невский, 1959; П. А. Триленко, 1976; П.Н.Жо-ваник с соавт., 1983; А. А. Новицкий, 1989; С. К. Димов, 1989; И. П. Никифоров с соавт., 1997 и др.).

Одной из больших неудач в разрешении поствакцинальной диагностики бруцеллеза, по нашему мнению, явилось отсутствие надежных критериев оценки, так как длительное время не было единого подхода к этой проблеме и, предлагаемые методы диагностики были либо только информативными, либо очень громоздки и не выполнимы в производственных условиях. Кроме этого не было единой системы применения противобруцеллезных вакцин на разных половозрастных группах (кратность применения, интервалы между вакцинациями, дозы вакцин). Все это привело к тому, что течение бруцеллезной инфекции на том промежутке времени было не управляемое, чаще всего меры начинали применять уже после возникновения бруцеллеза. В 1985 году была предложена система.

— Ill противобруцеллезных мероприятий, разработанная ВНИИБТЖ, ИЭВ-СиДВ, ВГНКИ и Другими НИУ совместно с ГУВ МОХ РФ. Однако в этой системе не нашла своего места дифференциальная диагностика бруцеллеза среди многократно привитого поголовья.

Первоначально комплекс диагностических исследований крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглюти-ногенного штамма 82, в целях дифференциальной эпизоотической оценки включал в себя следующие основные обязательные элементы: проведение эпизоотологического обследования хозяйстваизучение динамики и характера серологических реакций (РА, РИГА, РОК с Sи R-антигенами, КР с молоком) — отбор для диагностического убоя животных с наиболее высокими титрами по большинству примененных диагностических тестовбактериологические исследования взятого биоматериала (лимфоузлы и внутренние органы), включая и биопробудифференциацию выделенных культур. Оценку эпизоотического состояния стада делали на основании полученных результатов.

Довольно часто объективное заключение по стаду можно было сделать на основании результатов эпизоотологического обследования фермы, хозяйства и оценки характера серологических реакций у животных после прививки.

При выделении положительно и сомнительно реагирующих по РА или (и) РСК с S-антигеном (PCK-S) животных сыворотки крови от них переисследовали в РСК с R-антигеном (PCK-R) с целью определения характера реакций. В случае невозможности определения характера реакций при однократном исследовании проводили комплексную проверку по РА и РСК с единым биофабричным антигеном и РСК с R-антигеном через 20−30 дней после предыдущего исследования с раститровкой сывороток до предельных титров.

— 112.

При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота неблагополучных по бруцеллезу стад, где бруцеллез был установлен и бактериологически подтвержден, отмечали РА в титре 200 МЕ и выше и РСК-Б в титре 1:20 и выше. При этом РСК-1? была либо в более низких титрах, либо вообще отсутствовала.

Следует отметить, что высокие титры РА и РСК с Б-антигеном при исследовании сывороток крови привитых вакциной из штамма 82 животных неблагополучных стад довольно часто совпадали с положительными показателями КР с молоком и РИГА с сыворотками крови.

Анализируя характер серологических реакций на бруцеллез у крупного рогатого скота благополучных хозяйств Новосибирской области в разные сроки после ревакцинации (бруцеллез исключен эпизоотологически и бактериологически), следует отметить, что в РА либо реагирующих не было совсем, либо животные реагировали в титре не вше 100 МЕ. У некоторых животных РА совпадала с РСК-5 (1:5 и 1:10). РСК-Б отмечена в основном в титре не выше 1:10, очень редко 1:20 — 1:40.

Причем у ревакцинированных животных, реагировавших в РА и (или) РСК-З, отмечены титры РСК-Й, в большинстве случаев превышающие таковые с 3-антигеном на 1−2 порядка.

КР с молоком в благополучных по бруцеллезу стадах (с эпи-зоотологическими и бактериологическими доказательствами) была, как правило, отрицательной, у отдельных животных титр не превышал 1:4. При этом показания КР носили неспецифический характер, так как большинство таких проб реагировало с димастином, что свидетельствует о субклиническом мастите.

Наши результаты в отношении характера поствакцинальных' реакций в принципе не противоречат данным, полученным другими.

