Антимикробная активность металлокомплексных соединений и их влияние на течение инфекционного раневого процесса в эксперименте

Проблема лечения гнойных ран и раневой инфекции издавна является одной из важнейших в медицине, занимая ведущее место в хирургической заболеваемости (от 35 до 40%) [17, 127]. Обусловлено это изменившимся характером патогенных микроорганизмов, сложностью в выборе лечебной тактики, отсутствием унифицированных антибактериальных средств и методов лечения [43, 134].

Представление о раневом процессе постоянно меняется вместе с развитием медицины, микробиологии и технических наук и постоянно находится в центре пристального внимания клиницистов, приобретая медико-социальное значение [16, 92,111, 135].

Постоянное внимание к этой сложной и актуальной проблеме объясняется также увеличением числа гнойно-воспалительных заболеваний, тяжестью их течения, прогрессирующим возрастанием антибиотикоустойчивых и антибио-тикозависимых микроорганизмов [6, 74]. По данным ВОЗ к 2010 году патология микробной этиологии снова станет главной причиной. смертности людей во всех странах. В значительной степени такой неблагоприятный прогноз связан с ускорением формирования и распространения микробов, устойчивых к существующим препаратам. Одной из главных причин образования подобных штаммов! бактерий является нерациональное использование антимикробных препаратов, обусловленное недостаточными знаниями особенностей существования бактерий, характера раневого микробиоценоза, [16]. Поэтому одной из важных задач остается поиск новых методов и средств местного лечения, обладающих разнонаправленным действием, обеспечивающих антимикробный, иммуномо-дулирующий, противовоспалительный и репаративный эффект [135].

В связи с этим оправданно повысился интерес к химической модификации лекарственных средств, которая может осуществляться различными способами, в том числе комплексообразованием с металлами, так как в организме жизненно важные металлы находятся преимущественно в виде координационных соединений. Для большинства металлов показано разнообразное действие на активность биологических процессов в организме человека, в то же время, сравнительно мало известно о результатах их контакта с бактериями, патогенными для человека. Еще меньше данных о возможных результатах действия комплексных соединений металлов с лекарственными препаратами на бактерии. Однако именно изучение особенности, действия новых комплексных соединений металлов на бактерии, находящиеся в раневом отделяемом, в присутствии различных факторов внешней средыможет позволить сделать новый шаг к рациональной антимикробной терапии.

Поэтому комплексообразование биометаллов с уже известными1 лекарственными средствами может являться однимиз эффективных и актуальных направлений поиска новых биологически активных соединений, так как оно позволит сочетать в одном веществе различные виды активности, которые к тому же могут взаимно усиливать друг друга, расширять спектр действияснижать токсичность лекарственных средств.

В-качестве металлов-комплексообразователей нами-были выбраны цинк и железо, учитывая их положительную биологическую роль в жизнедеятельности организма. Необходимо отметить многообразную роль этих металлов, в окислительно-восстановительных процессах, протекающих в организме, а также иммунологических реакциях, необходимых для процессов роста и кроветворения.

В качестве лиганд для комплексообразования с металлами были выбраны биологически активные вещества производные, адамантана, нитроимидазола и нитрофурана. Из производных адамантана нас заинтересовало новое соединение, синтезированное в Пермском медицинском институте — ]Ч-(Г-Адамантил)-2-гидрокси-4-оксо-4-(п-толил)-кротонамйд, а производные нитроимидазола и нитрофурана часто используются-в практической медицине.

Целью работы явилось изучение антимикробной активности новых комплексных соединений цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола, нитрофурана и разработанных на их основе поликомпонентных глице-рогелей, а также их влияния на течение экспериментального раневого процесса.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

1. Изучение биологической, активности новых комплексных соединений цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана, а также оценка возможности их использования в составе антимикробных лекарственных форм.

2. Проведение сравнительного анализа выживаемости различных бактерий в присутствии комплексных соединений металлов.

3. Исследование влияния новых биокомплексов на течение экспериментальной стафилококковой инфекции.

4. Разработка состава и технологии получения антимикробной полимерной лекарственной формы, содержащей новые биокомплексы и предназначенной для подавления гноеродной микрофлоры.

