Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Получение атипичных форм Treponema pallidum и детекция антител к ним в эксперименте

Диссертация: Получение атипичных форм Treponema pallidum и детекция антител к ним в эксперименте
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

К исследуемой сыворотке добавляли 300−500 мкл 10% Ь-трепонемиого антигенного магнонммуносорбента. Экспонировали 1−2 часа при температуре (24±1) °С перемешивая. По истечении времени контакта гранулы МИС собирали магнитной палочкой и переносили во флакон с фибиологическим раствором для отмывания, При погружении стеклянного чехла, в который вставлена магнитная палочка (длинный металлический шток… Читать ещё >

Содержание

  • ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
  • Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Современное состояние заболеваемости и эпвдемиологическая ситуация, но сифилису 1.2 L-формы бактерий, особенности биотрансформа- 15 пни в L-формы T. palludum
    • U. Методы лабораторной диагностики сифилиса
  • СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 1. Штаммы микроорганизмов, нчятыс в работу'
    • 2. 2. Питательные среды
    • 2. 3. Основные химические реактивы и оборудование
    • 2. 4. Получение антигенных комплексов микроорганизмов
    • 2. 5. Лабораторные животные, использованные в опытах
    • 2. 6. Получение гнпериммушшх сывороток
    • 2. 7. Физико-кнмнческне н иммунологические методы
    • 2. 8. Получение нммунофлуореецнруютнх конъюга- 42 тов
    • 2. 9. Иммунофлуоресцентный анализ
  • 2−10. Иммунофсрментный анализ
    • 2. 11. Сублимация МИБП
    • 2. 12. Статистическая обработка материала
  • Глава 3. " ПОЛУЧЕНИЕ ИЗМЕНЕННЫХ ФОРМ БЛЕДНОЙ ТРЕПОМ ЕМЫ И ИЗУЧЕНИЕ ПРОЦЕССА ?? БИОТРАНСФОРМАЦИИ
    • 3. 1. Подбор оптимальной питательной среды
    • 3. 2. Особенности бнотрансформацнк культурал ьнон 44 бледной трепонемы in vitro по данным электронной микроскопии
  • 3−3. Получение биомассы L-форм бледной трепонемы
  • Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕН- 29 НОЙ СТРУКТУРЫ ТИПИЧНОЙ И L-ФОРМ БЛЕДНОЙ ТРЕПОНЕМЫ В НЕКОТОРЫХ СЕРОЛОГ И ЧЕСКИX PEAКЦИЯ X
    • 4. 1. Выделение специфических антигенов hi типнч- 60 ной и L-форм бледной трепонемы
    • 4. 2. Получение гипериммунных сывороток крови
    • 4. 3- Сравнительное изучение антигенных взаимоот- 67 ношений L-вариантов бледной трепонемы с нэ-витой формой Т. pallidum

    Глава?. ВЫЯВЛЕНИЕ ТРЕПОНЕМНЫХ L-АНТИ- 81 ТЕЛ В ЭКСПРЕССНЫХ МЕТОДАХ И. ММУ-НО АН АЛ ИЗ, А В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 5Л Модифицированный нммуноферментный анализ 81 5.2. Количественный нымунофлуоресцентный анализ 88 с применением магнонммуиосорбеитоа

Получение атипичных форм Treponema pallidum и детекция антител к ним в эксперименте (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы.

Ежегодно в России регистрируется более I млн. инфекций, передаваемых половым путем, из них более 270 тыс. составляют больные сифилисом. По сравнению с i 989 г. число заболевших сифилисом выросло более чем в 33 раза. При этом произошло увеличение числа ежегодно регистрируемых больных сифилисом (все формы) в 37,7 раза, из них первичным — в 33,2 раза, вторичным — в 34,2 раза, ранним скрытым — в 57,1 раза, в прочими формами в ¦ 4.6 раза, в том числе ранним врожденным с симптомами я 47,7 paja (Оннщекко ГГ., 2002, 2002аЯцуха MB., Козырева Л Т. Бобкова И. Н. и др., 2002).

Известно, что Т. pallidum при определенных условиях, благодаря действию защитных сил организма, трансформируется в формы выживания (цисты и L-формы), что обусловливав! развитие серорезистеитностн у больных, получавших специфическое лечение. Важное теоретическое и практическое значение имеют наблюдения авторов о L-трансформнрующем влиянии на возбудителя сифилиса соответствующих иммунных сывороток, особенно если помимо антител сыворотка кроен содержит пенициллин Здесь прежде всего нужно думать о детях, рожденных от больных сифилисом матерей как не леченных, так и леченных пенициллином во время беременности, так как дети с кровью матери получают антитела и пенициллин, которые являются мощным L-траисформнрующим фактором (Бедиова В. И. 2001; Яро-аинекий Б.Г., Зурочка А. В., и др., 2001; Хамаганова И. В. Кошина М.В., Пн-вень А.П. и др., 2004), Результаты серологических исследований в данном случае помочь не могут, так как в настоящее время во всем мире антигены для всех специфических реакций на енфнлне готовят нз извитых форм возбудителя. В связи с этим, в последние десятилетня учеными неоднократно ставился вопрос о необходимости расширения экспериментальных нселедований в отношении биологии возбудителя сифилиса как извитых, так и атипичных форм, в частности, совершенствовании его серодиагностики с разработкой антигенов из атипичных форм бледной трепонемы (Овчинников U.M., 1970. 1974; Бед нова ВН., 2001; Дмитриев Г. А., Акоабян В. А. Тихонова Л. И, 2001),.

Цель н основные задачи исследовании.

Цель диссертационной работы заключалась в получении L-форм бледной грепонемы н изучении возможности выявления антител к ним в экспрессных метлах кммуноаналнза в эксперименте.

Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи:

— подобрать рецепт) ру питательной среды, обеспечивающую стабильное образование L-форм бледной трспонсмы и наращивание сс биомассы;

— изучить процесс трансформации бледной трспонсмы в L-форму методом электронной микроскопии;

— выделить специфические антигенные комплексы нт типичной и L-форм Tpalhdum и изучить их в сравнительном аспектеразработать технологию получения высокоактивной кроличьей гнпе-риммунной антисыворотки против L-формы бледной трспонсмы;

— разработать модифицированный вариант иммуноферментиого анализа (ИФА) для выявления трепонемных L-аитител;

— разработать малiоиммуносорбентный трепонемный L-антигенный дн-агностикум для количественного иммунофлуоресцентного анализа (КИФА).

Научная новизна pa&utbi.

Разработана рецептура питательной среды с композицией индукторов L-1трансформации, обеспечивающая стабильное получение L-форм бледной трепонемы.

С помощью электронной микроскопии изучен процесс биотрансформации Тpallidum в L-форму.

Для изолирования специфических антигенных комплексов из извитых и [.-фор" бледной трепонемы разработан рял последовательных манипуляций, позволивший получить антигенные компоненты клеточной стенкн н цитоплазмы,.

Разработан методический подход к получению высокоактивной гипериммунной кроличий сывороткн против антигена I,-формы бледной трс-понемы.

Сравнительное изучение антигенной структуры родительской (извитой) и [,-формы Т. ра!кс1шп показало потерю части антигенов, связанных, по всей вероятности, с клеточной стенкой микроорганизма.

Предложен модифицированный метод постановки ИФА для выявления в сыворотке крови специфических Ь-антнтел к атипичной форме бледной трепонемы.

Впервые разработан экспрессный метод определения I.-антител в количественном иммунофлуоресцентном методе с использованием иммуно-сорбентной биотехнологии.

Приоритетность выполненных исследований подтверждена патентом РФ на изобретение «Способ культивирования Л-форм бледных трспонем» {положительное решение о выдаче патента от 5.12,2005 г. по заявке № 2 004 130 018),.

Практический значимость диссертации.

Разработанный комплекс последовательных лабораторных приемов с использованием предложенной питательной среды позволяет получать чистую биомассу Ь-форм бледной трепонемы в достаточном количестве для научных и практических целей.

Получены высокоактивные специфичные трепонемные гипериммунные сыворотки в результате подбора эффективного способа иммунизации кроликов антигенным комплексом из Ь-форм Тра (Шит, которые могут быть использованы в качестве положительного контроля при постановке серологических реакций.

Предложена модификация постановки иммунофсрмснгного анализа на стекле для выявления [.-антител, которая может способствовать совершенствованию серодиагностики сифилиса.

Использование трепонемных I,-антигенных магнонымужюорбентов в количественной реакции иммунофлуоресиенини позволило повысить диагностическую ценность этой реакции.

Материалы научных разработок легли в основу методических рекомендаций «Получение (.-форм бледной трспонемы к определение антител к ним в нммуноферментном анализе», которые были одобрены Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (протокол № 9 от 27 октября 2005 г.) н утверждены директором института 27 октября 2005 г.

Л п роба пия работы.

Основные результаты диссертационной работы были доложены на заседании Ставропольского краевого научного общества дерматовенерологов (Ставрополь, 2003) — XI Итоговой (межвузовской) научной конференции молодых ученых н студентов (Ставрополь, 2003) — научно-практической конференции «Опыт работы учреждений Роспотребнадзора в Ставропольском крае по обеспечению санэнндблагополучня н зашиты тграв потребителей» (Ставрополь, 2005) — Ставропольского филиала Общероссийской общественной органнзанн «Российское общество дерматовенерологов» (Ставрополь, 2005).

Основные положении, выносимые на защнгу.

1. Разработка рецептуры питательной среды для стабильного получения !-форм бледной трспонемы и изучение её изменчивости в процессе I-трансформацни методом электронной микроскопии.

2. Биотехнология получения специфического антигенного комплекса из извитых н Ь-форм бледной трспонемы.

3. Особенности технологии получения специфичной гипериммунной кроличьей актисыноротки к извитой и (.-форме бледной трепонсмы.

4. Результаты сравнительного изучения антигенной структуры извитой и измененной форм бледной трспонемы в некоторых серологических реакциях,.

5. Модифицированный метод постановки ИФА для определения L-антнтел в сыворотке крови,.

6. Биотехнология изготовления магноиммуносорбентного L-анти-генного лнагностикума дляКИФА.

Дширшши личного участия автора.

Экспериментальные исследования выполнялись лично автором нлн при непосредственном участии в составе научных групп в период с 2002 по 2005 гг. Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно. В совместных публикациях вклад автора 50−70%,.

Публикации.

Основное содержание диссертации, выполненной в рамках НИР «Получение и характеристика атипичных форм бледной трепонсмы и их ревср-тантов» (№ ГР 1 200 311 390) по Ставропольской государственной медицинской академии, отражено в 9 опубликованных научных работах (4 депонированные работы, 5 трудов в научных сборниках).

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы.

выводы Подобран состав полужидкой питательной среды на основе грнптнчсского гндролнзата казеина неглубокой степени расщепления, при введении в которую композиции индукторов трансформации (натриевой соли бензнлленицнллнна 100−500 ЕД/мл и глнцина 1,0−2,0 г/л) она обеспечивает стабильное получение Ь-форм бледной трепонемы,.

