Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Антикоагулянтная протеиназа (активатор протеина С) микромицета Aspergillus ochraceus: получение и свойства

Диссертация: Антикоагулянтная протеиназа (активатор протеина С) микромицета Aspergillus ochraceus: получение и свойства
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Изучено влияние условий культивирования микромицета на образование протеиназы с активаторной к PC активностью на примере штамма A. ochraceus L-1. Выявлен индуцибельный характер синтеза изучаемой протеиназы и показана перспективность твердофазного культивирования для получения протеиназы — активатора PC. Так, культивирование A. ochraceus L-1 в условиях твердофазного культивирования на вермикулите… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Современные представления о действии протеиназ системы гемостаза
      • 1. 1. 1. Свертывание крови и фибринолиз
      • 1. 1. 2. Антикоагулянтные механизмы системы гемостаза
    • 1. 2. Физиологические функции системы протеина С
      • 1. 2. 1. Структурные особенности и активация протеина С
      • 1. 2. 2. Антикоагулянтный эффект активированного протеина С
      • 1. 2. 3. Цитопротекторный эффект активированного протеина С
    • 1. 3. Активаторы протеина С из яда щитомордников
    • 1. 4. Рекомбинантный активатор протеина С из Р1сЫа раБ^пБ
    • 1. 5. Внеклеточные протеиназы мицелиальных грибов и регуляция их секреции
    • 1. 6. Воздействие внеклеточных протеиназ микромицетов на систему гемостаза
      • 1. 6. 1. Микромицеты — продуценты протеиназ, оказывающих воздействие на фибринолитическую систему
      • 1. 6. 2. Микромицеты — продуценты протеиназ, оказывающих воздействие на коагулянтную и антикоагулянтную системы
    • 1. 7. Образование микромицетами ферментов в условиях твердофазного культивирования
      • 1. 7. 1. Характеристика ТФК и физиологические особенности роста мицелиальных грибов в условиях ТФК
      • 1. 7. 2. Образование ферментов мицелиальными грибами в условиях ТФК

Антикоагулянтная протеиназа (активатор протеина С) микромицета Aspergillus ochraceus: получение и свойства (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Тромбоэмболические осложнения становятся наиболее частыми и серьезными заболеваниями сердечно-сосудистой системы. Факторы риска развития таких осложнений могут быть не только приобретенными, но и наследственными, в результате которых тромбоэмболии переходят в тромбофилии. К этим факторам относятся недостаточность содержания в плазме крови антитромбина, протеина С, протеина S, повышенное содержание фактора VIII и появление в кровотоке фактора V Лейденамутантной формы фактора V, резистентного к активированному протеину С (Rosendaal and Reitsma, 2009). Существует ряд причин, как приобретенных, так и наследственных, приводящих к уменьшению содержания этих белков в плазме крови.

Недостаточность содержания одного из ключевых компонентов естественной антикоагулянтной системы — протеина С может привести как к рискам возникновения тромбоэмболических осложнений, так и в ряде случаев к летальным исходам. Поэтому актуальными представляются средства, активирующие протеин С, а также позволяющие качественно и своевременно диагностировать его содержание в крови человека.

К настоящему времени известны активаторы протеина С, содержащиеся в яде некоторых видов змей (Gempeler-Messina and Muller, 2006). Протеолитические ферменты — активаторы протеина С, выделенные из яда южно-американского щитомордника Agkistrodon contortrix contortrix, находят широкое применение в составе диагностикумов для определения протеина С в плазме крови человека (Stoker et al., 1987; Gempeler-Messina and Muller, 2006).

В последнее время была показана способность некоторых микромицетов секретировать внеклеточные протеолитические ферменты с антикоагулянтной активностью (Ландау и др., 1998). Одним из наиболее активных продуцентов подобных протеиназ оказался мицелиальный гриб.

Aspergillus ochraceus. Ферменты A. ochraceus, добавленные к плазме крови, удлиняли время свертывания крови — активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) по типу активаторов протеина С. Действие этих ферментов аналогично тромбин-тромбомодулиновому комплексу и активаторам, выделенным из яда щитомордника (Ландау и др., 1998; Батомункуева и Егоров, 2001). Было высказано предположение, что данная активность может быть связана с активацией протеина С.

В связи с этим поиск альтернативных яду змей источников подобных протеолитических ферментов среди микроорганизмов, в частности, мицелиальных грибов, представляется весьма актуальным, поскольку такие протеиназы, проявляющие антикоагулянтные свойства по типу активаторов протеина С могут оказаться более доступными и дешевыми по сравнению с протеиназами, получаемыми из яда щитомордника. Значительный интерес представляет и изучение внеклеточных протеиназ микромицетов как возможных активаторов протеина С плазмы крови человека.

