Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Строение лемнана — пектинового полисахарида из ряски малой Lemna minor L

Диссертация: Строение лемнана — пектинового полисахарида из ряски малой Lemna minor L
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Широкое применение в народном хозяйстве и медицине находят полисахариды. Полисахариды — утлеводсодержащие биополимеры, представляющие собой продукты поликонденсации моносахаридов, остатки которых связываются между собой гликозидными связями и образуют линейные и разветвленные углеводные цепи. Они присутствуют во всех живых организмах: в клеточных стенках растений — фитополисахариды, в животных… Читать ещё >

Содержание

  • 1. Обзор литературы
  • Растительные полисахариды
    • 1. 1. Строение первичной клеточной стенки
    • 1. 2. Целлюлоза
    • 1. 3. Гемицеллюлозы
    • 1. 4. Камеди и слизи
    • 1. 5. Пектиновые полисахариды
      • 1. 5. 1. Выделение пектинов из растительных клеток
      • 1. 5. 2. Фракционирование смесей пектиновых веществ
      • 1. 5. 3. Структура пектиновых полисахаридов
      • 1. 5. 4. Линейная область пектиновых веществ
      • 1. 5. 5. Разветвленные области пектиновых полисахаридов
      • 1. 5. 6. Нейтральные компоненты пектиновых веществ
      • 1. 5. 7. Ксилогалактуронаны и апиогалактуронаны

Строение лемнана — пектинового полисахарида из ряски малой Lemna minor L (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

2.2. Общие принципы изучения строения лемнана.40.

2.3. Выделение и общая характеристика полисахарида ряски малой Lemna minor L.41.

2.3.1. Методы выделения лемнана.41.

2.3.2. Определение моносахаридного состава лемнана.50.

2.3.3. Определение конфигурации моносахаридов лемнана.54.

2.3.4. Выделение апиозы из лемнана.56.

2.3.5. Спектроскопия ЯМР апиозы.59.

2.4. Галактуронан — главная углеводная цепь лемнана.63.

2.5. Апиогалактуронан — основной фрагмент разветвленной области лемнана.65.

2.6. Гетерогликаногалактуронаны — минорные участки разветвленной области лемнана.68.

2.6.1. Фрагментация лемнана с помощью частичного кислотного гидролиза.68.

2.6.2. Фрагментация лемнана с помощью распада по Смиту.77.

2.7. О строении лемнана.82.

2.8.

Заключение

84.

3. Экспериментальная часть.86.

3.1. Реактивы и материалы.86.

3.2. Экспериментальные условия.86.

3.2.1. Общие экспериментальные условия.86.

3.2.2. Аналитические методы.91.

3.2.3. Выделение лемнана.93.

3.2.4. Ионообменная хроматография.94.

3.2.5. Частичный кислотный гидролиз.95.

3.2.6. Препаративное выделение моносахаридов методом ВЭЖХ.97.

3.2.7. Ферментативный гидролиз лемнана пектиназой.98.

3.2.8. Распад по Смиту.99.

Выводы.101.

Список литературы

102.

Условные обозначения.

БХ — бумажная хроматография.

ВЭЖХ — высокоэффективная жидкостная хроматография.

ГЖХ — газожидкостная хроматография.

ГЖХ-МС — хромато-масс-спектрометрия.

ДМСО — диметилсульфоксид.

ИК-спектр — инфракрасный спектр

КССВ — константа спин-спинового взаимодействия.

МС — масс-спектрометрия н.о. — не определено сл. — следовые количества.

ЯМР — ядерный магнитный резонанс.

AG-I — арабиногалактан I.

AG-II — арабиногалактан II.

Ас — ацетил.

АсеА — ацеровая кислота (З-С-карбокси-5-дезокси.

L-ксшо-фураноза).

Ага — арабиноза.

D — коэффициент поступательной диффузии.

DEAE — диэтиламиноэтил.

DHA — З-дезокси-О-ушк-со-гептулозаровая кислота.

CDTA — циклогексан-транс-1,2-диамино-тетрауксусная кислота.

COSY — Coreilation Spectroscopy — корреляционная спектроскопия.

Gal — галактоза.

GalpA — галактопиранозилуроновая кислота.

Glc — глюкоза.

Glc/?A — глюкопиранозилуроновая кислота.

KDO — 2-кето-3-дезокси-Б-лшн"о-октоновая кислота.

HSQC — Heteronuclear Single Quantum Coherence эксперимент по наблюдению гетероядерной одноквантовой когерентности Man — манноза.

Mw — средневесовая молекулярная масса.

MsD — молекулярная масса, рассчитанная из значений коэффициентов поступательной диффузии и седиментации EDTA — этилендиаминтетраацетат.

RG-I — рамногалактуронан I.

RG-II — рамногалактуронан II.

Rha — рамноза.

ROESY — Rotating frame Overhauser Effect Spectroscopy двумерная корреляционная гомоядерная спектроскопия ядерного эффекта Оверхаузера во вращающейся системе координат TOCSY — Total Correlation Spectroscopy — полная корреляционная спектроскопия TFA — трифторуксусная кислота.

Ху1 — ксилоза.

S — коэффициент седиментация г|] - характеристическая вязкость.

Фитотерапия — самый древний метод лечения заболеваний. Человечество и по сей день широко применяет лечение экстрактами растений и препаратами из них [1]. В последние годы широкое использование в медицине и в пищевой промышленности получили разнообразные биодобавки. В качестве таких универсальных лечебных добавок могут быть использованы природные биополимеры, обладающие физиологической активностью.

Ежегодно в здравоохранении, сельском хозяйстве, пищевой и косметической промышленности находят применение все новые высокоэффективные препараты. Безусловно, в состав большей части лекарственных препаратов входят синтетические соединения, но синтез соединений со сложным химическим строением — это всегда очень трудоемкий и дорогостоящий процесс. Провести синтез многих соединений (в число которых входят биополимеры) на сегодняшний день не представляется возможным не только вследствие их сложного строения, но и ввиду того, что структура многих из них до конца не установлена. На данный момент природа проводит синтез соединений со сложным строением в растительных тканях более селективно, чем человек в химических установках, необходимо лишь отработать технологию их выделения в нативном виде. Поиск, выделение биологически активных веществ из природных источников является одной из наиболее перспективных, но очень сложных задач современной биологической и медицинской науки, прикладных производств и промышленности. В последние годы в связи с этим большое внимание уделяется технологии выделения из растительного сырья биополимеров, обладающих физиологической активностью, установлению их химического строения и изучению физиологической активности, т. е. действия на организм человека и животных.

Широкое применение в народном хозяйстве и медицине находят полисахариды [2−4]. Полисахариды — утлеводсодержащие биополимеры, представляющие собой продукты поликонденсации моносахаридов, остатки которых связываются между собой гликозидными связями и образуют линейные и разветвленные углеводные цепи [5, 6]. Они присутствуют во всех живых организмах: в клеточных стенках растений — фитополисахариды, в животных тканях — зоополисахариды, в состав микроорганизмов входят как полисахариды, так и смешанные углеводсодержащие биополимеры (гликоконъюгаты). Полисахариды составляют значительную часть (до 80%) биомассы растений [5, 7, 8]. В состав растительных полисахаридов входят большие группы соединений, отличающихся по химическому строению, по выполняемым в растении функциям и по физиологической активности [5, 8]. К ним относятся целлюлоза и гемицеллюлозы, резервные полисахариды (крахмал, инулин и т. д.), пектиновые вещества, камеди и слизи.

Несмотря на то, что теоретически возможно необычайно большое число полисахаридов, многолетние исследования показывают, что в результате биосинтеза молекулы природных полисахаридов обычно имеют определенный набор связей и построены по определенному плану [5, 9]. Природные полисахариды, даже самые сложные, редко содержат больше пяти — шести различных моносахаридов. В состав многих полисахаридов входят заместители неуглеводной природы: сульфаты, фосфаты, а также ацетаты и остатки других органических кислот [5,8,9]. Многие полисахариды обладают иммуномодулирующими свойствами и нормализуют функции иммунной системы организма [10−13]. Растительные полисахариды препятствуют развитию опухолей: рака легких [14], опухолей тонкой и толстой кишки [15,16] - повышают устойчивость организма к инфекциям [17].

Особое место среди растительных полисахаридов занимают пектиновые полисахариды, характерной особенностью которых является наличие главной углеводной цепи, построенной из а-1,4-связанных остатков D-галактуроновой кислоты [5, 9, 18−27]. Исследования показали, что они обладают высокой и разнообразной физиологической активностью: они являются детоксиканта-ми солей тяжелых металлов [28], иммуномодуляторами [28−31], характеризуются комплексным влиянием на микрофлору полости кишок, обладают противоязвенным эффектом [13, 28, 32, 33].

1. Обзор литературы.

Растительные полисахариды.

Полисахариды локализованы в различных частях растительной клетки: в клеточной стенке, внутри клетки, в межклеточном пространстве. Особо следует отметить многообразие полисахаридов, входящих в состав клеточных стенок растений. Вместе они образуют протопектиновую систему растения, которая выполняет жизненноважные функции и объединяет целлюлозу, гемицеллюлозы, пектины и некоторые слизи [34, 35]. В этой связи представляется целесообразным более подробно рассмотреть строение стенки растительной клетки.

Выводы.

1. Из ряски малой Lemna minor L. выделен пектиновый полисахарид лемнан и впервые показано, что в его состав, наряду с остатками D-галактопирано-зилуроновой кислоты и D-апиофуранозы в качестве основных составлю-щих углеводной цепи, входят остатки D-галактопиранозы, L-арабинофура-нозы, L-рамнопиранозы, D-ксилопиранозы, и 2−0-метил-0~ксилопиранозы.

2. Установлено, что макромолекула лемнана имеет блочный характер и содержит линейный а-1,4-О-галактуронан в качестве главной углеводной цепи (кора) одновременно линейной области и разветвленных участков апиогалактуронана и гетерогликаногалактуронана.

3. Показано наличие в апиогалактуронане ковалентной связи между главной и боковыми углеводными цепями, которые присоединены в третье положение остатков D-галактуроновой кислоты кора и представляют собой линейные цепи, состоящие из одиночных и (3−1,5-связанных остатков D-апио-фуранозы.