5. Изучение антимикробной активности разработанной поликомпонентной полимерной лекарственной формы и эффективности ее применения при экспериментальном воспалении.

6. Изучение реактивных изменений в органах и тканях при введении биокомплексов цинка и железа при моделировании экспериментального воспаления.

Научная новизна работы. Впервые установлены антимикробные, антигрибковые, иммуномодулирующие свойства разработанных комплексных соединений цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана.

Оценено действие комплексных соединений металлов на выживаемость бактерий.

Показана высокая эффективность металлокомплексных соединений при лечении стафилококковой инфекции в эксперименте.

Результаты применения разработанных полимерных гидрогелей, содержащих биокомплексы цинка и железа, являются научно-экспериментальным обоснованием их использования в практическом здравоохранении при лечении гнойно-воспалительных инфекций кожи.

Практическая значимость работы. Установленная антимикробная, ан-тимикотическая и иммуномодулирующая активность новых биокомплексов позволяет рекомендовать эти соединения для дальнейшего изучения в качестве препаратов выбора при лечении инфекций, вызванных различными видами об-лигатнои факультативноанаэробных микроорганизмов.

Результаты проведенных исследований позволяют по-новому оценить выживаемость бактерий в естественных условиях раневого процесса в присутствии комплексного соединения.

Предложенные составы многокомпонентных глицерогелей обеспечивают выраженный антимикробный, обезболивающий, ранозаживляющий и регенерирующий эффекты при лечении и профилактике гнойно-воспалительных процессов кожи.

Материалы диссертации используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе на кафедрах биологической и химической технологии, микробиологии, вирусологии, иммунологии и кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии Курского государственного медицинского университета, на кафедре биомедицинской инженерии Курского государственного технического университета.

Основные положения, выносимые на защиту. Полученные результаты экспериментов in vitro и in vivo демонстрируют повышение антимикробной и антимикотической активности, иммуномодулирующие свойства новых биокомплексов цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана относительно исходных лигандов.

Разработанные составы многокомпонентных полимерных гелей, обеспечивая воздействие на различные стороны патогенеза раневого процесса, позволяют сократить сроки лечения кожных гнойных воспалений в эксперименте в среднем в 1,5 раза.

Апробация работы. Основные положения работы представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2006, 2007 гг.), межвузовских конференциях студентов и молодых ученных.

Курского государственного медицинского университета (2006, 2007 гг.), Всероссийской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2006 г.), Международной конференции «Современные медицинские технологии (диагностика, терапия, реабилитация и профилактика)» (Хорватия, 2006 г.), межкафедральной конференции Курского государственного университета (2008 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе две из них в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание ученой степени.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 5-и глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы. Она изложена на 171 страницах компьютерного текста, содержит 44 таблицы и 24 рисунка. Библиографический указатель включает 146 отечественных и 50 зарубежных литературных источников.

выводы.

1. Установлено, что новые, комплексные соединения цинка и железа. с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана обладают более выраженным антимикробным действием в отношении тест-штаммов микроорганизмов по сравнению с исходными лигандами.

2. Действие новых комплексных соединений металлов на бактерии имеет индивидуальных характер? и сопровождается усилениеммикробицидных свойств;

3. Показана высокая" эффективность металлокомплексных соединений при лечении? экспериментальной* стафилококковой] инфекции, заключающаяся, в снижении смертности животных при их инфицировании в 1,3−1,6 раза.

4. Комплексообразование цинка и железа с производными, адамантана, нит-роимидозола и нитрофурана приводит к: усилению стимулирующего действия, на факторы неспецифической резистентности (фагоцитоз, лизоцим, бактерицидная? активность сыворотки крови), гуморального и клеточного > иммунитета1. Установлена низкая токсичность и отсутствие раздражающего эффекта изучаемых биокомплексов.

5. Разработаны составы многокомпонентных полимерных глицерогелей, содержащих биокомплексы, цинка и железа, и установлена их выраженная антимикробная, активность, биологическая переносимость, противовоспалительный^ и: обезболивающий эффекты, возможность обеспечения пролонгированного антимикробного действия, что в результате позволило сократить сроки лечения* кожных гнойных воспалений в 1,5 раза.

