Молекулярно-генетический анализ хромосомной сар-области vibrio cholerae 0139
Адамов А, К, Щуркина И. И., Алексеева Л. П. О связи вирулентности с антигенной структурой холерных вибрионов // Генет. и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инф. Матер. Рос. науч. конф.: Тез, докл. Волгоград, 1992. С. 69. Смирнова Н. И., Давыдова Н, И., Ерошенко Г. А. Генетический анализ хромосомной области Vibrio cholerae, содержащей мутацию Тох-2, влияющую на продукцию холерного… Читать ещё >
Содержание
ЗАКЛЮЧЕНИЕ Эпидемия холеры в конце 1992 г. в Индии и Бангладеш была впервые вызвана холерным вибрионом, структура липополиоахарида которого весьма отличалась от таковой не только традиционных возбудителей холеры классического и эльтор биоваров, относящихся к 01-оерогруппе, но и известных к тому времени холерных неагглю-тинирующихоя вибрионов 02 — 0138 оерогрупп. Поэтому новый эпидемический или бенгальский штамм был отнесен к ранее неизвестной 0139-оерогруппе. Второе основное отличие бенгальских штаммов от традиционных возбудителей холеры заключалось в продукции ими еще одного нового поверхностного антигена — полисахаридной капсулы, которая не была обнаружена ни у одного штамма V. oholerae 01 классического или эльтор биоваров. Доказано, что капсула является одним из важных факторов патогеннооти и иммуногенности бенгальских штаммов. Несмотря на огромный интерес исследователей к этим двум ранее неизвестным поверхностным структурам возбудителя холеры, многие вопросы, касающиеся, в частности, генетического контроля их биосинтеза, а также роли умеренного фага в изменении продукции капсулы, остались до сих пор не решенными.
К настоящему времени известно, что продукция капсулы и 0139-антигена контролируется как общими (Waldor М.К., Mekaianos J. J, 1994- Ooiiistook L.E., 1995), так и различными (Смирнова Н.И. с соавт, 1995- Bik Е.М., 1995) хромосомными генами. Тем не менее о местоположении их на хромосоме было известно очень мало, так как работа по генетическому картированию весьма трудоемка и требует на первом этапе создания донорных и реципиентных штаммов с необходимыми свойствами.
Цель нашей работы состояла в молекулярно-генетичеоком анализе хромосомной области V. cholerae 0139, содержащей ген (гены) биосинтеза полисахаридной капсулы, а также в изучении распространенности умеренного фага 139 и его роли в изменчивости вирулентных свойств бенгальских штаммов,
Основным итогом исследований, представленных в первом разделе экспериментальной части работы, является установление локализации гена на хромосоме возбудителя холеры 0139-серогруппы, который контролирует биосинтез только полисахаридной капсулы, поскольку в конъюгационных скрещиваниях мы использовали в качестве донора и реципиента штаммы, имеющие 0139-антиген, но отличающиеся друг от друга по продукции капсулы. Генетический анализ полученных рекомбинантов показывает, что ген cap-90 локализован на хромосоме между генами риг-90 и arg-90, контролирующими, соответственно, биосинтез пурина и аргинина, Более того, было установлено, что в этом же участке хромосомы находится еще один ген патогенности — ген mot, определяющий подвижность, При этом оказалось, что оба гена патогенности cap и mot тесно сцепленны друг с другом. Сцепленнооть генов, экспрессия которых обеспечивает проявление вирулентности либо ее повышение, обнаружена у многих патогенных бактерий: Y. pestis, энтеропатогенных штаммов E. ooli и т. д. (Garniel Е, et al., 1996- Boyd E.F., Hartl D, L, 1998). Более того, довольно часто сцепленные гены вирулентности находятся на островах патогенности, которые способны к перемещению между различными штаммами бактерий, К настоящему времени мы не располагаем данными, позволяющими говорить о том, что гены mot и cap также могут входить в состав острова патогенности на хромосоме бенгальских штаммов, Тем не менее, анализ построенных ранее ге -1 pQ нетичеоких карт хромосомы V. oholerae 01 и 0139 свидетельствуют о том, что появившийся у бенгальских штаммов новый ген локализован в хромосомной области, которая содержит ряд других генов вирулентности. Так, по данным Н. И. Смирновой с ооавт. (1995), Н. И, Давыдовой (1993), Г, В, Чеховской с соавт.(1994), J, Mekalanos et al, (1979), Ch. Parker (1979) в изучаемом участке хромосомы ilv — pur — are V. cholerae 01 находятся гены rib, контролирующие биосинтез О-антигена, а также гены htx и tox-S, регулирующие продукцию холерного токсина, гены mot, обеспечивающие подвижность, а также, согласно нашим данным, гены rnsh, детерминирующие продукцию маннозо-чувотвительных пилей адгезии. Таким образом, сар-область хромосомы бенгальских штаммов находится в районе локализации других генов вирулентности,
Другим важным результатом работы является доказательство того, что геном умеренного фага типа каппа, обозначенный нами как фаг 139 включен в хромосому бенгальских штаммов вблизи генов па-тогенности cap и mot, а также гена ауксотрофнооти pur. Тесная оцепленнооть указанных генов с 139-профагом обеспечивает в большинстве случаев совместный их перенос от одного штамма к другому при конъюгационных скрещиваниях. Кроме того, зти данные указывают на наличие в этом участке хромосомы специфической нуклеотид-ной последовательности, в которую геном фага 139 может интегрировать .
