Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Исследование способности зрелых ооцитов кролика репрограммировать ядра эмбриональных и дифференцированных клеток

Диссертация: Исследование способности зрелых ооцитов кролика репрограммировать ядра эмбриональных и дифференцированных клеток
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

С увеличением возраста происходит увеличение способности ооцитов к партеногенетической активации с 42.4% (16.5−18.5 ч после инъекции ХГ) до 84.3% (19.5−22 ч после инъекции ХГ, Р<0.05). Способность партеногенов к развитию до стадии морулы-бластоцисты не зависела от возраста ооцитов (Р>0.05). Вместе с тем с увеличением возраста ооцитов кролика происходит увеличение способности реконструированных… Читать ещё >

Содержание

  • 1. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Трансплантация ядер — основные достижения последних лет
    • 1. 2. Способность ооплазмы репрограммировать трансплантированное ядро
    • 1. 3. Фактор, стимулирующий созревание (MPF), и его роль в обеспечении репрограммиро-вания ядра
    • 1. 4. Синхронизация клеточных циклов донора и реципиента ядра

    2. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Объекты исследования. Выделение яйцеклеток и эмбрионов. Подготовка ооцитов к микрохирургической операции. Подготовка эмбрионов к микрохирургической операции.

    Синхронизация бластомеров на Gi-стадии клеточного цикла. Культивирование эмбрионов. Получение и культивирование фибробластов кролика.

    Синхронизация фибробластов на Go/Gl-стадии клеточного цикла. Микрохирургические операции.

    Электрослияние. Оценка развития клонированных эмбрионов in vitro.

    Замораживание эмбрионов и фибробластов.

    Трансплантация эмбрионов кролика.

    Статистическая обработка.

    3. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

    3.1. Исследование эффективности энуклеации ооцитов и способности к развитию неэнуклеированных ооцитов с трансплантированными ядрами фетальных фибробластов.

    3.2. Исследование факторов, влияющих на эффективность электрослияния оопластов с клетками — донорами ядер

    3.3. Исследование влияния возраста ооцита-реципиента на способность к активации и эффективность развития реконструированных эмбрионов.

    3.4. Исследование влияния синхронизации клеточных циклов донорского ядра и ооплазмы на эффективность развития клонированных эмбрионов.

    3.4.1. Бластомеры морулы — доноры ядер

    3.4.2. Фетальные фибробласты- доноры ядер.

    3.4.2.1. Характеристика культуры фетальных фибробластов.

    3.4.2.2. Исследование синхронизации фетальных фибробластов на ОоЛ2г1 -стадии клеточного цикла в «истощенной» среде.

    3.4.2.3. Исследование влияния состояния клеточного покоя (ОоЮ!-стадия клеточного цикла) фетальных фибробластов на эффективность развития клонированных эмбрионов.

    3.5. Влияние возраста клеток — доноров ядер на эффективность развития клонированных эмбрионов.

    3.5.1. Влияние возраста донора клеток для трансплантации ядер на эффективность развития клонированных эмбрионов.

    3.5.2. Эффективность репрограммирования ядер фетальных фибробластов в зависимости от числа пассажей клеточной культуры.

    3.6. Оценка полноценности репрограммирования ядер бластомеров морулы и фетальных фибробластов в ооплазме стареющих ооцитов.

    3.6.1. Бластомеры морулы — доноры ядер.

    3.6.2. Фетальные фибробласты — доноры ядер.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    ВЫВОДЫ

    ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Исследование способности зрелых ооцитов кролика репрограммировать ядра эмбриональных и дифференцированных клеток (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Трансплантация ядер, как часть экспериментальной микрохирургии клеток, используется при исследовании основополагающих вопросов биологии развития. Среди них — репрограммирование генома, сохранение тотипотентности ядер, геномный импринтинг и др. Разработка условий для полноценного репрограммирования ядер поздней морулы в цитоплазме зрелых ооцитов позволяет решить такую насущную задачу как увеличение числа эмбрионов от элитных животных. Число таких эмбрионов можно еще увеличить методом реклонирования (Stice, 1989). В настоящее время в мире получено от 1000 до 2000 животных с использованием метода трансплантации ядер эмбриональных клеток (Wolf et al., 1998).

Использование клеточных культур для получения клеток-доноров ядер позволяет решить два основных вопроса — получение большого числа клеток с одинаковым генотипом и трансфецированных клеток с известным уровнем экспрессии. Разработка метода культивирования клеток внутренней клеточной массы бластоцисты (Doetschman et al., 1988; Notarianni et al., 1991; Saito et al., 1992; Graves, Moreadith, 1993) была первым шагом в использовании клеточных культур для получения клонированных животных. Доказательством тотипотентности ядер этих клеток послужило создание химерных животных, содержащих клетки этого генотипа в гонадах (Hooper, 1992; Nagy et al., 1993; Wang et al., 1997; Cibelli et al., 1998 б), a затем’и клонированных животных методом трансплантации ядер (Sims M. et al., 1994; Campbell et al., 1996; Wilmut et al., 1997; Wells et al., 1997).

Однако практическое использование трансфецированных клеток стало возможно после того, как была доказана возможность полноценного репрограммирования ядер фетальных фибробластов. Использование культуры трансгенных фетальных фибробластов положило начало новому методу получения трансгенных животных (Schnieke et al., 1997; Robl, 1998; Cibelli et al., 1998), который по оценке специалистов (Schnieke et al., 1997) требует вдвое меньше животных для получения одного трансгенного животного по сравнению с рутинным методом инъекции генной конструкции в пронуклеус зиготы.

Доказательство тотипотентности ядер некоторых дифференцированных клеток взрослого организма (Wilmut et al., 1997; Wakayama et al., 1998) позволило вплотную подойти к решению вопроса спасения вымирающих видов животных и получения клонов сельскохозяйственных животных с высокой продуктивностью. Так в 1999 году Велс с коллегами (Wells et al., 1999) сообщил, что им удалось получить клон из 4 телят от последней коровы с острова Эндерби. В том же году эта группа ученых получили клон из 10 идентичных телят, использовав для трансплантации ядер клетки гранулезы.

В 1988 году Стайс и Робл (Stice, Robl, 1988) показали, что цитоплазма зрелого ооцита кролика способна обеспечивать ремоделирование и полное репрограммирование ядер бластомеров ранних эмбрионов кроликов. Получен клон из шести крольчат. Мы предположили, что по аналогии с другими животными ооциты кролика должны репрограммировать и ядра более поздних эмбриональных стадии, и ядра дифференцированных клеток. Оценке способности зрелых ооцитов кролика репрограммировать ядра бластомеров морулы, фетальных фибробластов и фибробластов взрослого животного и посвящена настоящая работа.

Цель исследования.

Изучение способности зрелой энуклеированной яйцеклетки репрограммировать ядерный материал недифференцированных клеток (бластомеров морулы) и дифференцированных клеток (фетальных фибробластов, фибробластов молодого и взрослого животного), изучение полноценности репрограммирования ядерного материала.

Основные задачи исследования.

1. Исследование способности ядер бластомеров морулы и фибробластов различного происхождения к репрограммированию в цитоплазме зрелого энуклеированного ооцита и оценка полноценности репрограммирования ядерного материала.