6. Изучены реактивные: изменения в тканях при введении новых биоком-плексовщинка и железа и установлено их стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденных тканей, заключающиеся• в активизации образования демаркационной линии очага воспаления и более быстром развитии грануляционной соединительноиткани по сравнению с контролем.

7. Результаты антимикробной активности полимерных гидрогелей на, основе комплексных соединений дают основание рекомендовать их для проведения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Не возникает сомнения в том, что антибиотикотерапия была и остается наиболее эффективным методов лечения инфекционно-воспалительных процессов различной этиологии [25,29,36]. Антибиотики наряду с вакцинацией больше чем какие-либо другие достижения медицинской науки повлияли на жизнь человечества. Вместе с тем арсенал антибактериальных средств постоянно расширяется и обновляется в связи с неуклонным ростом резистентности микрофлоры, во многом обусловленным нерациональным их применением. Возможности для открытия новых препаратов практически исчерпаны и основные усилия, по мнению многих авторов, должны быть направлены на повышение эффективности и усовершенствование имеющихся лекарственных средств [5,3,53,55,120].

Кроме того, повысился интерес к использованию препаратов, который учитывали бы индивидуальные особенности организма больного (и в, первую очередь состояние иммунной системы), специфику инфекционного процесса и стадии его развития. Поэтому модификация широко использующихся антимикробных препаратов становится одним из основных вопросов современной медицины [75,67,47].

Особенно привлекательными в этом отношения являются комплексы лекарственных средств с эссенциальными металлами. Это связано с тем, что развитие патологических процессов в организме сопровождается нарушением естественного баланса микроэлементов. Применение же указанных комплексов может восполнить этот дефект и, тем самым, способствовать скорейшему выздоровлению больного. Имеется много примеров не только увеличения антибактериальной активности препаратов после включения в их состав различных биометаллов, но и расширения спектра действия [8,9,18,23,37,48,52].

Эффективность действия введенных в организм микроэлементов, связанных с лекарственными средствами, зависит от нескольких важных факторовот природы центрального атома, характера и прочности связи металл-лиганд, от исходного содержания вводимых (в виде биокомплексов лекарственных средств) микроэлементов в крови, печени и пораженных органах при конкретной патологии, а также от влияния указанных микроэлементов на рост бактерий, вызывающих эту патологию.

Из анализа литературных данных следует, что, учитывая возможность комплексообразования лекарственных средств in vivo, можно путем целенаправленного синтеза биокомплексов металлов с лекарственными средствами не только снижать их отрицательные побочные действия, но и в ряде случаев значительно усилить фармакологическую активность [75,77,90,96,117]. К тому же, введение в состав комплексов биометаллов, обладающих определенной иммуностимулирующей активностью, позволяет получать соединения с аналогичными свойствами.

Одними из препаратов, применяемых в терапии анаэробных или смешанных анаэробно-аэробных инфекций различной локализации, являются производные нитроимидазола [40,75,85,95,163]. В основном они активны против простейших и анаэробных бактерий, но известно и их антибактериальное действие и в отношении ряда факультативно-анаэробных микроорганизмов. Эти данные, наряду с описанной в литературе способностью эссенциальных металлов расширять спектр действия лигандов при комплексообразовании, явились предпосылками к изучению влияния некоторых, металлов на антимикробную активность нитроимидазола.

Для лечебно-профилактических целей был синтезирован ряд биокомплексов цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитро-фурана и изучена их биологическая активность, прежде всего в отношении тест-штаммов микроорганизмов, рекомендованных ГФ-XI методом диффузии в агар и двухслойной агаровой культурой. В результате проведенных сравнительных исследований было выяснено, что изучаемые биокомплексы обладают антимикробной активностью, но в разной степени.