— 113 авторами (К.В.Шумилов с соавт., 1977; Л. В. Дегтяренко с соавт., 1978;91- А. А. Новицкий с соавт., 1983; В. А. Клименко, 1983; И. П. Никифоров, 1985; И. А. Косилов с соавт., 1987; С. К. Димов с соавт., 1989; Т. Г. Попова, 1989; В. Г. Ощепков, 1990, 1998; А. М. Фомин, К. М. Салмаков, 1991; И. А. Косилов, 1992; С. К. Димов, 1993; В. П. Руденко 1993; В. И. Сайченко, 1995; С. К. Димов, А. Г. Хлыстунов, 1997 и др.).

В процессе нашей работы возникали сомнения по поводу животных, реагирующих в PCK-S в титрах 1:5, 1:10 и тем более 1:20, если они реагировали в PCK-R в равных титрах или только на один порядок выше и если эпизоотологическое обследование хозяйства бруцеллез исключало.

В таких случаях утверждать однозначно о наличии в хозяйстве бруцеллеза невозможно. Чтобы подтвердить наличие или отсутствие бруцеллеза, необходимо проводить бактериологическое исследование, на что затрачивается много времени.

Исходя из всего вышеизложенного, очевидной была необходимость поиска более простых и специфичных экспресс-методов дифференциальной поствакцинальной диагностики бруцеллеза, пригодных для объективной эпизоотической оценки стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, в разрешении кот-рой активное участие приняли Л. В. Дегтяренко с соавт., 1978;91- А. А. Лим, 1985; С. А. Аскерова, 1988; Т. Г. Попова, 1990; М. Т. Спирин, В. М. Чекишев, 1997; R. Diaz et al., 1979 и др.

Одним из заметных успехов в дифференциальной диагностике бруцеллеза было получение 0-ПС антигена и применение его в реакции иммунодиффузии В. М. Чекишевым с соавторами (1993).

По мнению J.W.Cherwonogrodzky, K.H.Nielsen (1988), В. М. Чекишева с соавт. (1993), Е. А. Киселева (1993) у коров, постоянно подверженных антигенному раздражению вакцинными штаммами бруцелл, осуществляется синтез О-специфических антител, выявляемых в РИД. По-видимому, не вирулентность, а инвазивность возбудителя, то есть способность задерживаться в ретикулоэндо-телиальной системе хозяина влияет на синтез антител к 0-поли-сахаридному антигену. Способностью формировать преципитат с О-полисахаридным антигеном обладают только антитела со специфичностью к «длинным» эпитопам расположенных вдоль всей молекулы 0-цепи. Эти антитела вырабатываются у зараженных бруцеллезом животных, в отличии от вакцинированных или инфицированных другими грамотрицательными бактериями, обладающими перекрестными реакциями с бруцеллами (иерсиниоза, паратифа, сибирской язвы, эмкара и др.).

Если говорить о диагностической ценности РИД, как теста, предназначенного для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных, то необходимо при этом учитывать длительность серологических реакций у животных в различной эпизоотической ситуации.

В этом отношении интересные данные получены R. Wilkinson et al. (1988), которые отмечали, что самый длительный период интенсивного иммунного ответа был при вакцинации ранее инфицированных животных (от 62,5 до 86,5 недель), в то время как при возникновении инфекции по иммунному фону — 8 недель. У вакцинированных животных иммунный ответ составляет от 2,4 до 22 недель. Аналогичные данные получены Ю. Ш. Абузаровым и Д.Г.Латыпо-вым (1980).

Учитывая, что РИД с 0-полисахаридным антигеном у ревакци-нированных животных через 1,5 месяца уже не регистрируется, представилось возможным применение ее в более ранние сроки.

— 115 после ревакцинации и с помощью этой реакции за короткий промежуток времени выявить инфицированных животных.

Необходимо отметить, что поствакцинальные реакции, обусловленные прививкой штамма 82, у здоровых животных, могут в отдельных случаях наблюдаться в течение 2,5−4 лет после вакцинации (З.А.Алиев, С. Ф. Садыхов, 1983; Г. Г. Бояринцева с соавт., 1986 и др.).

Учитывая данные, полученные другими авторами в дальнейшем в комплекс диагностических методов включили РИД с 0-ПС антигеном, полученным В. М. Чекишевым с соавторами в ИЭВСиДВ.

РИД с 0-ПС антигеном вначале ставили согласно Временному наставлению от 10.09.92 г.

