Особенности микрофлоры кишечника при псориазе на фоне инвазии Blastocystis hominis

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Организм человека представляет собой экологическую нишу для множества разнообразных микроорганизмов, которые в норме заселяют определенные биотопы. Микробиоценозы тела человека — это сложные системы, отличающиеся не только чрезвычайной многокомпонентностью, но и количественным разнообразием входящих в них представителей микрофлоры. При этом видовой состав микроорганизмов формируется качественно и количественно, в зависимости от характера микроэкологии в биотопах, который сложился эволюционно и приобрел устойчивость применительно к видовым особенностям макроорганизма (Ьондаренко, Грачева, Мацулевич, 2003).

Кишечный микробиоценоз ряд исследователей (Воробьев, Абрамов, 1997; Ьуторова, Калинин, 2001) рассматривают как своеобразный экстракорпоральный орган макроорганизма, где в единой системе существуют корреляционные связи между отдельными семействами, родами, видами анаэробных и аэробных бактерий. Этот своеобразный орган имеет свои функции, критерии и показатели функционального состояния.

Нарушение колонизационной резистентности кишечника, связанное с изменением состава нормальной микрофлоры, способствует адгезии и колонизации слизистой оболочки патогенными и условно-патогенными бактериями. Подобные нарушения приводят к формированию дисбиоза, к развитию экзогенной и эндогенной инфекций (Мельникова, 1997; Ьилимова, 2000).

Наиболее изучены изменения микрофлоры кишечника при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, таких как язвенная болезнь (Комаров, Рапопорт, 2000), гастрит, язвенный колит (Дорофеев, Несвижский, 1997) и заболеваниях гепатобилиарной системы (Cammarota, Ogava, 1998; Белова с соавт., 2004).

Показано, что нарушение биоценотических взаимоотношений между патогенными бактериями и нормальной кишечной микрофлорой является одним из важнейших факторов, влияющих на развитие многих заболеваний, особенно, имеющих хроническое течение. Б связи с этим, очевидна роль дисбактериоза кишечника в формировании аллергодерматозов. Так, Е. Р. Федорова (1992), Т. И. Рябиченко, В. Д. Петерсон (1998), I. Hamiiton, G.M.Fairris (1985) считают чрезвычайно важным для правильной оценки атопического состояния больного и проведения оптимальных терапевтических мероприятий анализ состояния микробиоценоза кишечника.

Многочисленные эпидемиологические исследования указывают на увеличение распространения в современных условиях ряда хронических кожных заболеваний, таких как псориаз, атонический дерматит (АД) и др., нередко сочетающихся с другими проявлениями атопического фенотипа, такими как бронхиальная астма, крапивница, ринит и др. (Ьрмолаев, 1996; Калюжная, 1987; Henseler, Christophers, 1995).

Псориаз рассматривают как хроническое наследственное заболевание кожи с многообразными клиническими проявлениями. Удельный вес псориаза в структуре кожных заболеваний человека значителен, он составляет 12−15%, что определяет его высокую социальную значимость (Фициатрик, 1999; Kavli, Forde, Arnesen, 1985). При псориатической болезни в организме выявлены иммунные, метаболические, структурно-функциональные сдвиги, являющиеся важными патогенетическими факторами развития данного заболевания (Машкиллейсон, Рубине, Векслер, 1987; Новиков, Охлопков, 1997; Немчанинова, 1999; Плейфер, 1999). Однако до сих пор механизмы развития дерматоза остаются недостаточно изученными.

А.А. Воробьев, Л. О. Иноземцева, Ю. В. Несвижский (1996), De Vos J., De Boer, F.D. Haas (1995) считают, что возникновение кожных заболеваний в определенной мере связано с нарушением микроэкологического баланса кишечника. Однако ряд исследователей полагают, что основным этиологическим фактором развития дерматозов являются не бактериальные инфекции, а паразитозы (Marks, Sinister, 1970). Б литературе имеются данные о наличии кожных высыпаний у больных при выявлении у них кишечных паразитов. Гак, работами Н. Тонкина, Г. Генова, Хр. Дмитриева (1986), (i.M.Swank, H.A.Deitch, (1996) показано наличие у больных дерматозами (экзема, псориаз, крапивница, нейродермит) протозойных и гельминтных инвазий.