Наиболее выраженное антимикробное действие было обнаружено у изучаемых биокомплексов цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана в отношении всех исследованных тест-микробов по сравнению с чистыми лигандами, так как биокомплекс цинка с производным адамантана проявлял наиболее выраженное антимикробное действие в отношении S. aureus, В. subtilis, В. cereus, P. aeruginosa и С. albicans. Изучаемые биокомплексы цинка с метронидазолом и фурацилином в отношении S. aureus, В. subtilis, Е. coli и P. aeruginosa также проявили наиболее значимую антимикробную активность, чем лиганды, то есть производные адамантана, метронида-зол и фурацилин.

В случае использования комплексов железа с метронидазолом, производным адамантана и производным нитрофурана наибольшая активность наблюдалась в отношении S. aureus и В. subtilis и была значимо выше во всех остальных случаях по сравнению с лигандами.

Таким образом, исследования антимикробной активности препаратов методом диффузии в агар показали, что комплексообразование цинка и железа с производными адамантана, нитроимидазола и нитрофурана позволяет значительно увеличить антимикробную активность и расширить спектр действия биокомплексов по сравнению с исходным лекарственным средством (в отношении целого ряда факультативно-анаэробных возбудителей). Это можно объяснить тем, что в составе биокомплексов биометаллы оказывают существенное синергидное действие, оказывая влияние на специфическую активность лиган-да.

Очень важной характеристикой антибактериальных препаратов является определение минимальной бактерицидной концентрации. Это связано с тем, что увеличение концентрации нитроимидазолов может сопровождаться различными побочными эффектами вследствие способности к кумуляции. Поэтому важно было, чтобы синтезированные биокомплексы по минимальной бактерицидной концентрации, как минимум, не уступали исходному лиганду. Для достижения указанных целей было исследовано антибактериальное действие изучаемых лиганд и их комплексных соединений с металлами методом серийных разведении в жидкой питательной среде.

Установлено, что производные адамантана и нитроимидазола оказывали подавляющее действие в отношении изученных тест-микробов в концентрации от 2,5 мг/мл до 5,0 мг/мл, а производное нитрофурана — в дозе 1,25 — 2,5 мг/мл. Комплексы цинка и железа с лигандами оказывали минимальное подавляющее действие в концентрациях 0,31 — 1,25 мг/мл, т. е. комплексообразование способствовало повышение антимикробной активности in vitro.

Комплексообразование цинка и железа с производными адамантана, нит-роимидазола и нитрофурана повышает их активность, что позволяет, рекомендовать данные комплексные соединения в качестве антимикробных лекарственных средств при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний.

Однако данный вывод требовал подтверждения в опытах на лабораторных животных, поскольку далеко не всегда антимикробное действие препарата, установленное in vitro может совпадать с его активностью в живом организме. Поскольку все исследованные биокомплексы показали выраженную активность в отношении стафилококков, то были проведены исследования протективной активности биокомплексов железами цинка с производными адамантана, нитро-имидозола и нитрофурана в опытах на мышах при внутрибрюшинном их заражении культурой S.aureus. Выживаемость животных при лечении комплексными соединениями железа и цинка с производным адамантана, метронидазолом и фурацилином составила 80−99% по сравнению с исходными лигандами.

Таким образом, исследование антибактериальной активности комплексных соединений производных адамантана, нитроимидазола и нитрофурана с металами позволяет сделать заключение, что в большинстве случаев включение металлов (железо, цинк) в структуру лекарственного средства приводит к повышению активности исходного лиганда и расширению спектра его действия.

Определение показателей токсичности изучаемых соединений для мышей свидетельствует о том, что как базовые препараты, так и синтезированные на их основе биокомплексы цинка и железа характеризуются сравнительно низкой токсичностью и в соответствии с классификацией токсичности, принятой ВОЗ, относятся к классу малотоксичных веществне обладали раздражающим и ал-лергизирующим действием на кожу морских свинок в 0,5%-ных концентрациях, не оказывали отрицательного воздействия на морфологическую структуру кожи и печени. Препараты не проявляли общетоксического действия на экспе-рименталых животных: аппетит, привес, реактивность, подвижность, состояние кожи и шерсти не отличались от контроля.

Исследование антигрибковой активности новых комплексных соединений цинка и железа позволило охарактеризовать их как биологически активные вещества с умеренной антимикотической активностью.