В процессе нашей работы были внесены изменения в технику постановки и учет реакции, которые не раз были подтверждены при исследовании сывороток крови и в последующем были включены в новое «Наставление по применению тест-системы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота», утвержденное Департаментом ветеринарии МСХиП РФ в 1995 году.

Опираясь на полученные данные, пришли к заключению, что температура при постановке РИД не должна быть ниже 18−20°С. При температуре 20−27°С также отмечали четкую линию преципитации, но при более высоких температурах в термостате из-за конденсата, который создается во влажной камере, наблюдалось сползание агара и искажение полученных результатов.

Как уже указывалось ранее, учет результатов в РИД с 0-ПС антигеном согласно Временному наставлению от 10.09.92 года предписывалось проводить через 24 часа после ее постановки.

Мы установили, что учет реакции следует вести не только через 24, но и через 48 часов, так как при этом дополнительно.

— 116 выявляется в среднем 33,8% реагирующих на бруцеллез животных.

При изучении РИД мы встретились с еще одной проблемой: у отдельных проб сывороток крови, реагирующих в РИД через 24 часа и дающих четкую линию преципитации, эта линия через 48 часов переходит на рядом расположенные пробы сывороток крови, создавая тем самым впечетление положительной реакции у расположенной рядом пробы (на самом деле отрицательно реагирующей).

Следовательно, для получения более достоверных результатов при выявлении животных, реагирующих на бруцеллез в РИД, необходима перестановка как минимум, тех проб сывороток крови, которые дают линию преципитации через 48 часов. При перестановке исследуемые пробы сывороток крови необходимо для более четкого учета результатов реакции вносить не в каждую лунку, а через одну.

Таким образом, вышеуказанные результаты в отношении техники постановки и учета РИД, получены нами совместно с В.М.Че-кишевым впервые.

Попытка применить РИД с О-ПС антигеном для исследования цельного молока и сыворотки молока закончилась неудачей. Это можно объяснить тем, что в молоке находятся иммуноглобулины другого класса (!(? А).

В дальнейшем на большом фактическом материале нами были получены положительные результаты, свидетельствующие о возможности использования в комплексной поствакцинальной диагностике в качестве дифференциального метода РИД с О-ПС антигеном.

Специфичность показаний РИД была подтверждена как на привитом, так и на непривитом поголовье благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйств нами совместно с Е. А. Киселевым и другими авторами (Е.А.Киселев, 1993; Ш. Р. Файзрахма.

— 117 нов, И. П. Никифоров, Г. С. Корж и др., 1993).

Изучение эффективности РИД с 0-ПС антигеном (РИД) в сравнении с ранее известными диагностическими тестами проводили на многократно привитом против бруцеллеза вакциной из штамма 82 поголовье крупного рогатого скота (в том числе при реиммуниза-ции с интервалом 1−2 года) неблагополучных и благополучных ферм. При этом прежде всего ориентировались на результаты, полученные в хозяйствах, где неблагополучие по бруцеллезу было доказано всеми имеющимися методами (эпизоотологический, бактериологический и биологический).

Было установлено, что в хозяйствах, где не было никаких сомнений в их неблагополучии по бруцеллезу, даже при использовании только одного эпизоотологического метода, были зарегистрированы при комплексных серологических исследованиях с применением максимума диагностических тестов положительные показания РИД при высоких титрах РА, РСК, РИГА и КР.

В благополучных хозяйствах при выявлении реагирующих в РА и РСК показания РИД были отрицательные. При проведении бактериологических исследований были получены также отрицательные результаты. При дальнейшем наблюдении за такими хозяйствами благополучие по бруцеллезу сохранялось.

Если говорить о чувствительности метода, то следует отметить, что по данным, полученным совместно с другими авторами, в экспериментах на крупном рогатом скоте, искусственно зараженном вирулентной культурой штамма В. abortus 54 в дозе 200 млн м.к., в первый месяц после заражения РИД была положительной не более чем у 40% инфицированных животных.

В условиях неблагополучных хозяйств не все животные, реагировавшие положительно в РА, РСК, КР с высокими титрами, име.

— 118 ли положительные показания РИД. Об этом же свидетельствует ряд других сообщений (В.М.Чекишев, 1993; В. М. Чекишев, А. А. Новицкий, С. К. Димов и др., 1993; Б. И. Антонов, К. М. Шумилов, О. Д. Скляров и др., 1994).