2. Изучение факторов, влияющих на способность оопластов к слиянию с клетками — донорами ядер.

3. Исследование зависимости активации ооцитов и реконструированных эмбрионов от возраста ооцита-реципиента.

4. Исследование влияния синхронизации клеточных циклов ооплазмы и донорского ядра на эффективность развития клонированных эмбрионов.

5. Исследование влияния возраста организма — донора клеток для трансплантации ядер на эффективность развития клонированных эмбрионов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Ооплазма стареющего ооцита кролика обеспечивает полноценное репрограммирование ядерного материала недифференцированных бластомеров морулы и частичное репрограммирование дифференцированных клеток — фетальных фибробластов.

2. Способность ооцитов кролика к слиянию с клетками-донорами ядер зависит от возраста ооцита, от происхождения клеток-доноров ядер, от времени культивирования клеток — доноров ядер в среде, индуцирующей выход клеток в состояние покоя.

3. С увеличением возраста ооцитов кролика повышается способность ооцитов к партеногенетической активации и реконструированных эмбрионов к дроблению и развитию до стадии морулы и бластоцисты.

4. Синхронизация клеточного цикла бластомеров морулы на 01-стадии и фетальных фибробластов на ОоЛ2г1- стадии не влияет на способность реконструированных эмбрионов к дроблению и достоверно увеличивает способность реконструированных эмбрионов к развитию до предымплантационных стадий по сравнению с реконструированными эмбрионами с не синхронизированными ядрами.

5. Существует отрицательная корреляция между возрастом донора клеток для трансплантации ядер и способностью реконструированных эмбрионов к предымплантационному развитию.

6. Старение клеток-доноров ядер в культуре, по крайней мере, до 10 пассажа включительно не влияет на способность реконструированных эмбрионов к развитию до предымплантационных стадий.

7. Тетраплоидные эмбрионы, получаемые при трансплантации ядер фетальных фибробластов в стареющие ооциты кролика с последующим культивированием в среде с цитохалазином Б, способны эффективно дробиться, однако эмбриональное развитие останавливается на 6−8 клеточной стадии, то есть в момент включения эмбрионального генома.

Научная новизна.

Показана способность ядер морулы, фетальных фибробластов и фибробластов животных разного возраста к репрограммированию в цитоплазме зрелых энуклеированных ооцитов и обеспечению развития клонированных эмбрионов вплоть до стадии бластоцисты. Обнаружена отрицательная корреляция между возрастом организма — донора клеток для трансплантации ядер и эффективностью развития клонированных эмбрионов до стадии бластоцисты. Подтверждена тотипотентность ядер морулы, их способность обеспечивать развитие клонированных эмбрионов вплоть до рождения. Показана способность ядер фетальных фибробластов обеспечивать развитие клонированных эмбрионов вплоть до имплантации. Показано влияние синхронизации донорских ядер на и 01 стадиях клеточного цикла на эффективность развития клонированных эмбрионов. Исследовано состояние ядерного материала стареющих ооцитов. Показано увеличение способности к активации и обеспечению развития реконструированных эмбрионов до предымплантационных стадий в процессе старения ооцита. Обнаружено снижение эффективности слияния клеток-доноров ядер с ооцитами с увеличением возраста ооцитов. Показано влияние длительности сывороточного голодания фетальных фибробластов на эффективность их слияния с оопластами.

Практическая значимость работы.

Разработаны методические приемы энуклеации зрелых ооцитов и трансплантации клеток доноров ядер под блестящую оболочку яйцеклетки.

Определены наиболее оптимальные временные параметры для активации клонированных эмбрионов кролика, реконструированных с использованием стареющих ооцитов, а именно 21−24 часа после инъекции ХГ.

Разработан способ получения реконструированных эмбрионов с ядрами бластомеров морулы, синхронизированными на 01-стадии клеточного цикла, позволяющий в 2 раза повысить эффективность развития клонированных эмбрионов кролика до стадии бластоцисты. Ядра бластомеров синхронизируют на стадии метафазы деления дробления с помощью колцемида. Трансплантация бластомера в перивителлиновое пространство энуклеированного ооцита и слияние полученной конструкции кариопласт-оопласт производятся в течение 30−45 минут после деления клетки.

Предложена «истощенная» среда для быстрого вывода клеток в культуре в состояние клеточного покоя и определены временные параметры наиболее эффективного ее использования. «Истощенная» среда основана на среде ДМЕМ, с добавлением 0,5% фетальной сыворотки коров. Содержание аминокислот, витаминов и глюкозы в среде уменьшено в четыре раза добавлением среды М-16. «Истощенная» среда обеспечивает быструю синхронизацию фибробластов на Go/Gl-стадии клеточного цикла уже через 2 суток культивирования. Эффективности развития клонированных эмбрионов до стадии бластоцисты при трансплантации ядер синхронизированных фибробластов увеличивается в 3 раза по сравнению с развитием эмбрионов с ядрами циклирующих фибробластов.

Автор выражает благодарность за помощь в обсуждении результатов работы и ценные критические замечания руководителям работы М. И. Прокофьеву и В. В. Галатуа также — В. Я. Черныху, М. Н. Мезиной за помощь в организации экспериментовМ.В. Пинюгиной, A.B. Захарову, A.B. Турину, Н. И. Шепелю, A.A. Кудряшову (ИТЭБ РАН) за помощь в подготовке и проведении экспериментовВ.И. Захарченко за помощь в практическом освоении методик и при обсуждении результатов работы.

выводы.

1. Ооплазма стареющего ооцита кролика обеспечивает полноценное репрограммирование ядерного материала недифференцированных бластомеров морулы и частичное репрограммирование дифференцированных клеток — фетальных фибробластов. Способность ядер бластомеров морулы К полноценному репрограммированию в ооплазме стареющих ооцитов кролика подтверждена получением полноценного потомства — двух крольчат. 2529,4% реконструированных эмбрионов с ядрами фетальных фибробластов были способны к имплантации при трансплантации синхронизированным самкам-реципиентам, но не способны к дальнейшему пренатальному развитию, что, по-видимому, является следствием неполного репрограммирования ядер фетальных фибробластов.

2. Эффективность слияния оопластов была значительно выше с бластомерами морулы по сравнению со слиянием с фетальными фибробластами (89.9% против 63,0%, Р<0.001).

3. Слияние фетальных фибробластов с молодыми ооцитами (12−15 ч после инъекции ХГ) происходит значительно эффективнее, чем со стареющими (21−24 ч после инъекции ХГ) (98,4% против 63.0%, соответственно. Р<0,001).

4. Сывороточное голодание фетальных фибробластов в среде ДМЕМ +0,5% ФСК до 7−14 суток резко снижает способность клеток к слиянию с оопластами с 98,9% до 67,2% по сравнению с фибробластами, культивировавщимися в той же среде в течение 0−4 суток (Р<0,01). Увеличение срока «голодания» в «истощенной» среде до 3−4 суток сопровождалось достоверным снижением способности фетальных фибробластов к слиянию с оопластами с 64,5% до 37,4% (Р<0,01) по сравнению с фибробластами, культивировавшимися в полной среде и в «истощенной» среде в течение 1−2 суток.

