Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Нейраминидазная специфичность штаммов вирусов гриппа A и B, циркулировавших в России в эпидсезоны 2006-2010 гг

Диссертация: Нейраминидазная специфичность штаммов вирусов гриппа A и B, циркулировавших в России в эпидсезоны 2006-2010 гг
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Субстратная специфичность NA вирусов гриппа остается практически не изученной областью, что объясняется как несовершенством и трудоемкостью существующих методов, так и недоступностью субстратов для вирусной NA — сиалированных олигосахаридов, входящих в состав клеточных рецепторов для вирусов гриппа (Штыря Ю.А., 2009; Mochalova L. et al., 2005). Нейраминидаза, являясь ферментом на поверхности… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
  • РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • ГЛАВА 1. Структура и свойства нейраминидазы вируса гриппа
    • 1. 1. Строение вируса гриппа
    • 1. 2. Классификация вирусов гриппа. История основных пандемий
    • 1. 3. Нейраминидаза вируса гриппа
      • 1. 3. 1. Структура нейраминидазы
      • 1. 3. 2. Структурно-функциональные домены нейраминидазы
      • 1. 3. 3. Строение активного центра нейраминидазы
      • 1. 3. 4. Механизм действия нейраминидазы вируса гриппа
  • Реакция десиалирования
    • 1. 3. 5. Функциональная активность нейраминидазы
    • 1. 3. 6. Ферментативная активность нейраминидазы
  • Методы ее детекции
    • 1. 3. 7. Субстратная специфичность нейраминидаз вирусов гриппа
  • Методы ее детекции
    • 1. 4. Антигенные свойства и олигосахаридная специфичность нейраминидаз вирусов гриппа А
  • ГЛАВА 2. Ингибиторы нейраминидазы вирусов гриппа, А и В
    • 2. 1. Спектр специфических противогриппозных препаратов в РФ
    • 2. 2. История создания химиопрепаратов с антинейраминидазной активностью
    • 2. 3. Механизм действия ингибиторов нейраминидазы
    • 2. 4. Клинические испытания ингибиторов нейраминидазы
      • 2. 4. 1. Фармакокинетика и фармакодинамика ингибиторов нейраминидазы
      • 2. 4. 2. Переносимость и безопасность ингибиторов нейраминидазы
  • ГЛАВА 3. Противовирусная активность антинвйраминидазных химиопрепаратов
    • 3. 1. Чувствительность вирусов гриппа к ингибиторам нейраминидазы
    • 3. 2. Молекулярные механизмы возникновения резистентных к ингибиторам нейраминидазы вирусов гриппа
      • 3. 2. 1. КА-зависимая резистентность
  • Маркерные мутации МА вирусов гриппа
    • 3. 2. 2. NA-нeзaвиcимaя резистентность. Мутации НА, которые селекционируются под воздействием ингибиторов нейраминидазы
    • 3. 2. 3. Методы определения чувствительности вирусов гриппа к ингибиторам нейраминидазы
    • 3. 3. Антинейраминидазные химиопрепараты и их применение во время пандемии

Нейраминидазная специфичность штаммов вирусов гриппа A и B, циркулировавших в России в эпидсезоны 2006-2010 гг (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы.

Особенности структурной организации вирусов гриппа (наличие поверхностных белков.

— гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA), их подверженность к изменениям с формированием новых дрейф-вариантовсегментированность генома, определяющая возможность реассортации и приводящая к возникновению новых штаммов с пандемическим потенциалом), способность к преодолению межвидового барьера и инфицированию людей некоторыми подтипами вируса гриппа, А птиц и млекопитающих.

A (H5N1), A (H7N7), A (H7N2), A (H7N3), A (H9N2) и др.) определяют актуальность исследований по поиску средств и методов, позволяющих снизить ущерб, наносимый этой инфекцией (Слепушкин А.Н., 2003; Каверин Н. В., 2003). Одним из таких направлений является разработка и внедрение химиопрепаратов, проявляющих активность в отношении определенной специфической мишени в цикле вирусной репродукции.

Спектр этиотропных противогриппозных препаратов наиболее широко представлен в.

России и включает в себя ремантадин, арбидол, ингавирин и рибавирин (Прокудина E.H.,.

2003; Галегов Г. А., 2009; Hay А., 1996; Leneva I. et al., 2009; McCoy D. et al., 2010). Кроме того, основываясь на знаниях третичной структуры одного из поверхностных белков вируса гриппа — NA, были созданы препараты «нового поколения» — озельтамивир (Tamiflu™) и занамивир (Relenza™), действие которых основано на блокировании активного центра NA вирусов гриппа, А и В, что препятствует высвобождению вновь сформированных вирионов и распространению вирусов от клетки к клетке (Colman Р. et al., 1983; Calfee D. & Hayden F.,.