В течение последних лет получены данные о значительной роли паразитарных инвазий кишечника (гельминтоз, лямблиоз, бластоцистоз) в патогенезе атопического дерматита, являющихся запускающим механизмом для иммунопатологических изменений кожи и поддерживающих его хроническое течение (Espinoza, Soligen, 1998). Однако данная проблема до сих пор остается мало изученной, не известна роль многих отдельных представителей возбудителей паразитозов в развитии данной патологии.

В связи с этим, особую актуальность приобретает широко распространенная «новая» протозойная инвазия — бластоцистоз, обусловленная паразитированием простейших Blastocystis hominis в толстом отделе кишечника (Чайка, 1992; Zierdt, 1988).

Интересным представляется факт высоких показателей инвазированности бластоцистами при аллергических заболеваниях, в частности, атопическом дерматите (Торопова, Сафронова, Гордеева, 1998). Это дает возможность предположить участие данных простейших в формировании системных атопических нарушений, в частности, псориаза. Однако эта проблема до сих пор остается неизученной.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Изучить особенности микрофлоры кишечника при псориазе на фоне инвазии Blastocystis hominis.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Изучить соотношение индигенной и условно-патогенной микрофлоры кишечника лиц, страдающих псориазом, в зависимости от формы, периода и стажа заболевания.

2. Выявить частоту встречаемости Blastocystis hominis в кишечнике у обследованных лиц.

3. Исследовать выраженность вирулентных свойств клинических изолятов В.hominis.

4. Выявить чувствительность В. hominis к антипротозойным препаратам.

5. Дать экологическую оценку микрофлоры кишечника у больных псориазом.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые изучены особенности микрофлоры кишечника больных псориазом на фоне протозойной инвазии — бластоцистоза.

Установлено, что степень выраженности дисбиотических изменений микрофлоры кишечника зависит от продолжительности заболевания, изменяется в периоды обострения и ремиссии.

Показана высокая инвазированность больных псориазом простейшими Blastocystis hominis. Установлено, что частота паразитоносительства зависела от стажа заболевания.

Выявлено, что выраженность вирулентных свойств и степень чувствительности к антипротозойным препаратам клинических изолятов бластоцист находились в зависимости от периодов заболевания.

Впервые дана экологическая характеристика особенностей микронейзажа кишечника при псориазе на фоне бластоцистной инвазии. Показаны глубокие перестройки микробиоценоза кишечника, сопровождающиеся сменой ценотипа и иерархии экологических групп.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Выраженные дисбиотические сдвиги микрофлоры кишечника у больных псориазом диктуют необходимость проведения регулярных исследований кишечного микроиейзажа при данной патологии.

Определение вирулентности и чувствительности к антинротозойным препаратам отдельных представителей микробиоценоза кишечника в различные периоды заболевания позволит разработать способ прогнозирования течения псориаза, а также выработать наиболее оптимальную терапию данного заболевания, с учетом микроэкологических особенностей кишечника.

Высокая частота обнаружения бластоцист при псориазе позволяет рассматривать данных простейших как этиопатогенетический ко-фактор развития этого заболевания, что предполагает возможность применения противопротозойных препаратов для его терапии.

Получена приоритетная справка № 2 003 135 444 от 09.12.2003 г. на «Способ получения чистой культуры простейших Blastocystis hominis на питательной среде».

Опубликованы практические рекомендации «Экологическая характеристика микробиоценоза кишечника» (Ульяновск, 2004 г.), «Особенности микроэкологии кишечника больных псориазом» (Ульяновск, 2004 г.).

Результаты исследований позволят совершенствовать процесс преподавания по курсу микробиологии, дерматологии, инфекционных болезней и смежных дисциплин.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Дисбиотические сдвиги микробиоценоза кишечника при псориазе характеризуются снижением уровня содержания облигатной микрофлоры и увеличением представителей условно-патогенной группы. Выраженность изменений микропейзажа кишечника находится в прямой зависимости от стадии и продолжительности заболевания.

2. Простейшими Blastocystis hominis инвазировано 73,6% больных псориазом. Существенных различий в частоте встречаемости бластоцист у мужчин и женщин не обнаружено. Отмечено изменение выявляемости данных простейших в зависимости от периода и стажа заболевания.

3. Изоляты Blastocystis hominis обладают различной вирулентностью, что позволяет предположить их неодинаковую значимость в течении патологического процесса.

4. Устойчивость к антинротозойным препаратам увеличивается в иериод обострения и снижается во время ремиссии.