4. Найдено, что боковые цепи гетерогликаногалактуронана, минорного компонента лемнана, состоят из остатков а-1,3-, а-1,5-связанной L-араби-нофуранозы, (3−1,3-, (3−1,4-, (3−1,6-связанной D-галактопиранозы и (3−1,4-свя-занной D-ксилопиранозы. Точками их разветвлениг являются остатки 2,5-ди-О-замещенной L-арабинофуранозы и 3,4-ди-О-замещенной D-галакто-пиранозы.

5. Получены данные по спектроскопии ЯМР апиогалактуронана, различных фрагментов гетерогликаногалактуронана, апиозы и апиобиозы, которые дополняют существующую базу данных и расширяют возможности использования спектроскопии ЯМР для изучения пектиновых полисахаридов.

2.8.

Заключение

.

В результате проведенных исследований, на примере цветкового пресноводного растения ряски малой Lemna minor L. был отработан метод получения пектиновых полисахаридов из свежесобранного растительного сырья, который позволяет получать пектиновые полисахариды с высоким выходом и с высокой степенью очистки при сохранении их углеводных цепей.

В состав макромолекулы лемнана, наряду с широко распространенными остатками моносахаридов таких, как D-галактопиранозилуроновая кислота (-60%), D-галактопираноза, L-арабинофураноза, L-рамнопираноза, D-ксилопираноза входит значительное количество остатков разветвленного моносахарида D-апиозы (-20%) и небольшое число остатков 2−0-метил-0-ксилопиранозы. Кроме того, лемнан характеризуется низкой степенью метоксилирования карбоксильных групп D-галактуроновой кислоты, что, возможно, связано с водной средой обитания этого растения, где пектиновый полисахарид с большим числом свободных карбоксилов может играть роль регулятора водного и водно-солевого обмена растения. Наличие большого числа остатков D-апиозы, связанных с остатками галактуроновой кислоты кора молекулы в виде разветвленного апиогалактуронана с вероятным образованием пористой, сетчатой структуры, может способствовать поддержанию тургора ряски малой, а устойчивость апиогалактуронана к действию пектинолитических ферментов, возможно, обусловливает определенную резистентность ряски малой к поражению фитопатогенами и, следовательно, к природным процессам гниения и разложения в водной среде, необычной для обитания цветкового растения.

Использование арсенала классических методов структурного исследования полисахаридов таких, как кислотный гидролиз, ферментативное расщепление, распад по Смиту, метод метилирования, в сочетании с такими мощными физико-химическими методами, как различные виды хроматографии и спектроскопии ЯМР, масс-спектрометрия позволило.

85 установить, что лемнан имеет главную линейную углеводную цепь и разветвленные области. Показано, что между боковыми цепями разветвленной области и главной углеводной цепью имеется прочная ковалентная связь. Важно отметить, что боковые цепи разветвленной области представлены не только арабиногалактаном и его фрагментами, как у большинства пектиновых полисахаридов, но в основном своеобразным апиогалактурона-ном, отличающимся от подобного фрагмента зостерана — пектина морских трав. Кроме того, выяснены отдельные элементы тонкой структуры макромолекулы лемнана, что расширяет представления о гликано-гликуронанах, в частности, о пектинах и может быть использовано при изучении биологических функций и физиологической активности лемнана.

В этой связи дальнейшее исследование лемнана, зостерана и других необычных пектинов позволит выявить особенности их биологической роли в жизненном цикле водных растенийустановить взаимосвязь между структурными особенностями макромолекул и выполняемыми ими функциями в развитии водных растенийвыявить, с чем связаны структурные различия пектинов водных и наземных растенийопределить, какие элементы строения макромолекулы определяют разнообразие физиологической активности пектиновых веществ.

3. Экспериментальная часть.

3.1. Реактивы и материалы.

Для выполнения диссертационной работы использовали: коммерческие заведомые образцы бычьего сывороточного альбумина (BSA) и моносахаридов: арабинозы, галактозы, рамнозы, глюкозы, маннозы, ксилозы, галактуроновой и глюкуроновой кислотхимические реактивы: пиридин и толуол марки «ч.д.а.», аммиак водный и серная кислота марки «о.с.ч.», этиловый спирт, метанол, хлороформ (стабилизированный этанолом), ледяную уксусную кислоту, соляную кислоту марки «х.ч.», ацетонитрил сорт «3», пектиназу (Ferbak, Германия) — в качестве исходного растительного материала использовали свежесобранную ряску малую Lemna minor L., которую заготавливали ежемесячно с поверхности озер в окрестностях г. Сыктывкара, в период с июня по октябрь.

3.2. Экспериментальные условия.

3.2.1. Общие экспериментальные условия.

Спектрофотометрические измерения проводили на приборе Ultrospec 3000 (Англия).

Оптическое вращение определяли на приборе Polartronic MHZ (Германия) при 20 °C в воде.

Для распределительной нисходящей бумажной хроматографии (БХ) использовали систему растворителей н. бутанол — пиридин — вода (6:4:3 v: v: v), хроматографическую бумагу Filtrak FN№ 3, 4, 12 (Германия) — для проявки пятен моносахаридов на бумажных хроматограммах применяли раствор кислого аналинфталата в водонасыщенном бутаноле при 105−110°С.

Гелъ-проникающую и ионообменную хроматографию выполняли на хроматографической системе «Uvicord SII» (Pharmacia, Швеция), которая включает в себя коллектор фракций на 96 пробирок, перистальтический насос, УФ-детектор, самописец.

Для проведения гелъфилътрации проводили предварительную обработку геля следующим образом: сухие частицы геля заливали водой и перемешивали до полного набухания. В ходе набухания гель отмучивали, добиваясь отделения мелких частиц. Для этого декантацией сливали верхний слой воды с мелкими частицами, неосевшими с основной массой геля. Затем гель заливали новой порцией воды и процедуру повторяли до тех пор, пока частицы геля не начинали оседать примерно с одинаковой скоростью. Полученный гель вносили в колонку. Колонку уравновешивали, промывая ее при постоянной скорости подачи растворителя. Затем на колонку наносили раствор исследуемого образца полисахарида или олигосахарида. Для гелъфилътрации использовали колонки с молекулярными ситами: а) с сефакрилом S-500 (Pharmacia Biotech, Швеция): 2.4×60 см, свободный объем V0 = 96 мл, элюент — 0.01 М раствор NaCl, скорость элюента 32 мл/чфракции собирали по 3.2 млб) с сефадексом G-25 (Pharmacia Biotech, Швеция): 2.5×75 см, свободный объем V0 = 108 млэлюент — диет, вода, скорость элюента 30 мл/чфракции собирали по 3.0 млв) с биогелем Р-2 (Bio-Rad Lab., США): 1.6×76 см, свободный объем V0 = 26 мл, элюент — диет, вода, скорость элюции 9 мл/чфракции собирали по 1.8 мл.

Свободный объем колонок (Vo) определяли с помощью декстрана голубого с молекулярной массой 2×10б.

Для ионообменной хроматографии использовали колонку с DEAE-целлюлозой (СГ-форма). Предварительную обработку ионообменной смолы проводили следующим образом: 30 г сухой DEAE-целлюлозы заливали водой и оставляли на ночь для набухания, отмучивали, промывали раствором.

0.5 н. соляной кислоты (1 л), отмывали водой до нейтрального значения рН, промывали 0.5 н. раствором едкого натра (1 л) и снова отмывали водой до нейтрального значения рН. Для перевода DEAE-целлюлозы в СГ-форму смолу суспендировали в 0.5 н. растворе соляной кислоты (0.5 л) и отмывали водой на пористом стеклянном фильтре до нейтрального значения рН. Полученную заряженную смолу вносили в стеклянную колонку, уравновешивали, промывая раствором O. OlMNaCl до отрицательной реакции на углеводы по методу Смита (реакция с фенолом в присутствии конц. серной кислоты) [212]. В результате получили колонку с DEAE-целлюлозой (СГ-форма) размерами 25×3 см Навеску полисахарида растворяли в 0.01М растворе хлорида натрия. Раствор наносили на колонку и последовательно элюировали 0.01, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 и 0.5 М NaCl. Разделение проводили при скорости элюента 42 мл/ч, отбирая фракции по 10 мл.

Выход полисахаридных и олигосахаридных фракций контролировали по реакции элюата на углеводы [212].

Газожидкостную хроматографию (ГЖХ) проводили на хроматографе Hewlett-Packard 4890А (США) с пламенно-ионизационным детектором и интегратором HP 3395А на капиллярной колонке RTX-1 (0.25 мм 0×30 м, Restek), газ-носитель — аргон. ГЖХ ацетатов полиолов проводили в программе: от 175 °C (1 мин) до 250 °C (2 мин) со скоростью подъема температуры 3°С/мин, ГЖХ ацетатов метилгликозидов — от 150 °C (1 мин) до 290 °C со скоростью подъема температуры 5°С/мин. Процентное содержание моносахаридов от суммарного препарата вычисляли из площадей пиков, используя коэффициенты отклика детектора [213].

Для препаративного выделения моносахаридов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) использовали препаративную колонку Диасорб-130-АМИН (24×250 мм, размер частиц -11 мкм, ЗАО «БиоХимМак СТ», Россия). Элюирование проводили в изократическом режиме смесью ацетонитрил: вода (84: 16), со скоростью элюции — 10 мл/мин и с использованием плунжерного возвратнопоступательного насоса DYNAMAX (США). Детектирование осуществляли на дифференциальном рефрактометре RIDK-101 (Чехословакия).

Перед вводом в хроматографическую колонку раствор фильтровали через металлический фильтр из нержавеющей пористой стали 12Х18Н10Т с размером пор 2 мкм (ЗАО «БиоХимМак», Россия). Смесь моносахаридов вводили в хроматографическую колонку через систему инжектирования и регистрировали сертифицированной системой для приема и обработки хроматографических данных «Varian Star 4.51» (США), которая включает IBM-совместимый компьютер, автономный блок связи хроматографа с компьютером, программу сбора и обработки хроматографической информации. Программа обеспечивает определение времени удерживания, площадей пиков, идентификацию пиков по градуировочным таблицам, расчет концентраций по площадям и высотам, обработку, печать, хранение выходных кривых.

В качестве стандартов использовали заведомые образцы моносахаридов.