выводы.

1. Доказана способность штаммов микромицета вида Aspergillus ochraceus, выделенных из различных экотопов разных географических регионов, продуцировать в процессе развития внеклеточные протеиназы, активирующие протеин С плазмы крови человека.

2. Определены оптимальные условия глубинного и твердофазного культивирования микромицета A. ochraceus — продуцента протеиназактиваторов протеина С плазмы крови человека и разработаны способы получения этих ферментов при культивировании продуцента в глубинных и твердофазных условиях. Показано, что в условиях твердофазного культивирования активаторная к протеину С активность микромицета в 1.5−3.5 раза выше по сравнению с активностью при глубинном культивировании (из расчета на мл питательной среды), а продуктивность мицелия больше в 4.8 раза.

3. Установлена способность протеиназы — активатора протеина С, полученной из A. ochraceus L-1, активировать протеин С человека. Показано, что реакция активации протеина С является Са2±зависимой.

4. Показано, что протеолитических фермент — активатор протеина С, образуемый A. ochraceus L-1, представляет собой негликозилированный белок — сериновую протеиназу с мол. массой около 33 к Да, pi 6.0 и оптимумом активности при рН 8.0−9.0 и температуре 37 °C.

5. Выявлены различия в субстратной специфичности протеиназы, продуцируемой A. ochraceus L-1 и протеиназы — активатора РС, содержащегося в яде южно-американского щитомордника, заключающиеся в неспособности грибного фермента гидролизовать большинство пара-нитроанилиновых субстратов по аргинину.

6. Сравнение активаторной к РС активности полученного препарата из A. ochraceus L-1 и препаратов из яда южно-американского щитомордника показало сопоставимость активаторной активности грибной протеиназы, что делает ее перспективным заменителем змеиного препарата в диагностикумах для определения содержания протеина С в плазме крови.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Определение содержания протеина С в крови пациентов является важным диагностическим показателем состояния системы гемостаза человека, позволяющее предупредить возникновение или спрогнозировать лечение тромбоэмболических осложнений. Обнаружение у представителей микромицетов вида Aspergillus ochraceus протеиназ, обладающих способностью активировать PC плазмы крови, дает основание для их использования как при коррекции нарушений системы гемостаза, так и для функционального определения PC в крови человека. Эти протеиназы при масштабном производстве могут быть более доступными и перспективными по сравнению с аналогичными протеолитическими ферментами — активаторами PC, получаемыми из яда южно-американского щитомордника Agkistrodon contortrix contortrix.

Впервые в данной работе установлена способность протеиназ микромицетов активировать протеин С человека и, соответственно экспериментально подтверждено высказанное в литературе предположение об этом свойстве протеолитических ферментов мицелиальных грибов (Ландау и др., 1998; Батомункуева и Егоров, 2001; Батомункуева и Егоров, 2002).

В результате проведенных исследований было показано, что активаторной к PC активностью обладают все 10 изученных штаммов вида Aspergillus ochraceus. Максимальные значения активности наблюдаются на 2 сутки культивирования, в конце логарифмической — начале стационарной фазы роста.

Изучено влияние условий культивирования микромицета на образование протеиназы с активаторной к PC активностью на примере штамма A. ochraceus L-1. Выявлен индуцибельный характер синтеза изучаемой протеиназы и показана перспективность твердофазного культивирования для получения протеиназы — активатора PC. Так, культивирование A. ochraceus L-1 в условиях твердофазного культивирования на вермикулите позволило более чем в 3 раза повысить выход протеиназы — активатора РС по сравнению с глубинными условиями культивирования.

Методом изоэлектрофокусирования выделена протеиназа — активатор РС, образуемая А. оскгасеш Ь-1. Определены ее биохимические и физико-химические свойства, которые сравнены с известными свойствами активатора РС, получаемого из яда щитомордника (Ктз1е1 е! а1., 1987; Огйтег е1 а1., 1988).

На основании данных, полученных в результате изучения субстратной специфичности протеиназы, образуемой А. оскгасеш, можно заключить, что грибной фермент имеет более узкую специфичность к хромогенным пептидным субстратам, в отличие от активатора РС из яда щитомордника. Однако оба фермента имеют примерно одинаковые изоэлектрические точки и молекулярную массу, оба являются сериновыми протеиназами.

Сравнение удельной активаторной к РС активности выделенной протеиназы, образуемой А. оскгасеш Ь-1, и протеиназы, получаемой из яда южно-американского щитомордника показало их сопоставимость.

