Разработка биопрепарата и бактериологической тест-системы для типирования Bordetella Bronchiseptica

Актуальность темы

Bordetella bronchiseptica — инфекционный агент, вызывающий бордетеллез домашних животных.

Бордетеллез — высококонтагиозное, инфекционное заболевание мелких домашних животных, характеризующееся общим недомоганием, развитием острого воспалительного процесса слизистой оболочки респираторного тракта, сухим, болезненным кашлем, рвотой, прогрессирующим исхуданием и гибелью животных СLopez, 1952; Pittman, 1984; Deeb et al., 1990; Dugal et al, 1991). Первые сообщения об ассоциации бордетеллеза с другими болезнями собак были сделаны в начале XX века, значительный процесс в понимании болезни наблюдается в последние десятилетия {Molina Gonzalez, 2006).

В нашей стране указанная болезнь не изучена, диагностируется как патология невыясненной этиологии, и методы лабораторной диагностики бордетеллеза домашних животных не разработаны.

Для разработки бактериологических схем и методов идентификации возбудителя возникает необходимость создания селективно-диагностической среды, тест-системы, конструирование антигенного биопрепарата для антигенного типирования бактерий вида В. bronchiseptica. Создание системы бактериологической диагностики бордетеллёза, включающей комплекс бактериологических и антигенных тестов, позволит своевременно и качественно выявлять и идентифицировать микробный агент и, следовательно, эффективно назначать лечебно-профилактические мероприятия.

Работа является частью комплексных исследований кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия» (номер Государственной регистрации 0120.1 157 936).

Цель и задачи исследования

Цель — разработка антигенного биопрепарата и тест-системы для бактериологической идентификации бактерий вида В. ЪгопсЫьерйса выделенных у домашних животных.

Исходя из цели исследования, были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать биологические свойства характерные для В. ЬгопсЫяериса, и на основе полученных результатов предложить для решения поставленной цели микробиологические тесты.

2. Создать антигенный биопрепарат для типирования бактерий вида В. ЪгопсЫяерНса по антигенному составу.

3. Сконструировать селективно-диагностическую среду для выделения и первоначального типирования бактерий В. ЬгопсЫзерИса по культуральным и биохимическим свойствам.

4. Разработать схему выделения и идентификации указанной бактерии от домашних животных.

5. Разработать нормативно-техническую документацию:

— на схему выделения, дифференциации и идентификации В. ЬгопсМяер11са;

— на изготовление антигенного биопрепарата.

Научная новизна. Впервые создан биопрепарат для антигенного типирования микроорганизма В. ЪгопсЫзерйса. Впервые разработана схема выделения и тест-система идентификации бактерий В. ЬгопсЫБерИса от домашних животных.

Практическая значимость работы. Изучены биологические свойства (ферментативная активность, восприимчивость к красителям, культуральные свойства, устойчивость к химическим и физическим свойствам), на основании которых предложены для ветеринарной практики микробиологические тесты для типирования бактерий вида В. ЬгопсМзерНса. Разработан биопрепарат для антигенного типирования и идентификации бактерии вида В. ЪгопсЫзерйса.

Созданы и апробированы селективно-диагностическая среда УГСХА ВВЯ 57 и оптимальная схема выделения бактерий вида В. ЬгопсМБерНса, позволяющие выделить и идентифицировать данные бактерии из клинического материала.

Материалы диссертации включены в разработанную и утверждённую научно-техническую документацию:

— «Методические рекомендации по выделению и идентификации В. ЪгопсЫБерйсаъ (Ульяновск, 2011);

— «Методические рекомендации по изготовлению биопрепарата для идентификации В. ЬгопсЫяерНса» (Ульяновск, 2011);

Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по дисциплинам «Биотехнология», «Частная микробиология», «Болезни мелких домашних животных», для студентов факультета ветеринарной медицины, биотехнологического факультета Ульяновской ГСХА, а также при выполнении тем научно-исследовательских работ на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновской ГСХА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Биологические свойства В. ЬгопсЫзерНса: ферментативная активность, восприимчивость к красителям, культуральные свойства, устойчивость к химическим и физическим воздействиям, положены в основу микробиологических тестов для типирования бактерий вида В. ЪгопсЫзерИса.

2. Разработанный биопрепарат, позволяет типировать по комплексному антигенному составу бактерии вида В. ЬгопсЫхерНса.

3. Селективно-диагностическая среда УГСХА ВВЯ 57, предназначенная для выделения и первоначального типирования бактерий вида В. ЪгопсЫзерИса по культуральным и биохимическим свойствам.

4. Оптимальная схема выделения бактерий вида В. ЬгопсЫзерйса от животных, позволяющая выделить и типировать бактерии данного вида за 120 часов.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и опубликованы на Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 60-летию 7 факультета ветеринарной медицины Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2003) — на научно-практической конференции молодых ученых Приволжского федерального округа «Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Саратов, 2007) — на Международной научно-практической конференции «Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК» (Москва, 2007), Международной научно-практической конференции посвященной пятидесятилетию ФГУ ВНИИЗЖ «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику» (Владимир, 2008г) — на Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008) — конференции молодых ученых, посвященной памяти члена-корреспондента РАСХН Вишнякова И. Ф. 70-летию со дня рождения «Актуальные проблемы инфекционной патологии ветеринарной медицины (Покров, 2009) — Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика — 2010». (Москва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ, 3 из которых — в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 176 страницах печатного текста, содержит 12 таблиц, 77 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 247 источников из них 233 иностранных. В приложениях представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, её научную и практическую значимость.