Хромато-масс-спектрометрические (ГЖХ-МС) исследования метилированных моносахаридов в виде соответствующих ацетатов полиолов проводили в Институте органической химии им. Н. Д. Зелинского РАН (Москва) на хромато-масс-спектрометре Carlo Erba Fractovap (Италия) 4200 с использованием капиллярной колонки Ultra-1 размерами 0.2 мм х 30 м x0.33jli (Hewllet-Packard), газ-носитель — гелий. ГЖХ проводили в программе: от 150 °C (1 мин) до 280 °C со скоростью подъема температуры 5°/мин. МС: ионная ловушка Finnigan MAT ITD-700 (Германия), развертка от m/z 44 до m/z 500, энергия ионизирующих электронов «70 eV, температура интерфейса 220 °C, частота сканирования 1 скан/с, задержка накопления 250 сек. Относительное содержание метилированных Сахаров представляли, как соотношение площадей пиков по полному ионному току.

ИК-спектры регистрировали на спектрофотометре UR-20 (Иена, ГДР).

Спектры ЯМР снимали в Институте органической химии им. Н. Д. Зелинского РАН (Москва) на приборе DRX-500 фирмы Bruker (Германия) для 3 — 5% растворов полии олигосахаридов в D20 при 55 °C и 70 °C (внутренний стандарт — ацетон, 5Н 2.225 м.д., 5С 31.45 м.д.). Для снятия двумерных спектров COSY, TOCSY, ROESY и HSQC использовали стандартные методики фирмы Bruker. Снятие спектров ROESY выполняли с временем смешивания 200 мсек. Для экспериментов TOCSY использовали длительность спин-лока MLEV17 60 мсек.

Определение молекулярных характеристик проводили в научно-исследовательском Институте физики им. В. А. Фока РАН (Санкт-Петербург). В качестве растворителя использовали воду с добавкой аммиака до рН11.4. Исследование проводили при 25 °C в системе со следующими о параметрами: плотность р0 = 0.993 г/см — вязкость растворителя.

2 3.

Г|0= 0.901×10″ Рудельный парциальный объем полимера v = 0.634 см/гфактор плавучести (1-ор0) = 0.37. Характеристическую вязкость водного раствора лемнана измеряли в капиллярном вискозиметре со временем течения растворителя т0 = 85.1 сек при 25 °C. Седиментационные измерения проводили на аналитической ультрацентрифуге МОМ-3180 (Будапешт), снабженной поляризационно-интерферометрической приставкой для определения константы седиментации S. Измерения проводили при скорости о вращения ротора п = 40×10 оборотов минуту в двухсекторной кювете с образованием искусственной границы. Изометрическую поступательную диффузию изучали классическим методом образования границы между раствором и растворителем. Исследования проводили в стеклянной кювете.

2 3 при концентрации растворов с = (0.07 — 0.08)х10″ г/см .

Для ультрафильтрации применяли ультрафильтрационный волоконный аппарат марки «2−100 ПА» (волокна с размером пор, соответствующим прохождению молекул с Mw до 100 кДа).

Центрифугирование растворов проводили на центрифуге с охлаждением марки «К 23» (Германия) со скоростью 4000 — 6000 об/мин в течение 10−20 мин. в зависимости от образца.

Растворы концентрировали в вакууме на роторном испарителе марки «ИР-1М2» (Минприбор) при 40 — 45 °C.

Водные растворы подвергали лиофилъной сушке на приборе марки «VirTis Sentery» (США).

3.2.2. Аналитические методы.

Общее содержание гликуроновых кислот определяли по реакции с 3,5-диметилфенолом в присутствии конц. H2SO4 [205] и калибровочному графику, построенному для D-галактопиранозилуроновой кислоты, фото-колориметрирование проводили при 400 и 450 нм.

Количественное определение белка осуществляли по методу Лоури [203] и калибровочному графику, построенному для BSA, фотоколориметри-рование проводили при 750 нм.

Количество метоксильных групп определяли по ранее описанному методу [209] и калибровочному графику, построенному для метанола, фотоколориметрирование проводили при 412 нм.

Определение содержания восстанавливающих Сахаров осуществляли по методу Нельсона-Сомоджи [214].

Качественное определение гликуроновых кислот проводили в соответствии с методом, описанным ранее [204]. Для этого лемнан (1 мг) обрабатывали 1 М НС1 в метаноле (1 мл) в течение 12 ч при 80 °C. Раствор упаривали в вакууме на роторном испарителе при многократном добавлении метанола. Полученную смесь производных моносахаридов растворяли в 0.2 мл сухого пиридина и ацетилировали 0.2 мл уксусного ангидрида в течение 1 ч при 80 °C. Для удаления избытка пиридина и уксусного ангидрида к смеси добавляли 0.2 мл толуола и упаривали в вакууме. Полученные в результате ацетаты метоксилированных метилгликуронозидов анализировали методом ГЖХ.

Полный кислотный гидролиз. К навеске (3−5 мг) исследуемого образца добавляли 1 мл 2 М трифторуксусной кислоты (TFA), содержащей в качестве внутреннего стандарта .мш-инозит (0.5 — 1.0 мг/мл). Смесь нагревали в течение 3−5 ч при 100 °C в запаянной ампуле. Избыток кислоты удаляли многократным упариванием досуха с метанолом. Моносахариды в гидролизате идентифицировали с помощью БХ, а также методом ГЖХ в виде соответствующих ацетатов полиолов.

Получение ацетатов полиолов. Использовали метод, описанный ранее [79]. Полученную в результате кислотного гидролиза смесь моносахаридов растворяли в 1 М растворе аммиака (1 мл), добавляли боргидрид натрия (5 мг) и оставляли на ночь при комнатной температуре. Избыток боргидрида натрия разрушали добавлением лед. уксусной кислоты до рН~5. Раствор упаривали, добавляя метанол до полного удаления влаги. Полученную смесь полиолов растворяли в 0.2 мл сухого пиридина, добавляли 0.2 мл уксусного ангидрида и оставляли на ночь при комнатной температуре или нагревали в течение 0.5−3.0 ч при 100 °C. К реакционной смеси добавляли 0.2 мл толуола и упаривали досуха до полного удаления избытка пиридина и уксусного ангидрида. Полученную смесь ацетатов полиолов растворяли в 1.0 мл сухого хлороформа, количественно переносили в пробирки Эппендорфа и концентрировали до 0.1 — 0.2 мл.

Определение содержания золы в образцах лемнана. Навески полисахарида помещали в предварительно прокаленные и взвешенные тигли и прокаливали в муфельной печи при температуре 800 °C до постоянной массы. Массовую долю золы X (%) вычисляли по формуле: х= JLni^x 100 о/о, mi — то где т — масса тигля с золой, гmi — масса тигля с навеской лемнана до прокаливания, гт0 — масса тигля, г.

Анализ золы проводили в аккредитованной лаборатории экспертно-криминалистической службы № 1 (Санкт-Петербург).

Полученные результаты представлены в главе «Обсуждение результатов», разделе 2.3.1.

3.2.3. Выделение лемнана.

Метод I.

Свежесобранную ряску малую Lemna minor (6 кг) промывали в проточной воде, отжимали, заливали 0.5%-ным водным раствором формалина (40 л) и оставляли при комнатной температуре на ночь. Растворы сливали, сырье промывали проточной водой до полного удаления окрашенных примесей, заливали водным раствором соляной кислоты (рН 4.0- 30 л). Смесь выдерживали в течение 3 ч при 50 °C. В течение всего периода обработки поддерживали рН на уровне 4.0, для чего при интенсивном перемешивании небольшими порциями добавляли необходимое количество соляной кислоты. Раствор сливали, сырье промывали в проточной воде, заливали 0.7%-ным водным раствором оксалата аммония (20 л). Экстракцию полисахарида проводили при температуре 68−70°С в течение 4 ч. Процедуру экстракции повторяли трижды. Наличие углеводов в растворе на каждой стадии контролировали по реакции с фенолом в присутствии конц. H2SO4 [212]. Экстракты объединяли и концентрировали до 3 л на роторном испарителе. Полисахарид осаждали 96%-ным этанолом (15 л), отделяли центрифугированием, растворяли в воде, раствор подкисляли до рН 4.0 и диализовали против дистиллированной воды в течение 3 дней при температуре 5 °C, меняя воду дважды в сутки. Диализованный раствор концентрировали на роторном испарителе до 3 л и лиофилизовали. В результате получали лемнан для дальнейшего исследования.

Метод II.

Свежесобранную ряску малую Lemna minor (6 кг) обрабатывали растворами формальдегида и соляной кислоты, как описано выше {метод I). Затем полученное сырье заливали 0.7%-ным водным раствором оксалата аммония (60 л) и проводили экстракцию полисахарида при температуре 68−70°С в течение 6 ч. Раствор подкисляли до рН 4.0 и концентрировали (до 3 л) с одновременным диализом на ультрафильтрационном волоконном аппарате, постепенно добавляя к экстракту 60 л диет. воды. Полученный экстракт лиофилизовали. В результате получали лемнан для дальнейшего исследования.

Из каждой партии сырья, собранного в разные месяцы с июня (VI) по октябрь (XI), получили соответствующие образцы лемнана, выход и состав которых приведен в табл. 2 (см. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.3.1.).

3.2.4. Ионообменная хроматография.

Лемнан (250 мг) растворяли в воде (5 мл), наносили на колонку с DEAE-целлюлозой в СГ-форме (3×25 см). Элюирование проводили последовательно 0.01, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 и 0.5 М водными растворами NaCl, контролируя процесс элюирования по методу Смита [212]. Фракции, соответствующие отдельным пикам на выходной кривой, объединяли, концентрировали до небольшого объема, диализовали и лиофилизовали. В результате получили одну фракцию лемнана, которая элюируется 0.3 М водным хлоридом натрия. Выход очищенного лемнана составил 132 мг. Анализ полученного образца лемнана приведен в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.3.1.).

3.2.5. Частичный кислотный гидролиз.

Частичный кислотный гидролиз лемнана а) Лемнан (2 г) растворяли в 0.01 М TFA (160 мл). Полученный раствор нагревали в течение 3 ч при 80 °C и после охлаждения выливали в 96%-ный этанол (320 мл). Выпавший осадок отделяли центрифугированием, промывали этанолом до отсутствия моносахаридов в супернатанте, растворяли в воде и лиофилизовали. Получили фракцию LMH, выход 1.578 г. Состав фракции приведен в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4.).

