Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Влияние размеров белковых макромолекул на избирательность их сорбции катионитами различных типов

Диссертация: Влияние размеров белковых макромолекул на избирательность их сорбции катионитами различных типов
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

В связи с вышеизложенным, выбранное направление исследований, а именно, исследование взаимодействия модельных белковых смесей с полимерными сорбентами с различной концентрацией ионогенных групп с целью определения влияния молекулярных размеров белков на избирательность их сорбции в многокомпонентном процессе, является актуальной задачей физической химии, как с теоретической, так и с прикладной… Читать ещё >

Содержание

  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Общие принципы сорбции белков
    • 1. 2. Взаимодействие белков с сорбционными материалами
    • 1. 3. Материалы, используемые для ионобменной хроматографии белков
      • 1. 3. 1. Требования к сорбентам для хроматографии белков
      • 1. 3. 2. Синтез полимерных сорбционных материалов
      • 1. 3. 3. Типы высокопроницаемых сетчатых полиэлектролитов
      • 1. 3. 4. Гетеросетчатые сорбенты
      • 1. 3. 5. Целлосорбенты
      • 1. 3. 6. Монолитные носители
      • 1. 3. 7. Концентрация ионогенных групп в сорбенте
    • 1. 4. Синергизм и конкуренция при взаимодействии белков с полимерными сорбентами
  • ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
    • 2. 2. Гетеросетчатые набухающие полиэлектролиты
      • 2. 2. 1. Синтез сополимеров МАА, ГПМА и ЭДМА
    • 2. 3. Монолитные диски
      • 2. 3. 1. Синтез макропористого сополимера ГМА-ЭГДМА
      • 2. 3. 2. Модификация монолитных дисковых сорбентов хлоруксуснои кислотои
    • 2. 4. Методы исследования сорбентов
      • 2. 4. 1. Определение степени набухания сорбента
      • 2. 4. 2. Определение обменной емкости сорбента
      • 2. 4. 3. Определение констант ионизации
      • 2. 4. 4. Оценка пористости использованных в работе сорбентов методом ртутной порометрии
      • 2. 4. 5. Метод динамической десорбции паров
    • 2. 5. Методы изучения сорбции белков
      • 2. 5. 1. Определение оптимальных условий сорбции модельных белков
      • 2. 5. 2. Эксперименты в статических условиях (сорбция из ограниченного объема раствора)
      • 2. 5. 3. Эксперименты в динамических условиях
        • 2. 5. 3. 1. Сорбция белковых растворов на гетеросетчатых набухающих полиэлектролитах. ^
        • 2. 5. 3. 2. Сорбция белковых растворов на карбоксилированных монолитных дисках
      • 2. 5. 4. Определение концентрации белков
      • 2. 5. 5. Электрофорез белков в полиакриламидном геле
      • 2. 5. 6. Окраска белков в полиакриламидном геле
    • 2. 6. Гель-хроматография
    • 2. 7. Модификация поверхности полистирольных латексов цитохромом
    • 2. 8. Сшивание цитохрома с глутаровым альдегидом
    • 2. 9. Выделение белков большего размера из плазмы крови
    • 2. 10. Расчет биленгмюровских изотерм для пары цитохром с — БСА
  • ГЛАВА 3. ИЗБИРАТЕЛЬНОСТЬ СОРБЦИИ БЕЛКОВ НА
  • НАБУХАЮЩИХ СОРБЕНТАХ
    • 3. 1. Влияние содержания ионогенных групп на структуру и свойства катионитов
    • 3. 2. Оценка взаимосвязи сорбционных свойств и структуры карбоксильных гетеростечатых катионитов с различным содержанием ионогенных групп
    • 3. 3. Исследование процессов сорбции модельных белков на серии набухающих гетеросетчатых катионитов с различным содержанием карбоксильных групп
      • 3. 3. 1. Определение оптимума pH для сорбции модельных белков
      • 3. 3. 2. Сорбция модельных белков из индивидуальных растворов
      • 3. 3. 3. Последовательная сорбция модельных белков
      • 3. 3. 4. Совместная сорбция модельных белков
      • 3. 3. 5. Расчет биленгмюровских изотерм при «полуконкурентном» характере взаимовлияния белков в сорбционном процессе
  • ГЛАВА 4. ИЗБИРАТЕЛЬНОСТЬ СОРБЦИИ БЕЛКОВ НА МОДИФИЦИРОВАННЫХ МОНОЛИТНЫХ НОСИТЕЛЯХ
    • 4. 1. Модификация поверхности ГМА-ЭГДМА сополимера
    • 4. 2. Исследование структуры катионитов на основе ГМА-ЭГДМА сополимера методами динамической десорбции воды и ртутной порометрии
    • 4. 3. Адсорбция модельных белков
      • 4. 3. 1. Определение условий адсорбции
      • 4. 3. 2. Адсорбция модельных белков из индивидуальных растворов
      • 4. 3. 3. Последовательная адсорбция модельных белков на 106 карбоксилированных монолитных ГМА-ЭГДМА носителях
      • 4. 3. 4. Совместная адсорбция модельных белков на 111 карбоксилированных монолитных ГМА-ЭГДМА носителях
    • 4. 4. Избирательность сорбции как функция размеров сорбата
      • 4. 4. 1. Модификация поверхности полистирольных латексов
      • 4. 4. 2. Влияние сшивание цитохрома на избирательность сорбции
    • 4. 5. Сорбция белков из плазмы крови