Хотя о присутствии в геноме бенгальских штаммов умеренного фага каппа-типа было уже известно (Остроумова Н.М. о соавт. 1993, 1998- Higa N, et al, 1993), полученные нами новые данные о его локализации в cap-области хромосомы явились основанием для предположения о том, что включенный в хромосому профаг может, видимо, при вырезании индуцировать хромосомные перестройки в близлежащих к нему генах и, следовательно, быть причиной появления спонтанных мутантов с измененной экспрессией генов cap, mot и pur, Более того, тесная сцепленность 139-профага о новым геном cap может, видимо, указывать на возможную роль этого фага в эволюции бенгальских штаммов, поскольку к настоящему времени сформировалось представление, согласно которому новый эпидемический штамм возник в результате переноса генетической информации (участка хромосомы с генами rib и cap) от неизвестного донора к V. cholerae биовара зльтор, возможно, при трансдукции (Mooi F. R, Bik Е.М., 1997), Однако, данное предположение об участии фагов в указанном событии может быть справедливым лишь в случае, если фаги будут иметь трансдуцирующую активность,
В связи с высказанным предположением второе направление нашей работы было связано с изучением свойств умеренного фага 139 и его роли в нарушении продукции капсульного полисахарида. Поскольку к началу нашей работы структура ДНК фага 139 не была изучена, первый этап исследований был направлен на получение таких данных. Реотрикционный анализ свидетельствует о том, что ДНК фага 139, выделенная из лизогенного штамма 0139-серогруппы V. cholerae PI6084, является двунитевой и линейкой. Размер фаговой ДНК — около 34,0 т.п.н, что составляет, примерно 1,3% от размера хромосомы бенгальских штаммов (Manumoler R. et al., 1996- Chatter,] ее S. et al, 1998). Фаговая ДНК содержит сайты для нескольких изученных реотриктаз- HindiII, PstI, EooRV, Xbal и BamHI. Электронно-микроскопический анализ фага 139, показавший, что фаговые частицы состоят из крупной гексагональной голоеки и хорошо выраженного покрытого сокращающимся чехлом хеоотоеого отростка.
-i -i --- - J. ± J. позволил отнести его к V морфологической группе по Т.Н. Тихонен-ко (1968) или к группе, А по D.E. Bradley (1967). Сопоставление этих данных с результатами исследований J. Reidl и J. Mekalanos (1995), изучавшими умеренный фаг, выделенный из другого бенгальского штамма МОЮ и обозначенный ими как фаг К139, показало на практически полное совпадение морфологических и молекулярно-биологических свойств изучаемых фагов. Из этого, видимо, следует, что холерные умеренные фаги 139 и К139 являются одним и тем же умеренным фагом, изучаемым в разных лабораториях. Далее, используя меченные ok, P Hindi Ii-фрагменты фаговой ДНК в качестве молекулярного зонда в экспериментах по ДНК-ДНК гибридизации, мы показали, что ДНК фага 139 находится в хромосоме штамма PI6064 в виде интегрированного в нее профага.
Заслуживают внимание данные, свидетельствующие о широком распространении умеренного фага 139 среди различных бенгальских штаммов. Согласно полученных нами сведений, из 22 проверенных бенгальских штаммов, выделенных в России, Индии и Франции, 15 штаммов или 68,18% содержат в геноме фаг 139. При этом лизигенные по фагу штаммы спонтанно продуцируют фаговые частицы. В тоже время было обнаружено 7 штаммов, лишенных этого фага. Как правило, штаммы, утратившие фаг, становятся чувствительными к его ли-тическому действию. Однако в случае нелизогенных бенгальских штаммов, мы получили совсем неожиданные результаты, указывающие на их резистентность к фагу 139. Такие же данные были получены J. Reidl и J. Mekalanos (1995), которые при анализе 7 бенгальских штаммов, выделенных в Индии, обнаружили 4 нелизогенных штамма, также имеющих иммунитет по отношению к фагу К139. Согласно точке зрения американских исследователей, нелизогенные бенгальские штаммы не могут быть инфицированы фагом К139 (или 139), видимо, из-за отсутствия у них фаговых рецепторов.
Поскольку фаг 139 довольно широко распространен среди различных бенгальских штаммов, находясь при этом в хромосомной cap-области в виде профага, встал вопрос о его функциональной значимости. В результате проведенной работы были впервые получены важные сведения о том, что геном умеренного фага 139 играет существенную роль в фенотипической изменчивости возбудителя холеры новой серогруппы за счет индуцирования им мутаций в близлежащих к нему генах cap, mot и pur, продукты которых важны для развития инфекционного процесса при холере.