Анализируя комплексные серологические исследования сывороток крови коров в неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах, нами было установлено, что показания РИД в значительной степени коррелируют с высокими титрами РА, РСК, РИГА и КР с молоком. Так, РИД в среднем выявляет от 80 до 100% реагирующих в РА в титрах 200 МЕ и выше. За время нашей работы отмечали в большинстве случаев 100%-ное совпадение РИД и РА.

В отношении PCK-S и РИГА отмечалась несколько иная закономерность. РИД выявляет от 60 до 93% животных, реагирующих в PCK-S в титре 1:20 и выше, а реагирующие в РИГА в титре 200 МЕ и выше в 64−92% случаев совпадали с таковыми в РИД.

Результаты сравнительных исследований сыворотки крови в РИД и молока от этих животных в КР показали, что от 90 до 100% реагирующих в КР с молоком, реагировали положительно в РИД. Это показывает их высокую диагностическую ценность, учитывая при этом, что КР с молоком можно проводить через 15−20 дней после ревакцинации, когда другие методы нельзя использовать.

Животные слабо реагирововашие или не реагировавшие в общепринятых серологических реакциях в своем большинстве не реагировали и в РИД. В неблагополучных хозяйствах у отдельных животных, положительно реагировавших в РИД, но сомнительно реагировавших или не реагироваших в РА и (или) РСК при исследовании их в дополнительных тестах: РИГА с сывороткой крови и КР с молоком, были отмечены реакции в высоких титрах 200 МЕ и выше и 1:8 и выше соответственно.

Однако при использовании РИД в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, как до, так и после применения вакцины из штамма 82, во всех случаях в РИД получены отрицательные результаты, хотя у определенного процента животных были положительные РА и PCK-S. В связи с этим в последующем было предложено исследовать в РИД только сомнительно и положительно реагирующих в РА, PCK-S.

В процессе нашей работы было отмечено, что телочки в 4−5-месячном возрасте и телки случного возраста не реагировали в РИД с 0-ПС антигеном, в то время как при исследовании нетелей и первотелок, выращенных из этих телочек, выявляли реагирующих в РИД и количество их варьировало в зависимости от тяжести эпизоотической обстановки (от единичных до 50%).

Наши материалы подтверждают данные других авторов о том, что отсутствие положительно реагирующих на бруцеллез среди молодняка всех видов в неблагополучных хозяйствах, по-видимому, нельзя отождествлять с отсутствием возбудителя бруцеллеза в их организме или их устойчивости к нему (И.А.Косилов с соавт., 1974; Г. А. Объедков, 1986; В. А. Мироненко, М. А. Бажин, 1988; А. Г. Хлыстунов, 1995 и другие). Хотя В. А. Штритер (1937), Д. К. Бессонов (1940), Е. С. Орлов, В. Е. Корнеева (1940), И.Л.Най-манов (1962), указывали на то, что молодняк обладает повышенной естественной резистентностью к бруцеллезной инфекции.

Нами доказана эффективность РИД в качестве экспресс-метода для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств, где животных реиммунизировали вакциной из штамма 82.

Наши исследования и наблюдения в АО «Рабочее», «Кирзинс-кое», «Восток» и др. показали, что при удалении животных pea.

— 120 гирующих в титрах РА 200 МЕ и выше, PCK-S — 1:20 и выше и РИД с последующей вакцинацией поголовья и проведением дифференциальной диагностики через 1,5−2 месяца после реиммунизации, позволило значительно улучшить эпизоотическое состояние уже через 6−7 месяцев и практически подойти к оздоровлению хозяйств в течение одного года.

Однако при этом необходимо учитывать одно важное обстоятельство: в данном случае в дальнейшем источником инфекции остается молодняк (телочки), среди которых, к сожалению, диагностировать бруцеллез до сего времени не удается, что и является основной причиной рецидивов бруцеллеза в ранее оздоровленных хозяйствах, в которых преждевременно прекращалась ревакцинация коров.

Эффективность РИД в целях дифференциальной поствакцинальной диагностики подтвердили в последующем и другие авторы (В.М.Чекишев, 1993, 1995, 1997; В. М. Чекишев с соавт., 1993; В. М. Чекишев, О. Д. Скляров, 1997; О. А. Колганова, А. И. Кабанцев, 1997, А. Г. Хлыстунов, С. К. Димов, 1998; Л. Н. Гордиенко, 1998).