Поскольку одним из непременных условий эффективной терапий инфекционных процессов является адекватный иммунологический ответ, то интересно было исследовать воздействие новых биокомплексов на показатели антиинфекционной защиты организма экспериментальных животных, так как известно, что использованные в комплексах металлы, обладают высокой активностью в процессах иммуногенеза [49,51,54, 68, 72, 126, 142,143].

Фактором антиинфекционной защиты, определяющим дальнейшее развитие инфекционного процесса, является ее неспецифическое звено. Результаты исследования влияния биокомплексов на фагоцитарную активность лейкоцитов показали, что более высокие показатели фагоцитоза, в первую очередь фагоцитарного индекса, отмечены в группах животных, которым вводили биокомплексы цинка и железа, так как фагоцитарный индекс значительно превышал показатели как контрольной группы, которым вводили физиологический раствор натрия хлорида, так и групп, которым вводили лиганды (производные адамантана, нитроимидазола и нитрофурана).

Активность кислородзависимых бактерицидных систем нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) также свидетельствует о стимулирующем влиянии исследованных биокомплексов.

Использование биокомплексов оказывало выраженный стимулирующий эффект на кислороднезависимые бактерицидные системы нейтрофилов, определяемые в тесте на лизосомальные катионные белки. Стимуляция бактерицидных систем нейтрофилов послужила, по нашему мнению, причиной усиления завершенности фагоцитоза под действием биокомплексов.

Изучение иммуномодулирующих свойств новых биокомплексов при иммунизации крыс эритроцитами барана показало, что введение изучаемых ли-ганд существенно не влияло на формирование гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана. Об этом свидетельствовал тот факт, что количество АОК в селезенке крыс, получавших физиологический раствор в твине и изучаемые лиганды, существенно не отличались друг от друга.

Введение

 же биокомплексов цинка и железа активизировало иммуномо-дулирующее действие лиганда на формирование гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Об этом свидетельствовал факт повышения по сравнению с контролем количества АОК в 1,5−2 раза.

Таким образом, установлено, что изучаемые биокомплексы повышают фагоцитарную активность нейтрофилов и стимулируют лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови крыс, иммунизированных эритроцитами, барана. Кроме того, на основании полученных данных можно констатировать факт более выраженного по сравнению с лигандами иммуномодулирую-щего действия биокомплексов с металлами на гуморальное звено иммунитета.

Выявленная высокая специфическая активность и эффективность действия комплексов, в частности, комплексного соединения цинка с производным 5-нитроимидазола, возможно, объясняется проявлением аналогии строения биокомплекса (где металл связан с 5-нитроимидазольными остатками через атом азота в положении 3 и молекулой воды) и активного центра важнейшего фермента — карбоангидразы (где, в частности, цинк связан с тремя имидазоль-ными остатками гистидина и одной молекулой воды).

Учитывая антибактериальную активность биокомплексов и отсутствие раздражающего эффекта целесообразно было провести испытания биологической активности этих соединений при экспериментальной гнойной ране. Местное применение лекарственных средств при очаговых поражениях, к которым относятся гнойные раны, является наиболее предпочтительным, поскольку позволяет создать максимальные концентрации их в ране и снизить общее отрицательное воздействие на организм больного [7,134,135,125,129]. Эффективность местной лекарственной терапии определяется суммарным действием целого ряда факторов, среди которых важное значение имеет терапевтическая активность используемых лекарственных средств [87, 91,97, 114, 116]. Достижения современной медицинской науки позволили сформулировать основные требования к лекарственным средствам для лечения гнойных ран. Основное из этих требований состоит в том, что применяемый препарат должен способствовать скорейшему заживлению гнойной раны [112,115,127,128,166,167]. Однако реализовать это требование на практике оказывается далеко не просто. Успех лечения определяется тем, насколько примененный лекарственный препарат будет соответствовать биологическим процессам, протекающим в ране в этот период.