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что свойство активировать протеин С присуще не только ферментам млекопитающих (тромбин) и змей (содержащейся в яде активатор), но и представителям мицелиальных грибов, в частности А. оскгасеш. Оба активатора сходны по своим свойствам, но не идентичны. Впервые были получены данные о свойствах протеиназ — активаторов РС, образуемых А. оскгасет: о субстратной специфичности, кинетических и физико-химических параметрах, действии ингибиторов протеиназ и пр.

Показана перспективность использования протеиназ — активаторов РС, образуемых А. оскгасет в составе диагностикумов для определения содержания РС в плазме крови, а самих продуцентов — как альтернативных источнику этих протеиназ — яду змей. Подбор оптимальных условий культивирования продуцента протеиназ позволил разработать способы получения данных ферментов как при глубинном, так и при его твердофазном культивировании. Небольшой срок культивирования микромицетов и образование протеиназ с активаторной к РС активностью на доступных средах делает возможным практическое использование микромицетов А. оскгасеж для получения протеиназ — активаторов РС.

Показать весь текст

Список литературы

  1. А.В., Снегирева А. Я., 1980. Лабораторный практикум по органической химии. М.: «Высшая школа», 184 с.
  2. Аль-Нури М.А., Иваница В. А., Егоров Н. С., 1981. Биосинтез внеклеточных протеаз Aspergillus candidus при отсутствии источников углерода или серы // Микробиология, 50, 6, 1019−1023.
  3. .П., 2001. Экстрацеллюлярные протеиназы микромицетов с фибринолитическими и антикоагулянтными свойствами. Дисс. канд. биол. наук. М.: МГУ.
  4. .П., Егоров Н. С., 2001. Выделение, очистка и разделение комплексного препарата внеклеточных протеиназ Aspergillus ochraceus 513 с фибринолитическими и антикоагулянтными свойствами // Микробиология, 70, 5, 602−606.
  5. .П., Егоров Н. С., 2002. Изучение препаратов внеклеточных протеиназ грибов Aspergillus ochraceus 513 и Aspergillus alliaceus 7 dNl // Микробиология, 71,1, 56−58.
  6. В.И., Коваль Э.З, 1988. Аспергиллы. Определитель. Киев, «Наукова Думка», 203 с.
  7. Р.К., Сафуани Ж. Е., Искакбаева Ж.А., 2003. Влияние различных источников азота и углерода на биосинтез протеолитических ферментову культуры Aspergillus awamori 21/96 II Прикладная биохимия и микробиология, 39, 2, 213−216.
  8. С., Манн К. Г., 2002. Свертывание крови. Биохимия, 67, 1,5−15.
  9. JI.P., Пинелис В. Г., Райзер Г., Струкова С. М., 2011. Активированный белок С регулятор активности NF-кВ при токсическом действии глутамата // Биологические мембраны, 28, 6, 1−12.
  10. Н.С., Лысенко С. В., 1991. Микроорганизмы, синтезирующие ферменты тромболитического действия // Биол. науки, 9, 136−153.
  11. А.Б., Титаева Е.В., 2002. Система фибринолиза: регуляция активности и физиологические функции ее основных компонентов//Биохимия, 67, 1, 116−126.
  12. Я.Е., Белякова Г. А., Павлюкова Е. Б., Белозерский М. А., 1995. Влияние условий культивирования на образование протеаз грибами Alternaria alternata и Fusarium oxysporum II Микробиология, 64. 3, 327−330.
  13. Я.Е., Грубань Т. Н., Белякова Г. А., Белозерский М.А, 1999. Влияние состава среды на количественный и качественный состав внеклеточных протеаз микромицетов // Микробиология, 68, 3, 324−329.
  14. Н.С., 1978. Протеолитические ферменты микроорганизмов, обладающие фибринолитической и коагулазной активностью. В кн.: Итоги науки и техники // Микробиология. М.: ВИНИТИ, 9, 5−39.
  15. Н.С., Ландау Н. С., 1965. Влияние различных концентраций глицерина и источников азота на биосинтез фибринолитического вещества культурой Aspergillus oryzae штамм МГУ // Прикладная биохимия и микробиология, 1, 487−493.
  16. Н.С., Лория Ж. К., Ландау Н. С., 1979. Протеолитические ферменты микроорганизмов в связи с их фибринолитической и коагулазной активностью / Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз. М., Наука, 146−196.
  17. Н.С., Ушакова В. И., 1973. Образование непатогенными плесневыми грибами рода Aspergillus коагулаз, свертывающих плазму и кровь человека // Микробиология, 211, 1, 221−223.