2. По данным электронной микроскопии, биотрансформацня типичной бледной трегюнемы проходит через несколько фаз: освобождение клеток от значительной части наружных фибриллформирование единичных петель, переходящих со временем в узелкиформирование Ь-колоннйпоявление зрелых 1,-форм, представляемых кольцеобразными структурами.

3. Разработан комплекс последовательных манипуляций, позволяющий получить чистую биомассу 1,-форм Т. ра1Мит в достаточном количестве для решения биотехнологии есхнх задач.

4. Методами физической деструкции микробных клеток (экструзня-УЗ — воздействие) и водно-солевой экстракции получен специфический антигенный комплекс (.-форм бледной трепонемы.

5. Результаты сравнительного изучения водорастворимых антигенных комплексов в некоторых серологических реакциях (РИД, ИФА, РИФ) родительской и 1—формы ТрЫШит свидетельствуют о потере, по крайней мерс, двух антигенов и частично — одного, связанных с ей клеточной стенкой.

В РИД показано наличие тропности бледной трепонемы к тканям сердца, печени, лимфоузлов н легкого человека, «по может играть определенную роль в патогенезе сифилиса.

6. Разработана высокоэффективная схема гипериммунизапни кроликов, позволившая получать иммунный ответ у 100% животных — продуцентов на введение Ь-антигена бледной трепонемы. Такая иммунная сыворотка может служить положительным контролем при выявлении Ь-антител в серологических реакциях.

7. Для выявления L-антнтел в сыворотках крови разработан модифицированный метод постановки ИФА на стекле, а также трепонсмный L-антн генный магнонм муносорбентный диагностикум для количественного иммунофлуорссиентного анализа.

IlРЛКТНЧЕСКИE РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Для получения L-форы бледной трспонемы использовать 03% питательную среду следующего состава;

— триптнческнй гидролизат казенна — 15,0 п.

— экстракт кормовых дрожжей — 5,0 г,.

— экстракт шнцевых дрожжей — 4,5 п.

— натрия хлорид — 7,5 п.

— глюкоза • 5,5 г,.

— кислота тноглкколевая ¦ 0,3 мл;

— цисткн — 0,75 г,.

• сыворотка лошадиная нормальная ¦ 20%- натриевая соль бензнлпеииинллнн — 100−500 ЕД/мл;

— глиинн — 1,0−2,0 г/л;

— вода дистиллированная до 1000 мл.

2, Для наиболее полного извлечения водорастворимых L-антигенов нз биомассы атипичной T. pattidum в нативном виде проводить водно-солевую экстракцию в комплексе сэкструзией и ультразвуковой дезинтеграцией,.

3, Для получения высокого иммунного ответа на L-антнген Tpalfidutn необходима гипериммуиизация, включающая не менее трех циклов иммунизации не только водорастворимыми изолягами. но и клеточными детритами на фоне введения нммугокорректора — феракрила.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Эпидемия сифилиса последних лет вызывает серьезные опасения в связи с её лавинообразным ростом, трансформацией «классического» течения. вовлечением незащищенных слоев населения — детей, подростков, а также женшни детородного возраста, что является не только медицинской, но и социальной проблемой. При этом участились случаи развития нейроси-филнса. клинической и серологической резистентности, изменилось соотношение вторичного рецидивного сифилиса и свежих формпроисходит рост числа детей с врожденным и приобретенным бытовым сифилисом (Родионов A.M., 2000; Оннщенко Г-Гч 2002; Петрншнна С. В., 2004 и др.).

Известно, что Т. pallidum при определенных условиях образует L-формы и цисты, которые могут длительно псренстнроватъ в организме и приводить к развитию резистентного бактерионосительстваФормирование в популяции прослойки носителей бледной трепонемы во многом обусловливает цикличность эпидемического процесса.

Так как в настоящее время повсеместно антигены для всех специфических реакций на сифилис производят из типичных извитых форм возбудителя, часто серологические исследования помочь не MOiyr. В связи с этим, необходимость расширения исследований по изучению биологии атипичных форм бледной трепонемы, выделению их специфических антигенов и совершенствованию серодиагностики сифилиса, вызванного атипичными формами возбудителя, является своевременной н актуальной проблемой.

Культнвкрованнс бледной трепонемы на искусственных питательных средах представляет определенные трудности в силу её биологических свойств, тем более, если стоит задача получить L-формы этого микроба,.

При отработке оптимальной рецептуры питательной среды в качестве основы мы использовали перевар Мартена, триптическнй гндролнздт казеина, пептонный бульон из бычьих сердец, печеночную питательную среду.

Кнгг-Тарощщ, в состав которых в различных сочетаниях и количествах дополнительно входилинормальная лошадиная сыворотка (10−20%), экстракт кормовых дрожжей (3−10 г/л), натрия хлорид (0,5−7,5 г/л), сернокислая магнезия (0,2−0,5 г/л), сахароза, глюкоза (3−7 г/л), кислота тноглнколеная (0.3−0,7 г/л).

В сериях опытов было испытано 15 вариантов питательных сред, на которые высевали VII штамм культу рал ьной бледной трепонемы II иммунологической группы (Ставрополь VII).

Взятые в эксперимент варианты питательных сред, но своим ростовым качествам были неравнозначны. Наиболее благоприятной оказалась питательная среда на основе ферментативного (тритггнческого) гнлролнзата казенна неглубокой степени расщепления следующего составатрнптнческнн гидролизат казенна -15,0 г, экстракт кормовых дрожжей — 5,0 г, — экстракт пищевых дрожжей — 4,5 г. натрия хлорид — 7,5 Гглюкоза — 5Т5 п кислота тиогликолевая — 0,3 млцистнн — 0,75 гсыворотка лошадиная нормальная — 20%- вода дистиллированная до 1000 мл. После стерилизации рН среда (7,0±0,2). На этой среде прирост биомассы составил (1,55*0,27) г/л.

В качестве основного L-трансформирующего агента мы использовали пенициллин, так как он является наиболее совершенным, почти универсально действующим фактором, вызывающим превращение разнообразных видов бактерий в L-формы (Тн маков В.Д., Каган Г. Я., 1961, 1973). Этот индуктор был с успехом применен рядом авторов при получении L-форм бледной трепонемы (Вясслева С, М, 1954; Овчинников Н. М-, Дслекторскн й В. В, и др., 1970; Устнменко Л. М., 1975а).

Вторым индуктором L-трансформации служил глнцин. Об эффекте со-четвнного индуцирующего действия пенициллина и глицина имеются сообщения ряда исследователей (Тнмаков В, Д., Каган Г. Я. 1973: Madoff S. et al., 1967).

Процесстрансформации бледной трепонемы в Ь-форму изучали при внесении различных доз натриевой соли бензил-пенициллина (25 ЕД’мл- 50 ЕД/млI 00 ЕД/мл- 250 ЕД/мл- 500 ЕД/мл) н глнцннв (0Л г/л — 2,0 г/л) в питательную среду после появления видимого роста исходной культуры.

Особенности биотрансформацнн бледной трепонемы изучали электрон номнкроскопнческнм методом. Для электронной микроскопии культуру готовили следу ющим образом (Овчинников Н. М"Делекторскнй В.В. Усти-менко Л. М" 1970): колонии извлекали из среды пастеровской пипеткой и последовательно осторожно отмывали от агара 3−4 раза в 5% растворе сахарозы, При наличии диффузного роста на полужидкой среде культуры тщательно смешивали с равным объемом 5% раствора сахарозы, центрифугировали сначала при 3000 об/мин в течение 20 мин, а затем отсасывали надосадочную жидкость и снова центрифугировали ее для осаждения трепонем при 6000 об/мни в течение (45±5) мни. Полученный осадок микробной массы исследовали в электронном микроскопе ]ТМ-]ООЕх (|ЕОЕ) с увеличением в 8000 -10 000 раз методом негативного контрастирования.

В питательной среде, в которую добавляли пенициллин в концентрации 25 ЕД/мл И 50 ЕД/мл, а глицин — 0,1 г/л через 6−7 дней, наряду с типичными формами, появлялось небольшое количество измененных клеток со вздутиями и утолщениями в теле, При увеличении концентрации пенициллина до 250−500 ЕД/мл, а глицина — до 2,0 г/л происходили следующие трансформации микробной клетки бледной трепонемы. При внесении индукторов в период появления видимого роста на следующий день и в последующие 2−3 дня у исходных культур отмечалось изменение морфологии, соответствовавшее I фазе биотрансформации трепонем: освобождение клеток от значительной части наружных фибрилл, сопровождающееся уплотнением завитков спирали, и наличие свободно расположенных фибрилл, связанных с наружной оболочкой клетки трепонемы,.

Далее в течение 3-И дней наблюдали 11 фазуобразование единичных петель из завитков за счет сокращения внутренних и коротких фибрилл, делающихся со временем контрастно непроницаемыми в виде узелковна этом этапе фибриллы сохраняют свободное расположение и связь с клетхой,.

11 фаза характеризовалась постепенным скручиванием трепонемы в кольцеобразную структуру, наличием связанных с клеткой свободно расположенных фибрилл, а также фибрилл, связанных внутри кольцеобразной структуры н формирующимся «концевым» отростком. В III фазу на 16−18 день начинали пояачяться L-колоиии, что свидетельствовано о переходе биотрансформацин в IV фазу (завершающую): зрелые клетки представлены кольцеобразными структурами, уложенными в виде клубка с нефрагмен-гированным чехлом и сформировавшимся «концевым» отростком, выраженными образованиями из фибрилл внутри клетки, отсутствием значительного количества свободно расположенных фибрилл снаружи клетки с сохранением свободных фрагментов.

Представленный процесс трансформации извитой формы бледной трепонемы иллюстрирует фазы образования цист-форм и переход к формированию L-формы бледной спирохеты. L-колонин — мелкие плотные непрозрачные образования крошхообразкон консистенции, правильной или неправильной круглой формы. Диаметр колоний варьировал от 0,3 до 2,2 мм. При фазовоконтрастной микроскопии I.-колонии состояли из шаровидных тел различных размеров с гомогенной протоплазмой неодинаковой оптической плотности, шаров с зернами в протоплазмеПри элсктронномнкроскопнчс-ском исследовании срезов L-форм трепонсм видны различной величины и электронной плотности шаровидные нлн округлые образования. Некоторые из них совершенно гомогенны, с мелкой зернистостью. Внутреннее строение части из ннх сходно со строением ядра у бактерий и пронизано нитями, которые подобны ДНК.

Для получения биомассы 1,-форм бледной трепонемы исходную типичную культуру штамма Ставрополь VII высевали на полужидкую питательную среду предложенной нами рецептуры. При появлении видимого роста микроорганизмов добавляли индукторы Е-трансформацин (натриевую соль бензил-пенициллина 100 ЕД/мл и глицин — 1,0 г/л), инкубировали при 37 °C в течение 6−7 суток. Далее отбирали Ь-колон и и стерильной пастеровской пипеткой и вносили в полужидкую среду, в которую после появления видимого роста микробов добавляли 250 ЕД/мл пенициллина н 2,0 г/л глицина, Инкубировали аналогично 1 пассажа, После этого отобранные Ь-колонии вносили в полужидкий агар с добавлением Е-нндикаторов (500 ЕД/мл пенициллина и 2,0 г/л глниина), в те же сроки, при этом среду с посевным материалом тщательно перемешивали для получения диффузного роста. По истечении срока инкубации питательную среду с выросшими Ь-формамн бледной трепонемы центрифугировали при 3000 об/мин 20 минут. Осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость повторно центрифугировали при 10 000 об/мин в течение (45±5) минут. Надосадочную жидкость отбрасывали, а её осадок клеток суспендировали в половине начальною объема в 5% растворе сахарозы. Эту манипуляцию повторяли 2−3 раза, в результате получая отмьггую от питательной Среды и продуктов метаболизма микробных клеток биомассу [.-форм бледной трепонемы в количествах, достаточных для изучения биологических свойств, антигенной структуры и конструирования диагностических тест-систем для выявления антител к измененным формам бледной трепонемы,.