Влияние размеров белковых макромолекул на избирательность их сорбции катионитами различных типов (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Различные хроматографические методы выделения и очистки биологически активных веществ (БАВ), в частности белков, имеют свои достоинства и недостатки. Наиболее экономичными и легко масштабируемыми процессами являются фронтальные процессы ионообменной хроматографии. Но по избирательности они уступают процессам аффинной хроматографии. Выделение белка с использованием одноактного ионообменного процесса может быть проведено, если целевой компонент резко отличается по своим свойствам от остальных компонентов. В противном случае приходится либо использовать каскад колонок с различными сорбентами, либо после насыщения фазы сорбента смесью различных белков с помощью промывки сорбента различными буферными растворами стараться отделить целевой белок от сопутствующих. Процесс осложняется тем, что множественные ион-ионные взаимодействия белка с ионогенными группами сорбента, дополняемые гидрофобным взаимодействием, приводят к межбелковому связыванию в фазе сорбента, что отрицательно сказывается на разделении белков. Известно, что уменьшение концентрации ионогенных групп сорбента повышает эффективность разделения. Однако, эти исследования проводили на модельных растворах, содержащих белки с близкой молекулярной массой и, соответственно, примерно одинаковыми размерами. Очевидно, что размеры белковой макромолекулы, непосредственно влияя на ее диффузию в фазе сорбента, должны оказывать и влияние на избирательность ее ' сорбции из многокомпонентной смеси. Чем больше размеры белка, тем больше на его поверхности групп способных к связыванию с полиэлектролитной сеткой или заряженной поверхностью. Следовательно, можно ожидать, что при определенных условиях после пропуска через колонну с сорбентом раствора смеси белков сорбент окажется насыщенным самым большим по размеру белком. Таким образом, весь процесс выделения белка возможно провести всего в две стадии: сорбция до насыщения и последующая десорбция.

В связи с вышеизложенным, выбранное направление исследований, а именно, исследование взаимодействия модельных белковых смесей с полимерными сорбентами с различной концентрацией ионогенных групп с целью определения влияния молекулярных размеров белков на избирательность их сорбции в многокомпонентном процессе, является актуальной задачей физической химии, как с теоретической, так и с прикладной точки зрения. Создание сорбентов с уменьшенным содержанием ионогенных групп позволит оптимизировать процессы тонкого разделения белков в хроматографическом процессе.

Работа выполнялась при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (коды проектов 03−03−32 710 и 06−03−32 363) и по планам Института высокомолекулярных соединений РАН. Кроме того, работа является победителем «Конкурса персональных грантов 2007 года для студентов и аспирантов вузов и академических институтов Санкт-Петербурга»" и программы «Участник Молодежного Научно-Инновационного Конкурса» (УМНИК).

Цель работы: Исследование влияния молекулярных размеров белков на избирательность их сорбции гетеросетчатыми катионитами и монолитными носителями с варьируемым числом ионогенных групп для повышения эффективности разделения белков в ионообменной хроматографии.

Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи: получение макропористых монолитных катионитов (сополимеров глицидилметакрилата и этиленгликольметакрилата) с различной степенью карбоксилированияисследование влияния концентрации карбоксильных групп в набухающих полиэлектролитных сетках при постоянном содержании сшивающего агента, а так же степени карбоксилирования монолитного носителя на структуру сорбентовизучение процессов последовательной и совместной сорбции смесей модельных белков, различающихся своими размерами, на катионитах с различным содержанием карбоксильных группсоздание модели укрупненного белка путем сшивания макромолекул глутаровым альдегидом, а также их прививки на частицы полистирольного латекса с целью проверки предположения об определяющей роли размеров белка в избирательности сорбции на катионитах с малым содержанием карбоксильных группрасчет биленгмюровских изотерм на основании данных, полученных для однокомпонентных систем, содержащих сорбент и раствор одного белка;

разделение белков плазмы крови по их молекулярным размерам на полученных ионобменных сорбентах.