5. С увеличением возраста происходит увеличение способности ооцитов к партеногенетической активации с 42.4% (16.5−18.5 ч после инъекции ХГ) до 84.3% (19.5−22 ч после инъекции ХГ, Р<0.05). Способность партеногенов к развитию до стадии морулы-бластоцисты не зависела от возраста ооцитов (Р>0.05). Вместе с тем с увеличением возраста ооцитов кролика происходит увеличение способности реконструированных эмбрионов к дроблению и развитию до стадии морулы и бластоцисты. При увеличении возраста ооцитов с 17−21 ч до 21−24 ч после инъекции ХГ числе реконструированных эмбрионов, способных к дроблению, возрастало в 1.75 раз (с 25.9% до 45.3%, Р<0.05), а способность дробящихся эмбрионов к развитию до стадии морулы-бластоцисты и бластоцисты увеличивалась, соответственно, в 15.9 раза (с 1.9% до 30.2%, Р<0.001) и 8.9 раза (с 1.9% до 17.0%, Р<0.01).

6. Синхронизация клеточного цикла бластомеров морулы на 01-стадии и фетальных фибробластов на ОоД]г1- стадии не влияет на способность реконструированных эмбрионов к дроблению, но достоверно увеличивает способность реконструированных эмбрионов к развитию до предымплантационных стадий по сравнению с реконструированными эмбрионами с несинхронизированными ядрами.

Эффективность дробления реконструированных эмбрионов с ядрами бластомеров морулы синхронизированных и несинхронизированных на 01-стадии клеточного цикла достигала, соответственно, 67,2% и 56,1% (Р>0,05), а эффективность дробления реконструированных эмбрионов с ядрами фетальных фибробластов синхронизированных и несинхронизированных на во/01-стадии клеточного цикла достигала, соответственно, 86% и 92,1% (Р>0,05).

Стадии морулы-бластоцисты и бластоцисты достигали соответственно 67,2% и 58.5% реконструированных эмбрионов с ядрами бластомеров морулы на в1-стадии клеточного цикла по сравнению с 36,7% и 19,2% реконструированных эмбрионов с 8-фазными ядрами (Р<0.025). Реконструированные эмбрионы с ядрами фетальных фибробластов на во/ОЬ стадии клеточного цикла развивались до стадии морулы-бластоцисты и бластоцисты, соответственно, в 67,6% и 51,4% случаев по сравнению с 22,9% и 17,1% реконструированных эмбрионов с ядрами циклирующих фетальных фибробластов (Р<0.05).

7. Обнаружена отрицательная корреляция между возрастом донора клеток для трансплантации ядер и способностью реконструированных эмбрионов к предымплантационному развитию. Коэффициент корреляции для морулы-бластоцисты г = -0,8261 и для бластоцисты г = -0.7139.

Стадии морулы-бластоцисты достигали 67,6% реконструированных эмбрионов с ядрами фетальных фибробластов по сравнению с 38,9% и 21,4% реконструированных эмбрионов с ядрами фибробластов животного в возрасте 4 месяцев и 5 лет (Р<0,001), а стадии бластоцисты, соответственно, 51,4% по сравнению с 16,7% и 7,1% (Р<0,025).

8. Старение клеток-доноров ядер в культуре, по крайней мере, до 10 пассажа включительно не влияет на способность реконструированных эмбрионов к развитию до предымплантационных стадий.

9. Тетраплоидные эмбрионы, получаемые при трансплантации ядер фетальных фибробластов в стареющие ооциты кролика с последующим культивированием в среде с цитохалазином Б, способны эффективно дробиться (90%). Однако эмбриональное развитие останавливается на 6−8 клеточной стадии, то есть в момент включения эмбрионального генома.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Предложена среда для быстрого вывода клеток в состояние покоя (Оо/С1): 1 часть ДМЕМ + 3 части М-16 с добавлением 0,5% фетальной сыворотки коровы.

2. Для повышения эффективности слияния клеток доноров ядер с оопластами и получения максимального количества реконструированных эмбрионов предлагается использовать клетки-доноры ядер через 4−5 суток культивирования в среде ДМЕМ с низким содержанием сыворотки или через 2 суток культивирования в «истощенной» среде.

3. Для получения реконструированных эмбрионов с ядрами бластомеров морулы наиболее эффективно использование бластомеров, синхронизированных на в 1-стадии клеточного цикла, а с ядрами фибробластов клеток, синхронизированных на ОоАл1 -стадии клеточного цикла.