1998). Первые официальные сообщения о препаратах с антинейраминидазной активностью были сделаны Von Itzstein М. et.al. в 1993 г. (занамивир) и Kim C.U. в 1997 г. (озельтамивир).

Эти препараты эффективны против большинства подтипов NA, что является ключевым моментом в предупреждении развития эпидемий, вызванных новыми дрейф-вариантами вирусов гриппа, и обеспечении готовности к пандемии (Roberts N. & Govorkova Е., 2009). Их практическое применение было начато с 1999 г., при этом, озельтамивир был рекомендован не только для лечения и профилактики инфекции, вызванной сезонными вирусами гриппа и штаммами высокопатогенного вируса гриппа птиц A (H5N1), но и для создания государственных стоковых запасов на случай возникновения пандемии (Hayden F., 2002;

Moscona А., 2005). С появлением с 2007 г. резистентных к озельтамивиру штаммов A (H1N1) в популяции вирусов гриппа эксперты ВОЗ включили занамивир в список рекомендаций.

Планов подготовки к пандемии (Roberts N. & Govorkova Е., 2009).

В связи с началом широкого практического применения антинейраминидазных препаратов в 1999 г. была создана Международная Сеть по Надзору за чувствительностью к ингибиторам NA (NISN) для информирования экспертов ВОЗ о частоте побочных эффектов, терапевтической и профилактической эффективности, чувствительности циркулирующих 7 штаммов и факторов, определяющих риск формирования резистентных мутантов. До 2007 г. многие исследователи отмечали редкие случаи детекции резистентных к антинеГфаминидазным препаратам вирусов гриппа (менее 1%), причем чаще всего такие штаммы выделяли от пациентов, принимавших курс лечения или профилактики озельтамивиром (WHO, 2008). В 2001 г. авторы ряда исследований выявляли около 1% таких мутантов у взрослых и 5% - у детей, а в 2004;2005 гт. в Японии — у 18% детей, инфицированных вирусами гриппа, А и прошедших курс лечения озельтамивиром (McKimm-Breschkin J. et al., 2003; Kiso M et al., 2004). В ноябре 2007 г. норвежскими учеными, а несколько позже и специалистами других стран мира было отмечено появление и широкое распространение штаммов вируса гриппа A (H1N1), несущих специфическую мутацию H274Y в белке NA, ответственную за резистентность к озельтамивиру (Moscona А., 2005; WHO, 2007).

В России озельтамивир разрешен с 2001 г.: для лечения гриппа у людей с 1 года и для профилактики — с 12 лет, а с 2005 г. расширены его показания по применению для лечения и профилактики гриппа с 1 года. Занамивир рекомендован для лечения и профилактики гриппозной инфекции с 5 лет (2007 г.). К началу выполнения настоящей работы, совместно с коллегами Отдела гриппа Центров по контролю за заболеваемостью и профилактике (CDC&P), Атланта, США были проведены исследования! чувствительности циркулировавших в РФ 75 эпидемических штаммов вирусов гриппа, А и В (1990;2007 гг.) к антинейраминидазным препаратам, результаты которых не выявили среди них резистентных мутантов, что отражало мировые тенденции в целом (Shevchenko Е. et al., 2009). Однако, учитывая, вышесказанное, проведение расширенных исследований чувствительности штаммов к ингибиторам NA с включением результатов в надзор за циркуляцией вирусов гриппа на регулярной основе было затруднено отсутствием необходимого оборудования и субстанций препаратов для постановки классических вирусологических методов оценки подавления нейраминидазной активности — флуоресцентного и хемилюминесцентного, а также молекулярно-генетических методов (RT-PCR/RFLP, ОТ-ПЦР-РВ), детектирующих маркерные мутации, ответственные за устойчивость к препаратам (Mungall В. et al., 2003; Lizheng G. et al., 2009).