5. Изменения микробиоценоза кишечника на фоне бластоцистной инвазии сопровождаются глубокими перестройками пространственной организации и иерархии экологических ipynn микроорганизмов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы доложены на региональной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современного здравоохранения и экологии» (Ульяновск, 2003) — XIII ежегодной научно-практической конференции студентов и аспирантов (Ульяновск, 2003; 2004) — XXXIX научно-практической межрегиональной конференции врачей (Ульяновск, 2004) — 5-ой Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2004). РАБОТА ВЫПОЛНЕНА. Диссертация выполнена в соответствии с учебным планом научной работы на экологическом факультете Ульяновского государственного университета.

ВЫВОДЫ.

1. Установлены дисбиотические изменения нормофлоры кишечника, наиболее выраженные при обострении распространенного псориаза и псориаза в сочетании с артропатией. Выявленные изменения усугублялись при увеличении стажа заболевания.

2. Обнаружено, что частота встречаемости Blastocystis hominis при псориазе в период обострения составила 73,0%, во время ремиссии — 63,1%, тогда как у практически здоровых людей этот показатель не превышал 5%.

3. Вирулентность изученных штаммов бластоцист неодинакова и зависит от периода и продолжительности псориаза, она увеличивается во время обострения и длительном стаже заболевания.

4. Выявлена выраженная чувствительность штаммов бластоцист к антипротозойным препаратам: к тинидазолу 52,4%, к метронидазолу 47,8%, в то время как к орнидазолу чувствительность не превышала 21,6%. Чувствительность менялась в зависимости от периода заболевания.

5. При псориазе, протекающем на фоне инвазии Blastocystis hominis, выявлено изменение микроэкологии кишечника, проявляющееся снижением доминирования и флористической значимости основных симбионтов и увеличением частоты встречаемости транзиторной микрофлоры. Это свидетельствует о структурной перестройке ценотипа, смене абсолютных доминант микробиоценоза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Выбранное направление исследования было определено широкой распространенностью псориаза, тяжестью его течения. Кроме возрастающего воздействия на организм человека бытовых и лекарственных препаратов, нарушений экологического баланса, многие исследователи придают значение взаимосвязи инфекций с аллергическими заболеваниями (Вьшова, Казначеева, 1998). С этой точки зрения наибольший интерес ггредсташгяют атопический дерматит и ггсориаз, при которых до настоящего времени не определена окончательно роль микроорганизмов, ггерсистирующих в желудочно-кишечном тракте и на коже, как этионатогенетических факторов заболевания. Дискутабельным остается воггрос в отношении особенностей кишечной микрофлоры у больных псориазом.

Рядом авторов (Воробьев, Иноземцева, Несвижский, 1996; Пегано, 2000; Песляк, 2000; De Vos, De Boer, Haas, 1995) обсуждалась роль нарушений микроэкологического баланса кишечника в возникновении кожных заболеваний. Ими указывалось на частое выявление дисбиотических сдвигов в составе микрофлоры кишечника с изменением качественного состава, количественного соотношения, антагонистических свойств и ферментативной активности бактерий.

Для достижения поставленной цели было проведено обследование больных псориазом, которое включало исследование микробиоценоза кишечника, выявление простейших, ггаразитирующих в кишечнике, определение вирулентности выделенных микроорганизмов и характеристик, позволяющих им длительно нерсистировать в организме хозяина, как в период обострения, так и в период ремиссии ггсориаза.

При первичном лабораторном обследовании ггациентов были выявлены существенные отличия между состоянием микробиоценоза кишечника больных исориазом разных возрастных групп, клинических форм, периодов и разного стажа заболевания.

В нашем исследовании дисбиотические сдвига имелись у подавляющего количества больных, однако, характер данных изменений варьировал в зависимости от диагноза заболевания. Наиболее выраженные изменения зафиксированы со стороны анаэробной флоры. Из представителей облигатно-анаэробной флоры кишечника обследованных больных отмечается снижение Bifidobacterium (65,8%) до значения lg 7,9+0,04 КОЕ/г (р<0,001). Количественное содержание Lactobacillus и Bacteroides также претерпевает значительные изменения в 38,8% и 67,1% случаев соответственно. Показатели уровня содержания данных микроорганизмов составили lg 7,2 ±0,03 КОЕ/г (р<0,01) и lg 8,3 ±0,04 КОЕ/г (р<0,001). Дефицит Escherichia был зарегистрирован в 47,3% случаев. Наряду с этим, характерным микроорганизмом для микропейзажа кишечника обследованных больных являлась кишечная палочка с гемолитическими свойствами. Частота обнаружения данных бактерий составила 43,4% со средним значением lg 5,5 ±0,2 КОЕ/г.