  18. Н.С., Ушакова В. И., Андреева Н. А., 1972. Выделение и изучение некоторых свойств протеолитических ферментов, образуемых Penicillium lilacium Thorn II Прикладная биохимия и микробиология, 8, 6, 854−860.
  19. Н.С., Ушакова В. И., Прудлов Б., 1971. Изучение образования протеолитических ферментов несовершенными грибами родов Cladosporium, Fusarium и Alternaria в связи с их фибринолитической активностью // Микробиология, 40, 4, 604−609.
  20. А.А., Броцкая С. З., Коршунов В. В., 1965. О действии протеиназ плесневых грибов на тромбы крови // Доклады АН СССР, 163, 3, 737−740.
  21. В.В., Егоров Н. С., 1983. О плазмокоагулирующей и фибринолитической активности грибов рода Aspergillus // Микробиология, 52, 3, 396−403.
  22. В.В., Отрошко Т. А., Егоров Н. С., 1979. Протеолитические ферменты, образуемые Aspergillus ochraceus в связи с их плазмокоагулирующей и фибринолитической активностями // Микробиология, 47, 5, 820−826.
  23. А.Е., Струкова С. М., 1993. Протеин С: механизм активации и антикоагулянтного действия // Биохимия, 58, 6, 827−844.
  24. В.Г., Руденская Г. Н., Ландау Н. С., Покровская С. С., Степанов В. М., Егоров Н. С., 1983. Субтилизиноподобная протеиназа SSPB из Streptomyces spheroides шт. 35 // Биохимия, 48, 8, 1365−1373.
  25. .А., Андреенко Г. В., Егоров Н. С., Струкова С. М., Ландау Н. С., 1963. Фибринолитические агенты, выделенные из культур некоторых сапрофитных грибов // Доклады АН СССР, 153, 4, 939−942.
  26. Н.С., Кураков А. В., Туликова О. М., Батомункуева Б. П., Струкова С. М., Егоров Н. С., 1998. Экстрацеллюлярные протеиназымикромицетов с фибринолитическими и антикоагулятными свойствами // Микробиология, 67, 2, 215−220.
  27. P.A., Пох Л.И., 1974. Фибринолитическая активность Trichothecium roseum II Микология и фитопатология, 8, 4, 326−330.
  28. В.В., 1971. Протеолитические ферменты. М.: «Наука», 404 с.
  29. Т.А., Клечковская В. В., Егоров Н. С., 1979. Изучение протеолитической системы Aspergillus ochraceus в связи с плазмокоагулирующей и фибринолитической активностями // Микробиология, 58, 4, 645−651.
  30. Е.Б., Белозерский М. А., Дунаевский Я. Е., 1998. Внеклеточные протеолитические ферменты мицелиальных грибов // Биохимия, 63, 8, 1059−1089.
  31. Л.И., 2002. Генетические механизмы наследственных нарушений гемостаза // Биохимия, 67, 1, 40−55.
  32. Л.В., Серебрякова Т. Н., Шаркова Т. С., Неумывакин Л. В., Андреенко Г. В., 2007. Эффект лизиса экспериментальных тромбов у крыс при наружном применении препарата лонголитина // Вопр. биол. мед. и фарм. химии, 1, 10−12.
  33. С.М., 2002. Современные представления о механизмах свертывания крови // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов, 2, 2126.
  34. С.М., 2004. Роль тромбоцитов и сериновых протеиназ в сопряжении свертывания крови и воспаления // Биохимия, 69, 10, 13 141 331.
  35. С.М., Андреенко Г. В., 1965. Исследования тромболитической активности аспергиллина М при экспериментальном тромбозе // Архив патологии, 4, 23−29.
  36. В.И., Егоров Н. С., Клечковская В. В., 1974. Образование микроскопическими грибами веществ, свертывающих плазму крови человека // Микробиология, 43, 5, 834−838.
  37. С.А., Никандров В. Н., Максимова Р. А., Шаркова Т. С., Андреенко Г. В., Серебрякова Т. Н., 1992. Физико-химические свойства тромболитического препарата лонголитина // Вопросы мед. химии, 38, 44−45.
  38. Т.А., Егоров Н. С., 1991. Отделение истинных коагулаз от других ферментов внеклеточного протеолитического комплекса Aspergillus ochraceus с помощью аффинной хроматографии // Научн. докл. высш. шк., 11, 109−113.
  39. Abdel-Fattah A., Ismail A.M.S., Salch S.A., 1993. Purification and properties of two fibrinolytic enzymes from Fusarium oxysporum N.R.C.J. II Zbl. Microbiol., 148, 2, 123−128.
  40. Aguilar C.N., Augur C. Favela-Torres E., Viniegra-Gonzalez G., 2001. Production of tannase by Aspergillus niger Aa-20 in submerged and solidstate fermentation: influence of glucose and tannic acid // J. Ind. Microbiol. Biotechnol, 2001, 26, 5, 296−302.