Совокупность данных по генетическому картированию профага и нестабильности строго определенных генов у разных штаммов свидетельствуют о наличии в хромосоме бенгальских штаммов предпочтительного сайта интеграции 139-фага. Эти данные также подтверждаются результатами гибридизации Hindi 11-фрагментов хромосомы трех разных бенгальских штаммов (МОЮ, AI-1837, AI-1852) о фаговым зондом, полученными J. Reidl и J. Mekalanos (1995). Сайт-опе-цифичнооть интеграции в хромосому фага 139 не является уникальным событием для холерных фагов. Так, недавно установлено (Wal-dor M.K., Mekalanos J.J., 1996), что холерный филаментозный или нитевидный фаг СТХФ, содержащий в своем составе кассету вирулентности (гены otxAB, асе, zot, сер), также при интеграции в хромосому внедряются в строго определенный attRS-сайт. В то же время холерные умеренные каппа-фаги VcAl, VcA2 и УсАЗ, в отличие от фагов 139 и CTXSD, не имеют предпочтительных сайтов для интеграции и поэтому внедряются в различные участки хромосомы (Mose-ley S.L., Falkow S, 1980- Johnson S.R. et al., 1981- Goldberg
С*4? л n г 7 П -1 i — О о. j iViUi. рпу J, П.,, X’OUUj >
Обнаружение Фага 139 вблизи нового гена cap, ответственного за проявление вирулентности вновь возникшего эпидемического штамма, ставит вопрос о роли этого Фага в переносе генетической информации. К сожалению, резистентность всех бенгальских штаммов к фагу 139 исключает возможность использования их при изучении данной проблемы, хотя выяснение возможности переноса гена cap фагом 139 представляет первоочередной интерес. Поэтому нам пришлось использовать холерные штаммы 01-оерогруппы классических и эльтор биоваров, которые можно было инфицировать фагом 139, Тем не менее, в результате проведенных исследований были получены очень важные приоритетные данные о том, что умеренный фаг 139 действительно способен переносить хромосомные гены. Более того, было показано, что указанный фаг с частотой п *10"° - п 10~/ осуществляет в основном перенос строго определенного бактериального гена pur. Вое трансдуктанты Pur"1″ были лизогенными по фагу 139, Следует отметить также, что все транодуктанты высвобождали спонтанно фаг 139 в заметно большем количестве по сравнению с исходным штаммом Р16 064 0139-серогруппы, К тому же транодуктанты были резистентны к заражению экзогенным фагом 139, что подтверждает приобретение клетками вместе с генами аукоотрофнооти и про-фага, Трансдукция хромосомных генов холерного эльтор вибриона происходит более эффективно (п *10~°), чем вибрионов классического биовара (п 'Ю-' - п * 10~й). Перенос фагом 139 в реципиент-ные клетки строго определенного гена pur"1″ о последующей их лизо-генизацией позволяет заключить, что этот фаг, подобно хорошо изученному кишечному фагу, осуществляет специфическую трансакцию. Весьма редкий перенос указанным фагом двух других хромосомных генов met (в случае холерных классических вибрионов) и arg1 (в случае вибрионов эльтор), возможно, связан с локализацией этих маркеров также вблизи шагового генома. О трансдукции бактериальных генов возбудителя холеры до сих пор имеется очень мало сведений. Участие умеренных холерных фагов в переносе генетической информации описано лишь несколькими исследователями (Ерошен-ко Г, А. с соавт., 1986- Кудрякова Т. Д. с ооавт., 1983- Qgg J.E. et al., 1981). При этом были обнаружены лишь фаги, осуществляющие общую транодукцию. Существенным отличием фага 139 от них является его способность к специфической трансдукции. Локализация этого фага на хромосоме бенгальских штаммов не только вблизи гена pur, но и гена cap, важного для вирулентности, позволяет использовать его в дальнейших экспериментах по переносу указанного нового гена патогенности в других штаммах.
Итак, умеренный холерный фаг 139 вносит значительный вклад в изменчивость генома холерных вибрионов двумя путями. Во-первых, находящийся в хромосоме бенгальских штаммов геном фага может индуцировать вторичные хромосомные перестройки в близлежащих генах cap, mot и pur, в результате чего изменяются важные для вирулентности и иммуногенности свойства штаммов. Во-вторых, при неточном вырезании из хромосомы штамма-хозяина фаг захватывает соседние гены бактерий и может их трансдуцировать в клетки других штаммов. Такая важная роль умеренного фага 139 в изменчивости генома возбудителя холеры послужила нам основанием для изучения распространения умеренного фага 139 среди различных штаммов Y. oholerae 01- и не 01-оерогрупп. С помощью ДНК-ДНК гибридизации на фильтрах с фаговым зондом было показано, что 46,9% изученных штаммов холерных вибрионов эльтор бюваров содержат фаг, идентичный Фагу 139, Это указывает на его широкое распространение среди возбудителей холеры указанного биовара, В значительном количестве штаммов (около 50%) холерного вибриона классического биовара содержится фаг, лишь родственный фагу 139, В то же время в штаммах ?.сЬо1егае не 01-оерогруппы фаг 139 или родственный ему фаг встречается редко: лишь 8,50% штаммов не 01-оерогруппы давали положительный сигнал гибридизации с ДНК фага 139, Лизо-генные штаммы биовара эльтор спонтанно продуцировали этот фаг, тогда как более 90% штаммов классических вибрионов, содержащих фаг, этим свойством не обладали. Эти данные согласуются с ранее высказанным предположением о том, что в хромосоме большинства классических холерных вибрионов каппа-фаги дефектны. Следует особо отметить тот факт, что классические и эльтор вибрионы, не содержащие фаг, были к нему чувствительны. Вибрионы не 01-оерог-руппы, так же как и бенгальские штаммы, у которых присутствие фага не обнаружено, были иммунны к указанному фагу. Отсутствие фага в хромосоме 50% эльтор и классических штаммов может быть связано с их спонтанной делизогенизацией. Основанием для такого предположения является высокая частота (5−10%) спонтанной утраты профага холерными вибрионами 0139-оерогруппы.