Помимо этого, представители условно-патогенной флоры также высевались в значительных количествах. Бактерии родов Proteus и Enterococcus были выявлены у 56,6% и 78,9% больных соответственно. Количественное содержание данных микроорганизмов составило lg 5,5 ±0,1 КОЕ/г (р<0,01) и lg 7,4 ±0,1 КОЕ/г (р<0,001). Для бактерий рода Klebsiella, характерно повышенное содержание у 51,3% обследованных (lg 5,4 ±0,1 КОЕ/гр<0,05). Аналогичная ситуация наблюдалась для Staphylococcus в 43,4% случаев. Уровень их содержания составил lg 5,9±0,07 КОЕ/г (р<0,05).

Дрожжеподобные грибы рода Candida в норме редко обнаруживаются у здоровых детей и взрослых (Крамарь, Чижикова, 1992; Бухарин с соавт., 2002). Однако при микробиологическом обследовании больных псориазом выявлены в количестве lg 5,8±0,08 в 68,4% случаев (р<0,001).

Обнаружено повышение содержания представителей рода Clostridium, роль которых велика в развитии эндогенной инфекции при снижении резистентности макроорганизма (Коршунов, Володин, Ефимов, 1999) до lg 6,1 ±0,1 КОЕ/г (р<0,001) у 23% обследованных больных.

Наиболее выраженные дисбиотические сдвиги были характерны для лиц с распространенным псориазом (р<0,05), а также с распространенным псориазом в сочетании с нсориатической артропатией (р<0,05). В тоже время у больных с вульгарным, каплевидным и псориазом волосистой части головы дисбактериоз был менее выражен (р<0,01).

Иная ситуация наблюдалась в период ремиссии заболевания. Показатели микробиоценоза кишечника имели тенденцию к нормализации. Количественный анализ выявляемой микрофлоры в данном случае показал, что дисбиотические изменения сохранились, однако, выраженность их уменьшилась. Так, уровень содержания бифидобактерий составил lg 8,7 ±0,3 КОЕ/г (р<0,05), лактобактерий — lg 8,3 ±0,04 КОЕ/г (р<0,01), бактероидов — lg 9,1 ±0,01 КОЕ/г (р<0,05). Обращает на себя внимание существенное снижение частоты выделения условно-патогенной флоры по сравнению с периодом острых проявлений кожного процесса. Так, уровень содержания бактерий рода Klebsiella составил lg 4,8 ±0,02 КОЕ/г (р<0,05), Staphylococcus — lg 4,2±0,2 КОЕ/г (р<0,05), Candida — lg 3,6 ±0,1 КОЕ/г, Proteus — lg 5,2±0,3 КОЕ/г (р<0,01). Количественный анализ выявляемой условно-патогенной флоры показал, что в период ремиссии псориаза уменьшилась массивность обсеменения условно-патогенными микроорганизмами. Так, частота выявления грибов рода Candida в повышенном количестве была незначительной и составила 2,8% случаев.

Исследования состояния микробиоценоза кишечника при различной продолжительности заболевания выявили наличие изменений во всех ipyimax обследованных лиц. Снижение содержания бифидобактерий характерно для всех групп. Наиболее выраженное снижение лактобактерий отмечено в третьей (lg 7,2+0,7 КОЕ/г) и четвертой группах (lg 7,7+0,1 КОЕ/г), т. е. у лиц с продолжительностью заболевания от 5 до 10 лет и от 10 лет и более. Значительные изменения количества бактероидов отмечены в первой (lg 7,3+0,4 КОЕ/г) и третьей группах (lg 7,9+0,3 КОЕ/г).

Иная ситуация наблюдалась с условно-патогенными микроорганизмами. Для больных с относительно малым стажем болезни (до 1 года и от 1 года до 5 лет) отмечалось значительное возрастание содержания бактерий группы УПМ. Так, очень часто регистрировались микроорганизмы родов Proteus (lg 5,6+0,8 КОЕ/г и lg 5,2+0,1 КОЕ/г соответственно), Klebsiella (lg 5,9+0,1 КОЕ/г и lg 5,3+0,5 КОЕ/г соответственно). Содержание стафилококков у больных со стажем 1−5 лет (вторая группа) составило lg 5,3 +0,9 КОЕ/г, при стаже 5−10 лет (третья группа) — lg 5,6+0,6 КОЕ/г, что превышало аналогичные показатели у здоровых (lg 4,1+04 КОЕ/г).