Субстратная специфичность NA вирусов гриппа остается практически не изученной областью, что объясняется как несовершенством и трудоемкостью существующих методов, так и недоступностью субстратов для вирусной NA — сиалированных олигосахаридов, входящих в состав клеточных рецепторов для вирусов гриппа (Штыря Ю.А., 2009; Mochalova L. et al., 2005). Нейраминидаза, являясь ферментом на поверхности вируса гриппа, выполняет рецептор-разрушаюшие функции, то есть отщепляет а2−3 или а2−6 связанные сиаловые кислоты от сиалилолигосахаридов, выстилающих поверхность клетки-хозяина (Matrosovich М. et al., 2004). Именно поэтому вторым направлением исследований стало изучение субстратной специфичности NA. Без таких знаний невозможно определить роль отдельных участков полипептидной цепи в функционировании NA, отследить возникновение и распространение новых штаммов вирусов гриппа, в частности вирусов, резистентных к ингибиторам NA, а также понять механизмы устойчивости вирусов гриппа к лекарственным средствам.

Все вышеизложенное послужило основанием для проведения исследований, представленных в настоящей работе.

Цель и задачи исследования

.

Цель настоящей работы заключалась в определении специфичности нейраминидаз штаммов вирусов гриппа, А и В к аналогам природных субстратов. Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Применить классический флуоресцентный метод для определения значений минимальной ингибирующей концентрации (IC50) озельтамивира карбоксилата и занамивира в отношении штаммов вирусов гриппа, А и В, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в РФ.

2. Оценить специфичность клеточного иммуноферментного анализа (ИФА) и возможность его применения в мониторинге противовирусной активности ингибиторов NA.

3. Провести сравнительный анализ различных молекулярно-генетических методов для возможного их применения в целях изучения чувствительности вирусов гриппа к антинейраминидазным химиопрепаратам на территории РФ.

4. Изучить чувствительность циркулировавших в РФ в период 2006;2010 гг. штаммов вирусов гриппа, А и В к озельтамивиру и занамивиру.

5. Оценить риск формирования резистентных к озельтамивиру штаммов вирусов гриппа на фоне приема препарата пациентами в период заболевания.

6. Исследовать и сравнить олигосахаридную специфичность NA эпидемических штаммов вируса гриппа A (IIINI), чувствительных и устойчивых к озельтамивиру, а также пандемических штаммов вируса гриппа A (HlNl)v, изолированных от инфицированных людей с различным исходом заболевания.

Все исследования соответствуют плановой научной тематике ФГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России: тема № 8 «Фундаментальные исследования-лекарственных средств для лечения распространенных и социально значимых вирусных инфекций человека» и тема № 9 «Новые и возвращающиеся вирусные инфекции в системе биобезопастности государства».

Научная новизна исследования.

1. Впервые в России были отработаны и применены различные вирусологические (флуоресцентный метод, клеточный ИФА) и молекулярно-генетические (ЯТ-РСК/КРЬР, ОТ-ПЦР-РВ) методы для изучения чувствительности вирусов гриппа к антинейраминидазным препаратам.

2. Установлен факт появления в РФ в конце 2007 г. резистентных к озельтамивиру штаммов в популяции вируса гриппа А (НШ1) и последующий рост их числа, достигший 92,0% в сезоне 2008;2009 гг. Циркуляция резистентных мутантов не была связана с приемом этого препарата.

3. Показано, что популяция циркулирующих штаммов вирусов гриппа гетерогенна по чувствительности к антинейраминидазным препаратам: эпидемические штаммы вируса гриппа А (НШ1) — резистентны к озельтамивиру и чувствительны к занамивируштаммы вирусов гриппа А (НЗШ), В и А (НШ1)у —чувствительны к обоим препаратам.

4. Впервые в России проведено изучение риска формирования резистентных к озельтамивиру штаммов вирусов гриппа, А и В при его приеме пациентами в период заболевания. В клинических наблюдениях 2007;2008 гг. и 2009;2010 гг. выявлено формирование устойчивых к озельтамивиру штаммов сезонного вируса гриппа А (НШ1) — на 3-ий день лечения и пандемического вируса гриппа А (НШ1)у — на 5-ый день лечения препаратом.

5. Показано, что профиль олигосахаридной специфичности ИА пандемического штамма вируса гриппа АЛ1У-Мозсоу/01/09 (НШ1)зу1 имеет особенности, свойственные для вирусов, выделенных от свиней, птиц и человека. В тоже время профиль. субстратной специфичности ИА вируса гриппа А/ПУ-Мо8соу/03/09 (НШ1)зу1 характерен для вирусов, выделенных от свиней.

6. Установлено, что профиль субстратной специфичности ЫА пандемического штамма вируса гриппа АШУ-ОгепЬгщ*/93/09 (Н1Ш)зу1, изолированного от пациента с летальным исходом, демонстрирует двойственную аффинность к а2−3 и а2−6 сиалозидам. Способность ИА этого вируса расщеплять фукозилированные (8Ьех) и линейные (З'БЬМ) структуры субстратов с одинаковой эффективностью характерна для высокопатогенных вирусов гриппа А.