Процесстрансформации микробной клетки при воздействии различным факторов приводит к структурным изменениям в клеточной стенке, протоплазме, ядерной субстанции. Эти изменения цитохимической структуры, химического состава и обменных процессов находят свое отражение в измс-нениях их антигенной структуры. Отличительной особенностью её является преобладание антигенных детерминантов цитоплазматической мембраны и цитоплазмы, которые иногда не выявляются у родительских бактериальных форм из-за преобладания у них антигенных компонентов клеточной стенки (Тимаков В.Д., Каган ГЛ., 1973).

За основу изолирования специфических антигенов мы приняли водно-солевую экстракцию и комплексе с экструзией и ультразвуковой дезинтеграцией микробных клеток.

Биомассы типичной н (.-форм бледной трепонемы суспендировали в дистиллированной воде и замораживали при 50 °C в течение 24 часов. После чего подвергали их 5−6 кратной экструзии на Х-прсссе. Затем центрифугировали при 20 000 об/мин (45±5) мин. Надосадочную жидкость декантировали, а осадок клеток экстрагировали 3% раствором хлорида натрия с добавлением цетавлона в течение 24 часов, предварительно подвергнув ультразвуковому воздействию при 44 кГц в течение 15 минут. После экстракции повторно центрифугировали при 20 000 об’мин (45±5) минут. Осадок суспендировали в дистиллированной воде в соотношении I '5. Надосадочныс жидкости после 1-го и 2-го центрифугирования объединяли, помещали в диализную трубку и диалнзнровалн против дистиллированной воды в течение 24 часов. Детрит и объединенные надосадочныс жидкости разливали в ампулы (раздельно) ШПВ-6 по I мл и сублимировали.

Лиофнлизированные водорастворимые белковые антигенные комплексы н летрнты служили нммуногенами при получении гнпернммунных сывороток, а также для конструирования экспериментальных диагностических препаратов.

Для получения высокоактивных и специфичных антисывораток типичной и Ь-форм бледной трепонемы мы применили разработанную производственную схему иммунизации животных-продуцентов гнпернммунных сывороток с нммуномодуяятором феракрнлом (Тюменцева И.С., 1996),.

Для получения более полного спектра антител нами при иммунизации кроликов, кроме растворимых антигенных комплексов, введены клеточные детриты типичных н измененных форм Т.pallidum.

Способ гипернммуннзацни заключался в следующем: в первом цикле (грундиммунизация) кролнкам’продуцентам пятикратно вводили водорастворимые антигены в повышающихся дозах от 1 до 3 мг на инъекцию в смеси с феракрнлом, Первые две инъекции делали подкожно в подушечки задних лап и в подмышечные лимфатические умы. Остальные три инъекции иммуноген вводили внутримышечно в бедра задних лап попеременноПосле пятой инъекции животным давали отдых в <30±1) дней. На 30-й день от животных получали 3 мл нмл1унной сыворотки, добавляли половинную дозу ангигена в каждую сыворотку. Полученный комплекс антиген-антитело вводили четырехкратно по 0,5 мл с промежутками в 3−4 дня в краевую вену уха тому же животному, от которого получена иммунная сыворотка. Одновременно внутримышечно кроликам инъецировали в три-четыре точки бедра смесь водорастворимых антигенов и детритом с феракрнлом.

Специфическую активность иммунных сывороток оценивали в реакции иммунодиффущи в агаровом теле по ООухтерлони, Пробное взятие крови проводили у всех животных через 7 дней (24 день) после грундиммуннзации, перед третьей инъекцией второго цикла (54 день) и через 7 дней (66 день) после окончания второго цикла.

Титры специфической активности гнпериммунных сывороток в РИД у животных, иммунизированных антигенами из типичных форм бледной тре-понемы, после взятия крови на 66 день от начата иммунизации достигали показателей 1:48,0±12,5, что вполне удовлетворяло поставленным нами задачам. V всех животных, иммунизированных антигенами из измененных форм T. pallidum в эти же сроки, развивалась ответная иммунологическая реакция, но титры специфических антител в сыворотках были невысокими 1:3,2±0,62.

Эгн результаты диктовали нам необходимость проведения третьего цикла иммунизации. После отдыха (20±|) день была проведена дополнительная иммунизация, состоящая из четырех инъекций смеси водорастворимою Ь-антигена (3 мг) с детритом (1 мг), при зтом половину дозы вводили кролику' внутривенно, вторую половину дозы смешивали с феракрилом и вводили внутримышечно Через 7 дней после последней инъекции (98 дней) титры специфической активности Ь-антител у всех кроликов, оцененные в РИД, повышались в течение всей гинернммунизаиии и достигали 1:41,6± 11,7.

Антигенную структуру Ь-варнантов бледной трепонемы и антигенные взаимоотношения с извитой формой изучали в реакции иммунодиффузин в агаровом геле по О. ОисЬ1ег1опу, прямой реакции нммунофлуоресценцни (РИФ) и непрямом иммуноферменшом апатите.

Результаты серологических реакций с использованием антигенов и ги-лернммунных кроличьих сывороток к ним из извитых и Ь-форм бледной трепонемы свидетельствуют о потере, по крайней мере, двух антигенов и частично одного. В связи с тем, что процесс Ь-трансформации в первую очередь затрагивает клеточную стенку микроорганизма, по всей вероятности, эти антигены могут быть локализованы именно в ней.

Показано наличие тропностн бледной трепонемы к некоторым тканям макроорган изма, что может играть определенную роль в патогенезе сифилиса и его серодиагностике,.

Высокоспецифнчный водорастворимый антиген Т. раПШит явился основой для конструирования трепоиемного Ь-антигенного магнонммуносор-бентного диагностикума для выявления антител в количественном иммуноф-луоресцентиом анализе. В качестве твердой фазы использовали органокрем-незем — алюмосиликат, модифицирование поверхности которого осуществляли в присутствии полимера-декстрана (полиглюкнна) н поверхностно-активного вещества — вторичного алкнлсульфата натрия.

Процесс получения МИС заключался в следующем: к I г алюмосн-лнкатного наполнителя добавляли 40 мл 3% водного раствора полиглюкина и 3 г магнитного порошка (РегОз), перемешивали и проводили гелеобраэова-ние при температуре (22±4) °С 2 часа. Полученный сорбент высушивали при 100−110 С в течение 30 мин, измельчали и методом рассева выделяли фракции с размером частиц 60−120 микрон.

Активирование твердофазного носителя вторичным алкнлсульфатом натрия проводили следующим образом: к ] г полученного алюмоснлнкатно-го МС примешивали 7,5 мл дистиллированной воды, содержащей 0,25 мл вторичного алкилсульфата натрия, Смесь инкубировали 1−2 часа при температуре (37±1) °С, затем сорбент отмывали 100 мл 0+9% раствора хлорида натрия и 100 мл дистиллированной воды, Для придания сорбенту аффинных свойств к 0,1 г активированного сорбента приливали I мл Ьантигена с содержанием белка (3,5±0,1) мг/мл, рН 7.0−7,2, Смесь оставляли при (20±2) °С в течение одною часа, Далее надосадочиую жидкость удаляли, а носитель промывали 0,15 М раствором хлористого натрия до 0 экстницнн на спектрофотометре.

Для проведения количественного нммунофлуоресцентного анализа использовали люминесцентный микроскоп ЛЮМАМ Ф-8, регистрирующий уровень свечения магнитных «ранул, оборудованный фотометрической насадкой типа ФМЭЛ-14. К насадке подсослииялн источник тиса УБПВ-1 и вольтметр цифровой универсальный типа В7−76, Рабочее напряжение составляло 800−900 В, увеличение объектива и окуляра хЮПрименяли возбуждающие светофильтры БС-8−2,СЗС-7−2, ФС-1−6, диаметр зонда фотометрической насадки 0,5 мм.

К исследуемой сыворотке добавляли 300−500 мкл 10% Ь-трепонемиого антигенного магнонммуносорбента. Экспонировали 1−2 часа при температуре (24±1) °С перемешивая. По истечении времени контакта гранулы МИС собирали магнитной палочкой и переносили во флакон с фибиологическим раствором для отмывания, При погружении стеклянного чехла, в который вставлена магнитная палочка (длинный металлический шток с постоянным магнитом на конце), в жидкую фазу, где находились гранулы МИС, последние примагничивались к погруженному конусу стеклянного чехла. При переносе устройства в другую жидкость с целью промывки МИС выдвигали постоянный магнит, при этом гранулы сорбента свободно рассеивались в объеме жидкости, Для тщательной промывки МИС эту процедуру повторяли несколько раз (Вфременко В.И., Тюменцева И. С., Пушкарь В. Г., 1997). Из флакона сливали физиологический раствор, фиксируя гранулы постоянным магнитом, вносили 300−500 мкл иммуноглобулинов против глобулинов кролика флуоресцирующих сухих (коммерческий препарат НИИЭМ им. Н.Ф.Гамапеи) в их рабочем разведении и экспонировали 20−30 минут при температуре (24±1) «С. После контакта [ранулы сорбента отмывали переносом с помощью магнитной палочкн в стеклянном чехле 5−6 раз физиологическим раствором и I раз дистиллированной водой. Отрицательным контролем служили гранулы МИС. неконтактировавшие с исследуемой сывороткой.

Исследуемые опытные и контрольные взвеси в объеме 20 мкл наносили на предметное стекло и помещали на столик микроскопа. После обнаружения, а поле зрения гранул сорбента закрывали полевую диафрагму и снимали цифровые показания уровня свечения 10−15 гранул на вольтметре. Определяли среднеарифметические значения величины флуоресценции опытных и контрольных гранул и пространства между ними — фона. Интенсивность люминесценции МИС (М) представляла собой разницу между среднеарифметическими показателями уровня свечения гранул и фона:

М) — Мгранул — М фона. За положительные принимали результаты, при которых уровень флуоресценции опытных гранул в 2,5 и более раз превышал аналогичный показатель контрольных гранул.

Таким образом, нами впервые разработан трепонемный магноиммуно-сорбентный Ь-анти генный лнагностнкум для количественного нммунофлуо-рссцентиого анализа. который позволяет при контакте со спссЕифнчсскнмн I,-антителами осуществлять динамическое селективное их концентрирование, образуя иммунные комплексы, определяемые в дальнейшем соответствующей меткой.

Кроме этого, для выявления Ь-актнтел в сыворотках крови намн апробирован способ постановки ИФА на предметном стекле.