Несмотря на то, что РИД не выявляет 100% инфицированных животных, это ни в коей мере не принижает ее достоинств, так как основное предназначение этого теста, как выяснилось и подтвердилось в процессе нашей работы, а также другими авторами, связано с тем, что РИД может быть использована:

— для оценки эпизоотической ситуации в благополучных по бруцеллезу хозяйствах, в которых имеет место выявление реагирующих на бруцеллез в РА, РСК с сывороткой крови и КР с молоком (при этом РИД может заменить бактериологический метод);

— для дифференциации вакцинированных и больных бруцеллезом животных в неблагополучных хозяйствах;

— 121.

— для ранней диагностики бруцеллеза через 1,5−2 месяца после реиммунизации противобруцеллезной вакциной из штамма 82, что ускоряет сроки оздоровления;

— для контроля за ходом оздоровления неблагополучных по бруцеллезу хозяйств с применением вакцины из штамма 82.

Нестандартные ситуации при использовании различных средств и методов дифференциальной поствакцинальной диагностики для эпизоотической оценки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого живой вакциной из слабоагглютиногенного штамма В. abortus 82, как показали результаты наших наблюдений, имеют место, хотя их не много. Они могут не подпадать ни под одно из положений действующих в настоящее время «Методических указаний по дифференциаль ной эпизоотической оценке стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82» .

В хозяйствах с нестандартной ситуацией эпизоотологическим методом наличие бруцеллеза не подтверждается, однако результаты серологических исследований могут указывать и на возможную эпизоотическую опасность (положительные РИД, КРвысокие титры РА и РСК). Поэтому необходимы дополнительные исследования, в том числе и бактериологические.

Об этом одним из первых отмечал в своих исследованиях В. И. Сайченко (1995). В дальнейшем мы продолжили с ним работу в этом направлении.

Все молочно-товарные фермы в Краснозерском районе с 1990 года оцениваются как благополучные по бруцеллезу.

В 1997 году из 174 реагирующих в целом по району животных РА и (или) РСК в высоких титрах были у 17 животных на 4 фермах. При этом на этих же фермах выявлено 11 положительно реагирующих в РИД (при бактериологическом исследовании материала от.

— 122 данных животных получен отрицательный результат, включая биопробу). Следует отметить, что на этих четырех фермах за указанный период всего положительно реагировало 130 животных, в том числе 125 — на двух: ТОО «Заря» и А0″ Сибирь". Эпизоотологичес-ки бруцеллез на указанных фермах исключен. В качестве предполагаемой причины реакций — вакцинная их природа, причем в ТОО «Заря» установлено, что реагирующие появились через 7−14 дней после прививки животных данного стада против сибирской язвы. При переисследовании всего поголовья животных получены результаты, свидетельствующие о полном угасании динамики положительных реакций (РИД и РА и РСК). При последнем исследовании (январь 1998 г.) получены отрицательные результаты в РА, РСК и РИД.

С 1988 года по настоящее время в районе благоприятны и эпидемиологические показатели: нет ни острых, ни хронических случаев заболевания бруцеллезом людей.

Аналогичная ситуация отмечалась и в ряде хозяйств Ордынского, Черепановского, Кочковского и других районов. Результаты комплексных исследований подтвердили их благополучие по бруцеллезу.

С учетом полученных результатов в ранее разработанные критерии эпизоотической оценки, основанные на эпизоотологичес-ком обследовании хозяйства и результатах анализа характера различных серологических реакций, внесены определенные изменения, которые отражены в системе эпизоотологического мониторинга.

Эти изменения не противоречат данным других авторов, занимавшихся проблемой эпизоотологического мониторинга (С.К.Ди-мов, 1993; В. И. Сайченко, 1995, В. М. Авилов с соавт., 1997;

— 123.

А.Г.Падалица, 1997 и другие), но существенно дополняют их в плане повышения их профилактической, противоэпизоотической и экономической эффективности. С учетом этих критериев сложились три эпизоотологические категории ферм: неблагополучные, благополучные и требующие уточнения эпизоотической ситуации.