Показать весь текст

Список литературы

  1. С.Г. Пересадка ядер в яйцеклетки млекопитающих//Онтогенез. Т. 17. N3. С. 229−233.
  2. А.П. Раннее развитие млекопитающих//М. Наука. 1988. 228 с.
  3. О.И. Лекции о клеточном цикле// Москва. КМК Scientific Press. 1997. С. 144.
  4. О.И., Терских В. В., Полуновский В. А. Покоящиеся клетки.// «Наука». М. 1983.
  5. В.И., Лакиза О. В., Хорошилова Т. В., Перетокина И. С., Прокофьев М. И. Трансплантация эмбрионов кроликов// Онтогенеза. 1989. Т. 20. N. 5. С. 553−557.
  6. В.И., Лагутина И. С., Захаров А. В., Прокофьев М. И. Исследование влияния некоторых факторов на развитие клонированных эмбрионов кролика// Доклады РАСХН. 1993. N 5. С. 26−29.
  7. В.И., Лагутина И. С., Прокофьев М. И. Эмбрионы кролика с трансплантированными ядрами//Аграрная наука. 1994 а. N 1. С. 35.
  8. В.И., Лагутина И. С., Прокофьев М. И., Эрнст Л. К. Эффективность клонирования эмбрионов кролика и крупного рогатого скота в зависимости от постовуляторного старения ооцитов-реципиентов// С-х биология. 1994 б. N 6.
  9. .В. Клонирование позвоночных: успехи и проблемы// Генетика. 1997. Т. 33. N 1.С. 1605−1620.
  10. Г. Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980.
  11. О.В. Автореферат дис. канд. биол. наук. 1991
  12. М.И., Захарченко В. И., Сураева Н. М., Лагутина И. С. Методы получения биоинженерных сельскохозяйственных животных// С-х биотехнологи. 1994. N4. С. 12−25.
  13. X. Эксперименты с преимплантационными эмбрионами мыши// В кн. Биология развития млекопитающих. Методы. М. «Мир». 1990. С. 27−64.
  14. H.H. Новые данные о пересадках ядер у млекопитающих// Онтогенез. 1987. Т. 18. N4. С. 341−344.
  15. Adenot P.G., Szollosi M.S., Chesne P., Chastant S., Renard J.P. In vivo ageing of oocyte influences the behaviour of nuclei transferred to enucleated rabbit oocytes// Mol Reprod Devel. 1997. V. 46. P. 325−336.
  16. Adeol Y. Early transcription in different animal species: implication fo~ transition from maternal to zygotic control in development// Roux’s Arch. Dev. Biol. 1994. V. 20. P. 3−10.
  17. Betts D.H., Bordignon V., Smith L., Sempel E., King W.A. Telomerase activity in bovine blastocysts, fetal fibroblast and stem cell-like cell lines cultured under various conditions// Theriogenology. 1999. V. 51. N1. P. 181.
  18. Blow J.J., Laskey R.A. A role for the nuclear envelope in controlling DNA replication within the cell cycle// Nature. 1988. V. 332. P. 546−548.
  19. Boquest A.C., Day B.N., Prather R.S. Flow Cytometric Cell Cycle Analysis of Cultured Porcine Fetal Fibroblast Cells// Biol Reprod. 1999. V. 60. N 4. P. 10 131 019.
  20. Campbell K.H.S. Nuclear equivalence, nuclear transfer, and the cell cycle// Cloning. 1999. V. 1. N 1. P. 3−15.
  21. Campbell K.H.S., Loi P., Cappai P., Wilmut I. Improved development to blastocyst of ovine nuclear transfer embryos reconstructed during the presumptive S-phase of enucleated activated oocyte// Biol Reprod. 1994. V. 50. P. 1385−1393.
  22. Campbell K.H., Me Whir J., Ritchie W.A., Wilmut I. Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line// Nature. 1996. V. 380. N 6569. P. 64−66.
  23. Chastant S., Christians E., Campion E., Renard J.P. Quantitative control of gene expression by nucleoplasms interactions in early mouse embryos: consequence for reprogrammation by nuclear transfer// Mol Reprod Devel. 1996. V. 44. P. 423−432.
  24. Cheong H-T., Takanashi Y., Kanagawa H. Birth of mice after transplantation of early cell-cycle stage nuclei into enucleated oocytes// Biol Reprod. 1993. V. 48. P.958−963.
  25. Cheong H.T., Takahashi Y., Kanagawa H. Relationship between nuclear remodeling and subsequent development of mouse embryonic nuclei transferred to enucleated oocyte// Mol Reprod Dev. 1994. V. 37. P. 138−145.
  26. Christians E., Rao V.H., Renard J.P. Sequential acquisition of transcriptional control during early embryonic development in the rabbit// Dev Biol. 1994. V. 164. P. 160−172.
  27. Cibelli J.B., Stice S.L., Golueke P.J., Kane J.J., Jeny J., Blackwell C., Ponce de Leon F.A., Robl J.M. Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal fibroblasts// Science. 1998 a. V. 280. N 5367. P. 1256−1258.
  28. Cibelli J.B., Stice S.L., Golueke P.J., Kane J.J., Jerry J., Blackwell C., de Leon F.A., Robl J.M. Transgenic bovine chimeric offspring produced from somatic cell-derived stem-like cells//Nat Biotechnol. 1998 6. V. 16. N 7. P. 642−646.
  29. Collas P., Barnes F.L. Nuclear transplantation by microinjection of inner cell mass and granulosa cell nuclei// Mol Reprod Dev. 1994. V. 38. N 3. P. 264−267.
  30. Collas P., Poccia D. Remodeling the sperm nucleus into a male pronucleus at fertilization// Theriogenol. 1998. V. 49. N 1. P. 67−81.
  31. Collas P., Robl J.M. Factors affecting the efficiency of nuclear transplantation in the rabbit embryo// Biol Reprod. 1990. V. 43. P. 877−884.
  32. Collas P., Robl J.M. Development of rabbit nuclear transplant embryos from morula and blastocyst stage donor nuclei// Theriogenology. 1991 a. V. 35. N 1. P. 190.
  33. Collas P., Robl J.M. Relationship between nuclear remodeling and development in nuclear transplant rabbit embryos// Biol Reprod. 1991 b. V. 45. P. 455−465.
  34. Collas P., Balise J.J., Robl J.M. Influence of cell cycle stage of the donor nucleus on the development of nuclear transplant rabbit embryos// Biol. Reprod. 1992 a. V. 46. P. 492−500.
  35. Collas P., Pinto-Correia C, Ponce De Leon F.A., Robl J.M. Effect of donor cell cycle stage on chromatin and spindle morphology in nuclear transplant rabbit embryos// Biol. Reprod. 1992 6. V. 46. P. 501 -511.
  36. Collas P., Sullivan E.J., Barnes F.L. Histone HI kinase activity in bovine oocytes following calcium stimulation// Mol Reprod Dev. 1993. V. 34. P. 224−231.
  37. Collas P., Chang T., Long C., Robl J.M. Inactivation of histone HI kinase by Ca2+ in rabbit oocytes// Mol Reprod Dev. 1995. V. 40. P. 253−258.
  38. Comings D.E., Okada T.A. Electron microscopy of human fibroblast in tissue culture during logarithmic and confluent stages of growth// Exp. Cell Res. 197Q. N 61. P. 295−301.
  39. Crissman H.A., Steinkamp J.A. Rapid, one step staining procedures for analysis of cellular DNA and protein by single and dual laser flow cytometry// Cytometry. 1982. V. 3. P. 84−90.
  40. Crozet N. Ultrastructural aspects of in vivo fertilization in the cow// Gamete Res. 1984. V. 10. P. 241−251.
  41. Delhaise F., Ectors F.J., de Roover R., Ectors F., Dessy F. Nuclear transplantation using bovine primordial germ cells from male fetuses// Reprod Fertil Dev. 1995. V. 7. N 5. P. 1217−1219.