Для дальнейшей очистки фракцию LMH (50 мг) растворяли в 5 мл 0.01 М NaCl и наносили на колонку с сефакрилом S-500. Элюцию углеводов контролировали по реакции Смита [212], как описано ранее. Фракции, соответствующие единственному пику на выходной кривой (kav 0.10), объединяли, концентрировали и лиофилизовали. В результате получили фракцию LMH-1, выход 38.6 мг (рис. 16, глава «Обсуждение результатов», раздел 2.6.1.). Состав фракции приведен в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4.). в) Объединенные водно-этанольные экстракты, упаривали до 2 мл, полученный супернатант I (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4., рис.11), выливали в 96%-ный этанол (20 мл). Выпавший осадок отделяли центрифугированием, промывали этанолом до отсутствия моносахаридов в супернатанте. Осадок растворяли в воде и раствор наносили на колонку сефакрилом S-500. Фракции, соответствующие единственному пику на выходной кривой (kav 0.06), объединяли, концентрировали и.

20 лиофилизовали. В результате получили фракцию LMH-2, [a]D +78.1 (с 0.1- вода), выход 14.7 мг, состав которой приведен в табл.5 (см. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.3.4.). с) Объединенные спиртовые супернатанты (супернатант II, см. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.3.4., рис.11), упаривали до постоянного веса (360 мг). Полученный образец растворяли в диет, воде и наносили на колонку с биогелем Р-2. Ход процесса контролировали с помощью метода Смита [212]. Фракции, соответствующие отдельным пикам на выходной кривой, объединяли, концентрировали и лиофилизовали. В результате получили пять фракций, из которых основные: LMH-3, выход 32.0 мг, kav 0.70 и LMH-4, выход 216 мг, kav 0.96 и минорные: I, выход 4.0 мг, kav 0.08- II, выход 8.3 мг, kav 0.27- III, выход 7.2 мг, kav 0.47- Состав фракций LMH-3 (апиобиоза) и LMH-4 (апиоза) приведен в табл. 7 (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4.) d) 50 мг апиобиозы (фракция LMH-3) гидролизовали 0.05 М TFA (10 мл).

20 при 100 °C в течение 0.5 ч. В результате получили D-апиозу, [a]D +5.4° (с 1.0- Н20). Полноту гидролиза апиобиозы контролировали с помощью БХ гидролизата и ГЖХ соответствующих ацетатов полиолов [79].

Частичный кислотный гидролиз LMH.

К полисахаридному фрагменту LMH (1г) добавляли 0.05 М TFA (100мл) при интенсивном перемешивании и нагревали при 100 °C в течение 3 ч. Выпавший в результате гидролиза осадок отделяли центрифугированием. Реакционную смесь выливали в 96%-ный этиловый спирт (500мл), осадок отделяли центрифугированием, трижды промывали метиловым спиртом до отсутствия моносахаридов в супернатанте, растворяли в воде и лиофилизовали. Получили фракцию LMHR, выход 92.0 мг (см. рис. 18 главу «Обсуждение результатов», раздел 2.6.1.).

Гелъфильтрация LMHR на сефакриле S-500.

LMHR (92 мг) растворяли в 5 мл 0.01 М NaCl и наносили на колонку с сефакрилом S-500. Ход процесса контролировали по методу Смита [212]. Фракции, соответствующие отдельным пикам на выходной кривой, объединяли и лиофилизовали. В результате получили фракции: LMHR-1, [а]20о+114.4° (с 0.1- Н20), выход 27.6 мг, kav 0.15, и LMHR-2, [а]20о+102.1° с 0.1- Н20) выход 39.7мг, kav 0.22. Состав фракций LMHR-1 и LMHR-2 приведен в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.3.4.).

Получение галактуронана из лемнана.

Лемнан LM (100 мг) нагревали с 0.1М TFA (5 мл) при 100 °C в течение 3 ч. Реакционную смесь выливали в охлажденный этиловый спирт (20 мл). Выпавший осадок отделяли центрифугированием, многократно промывали этиловым спиртом до отрицательной реакции на углеводы [212]. Осадок растворяли в воде, диализовали и лиофилизовали. Получили галактуронан (LM-1), [а]о +259° (с 1.0- в водном аммиаке), выход 54.4 мг. Аналитические данные для галактуронана приведены в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4.).

3.2.6. Препаративное выделение моносахаридов методом ВЭЖХ.

Лемнан (0.5 г) обрабатывали 2 М TFA (100 мл) при интенсивном перемешивании на магнитной мешалке в течение 3 ч при 100 °C. Осадок отделяли центрифугированием, промывали метанолом до отрицательной реакции на углеводы в метанольном растворе. Объединенный водно-метанольный раствор упаривали до постоянного веса (320 мг), растворяли в воде (10 мл) и выливали в охлажденный этиловый спирт (50 мл). Осадок отделяли центрифугированием, промывали метанолом. Объединенный водно-спиртовой раствор упаривали, растворяли в воде, фильтровали через патроны Диапак Амин (ЗАО «БиоХимМак», Россия) с сорбентом Cig и упаривали до постоянного веса (101.9 мг). Перед вводом в хроматографическую колонку раствор фильтровали через металлический фильтр.

В качестве элюента использовали смесь ацетонитрила с бидистиллированной водой в соотношении 84: 16, которую предварительно фильтровали через мембранный капроновый фильтр с диаметром пор 0.2 мкм и дегазировали в вакууме.

В результате выделили следующие индивидуальные моносахариды: L-рамнозу (6.8 мг), D-ксилозу (4.7 мг), L-арабинозу (5.4 мг), D-галактозу (9.2 мг). См. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.3.3., рис. 10.

3.2.7. Ферментативный гидролиз лемнана пектиназой.

Лемнан (500 мг) растворяли в воде (50 мл), добавляли 1 мл водного раствора пектиназы (10 мг, Ferbak, Германия). Смесь переносили в диализный мешок и инкубировали в течение 3 ч при 37 °C с одновременным диализом против диет, воды, меняя диализную воду через каждый час. Процесс ферментативного гидролиза контролировали, периодически отбирая аликвоту из диализного мешка, по методу Нельсона-Сомоджи [214] до прекращения роста количества восстанавливающих Сахаров. После окончания ферментативного гидролиза реакционную смесь помещали в стеклянную емкость и для дезактивации пектиназы нагревали на кипящей водяной бане в течение 10 мин. После охлаждения раствора образовавшийся осадок отделяли центрифугированием. Раствор концентрировали и осаждали 4-х кратным объемом 96%-ного этилового спирта. Выпавший осадок отделяли центрифугированием и промывали этанолом до отсутствия в супернатанте галактуроновой кислоты. Осадок растворяли в воде, добавляли водный раствор пектиназы и проводили повторный ферментативный гидролиз, как описано выше. Получили фракцию LM-2 (апиогалактуронан, выход 82 мг, [а]20с +105° (с 0.1- Н20). Полученный апиогалактуронан подвергали повторной обработке пектиназой. В результате получили исходный апиогалактуронан без существенных изменений, выход 82 мг, [a]20D + 105°(c 0.1-Н20).

Состав фракции LM-2 приведен в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4.).

3.2.8. Распад по Смиту.

Распад по Смиту фрагмента LMH.

Фрагмент лемнана LMH (40 мг) растворяли в 3 мл диет. воды. К раствору приливали 1 мл 0.03 М водного раствора метапериодата натрия. Полученный раствор выдерживали в темноте при + 5 °C в течение 24 ч до прекращения расхода окислителя. Расход окислителя контролировали по убыванию значения оптической плотности раствора при 305 нм [210]. Избыток метапериодата натрия разрушали 10%-ным водным раствором этиленгликоля (1 мл), смесь перемешивали на магнитной мешалке в течение 1 ч, затем небольшими порциями добавляли 100 мг NaBH4 и оставляли на ночь. Избыток боргидрида разрушали добавлением лед. уксусной кислоты до рН 5.0, полученную смесь диализовали против диет, воды и лиофилизовали. Получили полиспирт, выход 20 мг.

Полиспирт (20 мг) растворяли в 1%-ной уксусной кислоте (5 мл) и термостатировали в течение 2 ч при 100 °C. Полученный раствор нейтрализовали разбавленным водным раствором аммиака до рН 6.0. Образовавшуюся смесь упаривали с метанолом до минимального объема. Концентрированный раствор наносили на колонку с сефадексом G-25 и элюировали диет, водой. Контроль осуществляли, как описано ранее [212]. Фракции, соответствующие пику на выходной кривой, объединяли и лиофилизовали. В результате получили фракцию LMHS, выход 14.7 мг, Kav = 0.

Состав фракции LMHS приведен в табл. 5 (см. главу «Обсуждение результатов «, раздел 2.3.4.).

Метилирование LMHS.

Метилирование проводили по методу Хакомори согласно методике описанной ранее [79]. Навеску 5 мг LMHS сушили в пистолете Фишера в вакууме над оксидом фосфора (Р2О5) в течение 24 ч. К сухому образцу добавляли 1 мл безводного диметилсулъфоксида (ДМСО). Смесь перемешивали в течение 12 ч при 45 °C на магнитной мешалке в атмосфере азота до растворения образца. К раствору добавляли 0.5−1мл свежеприготовленного метилсульфинилкарбаниона (CH3SOCH2~Na+). Смесь перемешивали в течение 5−12 ч при 45 °C. Раствор замораживали, добавляли 0.5−1.0 мл иодистого метила (СН31), смесь оставляли при перемешивании на 2−3 ч. Реакционную смесь разбавляли равным объемом воды и трижды экстрагировали сухим хлороформом. Хлороформные вытяжки объединяли, сушили над сернокислым натрием (Na2SC>4) и упаривали в вакууме досуха. В результате получили перметилированный LMHS.

Полученный образец сушили в пистолете Фишера, растворяли в 1 мл тетрагидрофурана и добавляли 5 мг LiBH4 [204]. Смесь нагревали при 70 °C в течение 1 ч, нейтрализовали 10%-ной уксусной кислотой в метаноле, диализовали и лиофилизовали. Образец обрабатывали CH3SOCH2″ Na+H СН31, как описано выше. Полноту метилирования определяли ИК-спектроскопией по отсутствию полосы поглощения гидроксила в области 3200−3600 см" 1.

Полученный сполна метилированный образец гидролизовали в 2 М TFA (0.5−1 мл) в течение 5 ч при 100 °C. Избыток кислоты удаляли упариванием с метанолом. Полученные метилированные моносахариды переводили в ацетаты полиолов, согласно методике, описанной выше [79], и анализировали с помощью ГЖХ и ГЖХ-МС.