Так как профиль гибридизации хромосом с фаговым зондом может отражать эволюционное сходство или различие изучаемых штаммов, то после постановки необходимых экспериментов был проведен сравнительный анализ профилей гибридизации с фаговым зондом рестри-цированных фрагментов хромосомы бенгальских штаммов, холерных вибрионов классического биовара и холерных вибрионов эльтор. В результате установлено, что хромосомные профили гибридизации у бенгальских штаммов и холерных вибрионов эльтор идентичны, Эти данныеj полностью совпадая с результатами американских исследователей (Reidl J., Mekalanos J.J., 1995), еще раз свидетельствует в пользу предположения о том, что новый эпидемический штамм 0139-оерогруппы произошел от биовара эльтор. Кроме этого, данные по гибридизаций хромосомных ДНК с фаговым зондом указывает также на сайт-специфичность интеграции фага 139 и в хромосому вибрионов эльтор. Мы пока не располагаем данными о функциональной роли фага 139 или гомологичного ему фага в изменении генома традиционных возбудителей холеры. Тем не менее, обнаружение нами среди различных природных и клинических штаммов ауксотрофных мутантов, нуждающихся в строго определенном факторе роста — пурине, позволяет говорить о том, что внедренный в хромосому холерных классических и эльтор вибрионов умеренный фаг может также индуцировать хромосомные перестройки в близлежащем гене pur и тем самым быть причиной нестабильности генома возбудителя холеры.
При изучении генетической организации хромосомной cap-области и выяснения структуры и функции умеренного фага 139 были решены также и практические задачи. На основании данных о том, что полисахаридная капсула, расположенная на поверхности бактериальных клеток, маскирует фаговые рецепторы, был предложен методический прием для идентификации капсульных и лишенных капсулы клоков бенгальских штаммов, основанный на использовании двух холерных фагов 2и и Мнаба, выделенных из V. ohoierae ul. Штаммы, не имеющие капсулы, были чувствительны к этим фагам, тогда как кап-оулъные штаммы ими не лизировалиоь. Кроме того, сконструированные в ходе выполнения работы изогенные штаммы V. ohoierae 0139, несущие мутации в различных генах патогенности, могут быть использованы в дальнейших исследованиях, направленных на получение шюлшш ojoHSHiH8J. odn njQxe йэинэьАтоп о хнннвекао 'xeioged, а нэеэжон ш-зоеа члнд лзжой гагЛопен ионЦисзбжоихгоп ивий -hASouii ионнэшнасш о шеш инннеёеоо '6810 HimAdJodeo ешзуоцо’д и, ьоонна^онлши и илоондшешмйга шшеюшЗвйвй хнаон о шйшйбофни u. L-1- —
DODmTLT JjDiDu^Dil
1. На основании генетического анализа рекомбинантов, полученных в конъюгационных скрещиваниях, установлено, что в cap-области хромосомы V. oholerae оерогруппы 0139, локализованной между генами риг-90 и аг£-90, расположен ген (гены) mot, определяющий подвижность холерного вибриона, а также геном умеренного фага 139,
2. Показано методом ДНК-ДНК гибридизации, что умеренный фаг 139, ДНК которого является линейной и двунитевой размером около 34,000 т.п.н., содержится в геноме почти 70% изучаемых штаммов V. cholerae оерогруппы 0139, выделенных из разных мест, Изученные штаммы 0139-оерогрупп, независимо от наличия или отсутствия в их геноме фага 139, были резистентны к его литическому действию,
3. Умеренный фаг 139, содержащийся в геноме бенгальских штаммоЕ в виде профага, является причиной изменчивости вирулентных свойств возбудителя холеры новой оерогруппы, индуцируя, видимо, хромосомные перестройки в близлежащих к нему генах cap и mot, определяющих биосинтез таких факторов патогенности, как по-лиоахаридная капсула и подвижность.
4. Показана трансдуцирующая активность умеренного фага 139. Преимущественный перенос шагом 139 участка хромосомы с геном риг к холерным вибрионам классического и эльтор биоваров указывает на его принадлежность к специализированным транодуцирующим фагам.