Определение возможности корреляции изменений микрофлоры кишечника от продолжительности заболевания показало, что для больных со стажем 1−5 лет коэффициент корреляции (г) составил 0,91, для больных со стажем 5−10 лет — 0,84. Далее наблюдалось снижение этого показателя в четвертой группе до 0,76, в первой группе до 0,69. Полученные результаты свидетельствуют о наличии положительной корреляции изменений микрофлоры кишечника при продолжительности заболевания от I до 10 лет (2 и 3 группа).

Вследствие того, что псориаз относится к числу заболеваний, обострение клинических проявлений которого можно связать с сезонными колебаниями погоды (Ващенкова, 1976), нами были проанализированы изменения микробиоценоза кишечника по формам заболевания. Результаты исследования микрофлоры кишечника при различных формах псориаза показали наличие выраженного снижения количества облигатных представителей, особенно при осенней форме. Напротив, при всех формах псориаза отмечено увеличение количества транзиторной микрофлоры, также наиболее выраженное при осенней форме.

Возрастные особенности выявили дисбиотические изменения во всех группах обследованных лиц, однако, наиболее выражены они были у больных в возрасте 30−40 лет и более. Характерной особенностью обследованных ipyini явилось персистирование гемолитических кишечных палочек.

С современных позиций псориаз рассматривают как хроническое наследственное заболевание с разнообразными клиническими проявлениями (Скрипкин, 1995; Фицпатрик, 1999). Многообразие существующих теорий (Мордовцев, Сергеев, Алиева, 1987; Новиков, Охлопков, 1997; Корсун, Станевич, Яговдик, 1999) возникновения данного заболевания не раскрывает механизмов развития дерматоза.

В настоящее время многими авторами (Тонкин, Генов, Дмитриев, 1986; Espinoza, Soligen, 1998) особое значение в патогенезе кожных заболеваний придается паразитарным инвазиям кишечника (гельминтоз, лямблиоз, бластоцистоз), являющимся запускающим механизмом для иммунопатологических изменений кожи и поддерживающих хроническое течение заболевания.

В связи с этим, особый интерес представляют простейшие Blastocystis hominis, паразитирующие преимущественно в толстом отделе кишечника человека (Чайка, 1992; Белова, 1992). Кроме того, в настоящее время имеется достаточное количество данных, подтверждающих реальную роль бластоцист в развитии патологических состояний человека на фоне снижения резистентности макроорганизма (Garavelli, 1991).

Проведенные исследования, но выявлению простейших Blastocystis hominis у больных исориазом показали, что из 152 обследованных у 111 (73,0%) человек были обнаружены бластоцисты. Следует отметить, что в группе сравнения частота встречаемости данных простейших составила 5%.

Инвазированность бластоцистами при различных диагнозах была j неодинаковой. Наибольшее количество этих простейших определялось в фекалиях больных при распространенном псориазе у 76,5%- при PI IcI IA — у 15,3%. При остальных диагнозах инвазированность простейшими была значительно ниже: при АГ1 — 2,7%- при КП — 0,9%- при ВП — 2,7%- при ПВЧГ — 1,8%.

Следует отметить противоречивость литературных данных о частоте обнаружения бластоцист у людей в зависимости от возраста и иола. Анализ литературы показал, что наибольшее количество случаев бластоцистоза у взрослых зарегистрировано в возрасте от 30 до 40 лет (Торопова, Сафронова, Гордеева, 1998; Doyle, Helgason, 1990). Однако по данным P. Garavelli (1991) бластоцист обнаруживают и у пациентов в возрасте от 15 лет.

В проведенных нами исследованиях были обнаружены значительные огличия инвазированности в зависимости от возрастной структуры обследованных. Наиболее часто простейшие обнаруживались в четвертой возрастной группе (76,9%), и несколько меньше во второй — 74%. В первой частота их встречаемости составила 55,5%, в третьей — 52%.

Также противоречивы сведения о встречаемости бластоцист среди мужчин и женщин. По данным Н. А. Чайки (1992) у мужчин бластоцисты обнаруживаются чаще, чем у женщин. Напротив, исследования, проведенные P. Garavelli, указывают на большую зараженность женщин, чем мужчин. В проведенных нами исследованиях частота обнаружения простейших бластоцист у мужчин составила 75%, у женщин — 69,6%.