Результаты приведены в табл. 13 (см. главу «Обсуждение результатов», раздел 2.6.2.).

Показать весь текст

Список литературы

  1. В.И., Шапиро Д. К., Данусевич И. К. Лекарственные растения. Минск: Полымя, 1990. — 304 с.
  2. Whistler R.L., BeMiller J.N. Industrial gums, polysaccharides and their derivatives. 2nd Edition. N-Y.-Lnd.: Acad. Press, — 1973. — 807p.
  3. B.A., Бондарев Г. Н., Мартинчик A.H. Организация лечебно-профилактического питания. Л.: Медицина, 1987. — 216 с.
  4. Н.А., Миронов В. Ф., Коновалов А. И., Минзанова С. Т., Лапин А. А., Михалкина Г. С., Харитонов В. Д. Пектины -универсальная добавка к молочным продуктам // Молочная промышленность. 1999. -№ 9. — С. 32−35.
  5. Н.К., Бочков А. Ф., Дмитриев Б. А., Усов А. И., Чижов О. С., Шибаев В. Н. Химия углеводов. М.: «Химия», 1967. 672с.
  6. Т.Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 1998.-С. 169−186.
  7. ., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1994.- Т.З. — С.362−444.
  8. Ю.С. Полисахариды цветковых растений: структура и физиологическая активность // Биоорган, химия.- 1998.- Т. 24.- С. 483−501.
  9. Ю.С. Избранные главы биоорганической химии. -Сыктывкар: СГУ, 1998. 222 с.
  10. Ю.С., Оводова Р. Г., Лоенко Ю. Н. Биогликаны -иммуномодуляторы // Химия природн. соедин. 1983. № 6. С. 675−694.
  11. Wagner Н. Immunostimulants of plant origin // Croatica Chem. Acta. -1995.-V.68.-P. 615−626.
  12. А.И., Конопля А. И., Ласкова И. Л., Кедровская Н. Н. Изучение механизмов иммуностимулирующего действия некоторых растильных гетерополисахаридов // Фармакол. Токсикол. 1988. -№ 5. — С.68−72.
  13. Le Marchand L., Hankin J.H., Wilkens L.R., Kolonel L.N., Englyst H.N., Lyu L.C. Dietary fiber and colorectal cancer risk. // Epidemiology. 1997.- V.8.-№ 6.-P.658−665.
  14. Lipkin M., Reddy В., Newmark H., Lamprecht S.A. Dietary factors in human colorectal cancer // Annu. Rev. Nutr. 1999. — V. 19. — P. 545−586.
  15. Yun C.-H., Estrada A., Kessel A., Gajaddhar A.A., Redmond M.J., Laarveld B. (3-(l—>3, l-«4) Oat glucan enhances resistance to Eimeria vermiformis infection in immunosuppressed mice/Antern. J. Parasitol. -1997. V.27.-P.329−337.
  16. Hirst E.L., Jones J.K.N. The chemistry of pectic materials //Adv.
  17. Carbohydr. Chem. 1946. — V.2. — P.235−247.
  18. Kertesz Z.I. The pectic substances.-N.-Y.: Interscience Publ., 1 951 628 p.
  19. Smith F., Montgomery R. The chemistry of plant gums and mucilages and other related polysaccharides. N-Y.-Lnd. Reinhold Publ. Co., 1959. -402 p.
  20. Aspinall G.O. Chemistry of the carbohydrates // Ann. Rev. Biochem. -1962.-V. 31.-P. 79−83.
  21. The polysaccharides. / Ed. G.O. Aspinatl Lnd.: Acad. Press., 1982., V. 2. 503 p.
  22. BeMiller J.N. An introduction to pectins: Structure and properties // Chemistry and Function of Pectins / Eds. M.A. Fishman, J.J. Jen -Washington: American Chemical Society, 1986. P. 2−13.
  23. O’Neill M.A., Albersheim P., Darvill A.G. The pectic polysaccharides of primary cell walls // Meth. Plant Biochem. V.2 / Ed. P.M. Dey. Lnd.: Acad Press., 1990. -P.415−441.
  24. Schols H.A., Voragen A.G.J. Complex pectins: structure elucidation using enzymes // Pectins and Pectinases / Eds. Visser J., Voragen A.G.J., Vol. V.: Elsevier Science 1996. — P. 3−19.
  25. Thakur B. R., Singh R.K., Handa A.K. Chemistry and uses of pectin // Critical Rev. Fd. Sci.@ Nutr. 1997. — V.37.- P.47−73.
  26. JI.B. Технология пектина и пектинопродуктов. М.: ДеЛи, 2000.-256 с.
  27. Ю.Н., Артюков А. А., Козловская Э. П., Мирошников В. А., Еляков Г. Б. Зостерин. Владивосток: Дальнаука, 1997. — 212 с.
  28. Popov S.V., Popova G.Yu., Ovodova R.G., Bushneva О.A., Ovodov Yu.S. Effect of polysaccharides from Silene vulgaris on phagocytes // Int. J. Immunopharmacol. 1999. — V. 21. — P. 617 — 624.
  29. Sendl A., Mulinacci N., Vincieri F., Wagner H. Anti-inflammatory and immunologically active polysaccharides of Sedum telephium II Phytochemistry- 1993. -V. 34. P. 1357 -1362.
  30. Puhlmann J., Knaus U., Tubaro L., Schaefer W., Wagner H. Immunologically active metallic ion-containing polysaccharides of Achyrocline satureoides // Phytochemistry. 1992. — V. 31. — P. 26 172 621.
  31. Cho C.H., Mei Q.B., Shang P., Lee S.S., So H.L., Guo X., Li Y. Study of the gastrointestinal protective effects of polysaccharides from Angelica sinensis in rats // Planta Med. 2000.- V.66. — P.348−351.
  32. C.H., Спиридонов B.H. Пектины их свойства и применение // Раст. ресурсы. — 1998. — Вып.1. — С. 111−119.
  33. Joslyn М.А. The chemistry of protopectin // Adv. Fd. Res. 1962.-V.ll.-P. 1−25.
  34. B.H., Шелухина Н. П. Пектин: химия, технология, применение. М.: АТН РФ, 1995. 389с.
  35. Ролан Ж.-К., Селоши А., Селоши Д. / Атлас по биологии клетки. М.: Мир, 1978. — 280 с.
  36. B.JI. Биохимия растений. М.: Высшая школа, 1980. 446 с.
  37. Darvill A.G., McNeil М., Albersheim P., Delmer D.P. The primary cell walls of flowering plants // The Biochemistry of Plants. V.I. / Ed. N.E. Tolbert N.-Y.: Acad. Press, 1980. — P.91−162
  38. McCann М.С., Roberts К. Plant cell wall architecture: the role of pectins // Pectins and Pectinases: Proc. Intern. Symp. Wageningen, The Netherlands, 1996. — P.91−107.
  39. Carpita N.C., McCann M., Griffmg L.R. The plant extracellular matrix: news from the cell’s frontier // Plant Cell. 1996.- V.8. -P.1451−1463.
  40. Carpita N.C., McCann M. The cell wall // Biochemistry & Molecular Biology of Plants / Eds.B. Buchanan, W. Gruissem, R. Jones. Am. Soc. Plant Physiol., 2000. P. 52−108.
  41. Giersher К. Pectin and pectic enzymes in fruit and vegetable technology // Gordian. 1981. — V.81. — № 7−8. — P. 171−176.
  42. Darvill A.G., Albersheim P., McNeil M., Lau J.M., York W.S., Stevenson T.T., Thomas J., Doares S., Gollin D.J., Chelf P. Structure and function of plant cell wall polysaccharides//J. Cell Sci., Suppl. 1985.- V.2.-P.203−217.
  43. M.C., Лемле H.A., Шкантова Н. Г. Выделение и характеристика структуры целлюлозы трав // Ж. прикл. химии 1975. -Т. XLVIII. — С. 1352−1356.
  44. Cosgrive D.J. Assembly and enlargement of the primary cell wall in plants // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1997. — Y. 13. — P. 171−201.
  45. McCann M.C., Hammouri M., Wilson R., Belton P., Roberts K. Fourier transform infrared microspectroscopy: a new way to look at plant cell wall //Plant Physiol. 1992.- V.100. -P.1940−1947.
  46. McNeil M., Darvill A.G., Fry S. C, Albersheim P. Structure and function of primary cell walls of plants // Annu. Rev. Biol. Chem. 1984 — V.53. -P.625−663.
  47. Н.П. Научные основы технологии пектина. Фрунзе: Илим, 1988. — 167 с.
  48. Chanda S.A., Bapodara С., Singh Y.D. Degradation of xyloglucan and pectic polysaccharides during cell elongation in Phaseolus vulgaris hypocotyls// Acta physiol. plantarum. 1995. — V.17. — P.349−356.
  49. Kato Y., Matsuda K. Structure of oligosaccharides obtained by controlled degradation of mung bean xyloglucan with acid and Aspergillus oryzae enzyme preparation// Agric. Biol. Chem. 1980. — V.44. -P.1751−1758.
  50. Zablackis E., Huang J., Mtiller В., Darvill A.G., Albersheim P. Characterization of the cell-wall polysaccharides of Arabidopsis thaliana leaves//PlantPhysiol. 1995. — V.107. — P. 1129−1138.
  51. A.O. Глюканы высших растений // Химия природ, соедин. 1997-№ 1.-С.З-15.
  52. Ray В., Ghosal Р. К., Thakur S., Majumdar S. G. Structural studies of a neutral polysaccharide from the root bulb of Mirabilis jalapa I I Carbohydr. Res. 1988. — V.176. — P. 324−328.
  53. Buchala A.J., Meier H. A Hemicellulosic P~D-glucan from maize stem // Carbohydr. Res. 1973. — V.26. — P. 421−425.
  54. Fang J.-N., Proksch A., Wagner H. Immunologically active polysaccharides of Acanthopanax senticosus / Phytochemistry 1985. -V.24.-P. 2619−2622.
  55. Tomoda M., Shimada K., Konno C., Murakami M., Hikino H. Structure of aconitan A, a hypoglycemic glycan of Aconitum carmichaeli roots // Carbohydr. Res. 1986. -У.146. — P. 160−164.
  56. Yamada H., Kiyohara H., Otsuka Y. Characterization of a water-soluble glucan from Angelica acutiloba // Phytochemistry 1984. — V. 23. -P. 587−590.
  57. Nordstrom M., Teleman A., Jacobs A., Dahlman O. Characterization of acetylated glucomannans from aspen and birch // Seventh European Workshop on Lignocellulosics and Pulp, Turku / Abo, Finland, 2002, August 26−29. P.39−42.
  58. Fukushi Y., Otsuru O., Maeda M. The chemical structure of the D-xylan from the main cell-wall constitutents of Bryopsis maxima II Carbohydr. Res. 1988. — V.182. — P.313−320.