Научно-практическая значимость исследования Вирусы гриппа, А и В могут проявлять разные уровни чувствительности к антинейраминидазным препаратам в клетках культуры ткани МБСК, и этот факт зависит от различной эффективности связывания вируса с клеточными сиаловыми рецепторами. Вышесказанное определяет необходимость комплексного подхода для подтверждения случаев резистентности к химиопрепаратам, что также будет способствовать оптимизации методов для изучения чувствительности вирусов гриппа к ингибиторам NA в РФ.

Апробация четырех новых тест-систем на основе ОТ-ПЦР позволила усилить надзор и определить их как наиболее эффективные для мониторинга чувствительности штаммов вирусов гриппа к ингибиторам КА. Три отечественные ОТ-ПЦР-РВ тест-системы для детекции маркерных мутаций устойчивости к озельтамивиру (Шз274Туг и ГПз275Туг) в белке КА вирусов гриппа А (НШ1) и А (НШ1)у соответственно были разработаны совместно с сотрудниками лаборатории экологии вирусов НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского и ЗАО «НПФ ДНК-Технология». В настоящее время данные тест-системы находятся на стадии сертификации и лицензирования и используются в работе Центра экологии и эпидемиологии гриппа (ЦЭЭГ) при ФГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России.

В связи с увеличением числа озельтамивир-резистентных штаммов в популяции вируса гриппа А (НШ1), а также с появлением устойчивых к озельтамивиру пандемических штаммов А (НШ1)у существует необходимость в усилении надзора за чувствительностью вирусов гриппа, А и В к обоим антинейраминидазным препаратам и разработке рекомендаций по целесообразности их применения для лечения и профилактики гриппа в РФ. Следует отметить, что все исследованные вирусы гриппа, А и В, включая пандемические штаммы А (НШ1)у, оставались чувствительными к занамивиру.

В рамках проведенных исследований по изучению профилей субстратной специфичности ЫА вирусов гриппа было выявлено, что замена Шя274Туг в активном центре МА сезонного вируса гриппа А (НШ1), обеспечивающая устойчивость к озельтамивиру, не приводит к изменению профиля кинетической субстратной специфичности ЫА, и поэтому «обоснование» этой мутации, вероятно, следует искать не в изменении «субстрат-узнающих» свойств мутантных вирусов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Детекцию специфических маркеров устойчивости к ингибиторам ЫА можно осуществлять с помощью методов на основе ОТ-ПЦР, которые должны быть внедрены в надзор за чувствительностью циркулирующих вирусов гриппа к этим препаратам в РФ на регулярной основе.

2. Популяция современных штаммов вирусов гриппа, А и В в РФ гетерогенна по чувствительности к ингибиторам МА: эпидемические штаммы вируса гриппа А (Н1Ш) в подавляющем большинстве резистентны к озельтамивиру, но чувствительны к занамивируштаммы вирусов гриппа А (НЗШ), В и А (НШ1)у чувствительны к обоим антинейраминидазным препаратам.

3. Штаммы вирусов гриппа A (H1N1) и A (HlNl)v наиболее высоко подвержены риску формирования резистентности к озельтамивиру. Одним из факторов риска является курс лечения этим препаратом в период заболевания.

4. Мутация His274Tyr в активном центре NA сезонного вируса гриппа A (H1N1), обеспечивающая устойчивость к озельтамивиру, не приводит к изменению профиля кинетической субстратной специфичности NA.

5. Профиль олигосахаридной специфичности NA пандемического штамма вируса гриппа A/iiV-Moscow/01/09 (HlNl)swl имеет особенности, свойственные для вирусов, выделенных от свиней, птиц и человека. Профиль субстратной специфичности NA вируса гриппа A/nV-Moscow/03/09 (HlNl)swl характерен для вирусов, выделенных от свиней.

6. Профиль субстратной специфичности NA пандемического штамма вируса гриппа A/nV-Orenburg/93/09 (HlNl)swl, изолированного от пациента с летальным исходом, демонстрирует одинаковое сродство к а2−3 и а2−6 сиалозидам.

Апробация результатов исследования.