Методы исследования. Для исследования структуры набухающих гетеросетчатых катионитов, макропористых монолитов и катионитов на их основе были использованы методы электронной микроскопии, динамической десорбции паров и ртутной порометрии. Для определения количества ионогенных групп и их константы диссоциации был использован метод кислотно-основного и потенциометрического титрования. Для оценки составов белковых растворов до и после контакта с сорбентом применялись методы спектрофотометрии в УФ и видимой областях, а так же гель-электрофорез. Для количественной оценки результатов гель-электрофореза был использован метод денситометрии.

Объектами исследования являлись 1) серия гетеросетчатых набухающих катионитов на основе сополимера метакрилоил-р-аланина, гидроксипропилметакриламида и этилендиметакриламида с различным содержанием ионогенных группмакропористые монолитные носители на основе сополимера глицидилметакрилата и этиленгликольдиметакрилата, а так же серия катионитов, полученная путем их модификации.

2) модельные белки (фибриноген, бычий сывороточный альбумин, цитохром с), их смеси и плазма крови человека. Научная новизна,.

1. Методами электронной микроскопии, динамической десорбции паров и ртутной порометрии показано, что изменение соотношения между ионогенными и неионогенными звеньями сорбентов при сохранении постоянного содержания сшивающего агента для полиэлектролитных сеток, а так же степень карбоксилирования для монолитных носителей не оказывают существенного влияния на строение сорбционных материалов.

2. Изучена кинетика реакции модификации монолитных носителей карбоксильными группами и получена серия сорбентов с различной концентрацией ионогенных групп. Показано, что отсутствие диффузионных затруднений в проточных порах монолитных носителей позволяет добиться равномерного распределения карбоксильных групп на поверхности пор.

3. Показано, что при высокой концентрации ионогенных групп (0,6 мг-экв/г и выше) процессы последовательной и совместной сорбции модельных белков различного размера на карбоксильных катионитах различных типов (гетеросетчатых и монолитных) в статических и динамических условиях сопровождаются синергетическими явлениями.

4. Установлено, что уменьшение содержания ионогенных групп в фазе сорбента в 4−5 раз по сравнению с максимально достижимой (до значения 0.2−0.3 мг-экв/г) приводит к «полуконкурентной» сорбции: больший по размеру белок вытесняет меньший, тогда как обратного явления не происходит. При этом наблюдается резкое (на два порядка) увеличение избирательности сорбции большего белка.

Практическая значимость работы.

На примере полученных серий набухающих и макропористых монолитных сорбентов с различным содержанием карбоксильных групп продемонстрировано, что уменьшение полной обменной емкости сорбентов увеличивает избирательность сорбции белков большого размера из смеси. Результаты, полученные при разделении модельных смесей белков, могут быть использованы при разработке процессов разделения биологических жидкостей, например, плазмы крови.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1. При последовательной и совместной сорбции белков различных размеров на карбоксильных катионитах, как набухающих, так и монолитного типа, при большой (до 0,6 мг-эюУг) концентрации ионогенных групп в условиях, близких к условиям максимального связывания, наблюдаются синергетические явления.

2. Уменьшение концентрации карбоксильных групп приводит к ослаблению связывания белка с полиэлектролитной сеткой или поверхностью монолитного носителя, и это ослабление связывания зависит от размеров белковых макромолекул. Это обстоятельство позволяет резко (на два порядка) увеличить избирательность сорбции из смеси белка большего по размеру.

3. Расчет биленгмюровских изотерм на основании данных, полученных для однокомпонентных систем (сорбент — раствор белка) дает количественное совпадение с экспериментом лишь для вытесняемого белка.

4. Жесткая структура монолитных носителей позволяет добиться большего выигрыша в избирательности сорбции по сравнению с набухающими гетеросетчатыми катионитами.

5. Структурные изменения полиэлектролитных сеток при изменении соотношения между ионогенными и неионогенными звеньями при постоянном содержании сшивающего агента, а также монолитных носителей при изменении степени карбоксилирования незначительны и не влияют на характер сорбционных процессов.

6. Методы, разработанные для модельных смесей белков, дают возможность разделить во фронтальном хроматографическом режиме белки плазмы крови.