  59. Tanczoc I., Schwarzinger C., Schmidt H. Structural characterization of hemicelluloses by reactive Py-GC/MC in the presence of tmah // Seventh European Workshop on Lignocellulosics and Pulp, Turku / Abo, Finland, 2002, August 26−29. P.161−164.
  60. Teleman A., Tenkanen M., Jacobs A., Dahlman O. Charactirisation of O-acetil-(4−0-methylglucurono) xylan isolated from birch and beech II Carbohydr. Res. 2002. — V. 337. — P. 373−377.
  61. Cerezo A.S., Stany M.S., Weber J.M. Some structural studies of brea gum // Carbohydr. Res. 1969. — V. 9. — P. 505−509.
  62. Ю.С. Химия гликуроногликанов // Химия природн. соедин. -1975.-С. 300−315.
  63. Gupta O.C.D., Gupta R., Srivastava V.P., Gupta P.С. Structure of a new galactomannan from the seeds of Ipomoea fistulosa II Carbohydr. Res. -1979,-V.73.-P. 145−150.
  64. O.B., Смирнова Н. И., Местечкина H.M., Шретер И. А., Щелухин В. Д. Характеристика и структура галактоманнана астрогала серпоплодного {Astragalus falcatus Lam.) // Прикл. биохим. микробиол. 1995. -Т. 31. -№ 6. -С.645−649.
  65. В.Д. Галактоманнаны семян некоторых видов порадка Fabales, произрастющих в СССР // Раст. ресурсы. 1991. — Вып. 1. -С. 1−8.
  66. Sanchez С., Renard D., Robert P., Schmitt С., Lefebre J. Structure and rheological properties of acacia gum dispersions // Food Hydrocoll. -2002.-V. 16.-P. 257−267.
  67. Islam A.M., Phillips G.O., Sljivo A., Snowden M.J., Williams P.A. A review of recent developments on the regulatory, structural and functional aspects of gum arabic II Food Hydrocoll. 1997. — V. 11. — P. 493−505.
  68. Connolly S., Fenyo J.-C., Vandevelde M.C. Heterogeneity and homogeneity of arabinogalactan-protein: Acacia Senegal gum // Food Hydrocoll. 1988. — V. 1. — P. 477−480.
  69. Idris O.H.M., Williams P.A., Phillips G.O. Characterization of gum from Acacia Senegal trees of different age and location using multidetection gel permeation chromatography // Food Hydrocoll. 1998. — V. 12. — P. 379−388.
  70. Picton L., Bataille I., Miiller G. Analysis of a complex polysaccharide (gum arabic) by multi-angle laser light scattering compiled with on-line size exclusion chromatography and flow field fractionation //Carbohydr. Polym. 2000. — V. 42. — P. 23−31.
  71. Street C.A., Anderson D.M.W. Refinement of the structures previously proposed for gum arabic and other Acacia gum exudates 11 Talanta -1983.-V. 30.-P. 887−893.
  72. Churms S.C., Merrifield E.H., Stephen A.M. Some new aspects of the molecular structure of Acacia Senegal gum (gum arabic) // Carbohydr. Res. 1983.-V. 123.-P. 267−279.
  73. Aspinall G.O., Davies D.B., Fraser R.N. Gum tragacanth. Part III. The characterisation of three aldobiouronic acids as minor partial hydrolysis products from tragacanthic acid // J.Chem.Soc. ©. 1967. -P.1086−1088.
  74. Ovodov Yu.S. Structural chemistry of plant glycuronoglycans // Pure Appl. Chem. 1975. — V.42. — P.351−365.
  75. G.O. // Biogenesis of Plant Cell Wall Polysaccharides. N.-Y. Lnd.: Acad. Press., 1977. — P.94−115.
  76. York W.S., Darvill A.G., McNeil M.A., Stevenson T.T., Albersheim P. Isolation and characterization of plant cell walls and cell-wall components //Meth. Enzymol. 1985. — V.118. -P. 3 — 40.
  77. Е.Н., Костин В. И. Углеводы амаранта и их практическое использование. Ульяновск.: Изд-во Ин-та химии Коми НЦ УрО РАН, 2001.- 179 с.
  78. М.Т., Ходжаева М. А. Растительные пектиновые вещества. Способы выделения пектиновых веществ // Химия природн. соедин. 1993. — С.635−643.
  79. А.Я., Оводова Р. Г., Попов С. В. Выделение и общая характеристика полисахаридов из пижмы обыкновенной, мать-и-мачехи и лопуха войлочного // Химия раст. сырья. 1999. — №. 1. -С. 33−38.
  80. В.Н., Литвиненко В. И., Попова Т. П., Аммосов А. С. Способ получения суммы полисахаридов, обладающей противовоспалительной активностью // Патент РФ № 2 063 236 от 10.07.96. БИ 1996, № 19
  81. Ovodova R.G., Vaskovsky V.E., Ovodov Yu.S. The pectic substances of Zosteraceae // Carbohydr. Res. 1968. — V. 6. — P. 328−332.
  82. А.Я., Оводова Р. Г., Оводов Ю. С. Способ получения из растительного сырья суммы полисахаридов // Патент РФ № 2 176 515 от 10.12.2001 г.-БИ. № 34.-2001.
  83. Р.Г., Бушнева О. А., Шашков А. С., Оводов Ю. С. Выделение и предварительное исследование строения полисахаридов из смолевки обыкновенной Silene vulgaris // Биоорган, химия. 2000. — Т.26. -С. 686−692.
  84. Ю.С. Химическое исследование гликуроногликанов кислых растительных полисахаридов: Автореферат дисс. докт. хим. наук. -М., 1971.-42 с.
  85. Т.Ф. Химическое изучение пектина женьшеня: Автореферат дисс. канд. хим. наук. Владивосток, 1969. — 20 с.
  86. Marcelin О., Saulnier L., Brillouet J.-M. Extraction and characterization of water-soluble pectic substances from guava (Psidium guajava L.) // Carbohydr. Res. 1991. -Y.212. — P. 159−167.
  87. Westerlund E., Aman P., Andersson R.E. et al. Chemical characterization of water-soluble pectin in papaya fruit // Carbohydr. Polym. 1991. -V.15. — P.67−78.
  88. Ralet M.-Ch., Thibault J.-F. Extraction and characterisation of very highly methylated pectins from lemon cell walls // Carbohydr. Res. 1994. -V.260. — P.283−296.
  89. Prithi I.S., Mookerji K.K., Girdhari L. A study of factors affecting the recovery and quality of pectin from guava. // Indian Food Packer. -1960. V.14. — № 7. — P.7−19.
  90. О.В. Выделение, структурная индентификация и химическая модификация пектиновых веществ растения амарант и некоторых модельных соединений: Автореферат дисс. канд. хим. наук. Казань, 2000. — 20 с.
  91. Eriksson I., Andersson R., Aman P. Extraction of pectic substances from dehulled rapeseed // Carbohydr. Res. 1997. — V.301. — P.177−185.
  92. Furuta H., Takahashi Т., Tobe J., Kiwata R., Maeda H. Extraction of water-soluble soybean polysaccharides under acidic conditions // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1998. — V.62. — P.2300−2305.
  93. Н.Ш. Экстрагирование хлопкового пектина // Раст. ресурсы 1996. — С.207−209.
  94. Т.А., Снапян Г. Г., Никогосян Г. А. Получение пектина из лопуха (род Arctium) // Укр. биохим. ж. 1998. — Т.70. — № 1. -С .98−105.
  95. С., Одза С. Способ получения пектина из яблок. // Пат.4645. Япония. 16.04.64.
  96. Anderson R.L., Stone В.A. Studies on Lolium multiflorum endosperm in tissue culture III.* Structural studies on the cell wall // Aust.J. Biol. Sci. -1978. V.31. -P.573−586.
  97. Barbier M., Thibault J.-F. Pectic substances of cherry fruits// Phytochemistry 1982. -У.21. — P. 111−115.
  98. H.C., Лисянский B.A., Донченко Л. В. Определение коэффициэнта диффузии пектиновых веществ в растительной ткани // Пищ. пром. 1982. — № 3. — С.5−37.
  99. Neukom Н., Deuel Н. Alkaline degradation of pectin // Chem. Ind. -1958.-P. 683−691.
  100. Yamaguchi F., Ota Y., Hatanaka C. Extraction and purification of pectic polysaccharides from soybean okara and enzymatic analysis of their structures II Carbohydr. Polym. 1996. — V.30. — P.265−273.
  101. Redwell R.J., Fischer M., Kendal E., MacRae E.A. Galactose loss and fruit ripening: high-molecular-weight arabinogalactans in the pectic polysaccharides of fruit cell walls // Planta. 1997. — V.203. -P.174−181.
  102. Edashige Y., Ishii Т. Rliamnogalacturonan I from xylem differentiating zones of Cryptomeria japonica И Carbohydr. Res. 1997. — V.304. -P.357−365.
  103. Aspinall G.O., Fanous H.K. Structural investigations on non-starchy polysaccharides of apples // Carbohydr. Polym. 1984. — V.4 — P. 193−214.
  104. Renard C.M.G.C., Thibault J.-F. Structure and properties of apple and sugar-beet pectins extracted by chelating agents // Carbohydr. Res. 1993.- V.244. P. 99−114.
  105. Arslan N. Extraction of pectin from sugar-beet pulp and intrinsic viscosity-molecular weight relationship of pectin solution // J. Food Sci. Tech.1995. V.32. -P.381−385.
  106. Stevens B.J.H., Selvendran R.R. Structural features of cell-wall polysaccharides of the carrot Daucus carota // Carbohydr. Res. 1984. -V.128. — P.321−333.
  107. Vignon M.R., Garcia-Jaldon C. Structural features of the pectic polysaccharides isolated from retted hemp bast fibers // Carbohydr. Res.1996.- V.296. P.249−260.
  108. Renard C.M.G.C., Thibault J.-F., Voragen A.G.J., van den Broek L.A.M., Pilnik W. Studies on apple protopectin. VI: Extraction of pectins from apple cell walls with rhamnogalacturonase // Carbohydr. Polym. 1993. -V.22. — P.203−210.
  109. Shkodina O.G., Zeltser O.A., Selivanov N.Y., Ignatov V.V. Enzymic extraction of pectin preparations from pumpkin // Food Hydrocoll. 1998.- V.12. -P.313−316.