Из биомассы Ь-форм бледной грепонемы готовили суспензию. Последнюю в количестве 50 мкл наносили дозатором на обезжиренное предметное стекло. Мазки высушивали на воздухе, после чего фиксировали в ацетоне в течение 5 мин На фиксированный мазок антигена наносили двойное разведение испытуемой еыворотки, Параллельно ставили отрицательный контроль: на мазок наносили эабуференный физиологический раствор (рН 7,2±0,1). Мазки инкубировали в течение 30 мин в термостате при температуре 37 °C во влажной камере, затем последовательно отмывали по 1 мин в ЗФР и дистиллированной воде, подсушивали на воздухе и наносили конъю-гат нммуноперокендазный антикроличий в его рабочем разведении. После инкубации в течение 30 мин при температуре 37 °C отмывали ЗФР и дистиллированной водой, подсушивали н наносили субстрат-ннлнкаторный раствор (10 мл шпратного буферного раствора рН (5,0±0,05), 5 мг орто-фениленднамина н 0,05% перекиси водорода), Инкубировали при 37 °C без доступа света в течение 10 мин. Для остановки реакции использовали 2 М раствор серной кислоты, который наносили на мазки в объеме 50 мкл. Результаты реакции учитывали визуально. На отрицательном контрольном мазке реакционная смесь оставалась неокрашенной, на опытных (положительных) субстрат окрашивался в оранжево-желтый цвет разной интенсивности в зависимости от разведения исследуемой сыворотки. Для количественного определения результатов ИФА продукт реакции переносили в лунки микроплаты и регистрировали оптическую плотность на вертикальном фотометре «Multiskan» (Флоу Лаб, Англия), считая анализ положительным, если ОП исследуемого образца, а 2 и более раз превосходила среднее значение ОП отрицательного контроля.

Предлагаемый нами способ постановки ИФА значительно упрощает, ускоряет и удешевляет проведение анализа. Прочная адгезивная фиксация корпускулярного L-антнгена на стекле исключает недостатки и последствия десорбцнонных процессов. Вследствие нею такие стекла можно заготавливав заранее и применять для постановки ИФА. по крайней мерс, не менее двух лет (срок наблюдения), что немаловажно при проведении большого количества исследований.