5. С помощью ДНК-зонда установлено, что 46,9% изученных штаммов V. cholerae 01 биовара эльтор содержат геном фага 139, который может спонтанно продуцироваться, В геноме 52,1% изученных штаммов V. oholerae 01 классического биовара содержится фаг, родственный фагу 139. продукция которого не выявляется. В то же время в геноме 91,5% изученных штаммов V. cholerae не 01 фаг 139 отсутствует.
Молекулярно-генетический анализ хромосомной сар-области vibrio cholerae 0139 (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
1. Адамов А, К, Иммунология холеры, — Саратов: ивд-во Оарат. ун-та, 1981, — 320 о,.
2. Адамов А, К, Наумшина М, и, Холерные вибрионы, Саратов, 1984. — 328 о.
3. Адамов А. К, Павлова Ю. П. Влияние имунных антител и ферментного звена коантина Vibrio cholerae // ШЗй, 1990, — N2,-и.6−10.
4. Адамов А, К, Щуркина И. И., Алексеева Л. П. О связи вирулентности с антигенной структурой холерных вибрионов // Генет. и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инф. Матер. Рос. науч. конф.: Тез, докл. Волгоград, 1992. С. 69.
5. Андросова С, В., Быстрый Н. Ф, Хотько Н. И. Изучение влияния природных экологических факторов на микроорганизмы рода Vibrio в открытых водоемах // Микробиол, лаб. диагност, и специфич. про-фидакт, карантин, инф. Саратов, 1989, — С.126−132,.
6. Гордеева Л, А, Седова А. Г, Ковтунова А. И. Эпидемиология НАГ-инфекций в Астраханской области // Тез. докл. обл, науч. -практ. конф. «Итоги и перспективы профилакт. особо опасных инф,», Астрахань, 1989. — С, 43−44.
7. Давыдова Н. И. Генетический анализ хромосомной области, определяющей серологическую специфичность возбудителя холеры: Авторе®-. на соиок. уч. ст. канд. биол, наук, Саратов, 1993. — 22 о,.
8. Дунаев Г. С., Зыкин Л, Ф, НАГ-инфекция самостоятельная ноо-зоологичеокая единица // Особо опасные и редко встречающиеся тропические инф, — Волгоград, 1980. — С.28−29.
9. Ермольева 3, В, Краснова И, Н, Ведышина Е. А, Неагглютинирующиеоя вибрионы у людей о кишечными заболеваниями // Актуальные вопросы микробиол, Москва, 1970. — С. 64−65.
10. Маниатис Т., Фрич 3, Сэмбрук Д, Методы генетической инженерии // Москва, 1984, 479 с.
11. Мединский Г, М, Воронежская Л, Г, Сомова А. Г, Диарейные заболевания, вызванные холерными вибрионами не 01 группы // Актуальные вопр, микробиол, лаб, диагн, и профилакт, холеры: Тез, Всесоюз, науч. конф, Ростов-на-Дону, 1988, — С, 276−279,.
12. Остроумова Н. М. Мороз В.П., Синичкина H.A., Коровкина Г, И., Зинина О. С., Кологоров А. И. Лизигенные системы и свойства умеренных фагов Vibrio oholerae 0139-серовара // Проблемы особо опасных инф. Саратов, 1998. — С, 141−147.
13. Остроумова Н. М., Аниоимов П. И., Агапова З. М. Биохимические свойства гетероимункых умеренных фагов холерных вибрионов // Им-мунол. и спец. профилактика особо опасных инф. Саратов, 1986. — С. 49−54.
14. Остроумова Н. М., Агапова З. М., Мороз В. П. Лизогения у НАГ-вибрионов 041-оеротипа // В кн.* Генет. и биохимия особо опасных инф. Саратов, 1980. — С. 56−61.
15. Развых В. М. Биологические свойства НАГ-вибрионов и особенности их циркуляции // Автореф. дио. на ооиок. уч. ст. канд. мед. наук. Москва, 1984. — 22 с.
16. Смирнова Н. И., Давыдова Н, И., Ерошенко Г. А. Генетический анализ хромосомной области Vibrio cholerae, содержащей мутацию Тох-2, влияющую на продукцию холерного токсина // Мол. генет., микробиол. и вирус. 1995. N3, — С, 23−26,.
17. Смирнова Н. И., Чеховская Г. В., Давыдова Н. И. Фенотипический анализ двух морфологически разных типов колоний Vibrio ohoierae 0139 // Мол. генет., микробиол. и вирус. 1995. — N3. С, 30−34.
18. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований // Москва, 1982. 462 с.
19. Тихоненко Т. П., Ультраструктура вирусов бактерий.- Москва, 1968. 170 с.
20. Ткаченко В. В. Липополисахариды холерного вибриона и некоторые знтеробактерии // ЖМЗИ.- 1982. N2. — С. 20−28.