  41. M.L., 1935 // Crystelline carboxypeptidase. Science, 81, 467−470.
  42. Astrup R., Miillertz., 1952. The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity // Arch. Biochem. Biophys., 40, 346−351.
  43. Bakker H.M., Tans G., Yukelson L.Y., Janssen-Classen T.W., Bertina R.M., Hemker H.C., Rosing G., 1993. Protein С activation by an activator purified from the venom of Agkistrodon halys halys II Blood. Coagul. Fibrinolysis, 4, 4, 605−614.
  44. Barrios-Gonzalez J., 2012. Solid-state fermentation: Physiology of solid medium, its molecular basis and applications // Process Biochem., 47, 2, 175 185.
  45. Bertina R.M., Koeleman B.P.C., Koster T., Rosendaal F.R., Dirven R.J., de Ronde H., van der Veldon P.A., Reitsma P.H., 1994. Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C // Nature, 369, 6475, 64−67.
  46. M., 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem., 72, 1, 238−247.
  47. F.J., 2001. Gene targeting in hemostasis: protein C // Frontiers in Bioscience, 6, 807−819.
  48. Castoldi E, Rosing J., 2010. APC resistance: biological basis and acquired influences // J. Thromb. Haemost., 8, 445−453.
  49. R. Jr., Burnett T.J., Hageman J.N., 1984. Assaying proteinases with azocoll // Anal. Biochem., 136, 2, 446−450.
  50. Cruz-Hernandez M., Augur C., Rodriguez R., Conteras-Esquivel J., Aguilar C.N., 2006. Evaluation of Culture Conditions for Tannase Production by Aspergillus niger GH1// Food Technol. Biotechnol., 44, 4, 541−544.
  51. B., Villoutreix B.O., 2005. Regulation of blood coagulation by the protein C anticoagulant pathway: novel insights into structure-function relationships and molecular recognition // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 25, 1311−1320.
  52. B.J., 1964. Disc-electrophoresis. VI. Method and applications to human serum proteins // Ann. N.Y. Acad. Sci., 121, 404−427.
  53. G., Kumaran N.S., 2012. Amylase Production from Solid State Fermentation and Submerged Liquid Fermentation by Aspergillus niger II Bangladesh J. Sci. Ind. Res. 2012. V. 47. № 1. P. 99−104.
  54. Diaz-Godinez G., Soriano-Santos J., Augur C., Viniegra-Gonzalez G., 2001. Exopectinases produced by Aspergillus niger in solid-state fermentation and submerged fermentation: a comparative study // J. Ind. Microbiol. Biotechnol., 26, 5, 271−275.
  55. N.S., 1986. Microbiological synthesis of proteolytic enzymes possessing fibrinolytic activity / Thrombosis and thrombolysis. Ed. E.I. Chazov and V.N. Smirnov. Consult. Bur., N.Y. and London, 197−221.
  56. El-Aassar S.A., 1995. Production and properties of fibrinolytic enzyme in solid state cultures of Fusarium pallidoroseum II Biotech. Lett., 17, 5, 943 948.
  57. C.T., 2003. The protein C pathway // Chest (Suppl.), 124, 3, 26S-32S.
  58. C.T., 2005. The interactions between inflammation and coagulation // Brit. J. Haemat., 131, 417−430.
  59. C.T., Esmon N.L., 1984. Protein C activation // Semin., Thromb. and Haemost., 10, № 2, 122−130.
  60. T., Vaasjoki R., 1988. Characterisation and some properties of the protein C activator from Agkistrodon contortrix contortrix venom // Thromb Haemost. 25, 59, 1, 40−44.
  61. Fungaro M., Magnani M., Vias-Boas L.A., Vissotto P.C., Furlaneto M.C., Vieira M.L.C., Taniwaki M.H., 2004. Genetic relationships among Brazilian strains of Aspergillus ochraceus based on RAPD and ITS sequences // Can. J. Microbiol., 50, 11,985−988.
  62. Gempeler-Messina P.M., Millier C., 2006. Diagnostic use of the protein C activator from Agkistrodon contortrix. Toxin Reviews, 25, 335−349.
  63. Gempeler-Messina P.M., Volz K., Biihler B., Millier C., 2001. Protein C activators from snake venoms and their diagnostic use // Haemostasis, 31, 266−272.
  64. A., Trop M., 1971. The elastase-like enzymes from Streptomyces griseus (Pronase). Isolation and partial characterization // Eur. J. Biochem., 19, 1,90−96.