Результаты работы были представлены на международных симпозиумах, съездах, конгрессах и конференциях: IX Съезд Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 26−27 апреля 2007; VII Конгресс детских инфекционистов России «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей», Москва, 3−5 декабря 2008; I Ежегодная Конференция молодых ученых, Москва, НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского, апрель 2008; XVI Интернациональная Конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2009», Москва, 14−18 апреля 2009; II Ежегодная Конференция молодых ученых, Москва, НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского, 23 апреля 2009; BIT’s 7th Annual Congress of International Drug Discovery Science and Technology 2009 (IDDST-2009) «Milestones of Innovative Therapeutics», Shanghai, China, 22−25 October 2009; Всероссийская Научная Конференция «Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций», Санкт-Петербург, 19−20 ноября 2009; VIII Конгресс детских инфекционистов России «Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей», Москва, 2009; XVII Международная Конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2010», Москва, 12−15 апреля 2010; III Ежегодная Конференция молодых ученых, Москва, НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского, 20 апреля 2010; International Conference «Options for the control influenza VII», Hong Kong SAR, China, 3−7 September 2010.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе б — в реферируемых журналах, материалах докладов на Международных и Всероссийских конгрессах, съездах, симпозиумах, конференциях и проблемных комиссиях, а также 3 удостоверения (депонента) в ГКВ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского на два сезонных штамма вируса гриппа A (H1N1) и один пандемический штамм вируса гриппа A (HlNl)v с различной чувствительностью к озельтамивиру. Помимо вышеперечисленного является соавтором депонирования в ГКВ НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского 81 штамма пандемического вируса гриппа A (HlNl)v.

Соавторами научных трудов являются: Львов Д. К., Бурцева Е. И., Шевченко Е. С., Альховский С. В., Прилипов А. Г., Колобухина Л. В., Меркулова Л. Н., Оскерко Т. А., Ротанов М. (НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского, Москва), Абрамов Д. Д. (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Москва), Ленева И. А. (ЦХЛС-ВНИХФИ, Москва). Автор глубоко благодарен и признателен всем своим соавторам.

По материалам диссертации подана заявка на изобретение № 2 009 129 374/10 «Штамм вируса гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (HlNl)swl для разработки средств и методов биологической защиты», дата подачи 30.07.2009 г. Решение о выдаче патента РФ на изобретение получено 15.09.2010 г.

Структура и объем диссертации

.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 37 работ отечественных и 191 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста и включает 17 таблиц, 2 схемы и 34 рисунка.

выводы.

1. Результаты проведенных исследований выявили различную специфичность методов оценки подавления нейраминидазной активности вирусов гриппа, возможность детекции маркерных мутаций методами на основе ОТ-ПЦР, а также гетерогенность популяции штаммов вирусов гриппа по чувствительности к аналогам природных субстратов.

2. Флуоресцентным методом определены значения минимальной ингибирующей концентрации (1С5о) озельтамивира карбоксилата и занамивира, которые составили 2,5−11,0 нМ 0,75−10,0 нМ соответственно, для российских штаммов вирусов гриппа, А и В, чувствительных к ингибиторам нейраминидазы (2008;2009 гг.).

3. Показаны различия по активности подавления репродукции штаммов вирусов гриппа, А и В субстанциями озельтамивира карбоксилата (ICso< 0,8−5,2 мкМ) и занамивира (IC50 < 0,3−8,6 мкМ) в клетках культуры ткани MDCK. У 7 штаммов вируса гриппа A (H3N2) с пониженной чувствительностью к занамивиру, выявленной клеточным ИФА, маркерных мутаций устойчивости к этому препарату обнаружено не было, что указывает на ограниченность широкого применения этого метода.

4. Установлено, что изученные ОТ-ПЦР тест-системы (RT-PCR/RFLP, 1 — на основе TaqMan probes и 2 — на основе Kissing probes) являются высокоспецифичными для детекции маркерных мутаций устойчивости к озельтамивиру в гене NA штаммов A (H1N1) и A (HlNl)v и могут быть использованы для мониторинга чувствительности вирусов гриппа к этому препарату.

5. Выявлен факт появления в РФ в конце 2007 г. резистентных к озельтамивиру штаммов в популяции вируса гриппа A (H1N1) и последующий рост их числа, достигший 92,0% в сезоне 2008;2009 гг., при этом циркуляция резистентных мутантов не была связана с приемом этого препарата. Показано, что все исследованные штаммы вирусов гриппа A (H3N2), В и A (HlNl)v оказались чувствительными к озельтамивиру и занамивиру.

6. Установлено отсутствие у штаммов вирусов гриппа A (H1N1), A (H3N2) и A (HlNl)v перекрестной резистентности к этиотропным химиопрепаратам с разным механизмом действия.

7. Впервые в РФ выделены резистентные к озельтамивиру штаммы вирусов гриппа, А (А/Москва/118/2008 (H1N1) и A/IIV-Moscow/17/2010 (HlNl)swl) от пациентов на фоне приема препарата (3-ий и 5-ый день соответственно), что определяет актуальность применения комбинированных схем лечения противовирусными лекарственными средствами.