21. Федорова В. А., Девдариани 3.Л., Громова О. В., Ливанова Л. Ф. Некоторые иммунохимичеокие и иммунологические свойства капоуль-ного антигена У. ohoierae 0139 серовара // Мол. генет. 1997. -N3. — и. 12−20.
22. Чеховская Г. В., Смирнова Н. И. Создание и стойотва штаммов Vibrio ohoierae серовара 0139 с повышенной продукцией холерного токсина // Генет. 1994. — Т.30. — С. 177−178.
23. Яговкин 3.А. Иммунохимичеокие и биологические свойства липо-полисахаридов холерного вибриона эльтор // Автореф. дио. на со-иск. уч. ст. канд. мед. наук. Саратов, 1982. — С.20.
24. Adelberg Е.А., Mande1 M., Chen G.G. Optimal condition for mutagenesis by N-methyl-N'-nitro-N-nitro-soguanidine in Esche-riohia coli Kl2 // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1965. -V.18,N5 — 6. — P.788−795.
25. Albert M.J., Bhuiyan N.A., Rahman A., Ghosh A.N., Hultenby K.} weintraub A., Nahan S., Kibriya A.K.M.G., Ansaruzzarnan M, Shimada T. Phage specific for Vibrio cholerae 0139 Bengal // J. Clin. Microbiol. 1996, — V.345N7, — P. 1843−1845,.
26. Boyd E.F., Hartl D.L. Chromosomal regions specific to pato-genik isolates of Escherichia coli have a phylogenetioally olas-tered distribution //J, Bacterid. 1998, — V, 180, N5. — P.1159−1165.1. P.
27. Chithis D. S,} Sharma K.D., Kamat R.3. Role of somatic antigen of Vibrio oholerae in adhesion to intestinal mucosa //J.
28. H.->4 1-.?A .-,<-. 1 -i nQf! tr iC M-i n pi. C'l1.ifU. MlUlUUlUi. X5JOC. V.iDjiU. — r. Do Ui.
29. Cholera Working Group, Internation center for diarrheal deaeaiiti eifiii ui, Odliglcautfiui. Lcti gti tfpxueiiiixC ux uiiuxtu x i, e ulss" ase in Bangladesh caused by Vibrio oholerae 0139 synonym Bengal // Lancet. 1993. — V.342. — P. 387−390,.
30. Comstock L. E, Manevai D., Paningrahi P. The capsule and 0-antigen in Vibrio oholerae 0139 Bengal are associated with agenetic region noipresent in vibriu oholerae ul // Infect.1.llil i. 133U. i.uijiu. r, OXi OCO.
31. UO, vUSLSl LUil r.VV.j iiVlXH it, i, , UiitfUy A. J. Hit? L’dUUGi XcSX giUUU" oalix in nuture and disease // Microbiol. Rev, 1981. — V.35. -P. 299−324,.
32. Cross A. The biologic significance of bacterial encapsulation // Curz. Top. Microbiol. Imrnun. 1990, — V.150. — P. 87fx ~su,.
33. UU. Jxrcx L-ci. v, r, j rdiiUl U-. 5 rcUiUfc? x b. J AteiVzildiiUi r.r. kbS^UldLUi ycascade controls virulence in Vibrio oholerae // Prot. Natl.
34. Acad. Sci, USA, 1991. — V.88, — P. 5403−5407,.
35. Dhar R., Mahbool A., Thafoor A, Unusual non-serogroup 01i rjiVliC /.
36. UdUL.'ol xUUiidgci / / VXiui. iSiU. V. XU, hO, r. XiCOX XfLOO, 4.. ¦1. J tf.
37. Hacker J., Blum-Oehler G., Muhldorfer I., Tschape H, Patoge-nesity islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbial evolution // Mol, Microbiol, 1997. — V.23, N6, — P. 1089−1097.
38. Hall R.H., Khambaty L.M., Kothary M. Non-01 Vibrio oholerae // Lancet. 1993. — V.32. — P. 430,.
39. Hisatsune K., Kendo S., Isshiki J. (c)-antigenic lipopolysaco haride of Vibrio oholerae 0139 Bengal a new epidemic strain for recent cholera in the Indian subcontinent // Biochem. Biophys. itt?s. i.-uxnmUiilua.Lxuiiii. xaao. v.xbUjHO. ioUd- ??Jib.
40. Vibrio oholerae 0139 Bengal arom water in Bangladesh // Lancet.-1 nno — r oo hqqco — p A oh xatfO. v. O&j, nyuuu. r. toU.
41. Jalajakumari M.B., Manning P.A. Nuleotide sequence of the gene, OmpW, encoding a 22 kDa immunogenic outer membrane proteinui vlblxu uiiuxt?! ctt? // NtlO-ifiu aUluiD t v, ior, 1. Cj Q pj.
42. OSJ UUIJ, а Ыч CO i i Lluu к L w-iqojoi^ 'Uixo ' // eejeioqo oi-iqiA ui (x^o) seuaS UTXoq.ojaq.ue BjQToqo uiQ. jj Axquapusdepui jnooo qou ssop (}OZ) uixoq. suepnxooo BTnuoz Зитрооиэ euag jedey a’S’j sijjo^ ' *v*f uosuqor *fq.