Анализ инфицированности бластоцистами в зависимости от различных форм заболевания показал, что наибольший процент встречаемости простейших приходится на смешанную форму заболевания (28,8%), а также на сезонные обострения, связанные с осенне-весенним и зимним периодами года (13,5% и 14,4% соответственно). При осенне-зимней форме бластоцисты были обнаружены в 9,9% случаев, при весенне-зимней — в 6,3%. Еще более низкая инвазированность была выявлена при недифференцированной форме (3,6%), весенней (2,7%) и осенней (2,7%) формах.

Следует отметить, что клинический материал обследовался на момент выписки из стационара, т. е. в период снижения клинических проявлений болезни. Проведенные нами исследования показали, что частота встречаемости бластоцист значительно снижалась в период ремиссии и составила 63,1% (70 человек).

Значительные различия были выявлены при анализе степени инвазированности бластоцистами в группах, но продолжительности заболевания. Полученные результаты свидетельствуют о том, что наиболее часто В. hominis обнаруживали в фекалиях больных с продолжительностью заболевания более 10 лет (79,7%), у больных со стажем 5−10 лет и от 1 до 5 лег — реже (70,0% и 68,7% случаев соответственно). Менее всего бластоцист выявляли у больных 1-ой группы, частота встречаемости данных микроорганизмов составила 64,2%.

Таким образом, проведенные нами исследования выявили высокую (73,6%) распространенность условно-натогенного простейшего микроорганизма Blastocystis hominis в кишечнике больных, страдающих псориазом, что согласуется с данными Н. П. Тороповой, Н. А. Сафроновой, JI.M. Гордеевой (1998) но выявлению данного простейшего среди лиц с хроническими признаками атонии. Значительных различий в обнаружении бластоцист среди мужчин и женщин обнаружено не было. Напротив, некоторые различия выявлены в зависимости от возраста больных. Наблюдается увеличение инвазированности этими возбудителями при возрасте более 40 лет.

По литературным данным, существуют три основные формы бластоцист: вакуолярная, гранулярная и амебоидная (Сахарова, Гордеева, Сергиев, 1997; Zierdt, Rude, Bull, 1967; 1973; Zaman, Howe, Hg, 1997).

В собственных исследованиях также была изучена морфологическая организация бластоцист. Вакуолярные формы в препаратах из фекалий обнаруживались в 40,8%, на гранулярную приходилось 21,7%. Одновременное выявление вакуолярных и гранулярных форм составило 35,6%. Амебоидная форма бластоцист в клиническом материале отсутствовала. Размеры бластоцист варьировали в широких пределах. Простейшие размером менее 6 мкм встречались в 23,1% случаев, от 6 до 15 мкм — в 69,5% и более 15 мкм — в 7,6%.

Совокупность бактериальной флоры и простейших, вегетирующих в кишечнике, составляет основу его микроэкологии, представляя собой сбалансированную систему. Воздействие на организм широкого спектра неблагоприятных факторов, таких как вредные условия производства, многочисленные заболевания и др., оказывает отрицательное влияние на микробиоценоз, способствует нарушению существующего баланса. Это нарушение проявляется количественными и качественными изменениями, а также изменением степени выраженности натогенных свойств представителей условно-патогенной флоры. Таким образом, микробиоценоз организма человека является чувствительным индикатором депрессии защитных механизмов.

Для аргументации этиологического значения бластоцист в развитии патологического процесса необходимо подтверждение их патогенных свойств. Проведенные нами исследования показали, что не все выделенные штаммы обладали вирулентностью. Только 78,4% (87 изолятов) вызвали гибель животных. Кроме того, количественная характеристика ггатогенности (LD 50) также значительно варьировала, что позволило разделить все изученные штаммы на 3 группы: слабовирулентные lg 2,9±0,3- умеренновирулентные — lg 3,86±0,22- высоковирулентные — lg 5,98±0,2.

В период ремиссии псориаза наблюдалось снижение вирулентных свойств бластоцист. Вирулентность проявили только 39,0% штаммов.

Изменился также и показатель вирулентности LD50 (lg). Так, для умеренно-вирулентных штаммов он составил lg 2,24±0,3, слабовирулентных — lg 1,9±0,1. Высоковирулентные штаммы отсутствовали. Следует отметить наличие положительной корреляции изменений вирулентности от периода заболевания (г=0,94).

Анализ полученных результатов, но определению степени выраженности патогенных свойств клинических изолятов бластоцист в зависимости от продолжительности заболевания показал повышение вирулентности бластоцист со стажем заболевания. Так, возрастало не только количество высоковирулентных штаммов бластоцист, но и показатель LD50 (lg) (от 5,83±0,18 до 7,0±0,2).