Личный вклад автора состоял в непосредственном проведении экспериментов и расчетов, анализе и обобщении результатов, в разработке модельных представлений.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на четырех Санкт-Петербургский конференциях молодых ученых «Современные проблемы науки о полимерах» (февраль 2005, февраль 2006, апрель 2007 и апрель 2008), на 5-м и 6-м Международном симпозиуме «Molecular Mobility and Order in Polymer Systems» (Санкт-Петербург, июнь 2005 и июнь 2008), на X Международной конференции «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии» (Москва, апрель 2006), на Третьей и Четвертой Всероссийских конференциях «Физико-химические процессы в конденсированном состоянии и на межфазных границах» (Воронеж, октябрь 2006 и октябрь 2008), на Международной конференции «Actual problems of polymer chemistry and physics» (Ташкент, 2006), на Всероссийском симпозиуме «Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях». (Москва, апрель 2007), на научном семинаре Российского Химического общества им. Д. И. Менделеева по хроматографии (май 2007), на XI Международной конференции «Физико-химические основы ионобменных процессов — ИОНИТЫ-2007» (сентябрь 2007) и на Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хромато-масс-спектрометрия» (Москва, апрель 2008).

Структура работы.

Диссертация состоит из введения, четырех глав основного текста, библиографии (103 источника), заключения и выводов. Работа изложена на 137 страницах текста и содержит 41 рисунок и 16 таблиц.

ВЫВОДЫ.

1. Показано, что в процессах сорбции модельных пар белков, отличающихся молекулярными размерами, на карбоксильных катионитах, как набухающих, так и монолитного типа, при большой (от 0,6 мг-экв/г и выше) концентрации ионогенных групп в условиях, близких к условиям максимального связывания, отсутствует вытеснение одного белка другим.

2. Впервые показано, что ослабление связывания белка с полиэлектролитной сеткой или поверхностью монолитного носителя, вызванное снижением концентрации карбоксильных групп (до 0.2−0.3 мг-экв/г), зависит от размеров белка. Больший по размеру белок вытесняет меньший, обратного вытеснения не происходит. Этот эффект «полуконкурентной» или «частично конкурентной» сорбции позволяет увеличить избирательность сорбции из смеси белка большего по размеру.

3. Сравнение экспериментальных данных, полученных для сорбции двухкомпонентных систем (сорбент — раствор двух белков) с расчетными значениями для биленгмюровских изотерм показывает количественное совпадение только для вытесняемого белка, что подтверждает эффект «полуконкурентной» сорбции.

4. Установлено, что увеличение избирательности значительно выше при сорбции белков на карбоксилированных монолитных носителях, чем на набухающих гетеросетчатых катионитах, что связано с отсутствием диффузионных затруднений для макромолекул, а так же с жесткой структурой поверхности монолитных сорбентов.

5. Физическими методами (электронная микроскопия, ртутная порометрия и динамическая десорбция паров) установлено, что изменение содержания карбоксильных групп незначительным образом сказывается на проницаемости сорбентов для белков и, следовательно, не оказывает влияния на характер сорбционных процессов.