43. T698-?98 *d 'SMf09'A — «2661 — 'ипищ «qoejut // eoiui их aoueinjiA pus aueqsisej uzn. ies fA3oTaqdjoui Auoxoo seuiuueq.9p qsqq exnsdeo epiJceqooesAxod e senpoJd S90IHM ssjетоцо QiJqiA го-ион 'B'i stjjo^ ' «d iqejSiued «Vf uosuqof 'S8.
44. Kabir S. Characterization of the lopopolysaooharide from Vibrio cholerae 395 (ugawa) // Infect. Immun. 1982. -V"38,N3. — P. 1263−1272.
45. Kabir S. Composition and immunochemical properties of outer membrane proteins of Vibrio cholerae // J. Bacteriol. 1980. V.1,N1. — P. 382−389.
46. Kabir S, Mann P. Immunological properties of. the cell envelope components of Vibrio cholerae // Gen, Microbiol, 1980, -?.119,NE. — P. 517−525,.
47. Kaper J.B., Fasano A, Trucksis M. Toxins of Vibrio cholerae // Vibrio cholerae and cholera: Molecular to global, perspectives. Edited by L.K. Wahsmuth, P.A.Blake, 0. Olsvik. ASM Press, Washington, 1994, P. 145−176,.
48. Kaper J.B., Morris J. G, Levine M. M, Cholera // J. Clin. Microbiol. Rev. 1995. — V.8. — P, 48−86,.
49. Kar S, Ghosh R.K., Ghosh A. N, Chosh A. Integration of the DNA of a novel filamentous bacteriophage VSK from Vibrio cholerae 0139 into the host chromosomal DNA // FEMS Microbiol. Lett. 1996, — V. 145. — P. 17−22.
50. Karaolis D.K.R., Johnson J. A, Bailey C.C., Boedeker E.C.,.
51. Kaper J.B., Reeves P.R., A Vibrio cholerae patogenecity island associated with epidemic and pandemik strains // Proc, Natl. Acad, Sci, USA, 1998. — ?.95,N8. — P.3134−3139.
52. Kiinsey H.H., Waldor M.K. CTX immunity: ampliation in the development of" cholera vaucuines // Proc, Natl. Acad. Sci, USA.-1998, V, 95, — P, 7075−7039,.
53. Koonin E. Y, The second cholera toxin, Zot, and its pias-midencoded homologies consist a group of putative ATP-ases with an altered purine NTP-binding motif // FEMS Microbiol, Lett. 1992, V.312. — P, 3−6,.
54. Lugtenberg B, Bronstein H, van Selm N., Peters R. Pepti-doglyoan associated outer membrane proteins in gramm-negative bacteria // Biochim, Biophys, Acta, — 1977, — ?.433. — P.118.
55. Macenac F.M., Gherardi C., Mattera J. Sepsis for Vibrio cholerae non 01 // Medicina, 1991. — ?.51,N2. — P, 148−150.
56. Malumder R., Sengupta S, Khetawat G, Bhadra R, K, Royoha-udnury S., Das J. Physical Map of the genome of Vibrio cholerae 569B and localization of genetic markers // J. Bacteriol, 1996, V. 178, N4, — P. 1105−1112.
57. Mekalanos J.J., Swarts D, J, Person G.D.N. Cholera toxin genes: nucleotide sequence, deletion analysis and vacine development // Nature (London). 1983. V.3Q6. — P. 551- 557,.
58. Ogg J, E, Timme T. L, Alemohammad M.-M. General transduction in Vibrio cholerae // Infect, Immun. 1981, — ?.31,N2.fi Ai*±J.121. D™1. S12.
59. Parcer Ch., Gauthier D., Tate et al. Expanded linkage map of Vibrio cholerae // Genetic. 1979, — V.91}N2. P. 191−214.
60. Pearson G.D.N., Woods A., Chiong S.L., Mekalanos J.J. CTX genetic element encodes a site-specific recombination system and an intestinal colonization factor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. — V. 90, — P. 3750−375.
61. Preston L.M., Xa Q., Johnson J.A., Joseph A. Preliminary structure determination of the capsular polysaccharide of Vibrio.
62. U.—. 1 ,-. r,-(nn Ai -1 Q'" iff / / T D-T-I± «-i nn^ r ^ r? l» i til'-J.
63. Uiiuitrcib uxod DKHgciX rtlxbo/ / / J. DdCttii XUX. ladu, — Y. X/i, iMO.1. Q noc. OOQ1. !:¦ W- ,.
64. Xicu, itcunaruUi Liiy i.o.j acu. o. 5 jucidiiics a.rt. ?.ITicfiwiiCfeUx IiUvsxstrain of Vibrio ohoierae with epidemic potential m southern and eastern India // Lancet, 1993. — V. 341. — P. 703−704.
65. Raziuddin S. Studies of the polysaccharides (0-antigen) of Vibrio cholerae // Bioohem, Biophys. 1977. — V.14. — P.
66. Raziuddin S, Toxin and immunological properties of the li-popolysaocaride (0-antigens) from Vibrio El-Tor // Iiranunochem, -1978. V, 153N9. — P.611−614.