  65. P., Bensoussan M., 1994. Solid-state fermentations of the genus Aspergillus / Aspergillus. Ed. J.E. Smith. Plenum Press, New York, 101−140.
  66. S.M., Suneetha T.B., Ashwinipatil G.M., 2011. Exploration of newer substrate for fibrinolytic enzyme production by solid-state fermentation using Penicillium chrysogenum SGAD12 // J. Res. Biol., 4, 242−245.
  67. L., Pinelis V., Ishiwata S., Strukova S., Reiser G., 2010. Activated protein C prevents glutamate- and trombin-induced activation of nuclear factor-KB in cultured hippocampal neurons // Neuroscience, 165, 1138−1146.
  68. J.H., Fernandez J.A., Gale A.J., Mosnier L.O., 2007. Activated protein C // J. Thromb. Haemost., 5, Suppl. l, 73−80.
  69. J.H., Zlokovic B.V., Mosnier L.O., 2012. Protein C anticoagulant and cytoprotective pathways // Int. J. Hematol., 95, 333−345.
  70. Gutierrez-Correa M., Villenna G.K., 2003. Surface adhesion fermentation: a new fermentation category. // Rev. Peru. Biol., 10, 2, 113−124.
  71. B., Matsubara H., Nakai M., Okunuki K., 1958. Crystalline bacterial proteinase. I. Preparation of crystalline proteinase of Bacillus subtilis II J. Biochem., 45,185−194.
  72. Y., Ishida H., Kojima Y., Ichikawa E., Kawato A., Suginami K., Imayasu S., 1997. Comparison of two glucoamylases produced by Aspergillus oryzae in solid-state culture (Koji) and submerged culture // J. Ferment. Bioeng., 84, 6, 532−537.
  73. T., Iwen P., Hinrichs H., 2000. Identification of Aspergillus species using Internal transcribed spacer regions 1 and 2 // J. Clinical Microb., 15 101 515.
  74. I.B., Leaver A.G., 1976. A procedure to increase the sensitivity of staining by Coomassie Briliant Blue G-250 perchloric acid solution // Anal. Biohem., 75, 2, 634−636.
  75. U., Hofer M., Lenz J., 2004. Biotechnological advantages of laboratory-scale solid-state fermentation with fungi // Appl. Microbiol. Biotechnol., 64, 2, 175−186.
  76. U., Lenz J., 2005. Solid-state fermentation—are there any biotechnological advantages? // Curr. Opinion Microbiol., 8, 3, 301−306.
  77. Ives D.A.J., Tosony A.L., 1967. Purification of CA-7, a thrombolytic fungal protease // Can. J. Bioch., 45, 1055−1065.
  78. G., Buxton F., 1994. Nitrogen, carbon and pH regulation of extracellular acidic protease of Aspergillus niger II Current Genetics, 26, 238−244.
  79. Kang D., Gho Y.S., Suh M., Kang C., 2002. Highly Sensitive and fast protein detection with Coomassie Briliant Blue in sodium dodecyl sulfate -polyacrylamide gel electrophoresis // Bull. Korean Chem. Soc., 23, 11, 15 111 512.
  80. W., Kondo S., Kenneth J.S., Brad A., Leslie F.S., 1987. Characterization of a protein C activator from Agkistrodon contortix contortix venom // J. Biol. Chem., 262, № 26, 12 607−12 613.
  81. J.D., Walker F.J., 1986. Purification of a protein C activator from the venom of the southern copperhead snake (Agkistrodon contortrix) II Biochemistry, 25, 15, 4175−4179.
  82. Klocking HP, Markwardt F., 1971. Fibrinolytic activity of a protease isolated from Aspergillus ochraceus II Acta Biol Med Ger., 26, 1, 35−44.
  83. A.E., Makarov A.N., Bobruskin I.D., Strukova S.M., 1991. Comparative study of protein C activators from the Agkistrodon snake venoms // Thromb. Res., 62, 775−780.
  84. E., 2012. Fibrinolytic Bacterial Enzymes with Thrombolytic Activity. Springer, 74 p.
  85. Kunes Y.Z., Sanz M.-C., Tumanova I., Birr C.A., Shi P.Q., Bruguera P., Ruiz J.A., Sanchez-Martinez D., 2002. Expression and characterization of a synthetic protein C activator in Pichia pastoris II Protein Expr. Purif., 26, 406 415.
  86. U.K., 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of Bacteriophage T4 // Nature, 227, 5259, 680−685.
  87. Larcher G., Bouchara J.-P., Annaix V., Chabasse D., Tronchin G., 1992. Purification and characterization of a fibrinogenolytic serine proteinase from Aspergillus fumigatus culture filtrate // FEBS Letters, 308, 1, 65−69.
  88. M., 1952. Heart denaturation of plasminogen in the fibrin method // Acta Physiol. Scand., 27, 371−376.