Таким образом, нами показана возможность определения L-актнтел в сыворотках крови в модифицированном методе ИФА. Дальнейшие клинические испытания будут способствовать совершенствованию серодиагностики, в первую очередь, больных врожденным, поздними и серорезистснткыми формами сифилиса.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Л. Получение н серологическая оценка контрольных сывороток для лабораторной диагностики сифилиса. Дне.. канд. мед. наук. -Алма-Ата, 1989. 211 с.
  2. В. А., Резайкнпа А. В., Тихонова Л, И. Характеристика эпидемиологических закономерное гей, определяющих распространение заболеваний, передаваемых половым путём в России // Вести, дермаго-венерол. 1998. К — С. 4−6.
  3. Александров М В. Пиратннская В, А., Соколовский В. 8. Циклический характер заболеваемости сифилисом и iспецифическая резистентность макроорганнзма // Вести, дерматол. 1997. — № 3. — С. 48−51.
  4. Е. Р, Социально-психологические особенности и их взаимосвязи с рискованным сексуальным поведением больных с приобретенным сифилисом И Рос. журн. кожи, и венер. болезней 1999. — № 4. — С. 17−19.
  5. Афанасьев Е. Н Сравнительная характеристика антигенной структуры рода Brucella. Дисканд, мед, наук, Саратов, 1984, — 173 с.
  6. ЕЛ. Научно-методические аспекты экспреес-лиагностнкн возбудителей особо опасных эоонозных инфекций (чума, бруцеллез. сибирская язва). Дне. .доктора мед. наук. Ставрополь, 20Q0. -307 с.
  7. Л.В., Молочков В. А., Буеверов А.О- Гепатиты как причина серорсзнстентности при сифилисе и ложноположнтельных серореак-ций И Рос. журн. кожн. и венер. болезней 2003. — № 2. — С. 48−50.
  8. И. П., Воробьев А. А^ Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., 1962. — 180 с.
  9. А. В. Клиник о-ссрологнчее кая оценка моднфиннрванного иммуноферментного анализа для серодиагностики сифилиса:: Днсс. кайл мел- наук. М., 1990, — 127 с,
  10. Базнков И, А. Разработка новых препаратов для экспрессных методов диагностики сифилиса. Дис, доктора мед, шук. — Ставрополь, 2000.-200 с.
  11. Р. Ф Совершенствование организационных форм активного выявления больных сифилисом: Днсс. ,. канд. мед. наук. М, 1993. — 234 с,
  12. В.Н. Значение зерен-гранул культуральиой бледной трепонемы для развития этой трепонемы. Дис. ,. канд, мед, наук. — Ставрополь, 1956.- 168 с.
  13. Белнова В, Н, Реакция иммунофлюорссиенини //Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путйм, М, 1987. -С.126−133,
  14. Беднова В Н. Им. муиоферментиый анализ //Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. М: Медицина, 1987. С. 133−138.
  15. В. Н. Лосева О. К. Исторические аспекты серодиагностики сифилиса II Вести, дерматол. 1985. — № 2. — С. 14−20.
  16. H.A., Митина B.C., Вейнблат В. И. Мнкромстод фракционирования и идентификации белков бактерий //Материалы СевероКавказской бнохим. конф. Махачкала, 1970- С.270−271.
  17. A.B., Латышев O.A. Получение 1,-форм бледной трепонемы //Там же. 2003. — С56.
  18. A.B., Тюмснцева И.С, Сравнительное изучение антигенной структуры типичной и L-форм бледной трепонемы в некоторых серологических реакциях //Ставрополь, 2005. 10 с. — Деп. в ВИНИТИ, J&-1434-В2005.
  19. A.B., Тюменцева И. С. Выявление трепонемных L-антител в модифицированном нммуиоферментном анализе // Ставрополь, 2005. II с. Деп в ВИНИТИ, № 1435-В2005.
  20. H.A., Митина B.C. и др, Микрометод фракционирования и идентификации белков //Лэб. дело. 1972, — № 10. — С.514−516.
  21. Бендикене В, Г, Юодка Б, А, Казлаускас P.M. и др. Иммобилизация ферментов на носителях, обладающих магнитными свойствами. Получение и характеристика магнитных производных хитина -«'/Прикладная биохимия и микробиология, 1995. — Т.31, № 4. — С.393−400.
  22. Богомаз В, И, Синтез, свойства и применение новых видов модифицированных лирогенкых кремнеземов. Автореф. дне.. канд. хим. наук.1. Киев. 1982.-21 с.
  23. О.В. Механизм переметенцин бактериальных патогенов //Вести. Рос. акад. мед. наук. 2000. — № 2. — С.43−49.
  24. А. М. Особенности эпидемиологии сифилиса у жителей сельской местности. // Актуальные вопросы бесплодн. браков, обусл. БППП: Тез. докл. респ. научно-нракт. конф. дерм.-вен. и акуш.-гннек. 1−2 дек. 1989. Свердловск. — 1989. — С. 14.
  25. Л.И., Грндчина И. Ю., Пантелеев О-Н. и др. Изучение сорбинонной способности полнетирольных планшетов, используемых в иммуноферменгном анализе // ЖМЭИ. X? 9, — 1989. — С86−89.
  26. В.И., Каминский В В. и др. Иммуноднскэлектрофорез антигенов чумного микроба //Проблемы особо опасных инфекций. Саратов, 1972. — Вып. 26. — С. 196−200.
  27. Вирусные гепатиты: Сборник нормативно-методических материалов. М&bdquo- 1998. С. 126.
  28. С. М. Действие различных препаратов пенициллина на бледную трепонему Дне. доктора мед. наук. Казань, 1954. 378 с.
  29. С.М., Устименко М. М. Получение L-форм бледной тренонемы под влиянием сывороток больных сифилисом //ЖМЭИ. 1964. -№ 12.-С.104−109.
  30. Гамалея 11.Ф. Гетероморфизм бактерий под влиянием солей лития //Врач. 1894. — Т.15-, Na 19. — С.541 -543.
  31. Р. Р. О культивировании патогенных спирохет // Анналы Мечннковского института. 1936, — Т. 4. — Вып.2. — С. 359−364.
  32. P.P., Тутова Л.И, Серологические свойства различных культур бледной спирохеты в опытах с сыворотками крови больных сифилисом //Ученые записки: сб. науч. тр, Ставропольского мед. нн-та, Ставрополь, 1949.-TX-CI37−14I
  33. Г. А. Тест-системы в лабораторной диагностике сифилиса // Вестн. дерматол. 1996. — № 6. — С. 34−37.
  34. Г. А., Аковбян В.А.» Тихонова Л. И. Эволюция лабораторной диагностики еифилнеа //ИППП. — 2002.- С. 35−37.
  35. Дмитриев Г. А.Г Афонин А. В. О возможной причине возникновения ссрорезистенгностн при сифилитической инфекции // Вестник дерматол.- 2003. Яг 2, — С. 47−48,
  36. Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса // Вестник дерматол. 1996. — № 2,3. — С. 29−38.
  37. ГЛ. Галншников Ю. А., Зверева Н.С- Опыт применения нммуноферментного анализа для лаборатоной диагностики сифилиса //Вестн. дерматол. 2000. — № I. С. 6 — 8.
  38. Г. А.т Киселева Т. А. Применение ИФА для серодиагностики сифилиса // Актуал- вопр. дерм, и Венер.: Сб. тр. юбил. конф. поев. 5-летию каф. кож. и вен. болезней педиатр, фак. РГМУ, 5−6 нюня. М., 1997.- С. 36−37,
  39. Д.А., Оловянннков О. В. Количественная постановка мнкрореакиии преципитации с карднолнпиновым антигеном // Вестн, лерма-то-венерол, -1988. 12. С, 44−46.
  40. EpfMKH 8-Ф-. Барабонов Л. Ш., Гаснч ЕЛ. н др. Серологическая и молекулярно-бнологнческая диагностика инфекций, передаваемых половым путем // Вести, дермато-венерол. 2002. — № 2, — С 22−29,
  41. Ефременко В, И, Магносорбенты в микробиологических исследованиях Из-во «Ставрополье». — Ставрополь, 1996- - 131 с.
  42. Ефременко В-И-, Пушкарь В. Г., Трофимов Е, Н" Перов В. Ю. Получение и применение магннтых сорбентов в методах нммуноанапиза микроорганизмов //ЖМЭИ. 1989, — № 12. — С Л 00−1 Об,
  43. И.В. Методологические подходы и разработка биотехнологии иммунобиологических препаратов для диагностики инфекционных особо опасных заболеваний и детекции их возбудителей. -Автореф, дне, доктора бнол. наук. Ставрополь, 2004. — 39 с.
  44. Д.К. Спирохеты при сифилисе //Русский врач. 1905.-№ 23.-С. 741−742.
  45. Д.К. Сифилис, его патогенез и этнология СПб., 1909.-СЛ-17.
  46. Завьялов А. И" Оркнн Б. Ф., Бакулев АЛ-, Румянцева Е, В, Антибиотики резерва в терапии ранних форм сифилиса //Рос. журн. кож, и вен. болезней. 2001. — № 1C.58−6J.
  47. М.И. Метод получения гетерогенных протнвоорганных сывороток с высоким тигром комплемент-связывающих антитет //Лабораторное дело, 1991, — № 5- - С. З15.
  48. Инструкция по лечению и профилактики сифилиса, М., 1976.
  49. Инструкция по постановке иммуноферментного анализа (ИФА) на поверхности твердофазного носителя серо- и ликвороднагностикн сифилиса М, 1988 — С. 18.
  50. Информационное письмо МЗ РФ от 01.02,1955. № 2510/3139 9527. М&bdquo- 1995,
  51. Г. Р., Абдулаев, А Х. Изучение динамики уровня иммуноглобулинов классов G, М, А при экспериментальном сифилисе кроликов //Вест- дерматол. -1976, № 6, — С 30−32.
  52. Г. Я. О природе L-форм бактерий. В, кн.: «Изменчивость микроорганизмов и батериофагня», — М: «Медгиз». 1960. -С. 182−189.
  53. Г. Я., Левашев B.C. О методике получения L-форм гемолитического стрептококка группы, А и их реверсии в бактериальные культуры //Жури, микробнол. 1959. — № 2. — С68−71.
  54. Г. Я., Савенкова В. Т. Методика получения и морфологические особенности L-форм C.diphieriae //Жури, микробнол. I960. — № 3. С.55−58.
  55. Kaj-зн Г. Я., Щеголев А. Г., Прозоровский С-В. О патогенных и нммуногенных свойствах L-форм Styphimurium. полученных пол влиянием псишшллнна //Антибиотики. 1964. — № 8. — С.722−726.
  56. О. А., F-мельянова И- В., Лактионова М- А. ИФА в серодиагностике сифилиса // Современные вопросы дермато-венерологии: Сб. юбил. науч. тр., посвящ, 70-летню обл. кож.-вен. дисп. г- Курска, Курск- -1997,-С 65−67,
  57. Катаев Р. А, Проблемы БППП в условиях перехода к рыночной экономике //Новости лераматол, и венерол, 1998. — № 3, — С, 9−12,
  58. Каральннк Б. В-, Денисова Т. Г., Кешнлсва З. Б. Актнгенсвязы-вающие лимфоциты (АСА) и антитела, а диагностике сифилиса //ИППП. -1999 № 5, -С
  59. Карпенко В, В., Сачков В, И. Обезболивание животных в эксперименте Методические рекомендации — М-, 1985, — 53 с.
  60. Карышсва Л. Л, Разработка и апробация технологии промышленного производства бактериологического пептона in мясо-костных бульонов побочных продуктов мясоперерабатывающих предприятий //Bien. Пол-тав. Дсрж. Аграр. Акад. 2002. — Jfel, — С.66−69.
  61. Ким Э, Г, Особенности нммуногснстнкн и иммуногенеза при сифилисе (клнннко-экспериментальныс условия) — Дне, ,. докт. мед, наук. -Ташкент. 1992. — 282 с.
  62. Г. А., Беднова В, Н&bdquo- Дмитриев Г, А, Постановка ИФА для серодиагностики сифилиса // Вестн дерматол, 1998. — № I С. 39−42.
  63. Коробкова Е, И., Котельников Г Ф. Цитологические наблюдения над В, paratyphi В в процессе диссоциации //Вестн. мнкробнол., эпндемнол. и паразнтол. 1934. — T. XIIL ЯаЗ. — CI 75−187,
  64. Н. Г. Чиненова F. Г. Современные особенности течения врождённого сифилиса // Педиатрия. 3998. — № 3, — С. 61−64,
  65. Г. А. Биологические свойства Listeria monocytogenes. -Дне, канд. мед. наук. М.(1970, — 175 с.
  66. Котлярова Г. А.+ Прозоровский С, В., Бакулов И. А., Чевелев С. Ф Биологические свойства L-форм Listeria monocytogenes //Вестн. АМН СССР. 1969 -№ 5.-С. 84−90.
  67. Котровскнй А- В. Разработка и клиническая оценка методики постановки нммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса: Дис.. канд, мед. наук. М., 1986. 195 с.
  68. Котровсккй А- В., Бсдновз В, Н. Значение иммунных нарушений н патогенезе распространенных н тяжелопротекаюших лерматомикоюв н методы их терапевтической коррекции. М&bdquo- 1982. — С. 167−170.
