Механизм локализации мРНК нового гена Germes в оогенезе шпорцевой лягушки Xenopus laevis

1) Клонирована нолноразмерная кДНК нового гена, Germes, транскринт которого.

локализован на вегетативном нолюсе зрелых ооцитов и ранних эмбрионов шпорцевой.

лягушки Xenopus laevis. Определена нуклеотидная последовательность кДНК гена. Предсказана структура кодируемого белка. 2) мРНК Germes локализуется на вегетативный полюс яйца во время оогенеза за.

счет раннего механизма транспорта РНК. Предсказаны цис-действующие.

последовательности, ответственные за локализацию транскрипта, находящиеся в его.

З’НТО, и представляющие собой три кластера из САС-повторов. Все три кластера.

являются необходимыми, но недостаточными для локализации мРНК Germes в МО и на.

вегетативный нолюс ооцита. 3) Предсказаны вторичные структуры, образующиеся в З’НТО мРНК Germes и ее.

цис-действующих последовательностях. Изучен характер поведения РНК, содержащих.

кластеры из САС-повторов, и потенциальные вторичные структуры, являющиеся.

претендентами на роль сигналов локализации в ооцитах Xenopus laevis. РНК,.

соответствующая последовательности, обозначенной нами как Lbc', показала нетипичное.

новедение при инъекциях в ооциты — образование крупных агрегатов в цитоплазме, их.

локализацию в кортикальном слое и околоядерной области ооцитов ранних стадий. Предноложительно, Lbc' является цис-действующей последовательностью мРНК Germes,.

ответственной за локализацию по позднему пути. 4) Исследованы белковые факторы, специфично взаимодействующие с З’НТО.

мРНК Germes и ее цис-действующими последовательностями. Установлено, что Lbc'.

является минимальной цис-действующей последовательностью, с которой связывается.

набор белков, идентичный набору белков связываемых с З’НТО мРНК Germes. Разные.

части последовательности Lbc' — Lb и с', образующие предсказанные вторичные.

структуры, связывают разные наборы белков, предполагая участие этих структур в роли.

сигналов локализации. Среди белков, связывающихся с З’НТО мРНК Germes, обнаружены.

ранее не онисанные белки с молекулярными весами 30,45, 57 и 65 кДа, обозначенные.

нами как рЗО, р45, р57 и р65, соответственно. За связывание с белком р45 отвечает Lb, а с.

рЗО — носледовательность с'. Белки р57 и р65 связываются с обеими частями Lbc'. 5) Сравнительный анализ белковых факторов, связывающихся с З’НТО мРНК.

Germes и с цис-носледовательностями Xcat2 и Vgl мРНК показал, что белки рЗО, р45, р57.

и р65 являются, предположительно новыми транс-факторами, припимающие участие в.

раннем механизме локализации мРНК Germes и Xcat2.