Необходимость в интенсивном местном лечении ран после хирургической обработки диктуется тем фактом, что радикальная санация раны хирургическим путем практически невозможна. Успех лечения определяется одновременным и комплексным действием препарата как на микробную флору так и на основные факторы патогенеза раневого процесса, определяющие сущность каждой его фазы. Использование лекарственных препаратов, применяемых на рану после ее адекватной хирургической обработки должны подавить остатки микробной флоры и ликвидировать причины, обуславливающие прогрессиро-вание гнойного воспаления — ацидоз, гипергидратацию, нарушения микроциркуляции и т. д.

Наиболее часто для этих целей применяются антимикробные мази. На основании анализа литературных данных, посвященных разработкам мягких лекарственных форм для наружного применения, основной антимикробный компонент чаще всего используется в диапазоне концентраций от 0,1 до 3% [134,138,173]. При разработке мягкой лекарственной формы учитывалась природа носителя, так как она имеет большое влияние на терапевтическую активность лекарственных веществ в мазях [129]. В связи с этим выбор основы для мягкой лекарственной формы осуществлялся с учетом требований современной медицины и, особенно, с учетом такого показателя как способность основ к высвобождению действующих веществ [80,144,145,164,165].

Поиск в области разработки новых аппликационных лекарственных форм и составов для лечения воспалительных заболеваний актуален, а использование для этих целей гидрофильных основ может обеспечить создание необходимой и удобной, в каждом конкретном случае, консистенции хорошо фиксирующейся на поверхности, что будет способствовать локализации препарата на определенном участке. Большой интерес для разработки иммобилизированных лекарственных форм для лечения ран представляют производные целлюлозы, так как они имеют ряд преимуществ: лекарственные вещества хорошо и равномерно распределяются в их растворахне обладают аллергизирующими свойствамиболее устойчивы к действию микроорганизмовспособствуют лучшему контактированию лекарственных веществ с пораженным участком и т. д.

Мягкие лекарственные формы готовили на общеизвестных и широко используемых в производстве основах гидрофильной природы: 5% глицерогели метилцеллюлозы (МЦ), натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ) и оксиметилцеллюлозы (ОМЦ). Антимикробную активность мягких лекарственных форм исследовали вначале в опытах in vitro методом диффузии в агар.

Установлено, что использование гидрофильных основ в виде 5% глицеро-гелей не препятствует проявлению антимикробной активности как лиганд, так и их биокомплексов в отношении изученных тест-микроорганизмов. Диаметр зоны задержки роста тест-микробов, для глицерогелей содержащих (0,5 — 1,0%) биокомплексы цинка и железа значимо превышал зону угнетения тест-штаммов в случае использования полимерных гелей, содержащих исходные лиганды.

Поскольку при разработке мягкой лекарственной формы необходимо учитывать такой важный показатель, как способность основы к высвобождению действующего вещества, то его оценку проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану. Установлено, что изучаемые основы не препятствовали высвобождению активных компонентов, о чем свидетельствовало постоянное нарастание концентрации до 89,5±0,68% изучаемых веществ к 4−5 часам эксперимента и до 90±0,95% к 5−6 часам эксперимента.

Кроме того, при лечении ран одной из главных задач является проблема устранения болевого синдрома. Довольно часто для этих целей используется тримекаин. Принимая во внимание положительные стороны данного анестетика (по силе и продолжительности анестезирующего эффекта) тримекаин в 3−5 раз превосходит новокаин, сохраняет свою активность в кислой среде, которой характеризуется гнойная рана, и, при сочетании с рядом лекарственных веществ, усиливает их активность, вводили его в состав разрабатываемой сложной мази в концентрации 3%.

Показано, что введение в состав глицерогелей тримекаина (3%) также не оказывало отрицательного действия на высвобождение активных компонентов и не снижало их антимикробную активность.

Наибольшие показатели силы (индекс Ренье 1300±5,6 усл.ед.) и продолжительности анестезии (98,15±2,17 мин) имеют место при одновременном сочетании в гелях тримекаина, производного нитроимидозола и его биокомплекса с цинком, а время наступления анестезии было во всех случаях одинаково.

Таким образом, введение тримекаина в состав многокомпонентных глицерогелей содержащих биокомплексы, обеспечивает ценные качества, необходимые в терапии гнойно-воспалительных процессов.