  89. Lewis J. K., Wei J., Siuzdak G., 2000. Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry in Peptide and Protein Analysis /Encyclopedia of Analytical Chemistry, Ed. R.A. Meyers, John Wiley & Sons Ltd, Chichester, 5880−5894.
  90. Li Y., Shuang J.-L., Yuan W.-W., Huang W.-Y., Tan R.-X., 2007. Verticase: a fibrinolitic enzyme produced by Verticillium sp. Tj33, an Endophyte of Trachelospermum jasminoides II J. Integr. Plant Biol., 2007, 49, 11, 15 481 554.
  91. Liu C., Matsushita Y., Shimizu K., Makimura K., Hasumi K., 2007. Activation of prothrombin by two subtilisine-like serine proteases from Acremonium sp. II Biochem. and Biophys. Research Comm., 358, 356−362.
  92. Lu D., Kalafatis M., Mann K.G., Long G.L., 1996. Comparison of activated protein C/ protein S mediated inactivation of human factor VIII and factor V //Blood, 87, 11,4708−4717.
  93. R.A., Subbotina Z.A., Gavrilov O.K., 1996. A new polyvalent thrombolytic preparation (triase) the study of its effectiveness during the varios forms of experimental thrombosis // Hematol. Rev., 7, 2, 97−111.
  94. J.L., Stoker K., 1986. Fast functional protein C assay using Protac®, a novel protein C activator // Thromb. Res., 43, 253−256.
  95. McMullen B.A., Fujikawa K., Kisiel W., 1989. Primary structure of a protein C activator from Agkistrodon contortrix contortrix venom // Biochemistry, 28, 2, 674−679.
  96. J., Adler Ch., Stoker K., 1988. Isoelectric focusing of Protac®, the protein C activator from copperhead {Agkistrodon contortrix) venom: a note on experimental problems // Toxicon, 26, 2, 218−221.
  97. Mienda B.S., Idi A., Umar A., 2011. Microbiological features of solid-state fermentation and its applications // Res. Biotech., 2, 6, 21−26.
  98. L.O., Griffin J.H., 2006. Protein C anticoagulant activity in relation to anti-inflammatory and anty-apoptotic activities // Frontiers in Bioscience, 11,2381−2399.
  99. L.O., Zlokovic B.V., Griffin J.H., 2007. The cytoprotective protein C pathway//Blood, 109, 8, 3161−3172.
  100. S., Murugammal R., 2011. Production of cellulose by Aspergillus niger under submerged and solid-state fermentation using coir waste as a substrate // Brazil. J. Microbiol., 42, 3, 1119−1127.
  101. Oda K., Kakizono D., Yamada O., Lefuji H., Akita O., Iwashita K., 2006. Proteomic analysis of extracellular proteins from Aspergillus oryzae grown under submerged and solid-state culture conditions // Appl. Environ. Microbiol., 72, 5, 3448−3457.
  102. C.L., Bhattacharya P., Stricland D.K., 1988. Characterization of a protein C activator from the venom of Agkistrodon contortrix contortrix II Biochemistry, 27, 2558−2564.
  103. A., Selvakumar P., Soccol C.R., Nigam P., 1999. Solid state fermentation for the production of industrial enzymes // Current Science, 77, 1, 149−162.
  104. Y., Yang X., Zhang Y., 2005. Microbial fibrinolytic enzymes: an overview of source, production, properties, and thrombolytic activity in vivo // Appl. Microbiol. Biotechnol, 69, 126−132.
  105. Rahardjo Y.S.P., Tramper J., Rinzema A., 2006. Modeling conversion and transport phenomena in solid-state fermentation: a review and perspectives // Biotechnol. Adv., 24, 2, 161−179.
  106. Rao M.B., Tanksale A.M., Ghate M.S., Deshpande V.V., 1998. Molecular and biotechnological aspects of microbial proteases // Microbiology and Molecular Biology Reviews, 62, 3, 597−635.
  107. Rodrigues P., Soares C., Kozakiewich Z., Paterson R.R.M., Lima N., Venancio A., 2007. Identification and characterization of Aspergillus flavus and aflatoxins / Communicating Current Research and Educational Topics and
  108. Trends in Applied Microbiology. Ed. A. Mendez-Villas, SI. Formatex, 527 534.
  109. Romeo-Gomez S.J., Augur C., Viniegra-Gonzalez G., 2000. Invertase production by Aspergillus niger in submerged and solid-state fermentation // Biotechnol. Lett., 22, 15, 1255−1258.
  110. F.R., Reitsma P.H., 2009. Genetics of venous thrombosis // J. Thromb. Haemost., 7, Suppl. l, 301−304.