  69. КрнчсвскнЙ И.Д., Рубинштейн ПЛ. О плеоморфизме бактерий Сообщение III. О плеоморфизме у В. paratyphi abdomoinalis в связи с условиями, определяющими его выращивания //ЖМЭИ. 1936. — Вып. 16, № 5. С.564−575.
  70. Е. С-, Яиуха М- В., Шевченко А. А. Ко1гтроль сифилитической инфекции с помощью чомлыотерного моделирования И Вести, дер-матол. 1998, — № 1,-С. 18−20.
  71. В.И., Селисский Г. Ж., Богуш П1~. и др. Проблема сифилиса центральной нервной системы И Вести, дермато-венерол. 2003. — № 2. -С.63−66,
  72. С .А. Павлова Т. Н. Эвтаназия экспериментальных животных: Методические рекомендации по выведению животных из экспериментов. М. 1985. — 9 с.
  73. Левашов В. С, Генетические механизмы образования L-форм бактерий и перспективы дальнейших исследований //Вести, АИН СССР, 1965, -№ -С39−45.
  74. Левашов В, С. Генетическая характеристика L-форм бактерий, процессов их образования н реверсии. Дне. .доктора мед, наук, М&bdquo- 1966, -315с.
  75. Ломоносов К М, Актуальное шгтервыо Главное в диагностике н терапии сифилиса// Рос, жури, кожн, и вен болезней. 2002. -№ 5. С.56−60.
  76. Лечение и профилактика сифилиса. Метод, реком. — М., 1993.
  77. Лечение и профилактика сифилиса (метод, указания). М., 1999.
  78. О. К. Сексуальное поведение больных енфнлнеом (эпи-демиолошческие и медико-социальные проблемы): Дне,, докт, мед. наук. М., 1991 -280 с.
  79. О. К., Бабкова И. Н- Изучение сексуального поведения мужчин и женщин, заболевших сифилисом (панельное исследование) //Вести, дерматол- 1999. — № 1. — С. 43−45.
  80. О. К., Доля О. В., Чиханатова А. Г. Трансфузнонный сифилис // Новое в трансфузиологии- 1997. — № 18. — С, 55−58.
  81. Лосева О, К,. Нашхосв М, Р. Социальное происхождение, сексуальное поведение, потенциал в распространении инфекций, передающихся половым путём у женщин, представляющих платные сексуальные услуги //Вестн. дерматол. -1999. Яг 2. — С 20−24.
  82. Лосева О, К, Тактамышева ЭЖ, Штульман Д. Р, Современный нейроенфилне: диапюстика, лечение н тактика ведения больных // Рос. журн, кожи, вен, болезней, 999, — № 4, — С.39−44.
  83. Лузан Н, В. Концепция первичной профилактики ИППП у несовершеннолетних II Вести, дерматол, 999, ¦ № 4. — С. 16−18.
  84. И.М. Этиология, иммунология н иммунопатология ревматизма //М-, 1972,
  85. Г. И., Гебенко Т. В. Сифилис во второй половине беременности: особенности диагностики и лечения // Педиатрия, акушерство и гниекол. 1998. — № 3. — С. 88−92.
  86. А.Г., Ванеева Л. И., Даргеева Tj. Проблемы потерн активности сорбированых лнгандов в гетерогенном нммуноферментном анализе // ЖМЭИ. Ni 4. — 1994. — С.52−55.
  87. Методические рекомендации по контролю пептидного состава гидролизатов для выращивания бактериальных культур //Вссрос. гос. НИИ контроля, стандартизации и сертификации вет. препаратов. М&bdquo- 1994. — 7 с.
  88. M. Е, Бабаян К, Р. Реакция РИГА в серологической диагностике сифилиса // Современные проблемы клинической и теоретической медицины: Сб. научи. Трудов. 1998. — С. 152−154,
  89. С.Б., Фомина И. П. Рациональная антибнотнкогерапшг -М., 1982.
  90. А. П, Медико-социальная профилактика венерических заболеваний среди несовершеннолетних- Дис. канд. мед. наук. -Минск. 1989. — 170 с,
  91. П. Г., Старченко M, Е., Касаткин Е. В, Данилов С. И. Новая концепция формирования серорезистентностн при сифилисе // Вести, дерматол. 1999. — № 6. — С. 17−19.
  92. ES. Овчинников И. М., Беднова В. Н., Делекторский В. В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путём. М., 1987. — 303 с.
  93. Н.М., Делекторский В.В, Устименко Л.М.Ь-формы бледной трепонемы (Электронном нкроскопнчес кис исследования) //Вести, дермагол и венерол. 1970. — № 8. -С. 53−57.
  94. Н. М&bdquo- Резникова Л. С, Стоянова О. А, Специфические и неспсцифнческие факторы иммунитета при экспериментальном сифилисе у кроликов //Вест, дерматол, -1980. № 6, — С. 27−28.
  95. Оке май Г. А. Смоловский К., Ном Дж, Математическое моделирование распространения эпидемического сифилиса. // ЗППП.- 1996. -№ З .-С, 21−32.
  96. А. О., Комлев М. В., Левина Т В. и др. Эпидемиология и профилактика сифилиса у Детей //Рос. жури. кожи, н вен. болезней. 2005- -№ 1 -С.35−37,
  97. Олифсрова Э. В, Влияние стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 на основные свойства знтеробактернй //Диагностика, лечение н профилактнка заболеваний сельскохозяйственных животных: Сб. науч. тр, -СтавропольгГСХА, 1998. С.55−58.
  98. Ометов В- К., Авилов Е. II. Капустюк Л. П. Влияние сезонности на распространен не венерических заболеваний в Ростовской области // Вести, дерматол. 1998. — № I. — С. 21−23.
  99. В.К. Моргуль МЛХ. Уразовская Е. В., Крушинекая И. А. О применении нммуноферментного анализа в диагностике сифилиса //Вестн, дерматол. 1997. — № 3. — С.46−47.
  100. Г. Г. Контроль н ликвидация инфекционных заболеваний стратегическое направление здравоохранения //Журн, мнкробнол, -2002а. — № 4. — С.3−16.
  101. В.Ф., Бакулев АЛ., Румянцева Е. В. и др. Резистентность клинических проявлений вторичного сифилиса и специфической терапии //Рос, журн. кож. н вен. болезней. /1999. — № 2. — С. 44−45.
  102. Петрншина С, В, Лабораторная диагностика сифилиса //Российский журнал кожных и венерических болезней. -№ 2, 2004, — С.46−49.
  103. Патрушева Н, Б, Рогачей Л. Н., Дегтярева Г. Н., Бсйкин Я, Б. Скри-нннговый КСР для диагностики сифилиса // Клин. лаб. диагност. 1997, — N" 6. — С. 66−67,
  104. Пожарская В. О, Особенности иммунного ответа кроликов на введение антигенов из бледных трепонем //Тез. докл.7 Всерос. съезда дерма-тол. и венер. Казань. — 1996, — Т. 3, — С. 73−74.
  105. В. И. Иммуноферментный анализ: современное состояние и тенденции развития // Медицинская генетика н иммунология. -М., 1986 С. 4−5.
  106. Н.С., Потекаев СЛ. Заметки к этнологии и патогенезу сифилиса /.'Этнология н патогенез сифилиса 2002. № 1. — С.63−68.
  107. Практическая химия белка: М, — Мир, 1989, С.300−301,
  108. Приказ Хз 1179 от 10 октября 3983 г, «Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения, М&bdquo- 1983.
  109. Приказ Министерства Российской Федерации X? 87 от 26,03.01 „О совершенствовании серологической диагностики сифилиса“ 51 с,
  110. Прозоровский С. В, Бактериологические свойства 1.-форм патогенных стафилококков. Дне. канд. мед. наук. — М.&bdquo- 1959. — 135с,
  111. С.В. Проблема патогениости Ь-форм бактерий н миконлазм. Дне. ¦¦¦ доктора мед. наук. — М.+ 1970. — 320 с,
  112. И. И. Синтез моноднсперсных функциональных полимерных микросфер для нммуноднагностнчсскнх исследований. // Успехи химии 1996.-Т. 65.-№ 2--С. 178−192.
  113. А.Н. Сифилис, — Руководство для врачей, С.-Г16.: „Питер“, 2000,-184 с.
  114. Родионов Ш1&bdquo- Третьяков В-В. Колларгол и протаргол, свойства // Препринт: коллоидное серебро. Физнко-хнмнчсскнс свойства. Применение в медицине. Новосибирск, (992- -С.5−14,
  115. Н. Р, Основные аспекты аутоиммунного заболевания. Механизмы иммунопатологии,-М» 1989, С. 165−180
  116. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней /Под ред, К. И. Матвеева. М.: Медицина, 1973. — 623 с.
  117. Санофи Диагностике Пастер. Стандартизация методов исследования сифилиса // Информацнонно-мегодичеекое пособие.- М., 1998. — 23 с.
  118. A.B., Маликов В. Е., Бурова A.A. и др. Аспекты использования иммуноферментного анализа в серологической диагностике сифилиса //Клиническая лабораторная диагностика. 1999. — № 11. — С, 22−23.
  119. С.М. Пептоны используемые в микробиологии (Использование в качестве компонентов питательных сред). М., 1988. — 33 с,
  120. Серегин С В., Бедавнн П. Б., Бабкина И-Н- и др. Получение ре-комбннантных антигенов Trponema pallidum и их применение в нммукофер-ментной диагностику сифилиса // Веста, дерматол, 1979. — № 8. — С, 48−51
  121. С.В., Белавин П. Б., Бабкина И. Н. и др. Получение ре-комбинантных антигенов Treponema pallidum и их применение в иммуиоферментной диагностике сифилиса, // Вести, дерматол 2000. ¦ № 2. С. S 8.
  122. Т. И Опыт культивирования бледных трепонем ив тиогликолевой среде H Вести, дермам". 1979. — Ns 8. — С. 48−51.
  123. В.В., Чеботарев В. В., Чеботарева Н. В. Сифилис в пенитенциарной системы //Ставрополь, 2003. 166 с.
  124. Е. В., Ляхов В. Ф. Значение определения гфотивотре-лонемных IgM-антител в серодиагностике сифилиса. //Бюллетень ассоциации САНАМ «Инфекции, передаваемые половым путем». 1995. — № 4. — С, II* 13.
  125. Скичко IL Д. Гидролнзаты животных белков основа питательных сред для промышленного производства биопрепаратов: Авторсф. дне. доктора биол. наук. М. т 1992. — 49 с.
  126. Скрнпкин (O.K., Курбаиова A.A., Шарапова Г. Я, СелникнЙ Г. Д. Инфекции, передаваемые половым путем. Практическое руководство //М.- «МЕДиресс». 1999, — 361 с.
  127. Скрипкнн Ю, К, Резайкння А, В, Иммунопатологические механизмы патогенеза хронических дерматозов: М, 1997, С. 94−98.
  128. Соколовский Е, В. Серологическая резистентность после лечения сифилиса: (причины и факторы развития, профилактика н лечение): Автореф. дис., докт, мед. наук. С-Пб. — 1996. — 40 с.
  129. К.Г., Чибнсова В. А, Ш ахании, а К.А., Походзей И, В, Новый количественный нммуноферментный метод определения IgE с помощью специфического сефарозного иммуиосорбента н люминесцентного микроскопа //ЖМЭИ 1931, — № I — С.85−88.
  130. Е. С., Смстанина С. Е., Максимов В. А. Прямая детекция ДНК Tr.pallidum в клиническом материале и крови доноров методом ПНР с гарантией достоверности отрицательного результата // Вести, службы крови России 1998. — Ne 3--C.18−2I.
  131. Сухова Л, П., Машеро В. В., Войнова H.H. Опыт применения ИФА-тест-систем с использованием рекомбннантных белков в диагностике сифилиса //Бюллетень ассоциации САНАМ «Инфекции, передаваемые половым путем». ¦ 999 № 1. — С.34−35.
  132. A.M., Пономарева А. М. Изучение сорбцнонных свойств полнстироловых планшетов, используемых в нммунофермснтном анализе //ЖМЭИ. 1987. — Jit 9. — С. 18−22.
  133. Сызраниев П И, Простые способы вычисления основных статистических величин. // Социалистическое зерновое хозяйство. 1938. № 3- -С, 185−203.
  134. В.А. Химические реакции с участием поверхности кремнезема //Кремнеземы в медицине и биологии: Сб. науч. тр. Киев-Ставрополь, 1993. — С.41−51.
  135. В.Д. Изменчивость микроорганизмов и бактериофагов.1. М. I960. -С/Мб.
  136. Тнмаков В. Д, Каган ГЛ. Биология L-форм бактерий //М.: «Мед-гнз», 196I.-C.67.
  137. Тнмаков В, Д., Каган ГЛ. Семейство Mycoplasmataceae и L-формы бактерий // М. «Медицина», 1967. 335 с.
  138. В.Д., Каган Г.Я, L-формы бактерий и семейство Mycoplasmataceae в патологии //М.: «Медицина», 1973. -С. 18−19.
  139. Г. Ф. РПГА в серодиагностике сифилиса: Днсс. докт. мед. наук. М. — 170с.
  140. Л. И. Общий обзор ситуацни с инфекциями, передаваемыми половым путём // Вести, дерматол. 1999. № 2. — С, 4−7.