Общепризнано, что представители нормальной микрофлоры, обладая определенными механизмами приживления, способны вызывать заболевания при снижении иммунитета. Многие микроорганизмы выработали свойства, направленные на взаимную адаптацию, позволяющую длительно нерсистировать возбудителю в организме. Персистенция бактериальных патогенов — широко распространенное явление в инфектологии (Валышев, Гильмутдинова, Фомичева, 1996; Бондаренко, 1999; Билимова, 2000). Как патоген, так и хозяин обладают удивительной пластичностью, которая лежит в основе их сложных взаимоотношений, иллюстрирующих закон параллельной эволюции паразита и хозяина (Бухарин, 2000; Леванова, Алешкин, 2002). Важнейшим механизмом этой взаимной адаптации, по-видимому, является универсальный принцип саморегуляции паразитарных систем с использованием обратных связей, где варьирующими признаками патогена являются вирулентность и антигенность, а хозяина — иммунокомпетентность (Сытник, 1988; Валышев, Гильмутдинова, Фомичева, 1996). Идущая в ходе инфицирования организма перестройка механизмов защиты хозяина, в ряде случаев способствует формированию его иммунокомпрометированного статуса, что создает условия для нерсистенции выживания) возбудителя и приводит к бактерионосительству, либо хронизации инфекции (Сытник, 1987).

Механизмы персистенции микроорганизмов очень разнообразны (Бухарин, 1994; Бухарин, Кириллов, 2002). К секретирующим началам, обеспечивающим нерсистирование микробной клетки, относят так называемый антиинтерфероновый признак, характеризующий способность бактерий инактивировать антибактериальный фрагмент препарата человеческого лейкоцитарного интерферона. Антиинтерфероновая активность выявлена у большой группы условно-патогенных микроорганизмов. Кроме того, в работе Н. В. Бугеро (2004) показано наличие антиинтерфероновой активности для простейших Blastocystis hominis. Резистентность микроорганизмов к антибиотикам оказывает существенное влияние на течение инфекционного заболевания (Мотавкина, Троян, 2002) и имеет прямое отношение к микроэкологическому равновесию в ЖКТ (Смирнова, Сиченко, Романова, 1989; Машковский, 2000).

Следовательно, следующим этаном нашей работы явилось изучение чувствительности к антибиотикам бластоцист, выделенных при разной степени длительности исориаза, прогрессирующей стадии и стадии ремиссии. В качестве антимикробных веществ были изучены метронидазол, тинидазол, орнидазол.

Результаты проведенных исследований показали, что все выделенные штаммы бластоцист обладали различной чувствительностью к антипротозойным препаратам в период обострения исориаза. Так, чувствительностью к тинидазолу обладало 52,4%, а к метронидазолу — 47,8% изолятов бластоцист. К этим препаратам обнаружено наибольшее количество чувствительных штаммов (58 и 53 соответственно). Менее эффективным оказался орнидазол, только 24 штамма (21,6% изолятов) проявили чувствительность к этому антибиотику. Кроме того, отмечено возрастание количества штаммов, проявивших устойчивость к изученным препаратам ио мере увеличения стажа болезни.

С целью более полной характеристики чувствительности бластоцист к антипротозойным препаратам использовали определение минимальной ингибирующей дозы (Zierdt, Swan, 1983). Для тинидазола и орнидазола она составила 10″ 3мг/мл, а к метронидазолу бластоцисты были чувствительны даже при разведении 10″ 4мг/мл.

Следует отметить, что в период ремиссии псориаза наблюдалось увеличение количества штаммов, проявивших чувствительность как к тинидазолу, метронидазолу, так и к орнидазолу. Частота встречаемости таких изолятов в данном случае составила 56,7%, 54% и 34,2% соответственно.

Снизилось количество умеренно-устойчивых штаммов по сравнению с периодом обострения. Частота встречаемости таких изолятов простейших бластоцист была ниже, она составила 28,8% к тинидазолу, 29,7% к метронидазолу и 28,8% к орнидазолу.

Результаты, полученные по выявлению устойчивых штаммов бластоцист, показали, что в период ремиссии псориаза их количество снизилось. При использовании тинидазола их частота встречаемости составила 14,4%, метронидазола — 16,2%. Однако, наибольшее количество устойчивых штаммов было обнаружено в стадии ремиссии к орнидазолу -36,9% (р<0,05).