  110. Doco Т., Williams P., Vidal S., Pellerin P. Rhamnogalacturonan И, a dominant polysaccharide in juices produced by enzymic liquefaction of fruits and vegetables // Carbohydr. Res. 1997. — V.297. — P. 181−186.
  111. Renard C.M.G.C., Voragen A.G.J., Thibault J.-F., Pilnik W. Studies on apple protopectin. V: Structural studies on enzymatically extracted pectins // Carbohydr. Polym. 1991. -V. 16. — P.137−154.
  112. Arslan N., Kar F. Filtration of sugar-beet pulp pectin extract and flow properties of pectin solutions //J. Fd. Eng. 1998. — V.36. — P. 113−122.
  113. Т. А., Брыкина Г. Д., Гармаш А. В., Долманова И. Ф., Дорохова Е. Н., Зологов Ю. А., Иванов В. М., Фадеева В. И., Шпигун О. А. Основы аналитической химии. Книга 1. Общие вопросы. Методы разделения М.: Высшая школа, 2000. 352с.
  114. Heri W., Neukom К, Deuel Н. Chromatographische Fraktionierung von Pekntinstoffen an DEAE-Cellulose // Helv. Chim. Acta. 1961. — V.44. -P. 1931−1939.
  115. Aspinall G.O., Begbie R., Hamilton A., Whyte J.N.C. Polysaccharides of soy-beans. Part III. Extraction and fractionation of polysaccharides from cotyledon meal // J. Chem.Soc. ©. 1967. — P.1065−1070.
  116. Tomoda M., Nakatsuka S. Plant mucilages. V. Isolation and characterization of mucous polysaccharide, «Falcatan», from Polygonatum falcatum rhizomes // Chem. Pharm. Bull. 1972. — V. 20. — P. 2491−2495.
  117. Zhan D., Janssen P., Mort A J. Scarcity or complete lack of single rhamnose residues interspersed within the homogalacturonan regions of citrus pectin // Carbohydr. Res. 1998. -V. 308. — P. 373−380.
  118. А.Г. Химическое исследование полисахаридов листьев Plantago maior L. И. Пектовая кислота // Химия природн. соедин. -1965. с.369−372.
  119. Stoddart R.W., Barrett A.J., Northcote D.H. Pectic polysaccharides of growing plant tissues // Biochem. J. 1967. — V. 102. — P. 194−204.
  120. Wolfrom M. L., Anderson L. E. Polysaccharides from instant coffee powder // J. Agr. Food Chem. 1967. — У. 15. — P. 685−687.
  121. Fraser R.N., Lindberg B. Polysaccharides elaborated by Armillaria mellea (Tricholomataceae). Part I. A water-soluble polysaccharide from the fruit bodies // Carbohydr. Res. 1967. — V.4. — P. 12−19.
  122. Методы химии углеводов / Под ред. Уистлера P. JL, Вольфрома M. JI -М.: Мир, 1967.- 512 с.
  123. Joseleau J.-P., Chambat G., Vignon M., Barnoud F. Chemical and 13C N.M.R. studies on two arabinans from the inner bark of young stems of Rosa glauca II Carbohyd. Res. 1977. — V.58. — P.165−175.
  124. В.Д., Анулов O.B. Галактоманнаны семян бобовых (обзор) //Прикл. биохим. микробиол. 1999. — Т.35, № 3. — С.257−274.
  125. М.Ю., Яковлев Г. П., Витовская Г. А. Состав полисахаридных фракций из надземной части Alhagi maurorum medic Н Раст. ресурсы 2001. — Вып.4. — С. 76−80.
  126. С.К., Рахманбердыева Р. К., Рахимов Д. А., Левкович М. Г. и др. Рамногалактуронан из стеблей Alcea rosea II Химия природн. соедин. 2001, — С.177−180.
  127. Yamada Н., Hirano М., Kiyohara Н. Partial structure of an anti-ulcer pectic polysaccharide from the roots of Bupleurum falcatum L. // Carbohydr. Res. 1991. -V. 219. — P. 173−192.
  128. McNeill M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant cell walls. X. Rhamnogalacturonan I, a structurally complex pectic polysaccharide in the walls of suspension cultured sycamore cells // Plant Physiol. 1980. — V. 66.-P. 1128−1134.
  129. Rihouey C., Morvan C., Borissova I., Jauneau A., Demarty M., Jarvis M. Structural features of CDTA-soluble pectins from flax hypocotyls // Carbohydr. Polym. 1995. -V. 28.-P. 159−166.
  130. Powell D.A., Morris E.P., Gidley M.J. et al. Conformations and interactions of pectins. II. Influences of residue sequence on chain association in calcium pectate gels И J. Mol. Biol. 1982. — V.155. -P.517−531.
  131. Thibault J.F., Renard C.M.G.C., Axelos M.A.V., Roger P., Crepeau M.J. Studies of the length of homogalacturonic regions in pectins by acid hydrolysis // Carbohydr. Res. 1993. — V. 238. -P.271−286.
  132. Kiyohara H., Yamada H. Characterisation of methyl-ester distributions in galacturonan regions of complement activating pectins from the roots of Angelica acutiloba Kitagawa // Carbohydr. Polym. 1994. — V.25. -P. 117−122.
  133. H., Вакоу O.E., Larsen B. Determination of the degree of esterification and the distribution of methylated and free carboxyl groups in pectins by 1H-NMR spectroscopy // Carbohydr. Res. 1988. — Y.184. -P. 183−191.
  134. Ishii T. O-Acetylated oligosaccharides from pectins of potato tuber cell walls//Plant Physiol. 1997. — V. l 13. — P.1265−1272.
  135. Rombouts E.M., Thibault J.F. Feruloylated pectic substances from sugar-beet pulp // Carbohydr. Res. 1986. — V.154. -P.177−187.
  136. A.M., Чиркина Т. Ф., Цыбикова Д. Ц., Бабуева Ц. М. Исследование функциональных свойств облепихового пектина // Химия раст. сырья. 1998. — № 1. — С. 29−32.
  137. Bushneva O.A., Ovodova R.G., Shashkov A.S., Ovodov Yu.S. Structural studies on hairy regions of pectic polysaccharide from campion Silene vulgaris (Oberna behen L.) // Carbohydr. Polym. 2002. — V.49. -P.471−478.
  138. Polle A.Ya., Ovodova R.G., Shashkov A.S., Ovodov Yu.S. Some structural features of pectic polysaccharide from tansy, Tanacetum vulgare L. // Carbohydr. Polym. 2002. — V. 49. — P. 337−344.
  139. An J., Zhang L., O’Neill M.A., Albersheim P, Darvill A.G. Isolation and structural characterization of ewdo-rhamnogalacturonase-generated fragments of the backbone of rhamnogalacturonan I // Carbohydr. Res. -1994.-V. 264. P.83−96.
  140. Lau J.M., McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of the backbone of rhamnogalacturonan I, a pectic polysaccharide in the primary cell walls of plants// Carbohydr. Res.- 1985, — V.137.- P. l 11−125.
  141. Lau J.M., McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P. Selective degradation of the glycosyluronic acid residues of complex carbohydrates by lithium dissolved inethylendiamine//Carbohydr. Res.- 1987.- V.168. P.219−243.
  142. McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant cell walls. X. Rhamnogacturonan I, a structurally complex pectic polysaccharide in the walls of suspension-cultured sycamore cells // Plant Physiol. 1980. -V.66.-P.l 128−1134.
  143. Cui W., Eskin M.N.A., Biliaderis C.G., Marat K. NMR characterization of a 4−0-methyl-(3-D-glucuronic acid-containing rhamnogalacturonan from yellow mustard {Sinapis alba L.) mucilage // Carbohydr. Res. 1996. -V.292. — P.173−183.
  144. Hirano M., Kiyohara H., Matsumoto Т., Yamada H. Structural studies of endo-polygalacturonase-resistant fragments of an antiulcer pectin from the roots of Bupleurum falcatum L. // Carbohydr. Res. 1994. — V.251. -P.145−162.
  145. Kiyohara H., Cyong J.-C., Yamada H. Structure and anti-complementary activity of pectic polysaccharides isolated from the root of Angelica acutiloba Kitagawa // Carbohydr. Res. 1988. — V. 182. — P.259−275.
  146. Stevens B.J.H., Selvendran R.R. Pectic polysaccharides of cabbage (Brassica oleracea) // Phytochemistry 1984. — V.23. — P.107−115.
  147. Spellman M.W., McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P., Henrick K. Isolation and characterization of 3-C-carboxy-5-deoxy-L-xylose, a naturally occurring, branched-chain, acidic monosaccharide // Carbohydr.Res. 1983. — V.122. — P. 115−129.
  148. York W.S., Darvill A.G., McNeil M., Albersheim P. 3-dzoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO) is a component of rhamnogalacturonan II, a pectic polysaccharide in the primary cell walls of plants // Carbohydr. Res. -1985. V.138. — P. 109−126.
  149. T.T., Darvill A.G., Albersheim P. 3-deoxy-D-/yxo-2-heptulosaric acid, a component of the plant cell-wall polysaccharide rhamnogalacturonan-II // Carbohydr. Res. 1988. — V.179. — P.269−288.
  150. Thomas J.T., Darvill A.G., Albersheim P. Isolation and structural characterization of the pectic polysaccharide rhamnogalacturonan II from walls of suspension-cultured rice cells // Carbohydr.Res. 1989. — V.185. -P.261−277.
  151. Kobayashi M., Matoh Т., Azuma J. Two chains of rhamnogalacturonan II are cross-linked by borate-diol ester bonds in higher plant cell walls // Plant Physiol. 1996. — V 110. — P. l017−1020.
  152. Ishii Т., Matsunaga T. Isolation and characterization of a boron-rhamnogalacturonan-II complex from cell walls of sugar beet pulp // Carbohydr. Res. 1996. — V. 284. — P. 1−9.
  153. Ishii S. Enzymatic extraction and linkage analysis of pectic polysaccharides from onion // Phytochemistry 1982. — Y.21. -P.778−780.
  154. Redgwell R.J., Melton L.D., Brasch D.J., Coddington J.M. Structures of the pectic polysaccharides from the cell walls of kiwifruit // Carbohydr. Res. 1992. — V. 226. — P. 287−302.