Если иметь в виду, что в качестве критериев потенциальной эпизоотической опасности при бруцеллезе у привитых животных являются положительные показания РИД, РА (200 МЕ и выше) и РСК (1:20 и выше), а также КР с молоком (1:8 и выше), то в 1995;98 гг. в большинстве районов области в том или ином масштабе возникла необходимость комплексной эпизоотической оценки стад по бруцеллезу. Основанием для объявления в последние годы неблагополучными по бруцеллезу ферм являются результаты эпизоотической оценки на основе указанной системы эпизоотологического мониторинга.

Об эффективности этой системы можно судить по следующим данным: на 1 ноября 1993 года было 309 пунктов, требующих выяснения эпизоотической ситуации. В период с 1993 по 1997 год неблагополучными были объявлены 29 ферм, то есть удалось предотвратить объявление неблагополучными 280 ферм.

На основании разработанных критериев в благополучных хозяйствах при массовых диагностических исследованиях крупного рогатого скота на бруцеллез не стали использовать РСК, кроме случаев, когда на той или иной ферме выявляются животные с положительной РА в титре 100 МЕ и выше.

Следует отметить, что в практику районных ветеринарных лабораторий РИД с 0-ПС антигеном была внедрена в 1994 году в 11 районах из 30-ти (из 14,7 тыс. проб сывороток крови крупного рогатого скота, главным образом из числа положительно и сомнительно реагировавшего в РА и РСК, в РИД положительно реагировало 529 проб), в 1995 году в 19 районах (из 19,6 тыс. шжяедевавкю. проб реагировало положительно ъ РОД 533). С года ее используют (хотя и не везде в больших объемах) практически во всех районах. В настоящее время в Новосибирской области проводится постоянная комплексная зпизоотологическая оценка по бруцеллезу всех ферм, где выделяются положительно реагирующие в РА и РСК.

С 1974 по 1997 год в Новосибирской области благодаря изучению, разработке и внедрению различных вариантов системы про-тивобруцеллезных мероприятий, основанных на рациональных схемах применения вакцин и поствакцинальной диагностике (в том числе и дифференциальной), удалось добиться снижения числа неблагополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота ферм с 532 до 11, то есть в 48,3 раза.

По состоянию на 1 января 1998 года в области официально числится 11 неблагополучных пунктов в восьми районах из 30-ти: Татарский — 2, Усть-Тарский — 1, Венгеровский — 1, Чулымский — 1, Колыванский — 2, Тогучинский — 2, Болотнинский -1, Мош-ковский — 1 пункт (тогда как в 1974 году неблагополучными были все районы области).

Однако, следует отметить, что если на 1 января 1997 г. в области было на учете 15 неблагополучных пунктов в девяти районах, то в течение года из них было оздоровлено 11, но дополнительно было объявлено неблагополучными еще 7 ферм в шести районах, оценка неблагополучия которых была проведена по предложенной нами схеме.

Количество положительно реагирующего на бруцеллез крупного рогатого скота, выявляемого ежегодно, начиная с 1974 года.

— 125 снизилось к 1997 году также довольно значительно — с 41 тыс. до 2,4 тыс. голов, или почти в 18 раз.

Так, количество положительно реагирующего на бруцеллез крупного рогатого скота среди невакцинированного поголовья с 1991 по 1997 год снизилось с 0,34 до 0,13% из числа исследованных. Среди вакцинированного поголовья количество положительно реагирующих снизилось за указанные годы с 1,0 до 0,30%. Среди телок случного возраста отмечена аналогичная тенденция (снижение с 0,46 до 0,15%).

Количество реагирующих в РИД с 1994 по 1997 год снизилось с 3,5 до 1,2% от числа исследованных.

Таким образом, на основании проанализированных материалов, очевидна, с одной стороны, потенциальная возможность полного оздоровления области от бруцеллеза в ближайшее время, с другой — наличие угрозы появления неблагополучных пунктов вновь как за счет рецидивов, так и за счет заноса инфекции извне при несоблюдении предложенных принципов создания и поддержания в неблагополучных и угрожаемых популяциях перманентного иммунитета и максимального использования провоцирующих свойств вакцин в рациональных схемах поствакцинальной диагностики.

Разработанная система эпизоотологического мониторинга позволяет осуществлять надежный экспресс-контроль за изменением эпизоотической ситуации и тем самым помогает предотвращать эту угрозу за счет принятия оперативных оптимальных мер.