6. Показана возможность проведения во фронтальном хроматографическом режиме одностадийного выделения из плазмы крови белков с молекулярной массой фибриногена и выше.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Совокупность полученных данных позволяет утверждать, что использование сорбентов с уменьшенной плотностью ионогенных групп позволяет во фронтальном режиме резко увеличить избирательность сорбции белков большого размера. Отсутствие диффузионных затруднений обеспечивает значительно больший эффект при сорбции белковых смесей карбоксильными катионитами монолитного типа по сравнению с сорбцией тех же белков набухающими гетеросетчатыми карбоксильными катионитами. В настоящее время монолитные носители используются лишь в аналитических целях, однако, бурное развитие технологии уже привело к созданию монолитных колонок, что позволит в будущем промасштабировать процессы разделения.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Г. И., Безбородов A.M. Введение в биотехнологию. М.: Наука, 2002. 286 с.
  2. Methods of Protein Analysis, Ed. by Kerese I., Akademiai Kiado, Budapest, 1984. P. 371.
  3. Т. В., Svec F. Theoretical aspects of separation using short monolithic beds. In Monolithic Materials: Preparation, Properties, and Applications, Svec F., Tennikova Т. В., Deyl. Z. (Eds.) Elsevier, Amsterdam, 2003, P. 351−372.
  4. Norde W., Haynes Ch. Structures and stabilities of adsorbed proteins // J. Colloid Interface Sci. 1995. V. 87. P. 313−328.
  5. Andrade J., Hlady V. et al. A domain approach to the adsorption of complex proteins: preliminary analysis and application to albumin // Croat.Chem. ACTA. 1990. V.63. P.527−538.
  6. Peng Gong, Szeleifer I. Competitive adsorption of model charged proteins: the effect of total charge and charge distribution //J. Colloid Interface Sci. 2004. V.278. Iss.l. P.81−90.
  7. Shen H. and Frey Douglas D. Effect of charge regulation on steric mass-action equilibrium for the ion-exchange adsorption of proteins // J. Chromatography A. 2005. V. 1079. Iss. 1−2. P. 92−104.
  8. Giacomelli C., Avena M. and De Pauli C. Adsoiption of Bovine Serum Albumin onto Ti02 Particles // J. Colloid Interface Sci. 1997. V.188. P. 378−395.
  9. Klose Т., Welzel P., Werner C. Protein adsorption from flowing solutions on pure and maleic acid copolymer modified glass particles // Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 2001. V. 51. P. 1−9.
  10. Wen Y., Dubin P.L. Potentiometric studies of the interaction of bovine serum, albumin and poly (dimethyldiallylammonium chloride // Macromolecules. 1997. V.30. P.7856−7861.
  11. Finette G., Baharin B., Mao O. et al. Adsorption behavior of multicomponent mixtures containing al-proteinase inhibitor with the anion exchanger, 2-(diethylaminno)ethyl-spherodex // Biotechnol. Prog. 1997. V.13. P.265−275.
  12. Wang R., Zhang Y., Ma G., Su Zh. Modification of poly (glycidyI methacrilate-divinylbenzene) porous microsphers with polyethylene glycol and their adsorption property of protein // Colloids and Surfaces B. 2006. V.51. P.93−99.
  13. Hunter A., Carta G. Protein adsorption on novel acrylamido-based polymeric ion-exchangers: Morphology and equilibrium adsorption // J. Chromatography A. 2000. V.897. Iss 1−2. P.65−80.
  14. Hunter A., Carta G. Protein adsorption on novel acrylamido-based polymeric ion exchangers II. Adsorption rates and column behavior // J. Chromatography A. 2000. V.897. Iss. 1−2. P. 81−97.
  15. Russell, S., Belcher, E.B., Carta, G. Protein Diffusion in Supported Cationic Poly (acrylamide)-Based Hydrogels // AIChE J., 2003. V. 49. P.1168.
  16. Russell, S.M., Carta, G. Multicomponent Protein Adsorption in Supported Cationic Poly aery lamide Hydrogels // AIChE J. 2005. V. 51. P. 8.
  17. Hunter A., Carta G. Protein adsorption on novel acrylamido-based polymeric ion exchangers. Effects of protein size on adsorption capacity and rate // J. Chromatography A. V.971. Iss.1−2. 2002. P.105−116.
  18. Staby A., Jacobsen J., Hansen R., Bruus U., Holm I. Comparison of chromatographic ion-exchanger resins. Strong and weak cation-exchange resins // J. Chromatography A. 2006. V. l 118. Iss.2. P. 168−179.
  19. Staby A., Sand M.-B., Hansen R., Jacobsen J., Andersen L., Gerstenberg M., Bruus U. Comparison of chromatographic ion-exchange resins. Strong cation-exchange resins // J. Chromatography A. 2004. V.1034. Iss.1−2. P.85−97.