Учитывая то, что применяемые для лечения ран препараты должны воздействовать на все составляющие инфекционной раны мы считали целесообразным включить в их состав общепринятый активатор чрезкожного всасывания — димексид, который к тому же обладает также антимикробной и противовоспалительной активностью. Показано, что увеличение концентрации димек-сида до 15% способствует увеличению активных компонентов в диализате, что позволяет характеризовать изучаемые глицерогели как пролонгированные лекарственные формы.

Другим активным компонентом разрабатываемых глицерогелей был выбран хлоргексидин, применяемый как антисептик для инфицированных ран и ожогов, а в качестве пластификатора — глицерин. Установлено, что антимикробная активность многокомпонентных глицерогелей достоверно увеличивается при включении в их состав хлоргексидина, димексида и тримекаина по сравнению с контролем и глицерогелями, содержащими только лиганды.

В: результате проведения комплексного исследования разработаны составы и технология получения многокомпонентных полимерных лекарственных форм, способных обеспечить разнонаправленное действие в терапии местных гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек.

Учитывая активность биокомплексов вотношении &-аигеиэ и тот факт, что этот микроорганизм часто выделяется из ран исследовние эффективности применения многокомпонентных полимерных лекарственных форм для лечения раневой инфекциибыло произведено на модели полнослойной стафилококковой раны, создаваемой^крыс линии Вистар.

Применение дляшечения*экспериментальных животных глицерогелейсодержащих биокомплексы цинка и железа, позволило повысить эффективность лечения гнойных раневых процессов стафилококковой этиологии.

По данным гистологических исследований, использование разработанных многокомпонентных глицерогелей, содержащих биокомплексы, быстро купировало воспалительный процесс, оказывало стимулирующее влияние на процессы восстановления поврежденных тканей, что проявлялось в активации образования демаркационной линии очага септического воспаления, более быстром развитии грануляционной соёдинительной ткани по< сравнению сконтролем.

Введение

в состав гелей дополнительно тримекаина* хлоргексидина, димексида и глицерина усиливало их антимикробную активность и ранозажив-ляющее действие, а также позволило сократить сроки леченияс 14 суток до 1012 суток.

Таким образом, проведение исследования показали, что введение в состав глицерогелей биокомплексов цинка и железа оказывает существенное влияние на антимикробную активность глицерогелей приводя как к ее увеличению, так и к расширению спектра действия. Поскольку известно, что биокомплексы металлов с лекарственными препаратами обычно выполняют транспортную и аккумулирующую роль, а также выступают как функционирующие модели активного центра ферментных систем, то усиление активности изучаемых лиганд может быть объяснено именно присутствием данных металлов.

Эффективность многокомпонентного глицерогеля, очевидно, основана на сочетании антимикробного и антисептического вещества, местного анестетика, димексида и глицерина, оказывающих влияние на иммунную систему, регенерацию тканей и гидрофильной основы.

Синергичные и антагонистические взаимоотношения биометаллов являются важными критериями, определяющими специфическую активность биоi комплексов in vivo. Испытания новых биокомплексов на животных позволило установить не только их выраженную протективную активность, но и способность стимулировать факторы иммунологической защиты организма.

Эффективность действия координационных соединений цинка и железа с метронидазолом при экспериментальной гнойной ране оценивалась по ослаблению экссудативно-инфильтративных явлений в коже и прилегающих мышцах, активизированию формирования грануляционной ткани, ускорению очищения раны от струпа по сравнению с моделью и использованием чистого метронидазола.

• Новый методический прием коррекции нарушенного метало-лигандного гомеостаза организма при патологических состояниях, заключающийся в применении новых синтезированных координационных соединений металлов, позволит расширить область их применения в лечебных и лечебно-профилактических мероприятиях, а также подтверждает необходимость разработки комплекса тонких и аналитически значимых методов, включающих исследование среды обитания и позволяющих выявлять ранние изменения в организме.

Таким образом, завершенное на данном этапе исследование, последующие теоретические и методические обобщения, систематизации полученных новых результатов и в дальнейшем буду способствовать реализации цели — укрепления здоровья и снижения заболеваемости.