  42. DiBerardino MA, Hoffner NJ, Etkin LD. Activation of dormant genes in specialised cells// Science. 1984. V. 224. P. 946−952.
  43. Dinnyes A., Liu L., Dai Y., Xu J., Zhou P., Van de Velde A., Yang X. Development of cloned embryos from adult rabbit fibroblast cells// Theriogenol. 1999. V.51.N1.P. 199.
  44. Doetschman T., Williams P., Maeda N. Establishment of hamster blastocyst-derived embryonic stem (ES) cells// Dev Biol. 1988. V. 127. P. 224−227.
  45. Du F., Jiang S., Yang X. Beneficial effect activation prior to and during nuclear transfer in cattle using in vitro matured oocytes 24 h of age// Reprod Nutr Dev. 1995. V. 35. P. 703−712.
  46. Du Z.T., Verma P.J., Crocker L.A., Faast R., Lyons I.G., Nottle M.B. Development of nuclear transfer embryos using porcine fetal fibroblasts// Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 201.
  47. Edwards J.L., Powell A.M., Talbot N.C., Garrett W.M., Pursel V.G. Development of reconstructed embryos activated immediately or 4 hours after assessment of fusion with fetal fibroblasts//Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 202.
  48. First N.L., Sims M.M., Park S.P., Kent-First M.J. Systems for production of calves from cultured bovine embryonic cells// Reprod Fertil Dev. 1994. V. 6. N 5. P. 553−562.
  49. Fraser L.R. Rate of fertilization in vitro and subsequent nuclear development as a function of the postovulatory age of the mouse egg// J.Reprod. Dev. 1979. V. 55. P. 153−160.
  50. Fulka Jr.J., Jung T., Moor R.M. The fall of biological Maturation Promoting Factor (MPF) and histone HI kinase activity during anaphase to telophase in mouse oocytes//Molec. Reprod. Dev. 1992. V. 32. P. 378−382.
  51. Fulka Jr, J., Ouhibi N., Fulka J., Kanka J., Moor R.M. Chromosome condensation activity (CCA) in bisected C57BL/6JxCBA mouse oocytes// Reprod FertDev. 1995. V. 7. P. 1123−1127.
  52. Fulka J.Jr., First N.L. Moor R.M. Nuclear transplantation in mammals: remodeling of transplanted nuclei under the influence of maturation promoting factor// BioAssays. 1996. V. 18. N 10. P. 835−840.
  53. Galat V.V., Lagutina I.S., Mesina M.N., Chernich V.J., Prokofiev M.I. Developmental potential of rabbit nuclear transfer embryos derived from donor fetal fibroblasts//Theriogenology. 1999. V. 51. N 1. P. 203.
  54. Gasser S., Laemnli U.K. Cohabitation of scaffold binding regions with upstream/enhancer elements of three developmentally regulated genes of D. melanogaster// Cell. 1986. V. 46. P. 521−530.
  55. Glinos A.D., Werrlein R.J. Density dependent regulation of growths in suspension cultures of L-929 cells// J. Cell. Physiol. 1972. N 79. P. 79−90.
  56. Graves K.H., Moreadith R.W. Derivation and characterisation of putative pluripotential embryonic stem cells from preimplantation rabbit embryos// Mol Reprod Dev. 1993. V. 36. P. 424−433.
  57. Gulyas B.J. The rabbit zygote: Formation of annulated lamellae// J. Ultrastruct Res. 1981 a. V. 35. P. 112−126.
  58. Gulyas B.J. Nuclear extrusion in rabbit embryos// Z Zellforsch Mikrosk Anat. 1981 6. V. 120. P. 151−159.
  59. Gurdon J.B. The control of gene expression in animal development// In Clarendon (ed). Oxford: Oxford University Press. 1974.
  60. Gurdon JB, Laskey RA, Reeves OR. The development capacity of nuclei transplanted from keratinized skin cells of adult frogs// J. Embryol. Exp. Morphol. 1975. V. 34. P. 93−112.
  61. Gurdon J.B., Brennan S., Fairman S., Mohun TJ. Transcription of muscle-specific actin genes in early Xenopus development: nuclear transplantation and cell dissociation// Cell. 1984. V.38. P. 691−700.
  62. Heyman Y., Renard J.P. Cloning of domestic species// Anim. Reprod Sci. 1996. V. 42. P. 427−436.
  63. Heyman Y., Chesne P., Renard J.P. Reprogrammation complete de noyaux enbryonnaires congeles apres transfert nucleaire chez le lapin// C.R. Acad Sci. Paris. 1990. Ser.HI. V. 311. P. 321−326.
  64. Heyman Y., Vignon X., Chesne P., Lebourhis D., Marchai J., Renard J.P. Cloning in cattle: from embryo splitting to somatic nuclear transfer// 14-e Reunion AETE. Venise. 11−12 Septembre 1998. P. 81−89.
  65. Hill J.R., Winger Q.A., Jones K.L., Thompson J.A., Burghardt R.C., Westhusin M.E. Serum starvation of bovine fetal fibroblasts prior to nuclear transfer increases in vitro development rates// Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 204.
  66. Hooper M.L. Embryonal stem cells: introducing planned changes into the germ line// H.J. Evans (ed). Harwood Academic Publishers. Switzerland. 1992.
  67. Horak V., Flechon J.E. Immunocytochemical characterisation of rabbit and mouse embryonic fibroblasts// Reprod Nutr Dev. 1998. V. 38. N 6. P. 683−695.
  68. Howlett S.K., Bolton V.N. Sequence and regulation of morphological and molecular events during the first cell cycle of mouse embryogenesis// J Embryol Exp Morphol. 1985. V.87. P. 175−206.
  69. Hyttel P., Prochazka R., Smith S., Kanka J., Greve T. RNA synthesis in porcine blastomere nuclei introduced into in vitro maturated ooplasm// Acta Vet Scand. 1993. V. 34. P. 159−167.
  70. Itoh T., Aoyagi Y., Konishi M., Itakura H., Takedomi T., Yasawa S., Akane K. Nuclear transfer of bovine embryonic disc cells// Theriogenol. 1998. V. 49. N 1. P. 322.
  71. Jung T., Moor R.M., Fulka Jr.J. Kinetics of MPF and histone HI kinase activity differ during the G2- to M-phase transition in mouse oocytes// Int. J. Dev Biol. 1993. V. 37. P. 595−600.
  72. Kanka J., Fulka J Jr., Fulka J., Petr J. Nuclear transplantation in bovine embryo: Fine structure and autoradiographic studies// Mol Reprod Dev. 1991. V. 29. P. 110−116.
  73. Kanka J., Hozak P., Heyman Y., Chesne P., Degrolard J., Renard J.P., Flechon J.E. Transcriptional activity and nucleolar ultrastructure of embryonic rabbit nuclei after transplantation to enucleated oocytes// Mol Reprod Dev. 1996. V. 43. P. 135 144.
  74. Kato Y., Tsunoda Y. Germ cell nuclei of male fetal mice can support development of chimeras to midgestation following serial transplantation// Development. 1995. V. 121. P. 779−783.
  75. Kato Y., Tani T., Sotomaru Y., Kurokawa K., Kato J., Doguchi H., Yasue H., Tsunoda Y. Eight calves cloned from somatic cells of a single adult// Science. 1998. V. 282. P. 2095−2098.
  76. Keefer C.L., Stice S.L., Matthews D.L. Bovine inner cell mass cells as donor nuclei in the production of nuclear transfer embryos and calves// Biol. Reprod. 1994. V. 50. N4. P. 935−939.
  77. Kill I.R., Shall S. Senescent human diploid fibroblasts are able to support DNA synthesis and to express markers associated with proliferation// J. Cell Sci. 1990. V. 100. P. 869−876.