  20. Adachi T., Isobe E. Fundamental characteristics of synthetic adsorbents intended for industrial chromatographic separations // J. Chromatography A. 2004. V.1036. Iss.l. P.33−44.
  21. Adachi T., Ando Sh. And Watanabe J. Characterization of synthetic adsorbents with fine particle sizes for preparative-scale chromatographic separation // J. Chromatography A. 2002. V. 944. Iss. 1−2. P.41−59.
  22. Adachi T., Isobe E. Use of synthetic adsorbents in preparative normalphase liquid chromatography // J. Chromatography A. 2003. V.989. Iss. 1. P. 19−29.
  23. Guerrier L., Lomas L., Boschetti E. A new general approach to purify proteins from complex mixtures // J. Chromatography A. 2007. V.1156. Iss.1−2. P.188−195.
  24. Lohramann M., Sculte M., Strube J. Generic method for systematic phase selection and method development of biochromatographic process //J. Chromatography A. 2005. V.1092. Iss.l. P.89−100.
  25. Dismer F. and Hubbuch J. A novel approach to characterize the binding orientation of lysozyme on ion-exchannge resins // J. Chromatography A. 2007. V. l 149. Iss.2. P.312−320.
  26. Jungbauer A. Chromatographic media for bioseparation // J. Chromatography A. 2005. V. 1065 Iss.l. P.3−12.
  27. Tyn M.T. and Gusek T.W. Prediction of diffusion coefficients of proteins //Biotechnol. Bioeng. 1990. V.35. P.327.
  28. Hemstrom P. Hydrophilic separation materials for liquid chromatography. Umea University, Umea. 2007, P. 1−26.
  29. Г. В., Тростянская Е. Б., Елькин Г. Э. Ионный обмен: сорбция органических веществ. Л.: Химия, 1969. 335 с.
  30. Samsonov G. V., Kuznetsova N.P. Crosslinked polyelectrolytes in biology //Adv. Polymer Sci. 1992. V.104. P. l -50.
  31. В.Ф., Котова Д. Л., Орос Г. Ю., Загородний А. А. Хроматография низкого давления физиологически активных веществ. С.546 569 в книге «100 лет хроматографии», М.: Наука, 2003. 740 с.
  32. М.А., Михлин B.C., Марусина С.В.,.Потопчина О. Б. Синтез и применение глицидилметакрилата (тематический обзор) М.: ЦНИИ нефтепереработки и нефтехим. пром-ти, 1979. 59с.
  33. Jelinkova М., Shataeva L.K., Tischenko G.A., Svec F. Reactive polymers. 58. Polyampholytes based on macroporous copolymers of glycidil methacrylate with ethylene glycol dimethacrylate or divinylbenzene // Reactive polymers. 1989. V.ll. N 1. P.253−260.
  34. .Я., Логвиненко Из.А., Зорина А. И., Сахарова Л. И., Хорош М. И. Синтез и сорбционные свойства пористого карбоксильного катионита КМ-2п на основе акрилонитрила и дивинилбензола. Из сборника Н. С. Иониты и Ионный обмен. М.: Химия, 1975. 232 с.
  35. Ионообменные материалы для процессов гидрометаллургии, очистки сточных вод и водоподготовки. Справочник под ред. Ласкорина Б. Н. М.: Госкомитет по использованию атомной энергии СССР. ВНИИХТ, 1985. 207с.
  36. Шатаева J1.K., Чернова И. А., Сельцер А. В., Шашков Б. В. Самсонов Г. В. Структура и сорбционные свойства регенерированного гемосорбента СКН // Прикладная биохимия и микробиология. 1984. Т.20. № 3. С.393−399.
  37. Г. В., Меленевский А. Т. Сорбционные и хроматографические методы физико-химической биотехнологии. Л.: Наука, 1986. 227с.
  38. Л.К., Кузнецова Н. Н., Елькин Е. Э., Карбоксильные катеониты в биологии. Л.: Наука, 1979. 286 с.
  39. Spevacek J., Dusek К. Manifestation of microgel-like particles of styrene-ethylene dimethacrylate copolymers in solution in .H and 13C NMR spectra //J. Polymer Sci. 1989. V.18. N 10. P.2027−2035.
  40. Ezhova N.M., Chernova I.A., Sukhanova Т.Е. Morphology variability of methacrylic acid polymer networks // 5-th Int.Symp. Molecular Mobility and order in Polymer Systems. St. Petersburg, June 20−24. 2005. P. 94.
  41. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии, под ред. А. Хеншен, К.-П.Хупе, Ф. Лотшпайх, В. Вёльтер, М.: Мир, 1988. 687 с.
  42. Pelzbauer Z., Forst V. The Electron-Microscopic evalution of the porosity of ion exchangers // Collect.Czechosl.Chem. Commun. 1966. V.31. P.2338−2343.
  43. Й.В., Марушка A.B., Моцкайтите Б. Н. Получение целлюлозных гранул из растворов ацетилцеллюлозы // Химия древесины. 1987. № 4. С.36−40.
  44. К.П., Никифорова Е. С., Ежова Н. М., Самсонов Г. В. Способ получения композиционных анионитов. Патент РФ № 1 819 272. 1993.