  155. Pellerin P., Doco Т., Vidal S., Williams P., Brillouet J.-M., O’Neill M.A. Structural characterization of red wine rhamnogalacturonan II // Carbohydr.Res. 1996. — V.290. — P.183−187.
  156. Capex P., Toman R., Kardosova A., Rosik J. Polysaccharides from the roots of the marsh mallow {Althaea officinalis L.): structure of an arabinan // Carbohydr. Res. 1983. — V. l 17. — P. 133−140.
  157. R., Himmelsbach D.S. 13C-NMR spectrum of a galactose-rich polysaccharide from tomato fruit // Carbohydr. Res. 1984. — V.127. -P.356−359.
  158. Odonmazig P., Badga D., Ebringerova A., Alfoldi J. Structures of pectic polysaccharides isolated from the Siberian apricot {Armaniaca siberica Lam.)//Carbohydr. Res. 1992.- Y.226. — P.353−358.
  159. Vierhuis E., Korver M., Schols H. A., Voragen A.G.J. Structural characteristics of pectic polysaccharides from olive fruit (Olea europaea cv moraiolo) in relation to processing for oil extraction // Carbohydr. Polym. -2003,-V. 51. -P. 135−148.
  160. Colquhoun I.J., Ruiter G.A., Schols H.A., Voragen A.G.J. Identification by n.m.r. spectroscopy of oligosaccharides obtained by treatment of the hairy regions of apple pectin with rhamnogalacturonase // Carbohydr. Res. — 1990.- V.206. P.131−144.
  161. Tomoda M., Shimizu N., Kanari M., Gonda R., Arai S., Okuda Y. Characterization of two polysaccharides having activity on the reticuloendothelial system from the root of Glycyrrhiza uralensis // Chem. Pharm. Bull. 1990. — V. 38. — P. 1667−1671.
  162. Shimizu N., Tomoda M., Takada K., Gonda R. The core structure and immunological activities of glycyrrhizan UA, the main polysaccharide from the root of Glycyrrhiza uralensis // Chem. Pharm. Bull- 1992-V. 40.-P. 2125−2128.
  163. Schols H.A., Bakx E.J., Schipper D., Voragen A.G.J. A xylogalacturonan subunit present in the modified hairy regions of apple pectin // Carbohydr. Res.- 1995, — V.279. P.265−279.
  164. G. O., Craig J. W. Т., Whyte J. L. Lemon-peel pectin. Part I. Fractionation and partial hydrolysis of water-soluble pectin // Carbohydr. Res. 1968. — V.7. — P. 442−452.
  165. Aspinall G.O., Hunt K., Morrison I.M. Polysaccharides of soy-beans. V. Acidic polysaccharides from the hulls // J. Chem. Soc. 1967. — P. 10 801 086.
  166. Kikuchi A., Edashige Y., Ishii Т., Satoh S. A xylogalacturonan whose level is dependent on the size of cell clusters is present in the pectin from cultured carrot cells // Planta. 1996. — V. 200. — P. 369−372.
  167. Lerouge P., O’Neill M.A., Darvill A.G., Albersheim P. Structural characterization of endo-glycanase-generated oligoglycosyl side chains of rhamnogalacturonan I//Carbohydr. Res. 1993.- V.243.- P.359−371.
  168. McNeil M., Darvill A.G., Albersheim P. Structure of plant cell walls. Rhamnogalacturonan I, a structurally complex pectic polysaccharide in the walls of suspension-cultured sycamore cells // Plant Physiol. 1980. -V.66.- P.1128−1134.
  169. Ovodov Yu.S., Ovodova R.G., Shibaeva V.I., Mikheyskaya L.V. Further structural studies of zosterine // Carbohydr. Res. 1975. — Y.42. -P.197−199.
  170. Р.Г. Химическое исследование зостерана пектина морских трав: Автореферат дисс. канд. хим. наук. — Владивосток, 1971. — 22 с.
  171. Hart D.A., Kindel Р.К. Isolation and partial characterization of apiogalacturonan from the cell walls of Lemna minor II Biochem. J. -1970, — V.116.- P.569−579.
  172. Hart D.A., Kindel P.K. A novel reaction involved in the degradation of apiogalacturonans from Lemna minor and the isolation of apiose as a product // Biochemistry. 1970. — V. 9. — P. 2190−2196.
  173. Cheng L., Kindel P.K. Detection and homogeneity of cell wall pectic polysaccharides of Lemna minor 11 Carbohydr. Res. 1997. -V. 301. — P. 205−212.
  174. Kindel P.K., Cheng L., Ade B.R. Solubilization of pectic polysaccharides from the cell walls of Lemna minor and Apium graveolens // Phytochemistry 1996. — V.41.-P. 719−723.
  175. Hudson C.S. Apiose // Adv. Carbohydr. Chem. 1949. — Y.4. — P.57−72.
  176. Northcote D.H. Plant Biochemistry // Biochem. Ser. 1974. — V.ll. -300 p.
  177. Biochemistry of Carbohydrates // W.J. Whelan, Ed. Ser. 1. V.5. -Butterworths Lnd.: Univ. Pare Press, Baltimore. — 1975. — 441 p.
  178. K.P., Демидова А. И. Углеводы и механизмы их усвоения. -Ташкент: ФАН 1986. — с. 132.
  179. Жизнь растений / Под ред.А. Л. Тахтаджяна М. :Просвещение, 1982. -Т.6.-167 с.
  180. Толленс-Эльснер. Справочник по углеводам. Ленинград: «Красный печатник», 1937−688с.
  181. Р.Г., Головченко В. В., Попов С. В., Шашков А. С., Оводов Ю. С. Структурное исследование и физиологическая активность лемнана, пектина из ряски малой Lemna minor L. II Биоорган, химия. -2000. Т. 26. — № 1. — С. 61−67.
  182. Golovchenko V.V., Ovodova R.G., Shashkov A.S., Ovodov Yu.S. Structural Studies of the pectic polysaccharide from duckweed Lemna minor L. // Phytochemistry 2002. — V. 60. — P. 89−97.
  183. Williams D.T., Jones J.K.N. The chemistry of apiose. Part I // Canad. J. Chem. 1964. — V.42. — P.69−72.
  184. Р. Г. Бушнева O.A., Головченко B.B., Попов С. В. Оводов Ю.С. Способ получения из растительного сырья полисахаридов, обладающих иммуностимулирующим действием // Патент РФ № 2 149 642 от 27.05.00. (приоритет от 9.08.99.) БИ № 15, 2000.
  185. Ю.С., Головченко В. В., Оводова Р. Г. Способ получения D-апиозы из полисахарида ряски малой Lemna minor L. Патент РФ № 2 190 666 от 10.10. 02. (приоритет от 11.07.00.) БИ № 28, 2002.
  186. Ovodova R.G., Golovchenko V.V., Shashkov A.S., Chizhov A.O., Ovodov Y.S. Identification of D-apiose as the sugar constituent of lemnan, pectin from Lemna minor L. // Carbohydr. Res. (in press).
  187. Takeuchi Y., Komamine A. Turnover of cell wall polysaccharides of a Vinca rosea suspension culture. I. Synthesis and degradation of cell wall components // Physiol. Plant. 1980. — Y.48. — P. 271−277.
  188. Goubet F., Norvan C. Synthesis of cell wall galactans from flax (Linum usitatissimum L.) suspension-cultured cells // Plant Cell Physiol. 1994. -V. 35. -P.719−727.
  189. Giinter E.A., Ovodov Yu.S. Changes in cell wall polysaccharides oiSilene vulgaris callus during culture // Phytochemistry. 2002. — V.59. -P. 703−708.
  190. Stolle-Smits Т., Beekhuizen J.G., Kok M.T.C., Pijnenburg M., Recourt K., Derksen J., Voragen A.G.J. Changes in cell wall polysaccharides of green bean pods during development // Plant Physiol. 1999. — Y. 121. -P. 363−372.
  191. Lowry О. H., Rosebrough N. J., Farr A. L., Randall R. J. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem.- 1951.- V. 193,-P. 265−275.
  192. Perepelov A.V., Babicka D., Shashkov A.S., Arbatsky N.P., Senchenkova S.N., Rozalski A., Knirel Y.A. Structure and cross-reactivity of the O-antigen of Proteus vulgaris 08. // Carbohydr. Res. 1999. Y. 318. P. 186−192.
  193. Воск К., Pedersen С. Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy of monosaccharides // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. 1983. — V. 41. -P. 27−66.
  194. Catoire L., Goldberg R., Pierron M., Morvan C., Herve du Penhoat C. An efficient procedure for studying pectin structure which combines limited depolymerization and 13C NMR // Eur. Biophys. J. 1998. — Vol.27. -P.127−136.
  195. Patt S.L., Shoolery J.N. Attached proton test for carbon 13 NMR// J. Magn. Reson. — 1982. — V.46. — P.535−539.
  196. Wood, P.J., Siddiqui, I.R. Determination of methanol and its application to measurement of pectin ester content and pectin methyl esterase activity // Analyt. Biochem 1971. — V. 39. — P.418−423.
  197. А.И., Смирнова Г. П., Билан М. И., Шашков А. С. Полисахариды водорослей. 53*. Бурая водоросль Laminaria saccharina (L.) Lam. как источник фукоидана // Биоорган, химия 1998. — Т.24. — № 6. -С. 437−445.
  198. Godstein I.O., Hay G.W., Lewis В.А. and Smith F. In Methods in carbohydrate chemistry / Ed. R.L. Whistler. New York and London: Acad. Press. — 1965. — V. 5. — P. 361−370.
  199. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determination of sugars and related substances // Analyt. Chem. 1956. — V.28. — P.350−356.
  200. Методы химии углеводов / Под ред. Р. Л. Уистлера, Дж. Н. Бемиллер. М.: Мир, 1975.-445 с.
  201. Nelson N. A photometric adaptation of the Somogyi method for the determanation of glucose // J.Biol.Chem. 1944 — V.153 — P.375−380.1. БЛАГОДАРНОСТИ
  202. Автор выражает искреннюю благодарность своим научным руководителям: академику Оводову Юрию Семеновичу и ст.н.с., к.х.н. Оводовой Раисе Григорьевне.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!