8. Показано, что замена № 5274Туг в активном центре КА эпидемического штамма вируса гриппа А/Москва/118/2008 (НШ1), обеспечивающая устойчивость к озельтамивиру, не привела к изменению профиля кинетической субстратной специфичности ИА, который был сравним с профилем чувствительного к озельтамивиру штамма вируса гриппа А/Москва/37/2008 (НШ1).

9. Определено, что профиль олигосахаридной специфичности ЫА пандемического штамма вируса гриппа АЛГУ-Мозсогу/01/09 (HlNl)swl имеет особенности, свойственные для вирусов, выделенных от свиней, птиц и человека. Профиль субстратной специфичности КА вируса гриппа А/ПУ-Мо8соу/03/09 (Н1Ш)зу1 характерен для вирусов, выделенных от свиней.

10. Установлено, что профиль субстратной специфичности КА пандемического штамма вируса гриппа А/ПУ-ОгепЬиг93/09 (НШ1)зу1, изолированного от пациента с летальным исходом, демонстрирует двойственную аффинность к ос2−3 и а2−6 сиалозидам. Способность ЫА этого вируса расщеплять фукозилированные (БЬе*) и линейные (З'БЬК) структуры субстратов с одинаковой эффективностью характерна для высокопатогенных вирусов гриппа А.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Высокая изменчивость поверхностных белков вируса гриппа приводит к тому, что в человеческой популяции циркулируют различные штаммы при постоянном появлении новых. В начале пандемии, до тех пор, пока новая вакцина к новому вирусу станет доступной для широкого использования в клинической практике, этиотропные специфические противогриппозные химиопрепараты остаются единственным средством для эффективной борьбы с распространением вируса, а в случае заболевания — единственным средством для лечения инфекции. К настоящему времени в мировой клинической практике для лечения и профилактики гриппа широко применяются ингибиторы нейраминидазы вирусов гриппа, А и В: озельтамивир (Tamiflu™) и занамивир (Relenza™).

В условиях отсутствия возможности проведения клинических испытаний в отношении каждого из возникающих штаммов вирусов гриппа только экспериментальное изучение активности специфического противогриппозного препарата может дать ответ о его эффективности при гриппозной инфекции. При этом первые рекомендации для лечения и профилактики гриппа, вызванного новым вирусом гриппа A (HlNl)v, были даны на основе экспериментального изучения его чувствительности к химиопрепаратам (WHO, 2009).

В заключение необходимо еще раз отметить важное значение проведения расширенного и систематического мониторинга чувствительности циркулирующих вирусов гриппа, А и В к химиопрепаратам со специфической активностью и субстратной специфичности NA вновь возникающих вирусов гриппа не только на региональном, но и на международном уровнях. Наряду с традиционными подходами особую актуальность приобретают новые методы исследования, которые позволяют установить причину формирования мутантов, упростить процедуру проведения такого мониторинга, унифицировать оценку полученных результатов и разработать единые критерии резистентности. Довольно относительные результаты, доказывающие важность комплексного методологического подхода в диагностике-чувствительности вирусов гриппа, А и В к антинейраминидазным химиопрепаратам, были получены в клеточном ИФА. В современных лабораториях выявление резистентных к ингибиторам NA вирусов гриппа проводится с помощью флуоресцентного или хемилюминесцентного методов, а также молекулярно-генетическими методами на основе ПЦР и секвенированием гена NA на предмет обнаружения известных маркерных мутаций.

В результате проведенных в настоящей работе исследований в эпидсезоны 2007;2008 гг. и 2008;2009 гг. впервые был установлен факт циркуляции и распространения (49%—>92%) на территории РФ эпидемических штаммов вируса гриппа A (H1N1), несущих мутацию, ответственную за резистентность к озельтамивиру, со 100% корреляцией данных, полученных разными молекулярно-генетическими методами на основе ПЦР. В популяции естественно-циркулирующих пандемических вирусов гриппа A (HlNl)v не было выявлено штаммов, устойчивых к озельтамивиру. В тоже время в клинических исследованиях 2 007 149.