67. Reidl J.5 Mekalanos J, J. Characterization of Vibrio cholerae bacteriophage K139 and use of a novel mini-transposon toidentify a phage-enoadeol virulence factor // Moi. Microbiol. innsti o p pop, — r*ni i i «j.i! j r > uutj / ux.
68. Rinpketa S.T., Jansen W.H., Gielen H., Guince P. A, Immunoglobulins in bile and serum of the rabbit associated with protection after Vibrio cholerae infection and vaccination // Microbiol. Pathog, 1987. — V, 3, N5. — P, 365−375.
69. Rubin E.J., Lin W., Mekalanos J.J., Waldor M. K, Replication.
70. Sengupta D. K, Boesman-Finkelstein M, 5 Finkelstein R. A, Antibody against the capsule of Vibrio cholerae 0139 protects against experimental challenge // Infect. Immun. 1996. — V.6.N1. p '^.?'-i-'-^R.
71. Vibrio cholerae non-01 in India and Bangladesh // Lancet, — 1993, V.341. — P, 347.
72. Shrivastava D.L., While P.B. Note on the relationship of the so-called Ogawa and Inaba types of V. cholerae // Indian. J. Med. Res, 1947. — V.35. — P.117−129,xou. Jiumque rv.n., DiidL L-cuial yya r. i. mage? J3 liiL.triawx.Oii.
73. V’iXLii V XJ. U XU UiiUXtfi Cttf // J. ivteu. Mil UUlUi. IsQ. v.xo. r.255.259.
74. Singh J., Bora D., Khanna K.K., Jain D.-C., Saohdeva V., Sharma R.S., Verghses I. Epidemiology and transmission of Vibrio oholerae 01 and Vibrio oholerae 0139 infection in Dealhi in 1993 // Diarrh. Dis. Res. 1995. — V. li}N3. — P. 132−186.
75. Sperandio V., Giron J.A., Silveira W.D., Kaper J.B. The OmpU outer membrane protein, a potential adherence factor of Vibrio oholerae // Infect. Immun, 1995. — V.53-N11. — P. 44 334 438.
76. Svennerholm A.M., Holmgren J. Sinergistio protectiv effect in rabbits of immunisation with Vibrio oholerae lipopolysaccha-ride and toxin (toxcid) // Infect. Immun, 1976, — V.13,N3. -P. 735−7407.
77. Swerdiow D.L., Ries A, Vibrio oholerae non-ul the eighth pandemic? // Lancet. 1993, — V.242,N8868. — P. 282−283,.
78. Tacked 0.0., Taylor R.K., Losonsky G., Lirn Y., Nataro J. P, Kaper J.B., Levine M.M. Investigation of the roles of TCP and MSHA pili in the pathogenesis of vibrio choleare 0139 infection-1 Qp.
79. Abtracts: Trirty third joint confer, on cholera and related diarrh. dis, — 1997, — P.154.
80. Takeya K., Shimodory Sh., Gomez C.J. Kappa-type phage detection as a method for the tracing of cholera El Tor carriaers // Bull, WHO, 1967, — V, 37, N5, — P, 806−810.
81. Toeg A., Berger S.A., Battat A. Vibrio oholerae bacteremia associated with gastrectomy //J. Clin. Microbiol. 1990. -V, 28, N3, — P. 603−604,.
82. Trucksis M., Galen J.E., Michalski J, Fasano A, Kaper J.B. Acessory cholera enterotoxin (Ace), the third toxin of a Vibrio cholerae virulence cassette // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. — V, 90. — P. 5267−5271.
83. Waldor M.K., Mekalanos J.J. Emergence of a new cholera pandemic: molecular analysis of Virulence determinants in Vibrio oholerae 0139 and development of a live vacine prototype // Infect. Dis. 1994. — V.170. — P. 278−283.
84. Waldor M, K., Mekalanos J.J. ToxR regulater virulence gene expression in non-01 strains of Vibrio cholerae that cause epidemic cholera // Infect. Immun. 1994. — V.62,N1. — P. 72−78.
85. Waldor M.K., Cowell R., Mekalanos J.J. The Vibrio cholerae 0139 serogroup antigen includes an 0-antigen capsule and lipopo-lysaccharide virulence determents // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. — V. 91. — P, 11 388−11 392.
86. Waldor M.K., Mekalanos J.J. Lysogenic conversion by a filamentous phage encoding cholera' toxin // Science. 1996. — V. 272. — P. 1910;1924.
87. M.F. Structural analyses of the capsular polysacharide and lipopolysacooharide isolated from Vibrio oholerae 0139 Bengal // Abstract: Trirty first joint conf. on cholera and related diarrh. dis. — 1996. — P. 206.
88. Wright A.E.5 Simpson L.M., James D. Phenotypic evaluation of acapsular transposon mutants of Vibrio vulnificus // Infect. Immun. 1990. — ?.58,N6. — P. 1769−1773.