  78. King W.A., Shepherd D.L., Plante L., Lavoir M.C., Looney C.R., Barnes F.L. Nucleolar and mitochondrial morphology in bovine embryos reconstructed by nuclear transfer//Mol Reprod Dev. 1996. V. 44. N4. P. 499−506.
  79. Kono T., Kwon O.Y., Watanaba T., Nakahara T. Development of mouse enucleated oocytes receiving a nucleus from different stages of the second cell cycle// J Reprod Fert. 1992. V. 94. P. 481−487.
  80. Kono T., Sotomaru Y., Aono F., Takahasi T., Ogiwara I., Sekizawa F., Arai T., Nakahara T. Effect of ooplast activation on the development of oocytes following nucleus transfer in cattle//. Theriogenol. 1994. V. 41. P. 1463−1471.
  81. Kopecny V. High-resolution autoradiographic studies of comparative nucleologenesis and genome activation during early embryogenesis in pig, man and cattle// Reprod. Nutr. Dev. 1989. V. 29. P. 589−600.
  82. Kruth H.S., Avigan J., Gamble W., Vaughan M. Effect of cell density on binding and uptake of low density lipoprotein by human fibroblasts// J. Cell Biol. 1979. V. 83. N3. P. 588−594.
  83. Kubiak J.Z. Mouse oocytes gradually develop the capacity for activation during the metaphase II arrest// Dev Biol. 1989. V. 136. P. 537−545.
  84. Kubiak J.Z., Prather R.S., Maul G.G., Schatten G. Cytoplasmic modification of nuclear lamina during pronuclear-like transformation of mouse blastomere nuclei// Mech. Dev. 1991. V. 35. P. 103−111.
  85. Kubiak J.Z., Weber M., Geraud G., Maro B. Cell cycle modification during the transitions between meiotic M-phases in mouse oocytes// J Cell Sci. 1992. V. 102. P. 457−467.
  86. Kubiak J.Z., Weber M., de Pennart H., Winston N.J., Maro B. The metaphase II arrest in mouse oocytes is controlled through microtubuledependent destruction of cyclin B in the presence of CSF// EMBO J. 1993. V. 12. P. 3773−3778.
  87. Kues W.A., Anger M., Carnwath J.W., Motlik J., Niemann H., Peul D. Cell cycle synchronisation of porcine primary fibroblasts: effects of starvation and reversible cell cycle inhibitors//Theriogenol. 1999. V.51. N 1. P. 205.
  88. Lagutina I.S., Zakcharchenko V.I., Prokofiev M.I. Nuclear transfer in rabbits and factors affecting it efficiency//Theriogenology. 1999 a. V. 51. N 1. P. 207.
  89. Latham K.E., Garrels J.I., Solter D. Alterations in protein synthesis following transplantation of mouse 8-cell stage nuclei to enucleated 1 -cell embryos//Dev Biol. 1994. V. 163. P. 341−350.
  90. Lavoir M.C., Kelk D., Rumph N., Barnes F., Betteridge K.J., King W.A. Transcription and translation in bovine nuclear transfer embryos// Biol Reprod. 1997a. V. 57. N1.P. 204−213.
  91. Lavoir M.C., Rumph N., Moens A., King W.A., Plante Y., Johnson W.H., Ding J., Betteridge K.J. Development of bovine nuclear transfer embryos made with oogonia// Biol Reprod. 1997 6. V. 56. N 1. P. 194−199.
  92. Leibfried-Rutledge M.L., Northey D.L., Nuttleman P.R., First N.L. Processing of donated nucleus and timing of post-activation events differ between recipient oocytes 24 and 42 hr of age// Theriogenology. 1992. V. 37. P. 244.
  93. Lesimple M., Dournon C., Labrousse M., Houillon C. Production of fertile salamanders by transfer of germ cell nuclei into eggs// Development. 1987. V. 100. P. 471−477.
  94. Lewis I.M., Peura T.T., Lane M.W., Vajta G., Trounson A.O. Pregnancies and live birth achieved from vitrified multigenerational cattle nuclear transfer embryos//Theriogenol. 1998. V. 49. N 1. P. 323.
  95. Liu L., Dai Y., Moor R.M. Nuclear transfer in sheep embryos: The effect of cell-cycle co-ordination between nucleus and cytoplasm and the use of in vitro matured oocytes.//Mol Reprod Dev. 1997. V. 47. P. 255−264.
  96. Masul Y., Clarke H.J. Oocyte maturation// Int Rev Cytol. 1979. V. 57. P. 185−282.
  97. Matsui Y., Zsebo K., Hogan B. Derivation of pluripotential embryonic stem cells from murine primordial germ cells in culture// Cell. 1992. V. 70. P. 841−847.
  98. Mitalipov S.M., Morrey J.D., Reed W.A., White K.L. Development of nuclear transfer and parthenogenetic rabbit embryos activated with inositol 1,4,5-trisphosphate// Theriogenol. 1998. V. 49. N 1. P. 324.
  99. Modlinski J.A., Smorag Z. Preimplantation development of rabbit embryos after transfer of embryonic nuclei into different cytoplasmic environment// Mol Reprod Dev. 1991. V. 28. P. 361−372.
  100. Moens A., Chastant S., Chesne P., Flechon J.E., Betteridge K.J., Renard J.P. Differential ability of male and female rabbit fetal germ cell nuclei to be reprogrammed by nuclear transfer// Differentiation. 1996 a. V. 60. N 5. P. 339−345.
  101. Moens A., Chesne P., Delhaise F., Delval A., Ectors F.J., Dessy F., Renard J.P., Heyman Y. Assessment of nuclear totipotency of fetal bovine diploid germ cells by nuclear transfer// Theriogenology. 1996 6. V. 46. N 5. P. 871−880.
  102. Moses R.M., Masui Y. Enhancement of mouse egg activation by the kinase inhibitor, 6-dimethylaminopurine (6-DMAP)// J Exp Zool. 1994. V. 207. P. 211 218.
  103. Nagy A., Rossant J., Nagy R., Abramow-Newerly W., Roder J.C. Derivation of completely cell culture-derived mice from early passage embryonic cells// Proc Natl Acad Sci USA. 1993. V. 90. P. 8424−8428.
  104. Naito K., Daen F., Toyoda Y. Comparison of histone HI kinase activity during meiotic maturation between two types of porcine oocytes matured in different media in vitro// Biol Reprod. 1992. V. 47. P. 43−47.
  105. Notarianni E., Galli C., Laurie S., Moor R.M., Evans M.J. Derivation of pluripotent, embryonic cell lines from the pig and sheep. J Reprod Fertil. Suppl. 1991. V. 43. P. 255−260.
  106. Onodera M., Tsunoda Y. Parthenogenic activation of mouse and rabbit eggs by electric stimulation in vitro// Gamete Res. 1989. V.22. N 3. P. 277−283.
  107. Ouhibi N., Fulka J., Kanka J., Moor R.M. Nuclear transplantation of ectodermal cells in pig oocytes: ultrastructure and radiography// Mol Reprod Dev. 1996. V. 44. P. 533−539.
  108. Pasternak C.A. The cell surface in relation to the growth cycle.// J.Theor.Biol. 1976. N58. P. 365−382.
  109. Pagan R., Martin I., Llobera M., Vilaro S. Epithelial-mesenchymal transition of cultured rat neonatal hepatocytes is differentially regulated in response to epidermal growth factor and dimethyl sulfoxide// Hepatology. 1997. V. 25. N 3. P. 598−606.
  110. Pedera J., Coppo M. Ultrastructure of a two-cell human embryo// Anat Embryol. 1987. V. 177. P. 91−96.
  111. Peura T.T., Wild S.P., Trounson A.O. The effect of cytoplasmic volume on development of bovine nuclear transfer embryos derived from in vivo donor embryos// Theriogenol. 1997. V. 47. N 1. P. 235.