2008 гг. и 2009;2010 гг. эпидсезонов на фоне проводимого курса лечения озельтамивиром среди пациентов, инфицированных эпидемическими и пандемическими штаммами вирусов гриппа, было выявлено формирование резистентных вариантов на 3-ий и 5-ый дни лечения соответственно. Все изученные в период 2006;2010 гг. эпидемические штаммы вирусов гриппа А (НЗШ) и В оказались чувствительными к обоим ингибиторам ЫА. Также в настоящем исследовании не было определено ни одного штамма с перекрестной резистентностью, который был бы устойчив сразу ко всем противогриппозным химиопрепаратам со специфической активностью (ремантадин, арбидол и ингибиторы ЫА). Увеличение числа резистентных к озельтамивиру штаммов вирусов гриппа, А в связи с его широким применением диктует необходимость своевременной замены лекарственных средств на другие, эффективные в отношении таких штаммов.

Данные по субстратной специфичности ЫА сезонных и пандемических штаммов вирусов гриппа А, полученные в ходе выполнения настоящей работы, позволяют сделать некоторые выводы относительно особенностей вирусов, вызвавших подъемы заболеваемости последних лет. Найденные закономерности для ИА этих вирусов, в целом, согласуются с «рецептор-узнающими» свойствами другого белка вируса гриппа — гемагглютинина, что еще раз подтверждает синхронность эволюционных изменений в ЫА и НА вирусов гриппа, А (ватЬагуап А. а1., 2005; МосЬа1оуа Ь. й а1., 2007; Львов Д. К. с соавт., 2010). Одновременное исследование олигосахаридной специфичности ИА и НА современных циркулирующих вирусов гриппа поможет объяснить причины изменений, происходящих при переходе вируса гриппа через межвидовой барьер, и предсказать субстратную специфичность очередного возможного штамма пандемического вируса гриппа А. Именно такие знания открывают возможность прогнозировать новую пандемию гриппа задолго до ее начала. В тоже время практическая значимость таких исследований очевидна, поскольку современное поколение лекарственных средств, рекомендованных для лечения гриппа — это ингибиторы ИА, и резкое изменение субстратной специфичности может привести к «уходу» вируса гриппа из-под контроля этими лекарствами.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Т.А. Рекомендации ВОЗ и международных форумов по тактике борьбы с гриппом в связи с возможной пандемией.// Бюллетень «Вакцинация». 3(27) — 1−5 (2003).
  2. Беляев A. JL, Бурцева Е. И., Слепушкин А. Н. и др. Арбидол новое средство для профилактики гриппа и ОРЗ у детей.//Вестник РАМН. 8: 34−37 (1996).
  3. Е.И., Шевченко Е. С., Ленева И. А. и др. Чувствительность к ремантадину и арбидолу вирусов гриппа, вызвавших эпидемические подъемы заболеваемости в России в сезоне 2004−2005 гг. ПВопр.вирусол. 2: 24−29 (2007).
  4. ВОЗ. Глобальный план ВОЗ по подготовке к борьбе с гриппом. 2005 http://www. who, int/csr/disease/avian influenza/Preparedness plan R US. pdf
  5. Г. А., Андронова В. Л., Леонтьева Н. А., Львов Н. Д., Петрова И. Г. Этиотропная лекарственная терапия вирусных инфекций.//Вопр.вирусол. 3: 35−40 (2004).
  6. Г. А., Андронова В. Л., Небольсин В. Е. Изучение противовирусной активности Ингавирина в отношении сезонного вируса гриппа A(H1N1) в культуре клеток MDCK.// АНТИБИОТИКИ И ХИМИОТЕРАПИЯ. 54: 9 10 (2009).
  7. С.Я. Классификация вирусов.// В кн.: Общая и частная вирусология. М: Медицина:26−60 (1982).
  8. Ю.З. Вакцины и химиопрепараты для профилактики гриппа.// Вопр.вирусол. 1: 4−10 (2007).
  9. В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. // Москва: Высшая школа.: 479 (2002).
  10. А.Л., Коровина Н. А., Бурцева Е. И. и др. Совпеменные препараты, содержащие сверхмалые дозы действующего вещества, и традиционные гомеопатические средства в профилактике и лечении ОРВИ и гриппа у детей.//Педиатрия. 88(1): 95−100 (2009).
  11. Н.В., Смирнов Ю. А. Межвидовая трансмиссия вирусов гриппа, А и проблема пандемий.// Вопр. вирусол. 3: 4−10 (2003).