  45. А.А., Могилевская А. Д., Самсонов Г. В. особенности многокомпонентной сорбции белков катионсодержащими композитами // Журн. Физической Химии. 1996. Т.70. № 11. С.2059−2062.
  46. Jongbauer A. and Hahn R. In Monolithic Materials: Preparation, Properties and Applications, Svec F., Tennikova T. and Deyl Z. (Eds) Elsevier, New York, 2002. P.561.
  47. T.B. Tennikova, D. Freitag, in H.Y.Aboul-Ehnen (Ed.), Analytical and Preparative Separation methods of Biomolecules, Dekker, New York, 1999. P.255.
  48. Strancar A., Barut M., Podgornic A., Koselj P. Convective Interaction Media: polymer supports for fast separation of biomolecules // LC-GC Int. 1998. V.10. P. 660.
  49. Tennikova T.B., Freitag R. An introduction to monolithic disks as stationary phases for high performance biochromatography (review) //
  50. J. High Resol. Chromatography. 2000. V.23. P.27.
  51. Т. В., Svec F., Theoretical aspects of separation using short monolithic beds. In Monolithic Materials: Preparation, Properties, and Applications, Svec F., Tennikova Т. В., Deyl. Z. (Eds.) Elsevier, Amsterdam, 2003. P. 351−372.
  52. Tennikova T.B., Freitag R. An introduction to monolithic discs as stationary phases for high performance liquid chromatography // J. High Resol. Chromatography. 2000. V.23. P.27.
  53. M., Azad A.R., Bailon P. // J. Chromatography A. 1992. V.597. P.155.
  54. Tennikova T.B., Bleha M., Svec F., Almazova T.V., Belenkii B.G., Highperformance membrane chromatography of proteins, a novel method of protein separation//J. Chromatography A. 1991. V. 555. P.97−107.
  55. Strancar A., Podgornik A., Barut M. Short Monolithic Columns as Stationary Phases for Biochromatography // Modern Advances in Chromatography, Springer Berlin/Heidelberg, ISSN 0724−6145, 2002 V. 76.
  56. Pessela B.C.C., Munilla R., Betancor L., Fuentes M., Carrascosa A.V. Ionic exchange using lowly activated supports: an easy way for purifying large proteins // J. Chromatography A. 2004. V. 1034. P. 155.
  57. Shen H. and Frey D.D. Effect of charge regulation on steric mass-action equilibrium for the ion-exchange adsorption of proteins // J. Chromatography A. 2005. V. 1079. P.92.
  58. Hellferich F., Klein G. Multicomponent chromatography, Dekker, New York, 1970. P.328.
  59. А.А., Дынкина И. М. Явления синергизма в процессах сорбции инсулина и рибонуклеазы катионитами // Журн. Физической Химии. 1995. Т.69. № 4. С.718−721.
  60. А.А., Могилевская А. Д., Самсонов Г. В. Влияние конформации белковых макромолекул на процессы многокомпонентной сорбции // Журн. Прикладной Химии. 1995. Т.68. № 9. С.1453−1455.
  61. А.А., Могилевская А. Д., Самсонов Г. В. Изменения избирательности в процессе многокомпонентной сорбции белков // Журн. Прикладной Химии. 1996. Т.69. № 1. С.31−34.
  62. Xu W. and Regnie F.E. Protein-protein interactions on weak-cation-exchange sorbent surfaces during chromatographic separations // J. Chromatography A. 1998. V.828. Iss.1−2. P.357−364.
  63. Demin A.A., Mogilevskaya A.D., Samsonov G.V. Synergistic effects in the processes of protein multicomponent sorption // J. Chromatography A. 1997. V.760. P.105−115.
  64. A.A., Могилевская А. Д., Самсонов Г. В. Особенности многокомпонентной сорбции белков катионитосодержащими композитами. // Журн. Физической Химии. 1996. Т. 70. № 11. С. 2059.
  65. А.А., Папукова К. П., Никифорова Е.С, Павлова Е. Н. Влияние синергетических эффектов на процессы разделения белков ионобменной хроматографии // Журн. Прикладной Химии. 2001. Т.74. № 4. С.625−629.
  66. Papukova К.Р., Nikiforova E.S., Demin А.А., Melenevsky A.T. and Chizhova E.B. Hydrophilic heteroreticular polyelectroplytes with varying content of carboxyl groups // J. Polymer Sci. 2004. V.46. N 9. P. 906−910.
  67. Freitag R., Allington R.W. Modern advances in chromatography // Science. 2002. V. 176. P.64−75.
  68. Т.Г. Ртутная порометрия и ее применение для описания пористых структур адсорбентов. Из кн. Адсорбция и пористость. М.: Наука, 1976. С. 191−198.
  69. Т. Г., Колосенцев С. Д. Порометрия. JL: Химия, 1988. 176с.
  70. Е.И., Елкина И. Б., Волков В. В. Пат. РФ № 2 141 642, 1998.
  71. Е.И., Волков В. В. Докл. АН. 378.№ 4.507. 2001.
  72. М.В., Тепляков В. В., Магсумов М. И. и др. Исследование пористости неорганических мембран методом динамической десорбции паров //Кинетика и катализ. 2005. Т. 46. № 6. С. 909−914.