  112. Peura T.T., Lewis I.M., Trounson A.O. The effect of recipient oocyte volume on nuclear transfer in cattle// Mol Reprod Dev. 1998. V. 50. N 2. P. 185−191.
  113. Pinto-Corriea C., Collas P., Ponce de Leon F.A., Robl J.M. Chromatin and microtubule organization in the first cell cycle in rabbit parthenotes and nuclear transplant embryos// Mol Reprod Dev. 1993. V. 34. P. 33−42.
  114. Pinto-Correia C., Long C.R., Chang T., Robl J.M. Factors involved in nucleaj-reprogramming during early development in the rabbit// Mol Reprod Dev. 1995. V. 40. P. 292−304.
  115. Prather R.S., First N.L. Cloning embryos by nuclear transfer//J Reprod Fert. 1990. Suppl. V.41.P. 125−134.
  116. Prather R.S., Rickords L.F. Developmental regulation of an snRNP coreprotein epitope during pig embryogenesis and after nuclear transfer for cloning// Mol Reprod Dev. 1992. V. 33. P. 119−123.
  117. Prather R.S., Barnes F.L., Sims M.L. et al. Nuclear transplantation in bovine embryo: assessment of donor nuclei and recipient oocyte//Biol.Reprod. 1987. V. 37. P. 859−866.
  118. Prather R.S., Sims M.M., Maul G.G., First N.L., Schatten G. Nuclear lamin antigens are developmentally regulated during porcine and bovine embryogenesis// Biol Reprod. 1989. V. 41. P. 123−132.
  119. Prather R.S., Kubiak J.Z., Maul G.G., First N.L., Schatten G. The expression of nuclear lamin A and C epitopes is regulated by the developmental stage of the cytoplasm in mouse oocytes or embryos// J Exp Zool. 1991. V. 257. P. 110−114″.
  120. Pressice G.A., Yang X. Nuclear dynamics of parthenogenesis of bovine oocytes matured in vitro for 20 and 40 hours and activated with combined ethanol and cycloheximide treatment// Mol Reprod Dev. 1994. V. 37. P. 61−68.
  121. Qi Z., Zi-yi L., Zhong-hua L., Xing-shen S., Gui-xin H., Jing-he T. Nuclear transplantation by microinjection in rabbit// Theriogenol. 1997. V. 47. N 1. P. 239.
  122. Rathjen J, Lake J-A, Bettess MD et all Formation of a primitive ectoderm like cell population, EPL cells, from ES cells in response to biologically derived factors// J. Cell Science. 1999. V. 112. P. 601−612.
  123. Reuter R., Tessars G., Vohr H.V., Gleichmann E., Luhrmann R. Mercuric chlorid induces autoantibodies against U3 small nuclear ribonucleoprotein in susceptible mice// Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1989. V. 86. P. 237−241.
  124. Robl J.M. Cloning, genetic modification, and embryonic stem cells in cowII Proceedings. Genetically engineering and cloning animals: science, society&industry. June 21−23, 1998.
  125. Rossini M., Lin J.C., Baserga R. Effect of prolonged quiescence on nuclei and chromatin of WI-38 fibroblasts.// J.Theor.Biol. 1976. N 88. P. 1−12.
  126. Saito S., Strelchenko N.M., Niemann H. Bovine embryonic stem cell-like cell lines cultured over several passages// Roux’s Archives of Developmental Biology.1992, V. 201. P. 134−141.
  127. Schultz R.M. Regulation of zygotic gene activation in the mouse// Bio Essays.1993. V. 15. P. 531−538.
  128. Shin T.Y., Roh S., Kim S.K., Lee B.C., Hwang W.S. Successful nuclear transplantation of fetal fibroblast cells as donor nuclei in korean native cattle// Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 214.
  129. Sims M., First N.L. Production of calves by transfer of nuclei from cultured inner cell mass cells// Proc Natl Acad Sci USA. 1994. V. 91. N 13. P. 6143−6147.
  130. Smith L.C., Wilmut I. Influence of nuclear and cytoplasmic activity on-the development in vivo of sheep embryos after nuclear transplantation// Biol Reprod. 1989. V. 40. P. 1027−1035.
  131. Smith L.D. Transplantation of the nuclei of primordial germ cells into enucleated eggs of Rana pipiens// Proc Natl Acad Sci USA. 1965. V. 54. P. 101 107.
  132. Smith S.D., Soloy E., Kanka J., Holm P., Callesen H. Influence of recipient cytoplasm cell stage on transcription in bovine nucleus transfer embryos// Mo! Reprod Dev. 1996. V. 45. P. 444−450.
  133. Stewart C.L., Gadi I., Bhatt H. Stem cells from primordial germ cells can reenter the germ line// Dev Biol. 1994. V. 161. P. 626−628.
  134. Stice SL. Multiple generation bovine embryo cloning// in: GE Seidel Jr (ed) Proceedings Symposium on cloning mammals by transplantation. 1989.
  135. Stice S., Robl J.M. Nuclear reprogramming in nuclear transplant rabbit embryos//Biol. Reprod. 1988. V. 39. P. 657−664.
  136. Stice S., Keefer C.L., Matthews L. Bovine nuclear transfer embryos: oocyte activation prior to blastomere fusion// Mol Reprod Dev. 1994. V. 38. P. 61−68.
  137. Stice S.L., Strelchenko N.S., Keefer C.L., Matthews L. Pluripotent bovine embryonic cell lines direct embryonic development following nuclear transfer// Biol Reprod. 1996. V. 54. N 1. P. 100−110.
  138. Strelchenkp N.S., Mitalipova M., Stice S. Further characterisation of bovine pluripotent stem cells// Theriogenol. 1995. V. 43. P. 327.
  139. Strelchenko N., Betthauser J., Jurgella G., Forsberg E., Damiani P., Golueke P., Pace M.M., Bishop M.D. Use the somatic cells in cloning// Proceedings. Genetically engineering and cloning animals: science, society & industry. June 2123,1998.
  140. Sundstrom P., Nilsson O., Liedholm P. Cleavage rate and morphology of early human embryos obtained after artificial fertilization and culture//Acta Obstet Gynecol Scand. 1981, V. 60. P. 109−120.
  141. Szollosi D. Extrusion of nucleoli from pronuclei of the rat// J Cell Biol. 1965. V. 25. P. 545−562.
  142. Szollosi M.S., Szollosi D. Blebbing of the nuclear envelope of mouse zygotes, early embryos and hybrid cells// J Cell Sci. 1988. V. 91. P. 257−267.
  143. Szollosi D., Czolowska R., Soltynska M.S., Tarkowski A.K. Remodeling of thymocyte nuclei in activated mouse oocytes: an ultrastructural study// Eur J Cell Biol. 1986. V. 42. P. 140−151.
  144. Szollosi D., Czolowska R., Soltynska M.S., Tarkowski A.K. Remodeling of mouse thymocyte nuclei depends on the time of their transfer into activated, homologous oocytes// J Cell Sci. 1988. V. 91. P. 603−613.
  145. Szollosi M.S., Kubiak J.Z., Debey P., De Pennart H., Szollosi D., Maro B. Inhibition of protein kinases by 6-dimethylaminopurine accelerates the transition to interphase in activated mouse oocytes// J Cell Sci. 1993. V. 104. P. 861−872.
  146. Tao T., Doquest A.C., Machaty Z., Petersen A.L., Day B.N., Prather R.S. Development of pig embryos by nuclear transfer of cultured fibroblast cells// Cloning. 1999. V. 1. N 1. P. 55−62.