  141. В.К. ИФА диагностика сифилиса. — Информационно-методическое пособие. — Кольцове, 999. — 30 с.
  142. . С. Клинико-эпндемиологнческая н социально-личностная характеристика больных сифилисом, а Северной Осетии. // Вестн. дерматол. 1995. — № 6. — С, 24−25.
  143. И. С, Жданова Е. В., Афанасьев Е. Н. Усовершенствование производственной схемы иммунизации животных моно- н полнком-понентнымн антигенами // Рукопись деп. в ВИНИТИ № 2507 В 94 от 04. 11. (994.
  144. И.С. Научно-методические основы конструирования и усовершенствования производства диагностических тсст-снстсм для выявления возбудителей особо опасных н других инфекций: Автореф. лис.. доктора мед. наук, — Саратов, 1996. -57 с.
  145. И.С., Базикоа И. А. Белнченко A.B. Получение L-форм бледной трепонемы и определение антител к ним в нммуноферментном анализе //Методические рекомендации. Ставрополь, 2005, — 15 с.
  146. Урбах В, Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях: М., 1975. 296 с.
  147. Устименко Л. М, Получение L-форм бледной трепонемы. -Дне.. канд. мед. наук. Казань, 1964, — 187с.
  148. Устименко Л. М, Факторы, ведущие к L-трансформацнн бледной трепонемы // ЖМЭИ. -1965, № 1. — С.107−111.
  149. Л.М. Резистентность культуральной бледной трепонемы к пенициллину //Материалы Всесоюз. конф. по химиотерапии инфекционных болезней, Ереван, — 1969. — С. 129−130,
  150. Л.М. Влияние сывороточного фактора на чувствительность культуральной бледной трепонемы к пенициллину и на et способность к L-трансформацнн //ЖМЭИ 1972. — № 5. — С, 116−119
  151. Л.М. Особенности морфогснеллеза L-форм бледной трепонемы //Актуальные вопросы теоретической н практической медицины: Тез. докл, науч, конф. ни-та. Казань, 1983, -С.20 3−204,
  152. Л.М. Особенности морфогенеза L-форм бледной трепонемы н зталы нх реверсии //Вести, дерматол н венерол, 1975. — № 2. — С, 36−40.
  153. Федерольф А-Е. Влияние хлористого натрия на бактерии //Врач.1995. Выл 16,№ 39.-С.3084−1086.
  154. Фриш Н. Ф Современные критерии дифференциальной диагностики сифилиса и ложиоположительных результатов стандартных серологических реакций на сифилис. Дне-. — - доктора мед. наук. — М., 2001.
  155. Н.В., Комарова В. Д., Обряднна А.П, Бурков А. Н, Сравнительные результаты иммупофермеггтного анализа, реакции пассивной гсмагтлютннаини и микрореакцнн в серодиагностике сифилиса // Вести, дермато-венерол 2000. — № 4, — С.34−36,
  156. H.B., Никулин H.K. Клиническая интерпретация результате! иммуноферментного анализа н мнкрорсакини преципитации в серодиагностике сифилиса //Вести, дерматол. и венерол. 2004. — KiI, -С.28−29,
  157. Хамаганова И. В, Коишна М. В., Пивеиъ ИЛ, Розанова Р, Ю. Структура заболеваемости сифилисом на примере случайной выборки в Москве //Российский журнал кожных н вен. болезней. № 6, — 2004. — С, 58−60,
  158. Щ.Ф., Внлнханов У. А., Балтабасв М К. Особенности эпидемиологии, современного течения к лечения раннего приобретенного сифилиса // Вести, дермато-венерол, 2004, — Кч 2, — С. 55−57.
  159. Церанди Н- Ф., Мажннков А. Г., Короткое Н. В, Актуальные аспекты серорсзнстентности у больных сифилисом, // Бюллетень ассоциации САНАМ «Инфекции передаваемые половым путем» 1998. — № 4. — С. 23−26.
  160. В. В, Индустрия секса, нравственно-этическое, половое воспитание нерешённые проблемы, // Вести, дерматол. 3999. — № 3. С. 29−30.
  161. Чеботарев В В. Земцов М-А., Павлик Л. В., Лукьяненко Н. В. К выходу Методических указаний № 98/273 от 28.12−98 «Лечение и профилактика сифилиса» //Рос. журн. кож. н вен. болезней. 2000. — Ns2. — С-61 -64.
  162. Чеботарев В, В., Иванисова О. П., Чеботарева Н. В. Фармвкокинс-тическне профили пенициллина в сыворотке кровн при лечении больных сифилисом различными препаратами пеницнллинового ряда // Рос, журн, кож, и вен, болезней, -2003. -№ 3,-С.58−61.
  163. Чеботарев В, В" Павлик Л. В, Повторные заражения сифилисом //Вести, дерматол. 1996, 4. — С, 46−49,
  164. В.В., Павлик Л.В, Гуджиева О. Д, Экстрагенитальные и биполярные шанкры казуистика нлн повседневность? // Вести, дерматол, — 1999. -№ 3, — С. 56−58.
  165. Чеботарев В. В, Павлик Л. В., Земцов М. А. Особенности течения сифилиса в период эпидемии //Вести, дерматол. 1999. — № 6. — С.56−58.
  166. Шахашша KJL, Соколенко A.A., Павлова И. П. и др. Выбор критериев пригодности твердофазных носителей на основе полистирола для проведения нммуноферментного анализа // ЖМЭИ. № 9. — 1987, — С .8−11,
  167. Г. Э., Протопопова Н, Е&bdquo- Юмикова В. В К проблеме ложноположнтелькых результатов серологических реакций на сифилис // Актуальные вопросы венерологии: эпидемиолога, клиника, лечение и профилактика: Тез, конф. Горький, 1986, -С. 45−49.
  168. К. Л. Магрунов Б.Л., Парпнев З. А., Реймназароиа Т. Д. Беременность и сифилис И Вестн. дермато-венерол. 2003, — № 3. — С.34−35.
  169. .Г., Зурочка A.B., Биргер Л.А.Г Егорова В. А. Частота рековалесцснтного hoch! ельства у больных ранним скрытым сифилисом после пенициллинотерапии //ИППП, № 1. — 2001. — С, 33−35,
  170. Яцуха М, В&bdquo- Аковбян В, А. Эпидемическое значение активного выявления больных сифилисом в соматических стационарах //Современные проблемы дермато-венерологнн: Сб, науч, тр. Курск. — 1994. — С, 16−18.
  171. М. В&bdquo- Кодырева Л.Д., Бобков И. Н., Аверина В. И. Сифилитическая инфекция в России в пернол бурного развития и угасания эпидемического процесса //ИЛИ № 1. -2002, — С.4МЗ.
  172. Alderete G. T. t Freeman-Shade L., Baseman G. B. Immuno diagnostic test for detection of serum antibody to treponema pallidum (Syphilis): fi-bronection as a capture vechicle for treponemal adhesins U J. Immunol. Meth. -1985. Vol. 84. 1−2.-P. 365−373.
  173. Antom G., Dal Maso G., Berti B. et al. Detection of antigenic determinants in the Treponema pallidum membrane protein Tmp A using overlapping synthetic peptides // I. I mmunol. Meth. 1996. — Vol. 189. — № I. — P, 137−140,
  174. Augenbraun M., Rolfs R" Johnson R.L. Treponemal specific tests for the serodiagnosis of syphilis. Syphilis and HIV Study Group // Sex. Transm, Dis, -1998. VoL25(lO). — P. 549−552.
  175. Backhouse J. L-, Hudson B. J. Evalution of immunoglobulin G enzyme immunoassay for serodiagnosis of yaws Hi, Clin. Microbiol. 1995. -Vol. 33, — № 7. — p. 1875−1878.
  176. Bailey M- G, T Penrv C- N" Cockayne A. Evodcncc for the presence of lipo poly sac hantle in Treponema phagedena (biotype Reiter) bat not m Treponema pallidum (Nichols)// FEMS Microbiol Lett 1985. — Vol. 27. — № I. — P. 117−121.
  177. Bazikov I.A., Belicbenko A.V.r Latysbev O.A. Obtaining morphological characteristics of L-forms of the treponema pallidum //European Academy oa Dermatology and Venerology JEADV 2003.- V. I7 (Suppl.l). P.63.
  178. Balic-Winter A., Kansky A. Scrolo. ska dijagnostika sifilisa //Lijecji.vjens, 1985. — Vol. 107. — № 1−2. — P. 92−94.
  179. Bayer M.E. The locations of defective synthesis in the wall of Escherichia coli after penicillin treatment // International Cungress for microbiology Jth Abstracts of Papers' Oxford^-1966, -PJ7−86.
  180. Bayer M. E, Response pf cell walls of E. cotli to a sudden rcductiom of (he cnviromctal osmotic pressure //J. Bad. 1967. — V.93, — P. I 104−1112.
  181. Bccbc G. L-, Nouri N. G, Comparative evaluation of commercial fluorescent treponemal antibody-absorbent test kits // J, Clin. Microbiol. 1984. -Vol, 19.-№ 6 -P 789−793.
  182. Berg R. N. Duncan W. P., Thornton C. G. Antigen analysis of cultivable Reiter and Nichols treponcms H Br, J, Vencr, Dis.- 1972. Vol. 48. — № 6. -P. 489−495.
  183. Canne fax 0. R, Garson W. Reiter protein complement fixation test for syphilis // Publ, Health. Rep. 1957. — № 72. — P. 335−340.
  184. Chermesky M-A. Nucleic axid tes-ths foediagnosis of sexually translated deseasis //FEMS Immun. Med. Microbiol. -1999.- N24. P.437−44S.
  185. Christiansen A, H. Studies on the antigenic structure of trcpcncmcs cspccial ly the polysaccharide fraction // Danich. Med. Bulletin. ¦ 1967. № 14-P. 03−109.
  186. Cohen M, Panos C. Membrane lipid composition pf streptococcus pyogenes and derived L-form //Byochemestry. (966. N 5. — P. 2385.
  187. Coons A.H., Kaplan M. H, Localisation of antigen in tissue celts 1/ J. Exp.Med. 1950.-V, 9l, N 1.-P.81−89,
  188. Cox D.L. Culture of Treponema pallidum / /Methods-Enzymol. -1994. Vol. 236. — P. 390−405.
  189. Cox D.L. Akins D.P., Poreella S.F. et al. Treponema pallidum in gel microdroplets: a novel strategy for investigation of treponemal molecular architecture // Mol. Microbiol. 1995. * Vol. 15. — № 6. — P. 115M164.
  190. Cnstian C. L., De Simore A. R. Abru&sof L. Anti-DNA antibodies in hyperimmunised rabbits tt J. of exp. Med. 1965. — Vol. 121. — № 2. — P. 309 321.
  191. Czaja A.J. Autoimmune hepatitis //Handbock of liver diseases 1998. -P.63−83.
  192. Dischc Z. Uber uniae пегт characteristische Farben reactionen der Thismonuelein Saure und ecne mikromethod zur Bestimmung der selben in tierischen Oroanen mit Hilpcdieser Reaktionen // Hikrochem. 1930. — № 8. — P. 432.
  193. Dicncs L., Weinberger Ш, MasolTS. The transformation of typhoid bacilli into L-forms under various conditions It J.Bactenol. 1950. V.59. P.755−760.
  194. Dienes L., Weinberger HJ. The L-forms of bacteria'/BacL Rev.1951- V.15.-P.245−258.
  195. Dimowa E. Nikolowa S., Gousterova A. rNedkov P. Enzyme peptone for microbiological purposes, obtained from extracted eacf skin //Biotechnol. biotechnol. Equipm, 2001, — T, 15 — № 1 — Р.99-Ю2.
  196. Dornach A. Autoantibodies in syphilis and chromic biologic false positive reactions // Sex, Transmit. Dis. London: Academic Press. — 1976, — P. 210−214.
  197. Egglcsttone S.L. Turner AJ. L, (Эгглстоун С. И" Тернер АД^кЛ. Серологическая диагностика сифилиса //ИПГ1Г1, 2001, — № 3, — С.4−9.
  198. Edward D.G.Thc pleuropneumonia grop of organisms: a review togeter with some new observations //J. gen, Microbiol, 1954, — № 10, — C.27.
  199. Eislcr M. Uber Wirkungen von Salzen auf Bakterien //ZbLf. Bact, I AbL Orig. 1909.-V, 51. V 5, — P, 546−564,
  200. Engvali E. t Perlmann P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISAy HI. Quantitation of specific antibodies by enzyme-labelled antnmmunoglobulin in antigen-coated lubes H J. Immunol. 1972. — V. I009T № 9. — P. 129 135.
  201. Farchy C.E., Hunter E. F" Larscn S.A. «al. Double conjugate enzyme-linked immunosorbent assay for immunoglobulins Gand Maganst Treponema pallidum. // J. din. Microbiol. 1984, — Vol. 20. — № 6. — P. 1109−1113.
  202. Fostrom L. Reiter protein complement fixation (RPCF) test as a serological test for syphilis//Acta dermalo-vcncrologica. 1967. — Vol. 47, ¦ P. 165 171.
  203. Fromm G, Spirochatcn Antigene in der Serolog, diagrvostik der Syphilis //Arzt. Wochcnschr. — 1954. -№ 9. — P. 639−641.