  73. Е.И., Родионова И. А., Солдатов А. П. и др. Взаимосвязь транспортной пористой структуры с гидродинамическойпроницаемостью неорганических мембран // Журн. Физической Химии. 2004. Т.78. № 5. С. 943.
  74. Грег С, Синг К. Адсорбция, удельная поверхность, пористость. М.: Мир, 1984. 407 с.
  75. Cano Т., Offringa N., Willson R.C. Competitive ion-exchange adsorption of proteins: Competitive isotherms with controlled competitor concentration // J. Chromatography A. 2005. V. 1079. P. l 16.
  76. A.T., Чижова Е. Б., Папукова К. П. Сорбция белков лизоцима и цитохрома с на карбоксильном катионите КМДМ-6−5 // Журн. Физической Химии. 1999. Т.73. № 11. С.2068−2071.
  77. Laemmli, UK Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. V.227. P. 680−685.
  78. JI.A. Методы исследования белков и нуклеоновых кислот: электрофорез и центрифугирование. М.: Наука, 1981. 288 с.
  79. Molday R.S., Dreyer W. Immunomicrospheres: reagents for cell labeling and separation// J. Cell. Biology. 1975. V.64. P.75.
  80. R.I. //Anal. Biochem. 1984. V. 143. P.l.
  81. H., Грицкова И., Черкасов В., Чалых А. Синтез монодисперсных функциональных полимерных микросфер для иммунодиагностических исследований // Успехи химии. 1996. № 2. С.178−191.
  82. Staros J.V., Wright R.W., Swingle D.M. Enhancement by N-hydroxysulfosuccinimide of water-soluble carbodiimide-mediated coupling reactions // Anal. Biochem. 1986. V. 156. Iss. 1. P.220−222.
  83. Demin A.A. and Melenevsky A.T. Bi-Langmuir Isotherms' applicability for description of interaction of ion-exchanger sorbents with protein mixtures // J. Chromatographic Sci. 2006. V.44. P. 181−186.
  84. К. П., Никифорова Е. С., Демин А. А, Меленевский А. Т., Чижова Е. Б. Гидрофильные гетеросетчатые полиэлектролиты сварьируемым содержанием карбоксильных групп // Высокомолек. соед. А. 2004. Т.46. № 9. С. 1488.
  85. Melenevsky А.Т., Chizhova Е.В. and Papukova К.Р. The sorpion of proteins lysozime and cytochrom с on cation-exchanger CMDM—6−5 // Журн. Физической Химии. 1999. V.73. P. 1693−1696.
  86. Azanova V.V., Hradil J., Svec F., Pelzbauer Z. Glycidil methacrilate-styrene-ethylene dimethacrylate terpolymers modified with strong-acid groups // Reactive Polymers. 1990. V. 12. P.247−260.
  87. Kim M., Kiyohara S., Konishi, S. et al. Ring-opening reactions of poly-GMA chain grafted onto a porous membrane // J. of Membrane Sci. 1996. V. l 17. P.33−38.
  88. Hradil J., and Svec F. Synthesis of Polymeric Sorbents with Carboxylic Groups by Chemical Reactions of the Copolymer Dihydroxypropyl Methacrylate-Ethylene Dimethacrylate // Reactive Polymers. 1985. 48. V. 3. P. 91−99.
  89. Ostryanina N.D., Tennikova T.B. Effect of experimental conditions on strong biocomplementary pairing in high performance monolithic disk affinity chromatography // J. Chromatography B. 2002. V.770. P.35.
  90. Н.П., Мишаева P.H., Гудкин Л. Р. Исследование олигомеризации глутарового альдегида при его конденсации с глицином // Журн. Прикладной Химии. 1999. Т. 72. Вып. 7. С. 1171 -1177.
  91. Р.Н., Гудкин Л. Р., Кузнецова Н. П. Модификация каталазы глутаровым альдегидом // Прикладная биохимия и микробиология. 2006. Т.42. С.404−408.
  92. Н.П., Мишаева Р. Н., Гудкин Л. Р. Олигомеризация бифункционального альдегида при взаимодействии с диполярными ионами // Журн. Прикладной Химии. 2002. Т.75. С.991−997.
  93. Н.П., Гудкин Л. Р., Кольцова С. В., Мишаева Р. Н. // Высокомолек. соед. А. 1996. Т.38. № 10. С. 1668−1673.
  94. Tomono Т., Ikeda Н., Tokunaga Е. High-performance ion-exchange chromatography of plasma proteins // J. Chromatography A. 1983. V.26. P. 39−47.
  95. Goheen S.C., Hilsenbeck J.L. High performance ion-exchannge chromatography and adsorption of plasma proteins // J. Chromatography A. 1998. V.824. P.135−141.
  96. Andrade J.D. and Hlady V. Plasma protein adsorption: The big twelve // Annals New York Acad. Sci. 1987. V.516. P.159−171.
  97. Yang G., Liu H., Zhang Y. et al. On-line simoultaneous removal of human serum albumin and enrichment of doxazosine using weak cation-exchange monolithic columns //J. Chromatography A. 2006. V. l 129. P.231−235.
  98. Hagen D.F., Markell C.G. Membrane approach to solid-phase extractions //Anal. Chim. Acta 1990. V.236. P.157.
  99. Theodoris Т., Papadoyanis I., Tsoukali-Papadopouloy H. // J.Liq. Chromatography. 1995. V.18. P.1993.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!