Лабораторная работа № 10. Субкультивирование каллусов
Оборудование и материалы: ламинар-бокс, пробирки с питательной средой для культивирования каллусов, препаровальные иглы, пинцеты, флакон с 96%-м спиртом, спиртовка. Обычно цикл выращивания составляет четыре недели. За это время для построения кривой роста каллус взвешивают четыре раза, т. е. через каждые семь дней. Где ИР — интенсивность роста; тг — масса каллусной ткани в начале пассажа; т2… Читать ещё >
Лабораторная работа № 10. Субкультивирование каллусов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
В цикле выращивания каллусные клетки после ряда делений проходят обычный онтогенез: растут растяжением, дифференцируются и деградируют. Рост каллуса можно отразить S-образной кривой роста. Ростовой цикл начинается с посадки экспланта на среду (начало культивирования), а завершается в момент прекращения митозов (стационарная фаза). В лаг-фазе (латентной фазе) клетки не делятся, не увеличиваются в размере, имеют низкую метаболическую активность. В экспоненциальной фазе (фазе логарифмического роста) клетки активно делятся митозом. В ранней экспоненте увеличивается количество митохондрий (синтезируется АТФ), рибосом, всех видов РНК, синтезируются белки, активизируется метаболизм, интенсивно поглощается кислород. Поздняя экспонента характеризуется снижением удельной скорости роста, замедлением клеточного деления, увеличением среднего размера клеток за счет растяжения. В стационарной фазе (фаза плато) размер клеток продолжает увеличиваться, а их деление прекращается. В поздней стационарной фазе (фаза деградации) за счет истощения среды клетки стареют и отмирают. Продолжительность ростового цикла каллусных клеток 21—28 дней. В процессе культивирования каллус пассируют (пересаживают на свежую питательную среду) каждые четыре — шесть недель в зависимости от интенсивности роста. Масса транспланта (фрагмента ткани, который пассируют на свежую питательную среду) составляет 60—100 мг на 20—40 мл питательной среды.
Цель работы: исследовать характер роста каллуса картофеля.
Оборудование и материалы: ламинар-бокс, пробирки с питательной средой для культивирования каллусов, препаровальные иглы, пинцеты, флакон с 96%-м спиртом, спиртовка.
Объект исследования: каллусная культура клеток картофеля.
Ход работы.
В асептических условиях извлечь каллусы из пробирок и поместить на стерильную поверхность. Стерильной препарировальной иглой выделить зоны меристематической активности (белые мелкие клетки). Транспланты величиной 2—3 мм поместить на поверхность питательной среды (среда: МС + 30 г/л сахарозы + 1 мг/л НУК + 0,8 мг/л Б АП). Культивируют в светлой культуральной комнате при 25 °C или в термостате.
Обычно цикл выращивания составляет четыре недели. За это время для построения кривой роста каллус взвешивают четыре раза, т. е. через каждые семь дней.
Задание. По результатам взвешиваний через одну, две, три и четыре недели построить кривую роста каллуса. Кроме снятия ростовых показателей, отмечать цвет и консистенцию каллусной ткани. Результаты культивирования зарисовать через две — четыре недели. Рассчитать (в процентах) интенсивность роста каллусной ткани по формуле.
где ИР — интенсивность роста; тг — масса каллусной ткани в начале пассажа; т2 — масса каллусной ткани в конце пассажа.