В проведенных нами исследованиях была определена корреляция степени устойчивости к антипротозойным препаратам и вирулентности бластоцист. Результаты показали отсутствие корреляции чувствительности бластоцист и их вирулентных свойств (г = - 0,17). Более характерная зависимость изученных свойств от вирулентности наблюдалась для изолятов, проявивших умеренную устойчивость к антипротозойным препаратам (г = 0,62).

Следовательно, наличие резистентности к химиоирепаратам, как одно из проявлений вирулентности микроорганизмов, позволяет рассматривать бластоцист как потенциальный этиологический фактор патологических состояний.

В естественных условиях представители микрофлоры кишечника обитают в виде сообществ. Сочлены микробиоценоза занимают в биотоие определенные экологические ниши и между ними существуют разнообразные экологические связи (Уиттекер, 1980; Сытник, 1989). В группе больных псориазом, у которых были обнаружены бластоцисты, выявлено достоверное снижение контагиозности бифидобактерий (0,45±0,01, в контроле — 0,75±0,08), лактобакгерий (0,7±0,1, в контроле — 0,9±0,1), кишечных палочек (0,31±0,3, в контроле — 0,95±0,4) и бактероидов (0,87±0,04, в контроле — 0,075±0,12). Наряду с этим, выявили достоверное повышение степени контагиозности представителей условно-патогенной флоры. Так, для энтерококков (0,64±0,7, в контроле — 0,48±0,1), клебсиелл (0,81±0,1, в контроле — 0,53±0,1), протеев (0,98±0,1, в контроле — 0,45±0,1), стафилококков (0,55±0,03, в контроле — 0,39±0,17), дрожжеподобных грибов рода Candida (0,40±0,2, в контроле — 0,43±0,25).

Уменьшение контагиозности представителей нормальной микрофлоры в поверхностном слое кишечника приводит к освобождению экологических ниш, успешно занимаемых транзиторной флорой. Подобное соотношение выявляет диспропорцию участия в горизонтальной структуре микропейзажа основных симбионтов и представителей транзиторной флоры.

На основании встречаемости видов определяли степень доминирования в сообществе (Сытник, 1989). Анализ доминантного состава показал, что доминирующими видами в кишечной микрофлоре больных псориазом являются бифидобактерии (С=80%), лактобактерии (С=90%), эшерихии.

С=92%), бактероиды (С=100%). Кроме того, абсолютно доминирующими видами в группе больных псориазом становятся энтерококки (С=96%) по сравнению с группой здоровых людей, где таковыми являются бифидобактерии, лактобактерий, эшерихии, бактероиды. Добавочными видами являются клебсиеллы, стафилококки и нротеи, транзиторными — дрожжеподобные грибы рода Candida и клостридии.

Показатель видового разнообразия свидетельствовал о достоверном снижении богатства видов в группе больных ггсориазом (3,1), в отличие от группы здоровых лиц (4,1).

Оггределение экологических характеристик микробиоценоза кишечника больных псориазом, инвазированных бластоцистами, ггроводили в зависимости о г продолжительности заболевания и ггериода заболевания. Полученные результаты показали, что флористическая значимость видов, входящих в состав микробиоценоза кишечника обследованных групп, закономерно снижается гго мере возрастания стажа заболевания. Отмечены изменения показателя видового разнообразия при различном стаже заболевания. Так, у больных со стажем до 1 года он составил 3,13, ггри стаже от 1 до 5 лет — 3,6, ггри ггродолжительности от 5 до 10 — 3,5, а при продолжительности заболевания более 10 лет — 2,85. Аналогичная ситуация наблюдалась с индексом флористической значимости.

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии ггрямой пропорциональной зависимости показателя видового разнообразия от ггродолжительности заболевания. Неравномерность изменения видового разнообразия является, возможно, следствием влияния адаптационно-компенсаторных механизмов макроорганизма в первые ггять лет от начала заболевания.

В период ремиссии псориаза следует отметить некоторое повышение контагиозности представителей облигатной микрофлоры и снижение контагиозности представителей условно-патогенной группы. Отмечено возрастание флористической значимости (Наткевечайте-Иванаускене, 1985) сочленов микробиоценоза и показателя видового разнообразия до 3,2.

Таким образом, в период затихания клинических проявлений псориаза наблюдается повышение контагиозности и флористической значимости представителей облигатной нормофлоры кишечника и одновременное снижение данных показателей для условно-патогенных микроорганизмов. Наряду с этим, отмечается некоторое увеличение показателя видового разнообразия по сравнению с периодом обострения псориаза.