  147. Tesarik J., Kopecny V. Development of human male pronucleus: ultrastructure and timing// Gamete Res. 1989. V. 24. P. 135−149.
  148. Thompson E., Legouy E., Christians E., Renard J.P. Progressive maturation of chromatin structure regulates HSP 70.1 gene expression in preimplantation mouse embryo//Development. 1995. V. 121. P. 3425−3437.
  149. Tsunoda Y., Kato Y. Nuclear transplantation of embryonic stem cells in mice//J Reprod Fertil. 1993. V. 98. N 2. P. 537−540.
  150. Tsunoda Y., Kato Y. Not only inner cell mass cell nuclei but also trophectoderm nuclei of mouse blastocysts have a developmental totipotency// J Reprod Fertil. 1998. V. 113. N 2. P. 181−184.
  151. Tsunoda Y., Tokunaga T., Imai H., Uchida U. Nuclear transplantation of male germ cells in the mouse// Development. 1989. V. 107. P. 407−411.
  152. Verma P.J., Du Z.T., Grupen C.G., Ashman R.J., Mcllfatrick S.M., Nottle M.B. Effect of cell cycle synchronization on porcine nuclear transfer// Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 215.
  153. Vignon X., Chesne P., Le Bourhis D., Flechon J.E., Heyman Y., Renard J.P. Developmental potential of bovine embryos reconstructed from enucleated matured oocytes fused with cultured somatic cells// CR Acad Sci III. 1998. V, 321. N 9. P. 735−745.
  154. Vignon X., LeBourhis D., Chesne P., Marchal J., Heyman Y., Renard J.P. Development of bovine nuclear transfer embryos reconstituted with quiescent and proliferative skin fibroblasts// Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 216.
  155. Wakefield L., Gurdon J.B. Cytoplasmic regulation of 5S RNA genes in nuclear transplant embryos// EMBO J. 1983. V. 2. P. 1613−1619.
  156. Wakayama T., Perry A.C.F., Zuccotti M., Johnson K.R., Yanagimachi R. Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei//Nature. 1998. V. 394. P. 369−374.
  157. Wang Z.Q., Kiefer F., Urbanek P., Wagner E.F. Generation of completely embryonic stem cell-derived mutant mice using tetraploid blastocyst injection// Mech Dev. 1997. V. 62. N 2. P. 137−145.
  158. Wells D.N., Misica P.M., Day A.M., Tervit H.R. Production of cloned lambs from an established embryonic cell line: A comparison between in vivo and in vitro-matured cytoplasts//Biol Reprod. 1997. V. 57. P. 385−393.
  159. Wells D.N., Misica P.M., McMillan W.H., Tervit H.R. Production of cloned bovine fetuses following nuclear transfer using cells from a fetal fibroblast cell line// Theriogenol. 1998 a. V. 49. N 1. P. 330.
  160. Wells D.N., Misica P.M., Tervit H.R. Cloning livestock animals from cultured cells using nuclear transfer// Proceedings. Genetically engineering and cloning animals: science, society&industry. June 21−23, 1998 6.
  161. Wells D.N., Misica P.M., Forsyth J.T., Berg M.C., Lange J.M., Tervit H.R., Vivanco W.H.-The use of adult somatic cell nuclear transfer to preserve the last surviving cow of the Enderby island cattle breed// Theriogenol. 1999. V. 51. N 1. P. 217.
  162. Whitfield J.F., Rixon R.H., Youdale T. The control of cell proliferation bya I ^^calcium, Ca calmodulin, and cyclic AMP// In Control of Animal Cell Proliferation. Eds AL. Boynton and HL Leffert. Academic Press, London. 1985. P. 331−335.
  163. Willadsen S.M. Nuclear transplantation in sheep embryos//Nature. 1986. V. 320. P. 63−65.
  164. Wilmut I., Schnieke A.E., McWhir J., Kind A.J., Campbell K.H. Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells// Nature. 1997. V. 385. N 6619. P. 810−813.
  165. Wolf E., Zakhartchenko V., Brem G.J. Nuclear transfer in mammals: recent developments and future perspectives// Biotechnol. 1998. V. 65. N 2. P. 99−110. ,
  166. Yang X., Anderson G.B. Micromanipulation of mammalian embryos: principles, progress and future possibilities// Theriogenology. 1992. V. 38. P. 315 335.
  167. Yang X., Jiang S., Farrel P.B., Foote R.H., McGrath A.B. Nuclear transfer in cattle: effect of nuclear donor cells, cytoplast age, coculture and embryo transfer// Mol Reprod Dev. 1993. V. 35. P. 29−36.
  168. Yin X.J., Choi C.Y., Kong I.K., Choe S.Y., Park C.S., Lee H.J. Production of second generation rabbit embryos by nuclear transfer//Theriogenol. 1998. V. 49. N l.P. 331.
  169. Yong Z., Yuqiang L. Nuclear-cytoplasmic interaction and development of goat embryos reconstructed by nuclear transplantation: production of goats by serially cloning embiyos// Biol Reprod. 1998. V. 58. N 1. P. 266−269.
  170. Zakhartchenko V., Wolf E., Palma G.A., Brem G. Effect of donor embryo cell number and cell size on the efficiency of bovine embryo cloning// Mol Reprod Dev. 1995. V. 42. N 1. P. 53−57 .
  171. Zakhartchenko V., Reichenbach H.D., Riedl J., Palma G.A., Wolf E., Brem G. Nuclear transfer in cattle using in vivo-derived vs. in vitro-produced donor embryos: effect of developmental stage// Mol Reprod Dev. 1996. V 44. N 4. P. 493−498.
  172. Zakhartchenko V., Stojkovic M., Palma G., Wolf E., Brem G. Enucleation of bovine oocytes with minimal cytoplasmic volume: effect on development of nuclear transfer embryos// Theriogenol. 1997 a. V. 47. N 1. P. 238.
  173. Zakhartchenko V., Stoikovic M., Brem G., Wolf E. Karyoplast-cytoplast volume ratio in bovine nuclear transfer embryos: effect of developmental potential// Mol Reprod Dev. 1997 6. V. 48. P. 332−338.
  174. Zakhartchenko V., Schernthaner W., Stojkovic M., Duchler M., Budingo C., Wolf E., Brem G. Cultured bovine mammary gland cells as donors for nuclear transfer// Theriogenology. 1998. V. 49. P. 332.
  175. Zakhartchenko V., Schernthaner W., Prelle K., Stoikovic P., Brem G., Wolf E. Nuclear transfer in the bovine embryo: developmental potential of cultured adult cells// Theriogenol. 1999 r. V. 51. N 1. P. 218.
  176. Фото 1. Начало процесса энуклеации. Направительное тельце в пипетке (увеличение х256).
  177. Фото 2. Завершение процесса энуклеации. Направительное тельце и прилегающая область цитоплазмы ооцита в пипетке (увеличение х256).
  178. Фото 3. Трансплантация фибробласта под блестящую оболочку ооцита. Фибробласт в пипетке (увеличение х256).
  179. Фото 4. Готовая конструкция оопласт-фибробласт (увеличение
  180. Фото 5. Первичная культура фетальных фибробластов через одни сутки культивирования (увеличение хЮО).
  181. Фото 6. Культура фетальных фибробластов в фазе экспоненциального роста. Пятый пассаж, (увеличение хЮО).
  182. Фото 7. Клонированные эмбрионы с ядрами фетальных фибробластов. Трое суток после слияния/активации I, (увеличение хЮО).
  183. Фото 8. Бластоциста, полученная из реконструированного эмбриона с ядром фибробласта. 4,5 суток после слияния/активации (увеличение х200).
Заполнить форму текущей работой

На отлично!