  111. T., Hatsuyama H., Kitamura T., Uchida K., Katayama Y., Matsuyama T., 1990. Study of chromogenic substrate on protein C activity assay in patients treated with warfarin // Rinsho Byori, 38, 8, 937−941.
  112. T., Beppu T., Arima K., 1977. Purification and properties of blood-coagulating protease from Cephalosporium sp II Agrie. Boil. Chem., 41, 2, 293−298.
  113. R.A., Madon J., Ender M., Galli P., Riewald M., 2012. Protease-activated receptor-1 cleaved at R46 mediates cytoprotective effects // J. Thromb. Haemost., 10, 1675−1684.
  114. R.R., Patel A.K., Soccol C.R., Pandey A., 2009. Recent advances in solid-state fermentation // Bichem. Eng. J., 44, 1, 13−18.
  115. Soh U.J.K., Trejo J., 2011. Activated protein C promotes protease-activated receptor-1 cytoprotective signaling through (3-arrestin and disheveled-2 scaffolds // PNAS, 108, 50, E1372-E1380.
  116. M.M., Marin H.H., 1958. Fibrinolysis. I. Fibrinolytic activity of extracts from non-pathogenic fungi // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 99, 2, 504 507.
  117. J., 1976. A new vitamin K-dependent protein: purification from bovine plasma and preliminary characterization // J. Biol. Chem., 251, 355−363.
  118. Stocker K., Fischer H., Meier J, Brogli M, Svedsen L., 1986. Protein C activators in snake venoms // Behring Inst Mitt, 79, 7−47.
  119. K., Fisher H., Meier J., 1988. Practical application of the protein C activator Protac® from Agkistrodon contortrix contortrix venom // Folia Haematol. Int. Mag. Klin. Morphol. Blutforsch., 115, 3, 260−264.
  120. K., Fisher H., Meier J., Brogli M., Svedsen L., 1987. Characterization of the protein C activator Protac® from the venom of southern copperhead (Agkistrodon contortrix) snake // Toxicon, 25, 3, 239−252.
  121. Sun L., Guang J., Huang S., Yu Q., 2001. Identification of protein C activator from nine species of Chinese snake venoms // Zhongguo Bingli Shengli Zazhi, 17, 241−244.
  122. H., 1978. Study of specificity of synthetic substrates in blood coagulation // Haemostasis, 7, 2−3, 95−96.
  123. Tao S., Peng L., Beihui L., Deming L., Zuohu L., 1997. Solid-state fermentation of rice chaff for fibrinolytic enzyme production by Fusarium oxysporum II Biotechnol. Lett., 19, 5, 465−467.
  124. D.J., Carlstadt I., Sheehan J.K., 1996. Identification of glycoproteins on nitrocellulose membranes and gels // Mol. Biotechnol., 5, 171−176.
  125. M., Kubo T., Miyatake K., Nakamura T., 2007. Purification and characterization of fibrinolytic alkaline protease from Fusarium sp. BLB // Appl. Microbiol. Biotechnol., 74, 331−338.
  126. Versteeg H.H., Heemskerk J. W. M., Levi M., Reitsma P.H., 2013. New fundamentals in haemostasis // Physiol. Rev., 93, 327−358.
  127. O., 1972. Isoelectric focusing of proteins in polyacrylamide gels I I Biochim. Biophys acta, 1, 11−19.
  128. Viniegra-Gonzalez G., 1997. Advances in solid-state fermentation / Ed. S. Roussos, B.K. Lonsane, M. Raimbault and G. Viniegra-Gonzalez. Kluwer Acad. Publ., 5−22.
  129. J., Oxley D., 2012. Protein Identification by MALDI-TOF Mass Spectrometry / Chemical Genomics and Proteomics. Methods in Molecular Biology, Volume 800, Humana Press, 227−240.
  130. Wu B., Wu L., Chen D., Yang Z., Luo M., 2009. Purification and characterization of a novel fibrinolytic protease from Fusarium sp. CPCC 480 097 // J. Ind. Microbiol. Biotechnol., 36, 451−459.
  131. W., Golay P., Warrel D.A., 1997. Synopsis of recent developments in venomous snake systematics // Toxicon, 35, 3, 319−340.
  132. W., Golay P., Warrel D.A., 1998. Synopsis of recent developments in venomous snake systematics // Toxicon, 36, 2, 299−307.
  133. Xiao-Ian L., Lian-xiang D., Fu-ping L., Xi-qun Z., Jing X., 2005. Purification and characterization of a novel fibrinolytic enzyme from Rhizopus chinensis 12 // Appl. Microbiol. Biotechnol., 67, 209−214.
  134. B.V., Griffin J.H., 2011. Cytoprotective protein C pathways and implications for stroke and neurological disoders // Trends in Neurosciences, 34, 4, 198−209.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!