  204. Gasponi A., Nedosant M. Fosti A. ei al. Valutasione di unnuovo mc-todo immunoenznnatico per la dimonstrazione dellc IgM-trcponcma specifiche nella sifilidc umana // J. of Hal. Dermatol, -1988. Vol. 123. 3, — P 113−1(6
  205. Godzeski C.W. In vivo pctsistacnce of L-phasc Bactena //В кн.- L. Guzc Microbiol protoplasts and L-fotms Baltimore, — (968. P. 39, 379.
  206. Goodhort G.L. Use and Interpretation of serologic Tests for the Diagnosis of Syphilis // Suoth met. J. (983. — Vot, 76. — P. 373- 379.
  207. Grob J J., Boncrand Y, J, Anli phospholipid antibodies and anti phospholipid antibody sindrom! t Ann. Dermatol. Vencrol. (986. — Vol. 113. — X? 9. -P 811−818.
  208. Hayaski K., Seino A. Bacteriolytic enzyme produced by streptomyccs sp //I. Termcuf. Technol/ 1981. — Vol. 59. — № 4, P.319−323,
  209. Hardi P. H. Fredericks W. R, Nell E. E Isolation and Antigenic characteristics of axial filements from the Retter Treponema // Infect Immun. -1975.11.- P. 380−386
  210. Hijmans V., van Bovem C.P., Clasener H.A. L. Fundamental Biology of the L-phase of Bacteria II B kii.: L.Hayflic. The mycoplasmatalcs and L-phase of baclcria/ New York. 1969. P.68.
  211. Horvath I., Puskas Et Horvath A. et al. Autoantibodies in immune defense agamts cholisterol // Orv. Hetil. 1994. — Vol. 135. — № 5. — P. 965−968.
  212. Hofschneider P.N. Uber Phadenadsotption hi „large bodies“ von E. coli Die L. FoTme Bacterien //Mtschr.Dtech Acad. Wiss. (Berlin) I960. V, 21.1. P. 36,
  213. Ito F., Hunter E.F., George R.W. et al. Specific immunoiluorcsccnt staining of pathogenetic lreponc"nes with a monoclonal antibody // J. Clin. Microbiol. 1992. — Vol. 30. — № 4, — P. 831−838.
  214. Kagan B.M. Antibiotic sensitivities of staphylococcal L-forms //B kk.: Cuze L. Microbial Protoplasts, Sferoplasts and L-form Baltimore ¦ 1968. -P.314.
  215. Kagan B.M. Role of L-iorms in staphylococcal iufection //B km.: Cuze L. Microbial Protoplasts. Sferoplasts and L-form Baltimore 1968a. -P.372.
  216. Kagan G.Ja. Comparative study of the patogemxity of bacterial L-forms and tmcoplasma organisms II Proceedings mtcrobiolisf Budapest — 1964.-P375.
  217. Kell P.D., Barton S. E» Sammerbeil C.D. et al. Sexually transmitted diseases in HIV-1 seropositive mof. cn at presentation U Int. J, STD AIDS. -1991. Vol. 2. — Ns 3. — P. 204−206.
  218. Klicncberger E, The natural occurence of pleuropncumonia-Uke organisms its apparent symbiosis with Streptobacillus moniliformis and other bacteria Hi. Pathol, Bad. 1935. — V. 40. — P 93−105
  219. Kliencberger E. Further studies on Streprobacillus moniliformis and its symbiont //J. Pathol. Bact. 1936. — V.75, N I — P. 587−592.
  220. Krembell J., Deluzarche A-, Minck R, Sur les lipids des formes L. stable du Proteus p. 18. G.R.//Acad Svi. (Paras). -1961. V.25, — P.2005.
  221. Landman O.E. Ginoza H.S. Genetic nature of stable L-forms of salmonella paratyphi //J.Bact. 1969.- V. 99. P.579
  222. Lapmski E.M., Flakas E.D. Induction of L--forms of Haemophilus influenzae in culture and their demonstration in human bronchial secretions //J. Bact 1967 — V.93 — P. 1438.
  223. Larscn S. A., Steiner B. M. Rudolph A, N. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis // Clin Microbiol Rcf 1995. — Vol. 8, — № I, -P. 21−22.
  224. Lee Y.B., Farshy C.E., Hunter E.F. et al. Detection of immunoglobulin M in cerebrospinal fluid from syphilis patients by enzyme-linked immunosorbent assay // J. Clin. Microbiol. 1986. — Vol. 21. — Ns S. — P. 736−744.
  225. Lefevre G.C., Prere M.F., Abba! M. Learvng M B. Quantitative evaluation of the FTA-abs IgM rntrcated and untreated syphilis // Ann, Dermatol. Venerol. -1983. Vol. 110(5). — P. 426−430.
  226. Levaditi C, Schoen R., Sanchis-Bayarn M.V. Ije cyste evolutif du «Treponema paltidim» //Bull. Acad. Pc Medicine. 1927, — V 97m N 30, P. I49-I52.
  227. Levaditi C, Vaisman A. Cycle evolutif du Trcponened psllifum //Comptrend. Soc, boil. 193S.-V.t57. tri. — P. 194−197
  228. Levaditi C, t Vaisman A., Schocn R., Mezgcr J.C. Nouvelles recherches expcnmcmtales sur la sy syphilis, Cycle evolutif du virus syphilique, Neurosyphilis. Virulence du «Treponema pallidum"//Ann, Insr, PasL 1933. — V. 50, N 2. — P.222−269
  229. Levaditi C-, Vaisman A» Schoen R, Rexherches experimentales sur la syphilis. E ludc palhogcniquc de la neurosyphilis (Troisieme me’moire) // Ann. Insr, Past. 1936.- V .56, N 5. — P.481−510,
  230. Madofi S. Dicncs L. L-forms pncumococci //L Bact. 1958. -V.76. P 245−250.
  231. MadofFSn, Burke M.E., Dicncs L, Induction and mdentiflcation of L-forms of bacteria //Ann. N. Y Acad, Sci, 1967, V.143. — P. 755.
  232. Mattman L.H., Mattman P, E. L-formes of Streptococcus faeealis in septicemia //Arh. Intern, Med 1965. — V. 115. — P.315.
  233. Matzuschita T. Die Emvirkunf des Kochsakgemaltes des Nahrbodens //2ml, Hyg' 1900. — V.35, — P.495−508.
  234. Mink R. Organisms du type de la peripneumonia des bovides wet formes: des bactenea //Rev. Immunol. (Paris), 1955. — № 9. — P. 86.
  235. MoldayR-S., Jen S.P.S., Renbaum A. Application of magnetic microspheres tn label ind and separation of cell // Nature. 1977. V.268. — P.43 7−438.
  236. Morrison-Plumier T., Aldcrtc Y.F., Bascmon J.B. Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of scrum antibody to on the membrane protein of T. pallidum // BriL J. Vener Dis, -1983. Vol. 59. — P. 75−79.
  237. Ncrmut M.V. L-cyclus baclern, jene biologisky lekarsky vyznam. -Praha, I960.
  238. Ouchtcrlofly O. Antigen-antibody reactions in gel // Acta Path. Microbiol, Med. 1949 — Vol26, — P 507−515.
  239. Panos C, A microbial enigma mycoplasma and bacterial L-forms, Cleveland. 1967
  240. Pans-Hamclin A, Loupy G." Vaisman A., Deregnancourt G- Recherche et dosage des IgM trcponemiqucs par unc mcthodc immunoenzymctogiquc (ELISA), Comparaison avec 1c FTA-Abs-IgM et Ic SPHA modific // Fcuiil. biol. -1985. Vol. 26. — № 145. — P. 13−19.
  241. Petersen C, S. Pedersen N. S" Axelscn N. H. A simple method for the isolation of flagella from Treponema Reiter // Acta pathol et microbiol. scand -1981. Vol. 89. -№ 6. — P. 379−385,
  242. Peterson C. S., Pedersen N. S., Axclsen N. H. Purification of a Reiter treponemal protein antigen that is immunologically related to an antigen in Treponema pallidum (DNA) // Infect. Immun. -1982. Vol. 35. — № 3. — P. 974−978.
  243. Pokrovskaja M. Zytotogischc Bcibachtungcn uber den Dissoziation-sprocess def PestbaziHen //Zbl. Bakter. 1931. — V. 10, N 119. — P 353.
  244. Pucilow K. r Zajac W Biologisch falschpositive seren in der diagnosis // Derm. Moschr. 1980. — Bd.166. — X° II. — P. 713−721.
  245. Quinn T.c. Recent advanced in diagnosis of sexually transmited diseases // Sex. Trans. Dis, 1994, — N 21. — P. 19−27.
  246. Radolf J. D. Treponema pallidum and quest for outer membrane proteins // Moll, Microbiol. -1995. Vol, 16. — P. 1067−1073.
  247. Radolf J.D., Robinson EJ-, Burcll K. W ct al. Characterization of outer membranes isolated from Treponema pallidum, the syphilis spirochete //Infect Immun 1995. — Vol. 63. X? 11, — P. 4244−4252.
  248. Rossemh O.L. Arese N. L, Boschiroli M.L., Cravcro S.L. Colomng of Brucella abortus gene and characterization of expressed 26-kilodalton peripasmic protein: potential use for diagnosis //J.Clin, Microbiol -1996, Vol.34, N 1. -P. 165−169.
  249. Rubio-Hucrtas M-, GonzalesVazques C. Morphology and patoge-nccity of L-forms of Clostridium teiani induced by glycine //Ann N.Y. Acad.Sci. I960. -V. 79, — P.629−703,
  250. Saiton M R., The Bacterial Cell Wall. Amsterdam. 1964.
  251. Sehaudinn F., Hoffman F. Vorlaufigen Bericht uber das vorkommen von Spirochcalcn in syphilitischen krankjcils produeten und dei Rupp Papilloncn //Arb. a. Kaiserl, Gerund, 1905, — № 22, — P, 527−534,
  252. Scvars A. H, t Schasfoart R. B, f Salden M H An immunosensor for syphilis screening Based on surfacc plasmon rcsonans // Bioscns, Bioclectron, -1993. Vol. 8. — № 3−4 — P. 185'189,
  253. Simon M" Milward F" Lcfebvcrc R ct al. Spirochetes: vaccines, animal models and diagnostics // Res. Microbiol- 1992, — Vol. 143, ¦ P.641.647.
  254. Simon M" Molincdo R. Diagnostic de la Syphilis par la recherche du granule spirochitogme //La Presse Mcdicalc 3940. — N 48. — P. 513−516.
  255. Smith P, F. Comparative physiology of plcuropncunonia like and L-type organisms //Bact. Rev., 1964. — N 28. — P.97.
  256. Smith P.F. The Physiologi of Mycoplasma // B kh, — C. Panos A mi-crobiol enigma mycoplasma and bacterial L-forms Cleveland. 1967, — P. 74.
  257. Steibuch G., Andran R. The isolation of IgG from imanahon scrra with the acid of capnhc // Arch. Biochem. Stray and Btophys. 1969. — Vol.139. -P. 279−284.
  258. Stienstra S., Peelers T., Van der Straaten A.M. Kadir N. Treponema pallidum membrane protein A ELISA: a new test for screening and diagnosis of syphilis // Beitr. Infusionsther. 1992. Vol.30, — P.85−91.
  259. H. (IllTopu X.) ILMMyMOtJj-iyopecueHUMS /Mmm>ho-jiorhhcck'hc mctojuj M-: Mean unna, 1987. — C. 128−148.
  260. Tanaka K-, Shinoda, Takai N. et al. The preparation of mesoporous silica gel and the nattrc of Chcm //Soc. Jap. 1980. — Vol.53. — № 5. — P. 12 421 246,
  261. Tulasnc R. Bilan de nos connaissances sur les cycles bactcnens du Type L el sur les formes L des bacteries //Biol. Med. 1955 — V.45 — P. 391
  262. Tulasne R-. Lavillaureix J. Sur une variante microbienne geante go-mogenc et stable issue de hactcnes du genre vibrion //Swcir Z allg. Path. -1957. N 20. — P.608.
  263. Tulasne R. Lavillaureix J, Fitration et ulrafiltration d’une souche de forme L. fixees C.B. //Acad. Sei (Paris). 1958. — V 246. — P.2396.
  264. Vaisman A., Hamelm A. Les antigenes treponemiques dans le serodiagnostic de la syphilis // Presse med, 1958. — № 66. — P. 1357−1358.
  265. Vavrova M, Shalopka J. Regeneration of cell wall at Bacillus spheroplasts//International Congress for M trobiology 9* Abstract of Papers, Oxword. 1966. — P.95−115.
  266. Vendrelly R. La notion d' cspece a travers de quelques donnees biochimiques recentes et le cycle L. //Ann. Inst Pasteur, 1958. V. 94. P. 142.
  267. Vendrelly R., Tulasne R. Chemical constution of the L-formes of bacteria //Nature London. 1953. N 171, — P. 262.
  268. Vila P., demander M. C, Lopez-Fernandez M.F. et al. Prevalenee, follow-up and clinical significance of the anticardiohpm antibodies in normal subjects // Thromb-Hemoctr. 1994. — Vol.72. — № 2. — P. 209−213.
  269. Wachter M.S., Johnson R.C. Treponeme outer envelope: Chemical analysis//Proe. Soc. Exp. Biol, and Med. 1976. — Vol. 151. — Xa 1. — P. 97−100.
  270. Warburg O., Christian W. Isolierung and Kristallisation des Garug-stcrmcnls Enolase // Biochem, J. 1941. — V 310. — P. I 120−1122,
Заполнить форму текущей работой

На отлично!