  12. И.А., Ребриков Д. В. Методы детекции однонуклеотидных полиморфизмов: аллель-специфичная ПЦР и гибридизация с олигонуклеотидной пробой J/Генетика. 42(1): 22−32 (2006).
  13. И.А., Глушков Р. Г., Гуськова Т. А. Лекарственные средства для химиотерапии и химиопрофилактики гриппа: особенности механизма действия, эффективность и безопасность (обзор)ЛХФЖ. 38(11): 8−14 (2004).
  14. И. А., Федякина И. Т., Еропкин М. Ю и др. Изучение противовирусной активности отечественных противогриппозных химиопрепаратов в культуре клеток и на модели животных.// Вопр. вирусол. 3: 19−27 (2010).
  15. Д. К., Бурцева Е. И., Прилипов А. Г. и др. Возможная связь летальной пневмонии с мутациями пандемического вируса гриппа А/ H1N1 swl в рецепторсвязывающем сайте субъединицы НА1 гемагглютинина.// Вопр. вирусол. 4: 4−9 (2010).
  16. Д. К., Слепушкин А. Н., Ямникова С. С., Бурцева Е. И. Грипп остается непредсказуемой инфекцией.// Вопр. вирусол. 3: 141—144 (1998).
  17. Львов Д-К., Ямникова С. С., Забережный А. Д., Гребенникова Т. В. Межпопуляционные взаимодействия в системе вирусы гриппа А—животные— человек Л Вопр. вирусол. 4: 4−11 (2005).
  18. О.В., Закстельская Л. Я. Методические рекомендации по применению современных методов исследований в общей и медицинской вирусологии.//М: (1984).
  19. О.В., Закстельская Л. Я., Иванова В. Т. и др. Определение специфичности нейраминидазы вирусов гриппа, А и В с помощью модифицированного лектин-теста.// Вопр. вирусол. 6: 663−668 (1983).
  20. О.В. Сравнительные исследования естественной изменчивости нейраминидаз вирусов гриппа, А и В.//Канд. диссертация. М: (1988).
  21. Методические указания к работе опорных баз Всесоюзного центра по гриппу и ОРЗ.// 986: 40−42.
  22. Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа.// Методические указания МУ 3.3.2.1758−03. (2005).
  23. Е. Н., Семенова Н. П., Чумаков В. M и др. Различия в олигомеризации нуклеокапсидного белка эпидемических вирусов гриппа человека A (H1N1), A (H3N2) и В.// Вопр. вирусол. 3: 27−31 (2003).
  24. И.А., Ильюшина Н. А., Шилов А. А. и др. Функциональное взаимодействие гликопротеинов вируса гриппа. II Мол. Биол. 37: 34−40 (2003).
  25. И.В., Хаитов М. Р., Трофимов Д. Ю. Разработка методов для проведения широкомасштабных исследований полиморфизма генов, регулирующих различные компоненты иммунного ответа.// Физиология и патология иммунной системы. 4: 21−26 (2009).
  26. А. Н. Всемирная программа ВОЗ по эпидемиологическому надзору и борьбе с гриппом (Global Agenda on Influenza Surveillance and Control) // Bonp. вирусол. 1: 46 (2003).
  27. A.H. Грипп и другие ОРВИ.// под ред. В. И Покровского, Г. Г. Онищенко, Б. П. Черкасского Эволюция инфекционных болезней в России в XXвеке: 184−214 (2003).
  28. .П., Руднева И. А. Изучение изменчивости белков вируса гриппа А. ПВопр.вирусол. 4: 471−477 (1981).
  29. И.Л. Грипп и острые респираторные заболевания приоритетная социально-экономическая проблема здравоохранения.// В сб. Вакцинопрофилактика гриппа: 10−16(1998).
  30. Ю.А. Изучение олигосахаридной специфичности нейраминидазы вируса гриппа.//Канд. диссертация. М: (2009).
  31. Ю.А., Мочалова Л. В., Бовин Н. В. Нейраминидаза вируса гриппа: структура и функция. // Acta nature. 2: 28−35 (2009).
  32. С.Б., Миненко А. Н., Прадед М. Н. и др. Диагностика гриппа: новый вариант A/H1N1 в России.//Эиндел*. и инфекц. болезни. 5: 56−62 (2009).
  33. Abed Y., Goyette N., Boivin G. A reverse genetics study of resistance to neuraminidase inhibitors in an influenza A/H1N1 virus. И Antivir. Ther. 9: 577−581 (2004).
  34. Aymard-Henry M., Coleman M.T., Dowdle W.R. et al. Influenzavirus neuraminidase and neuraminidase-inhibition test procedures. И Bull World Health Organ. 48(2): 199−202 (1973).
  35. Assay Guidance Manual. http://www/ncgc.nih.gov/guidance/section2.html.
  36. Babu Y.S., Chad P., Bantia S. et al. BCX-1812 (RWJ-270 201): discovery of a novel highly potent, orally active, and selective influenza neuraminidase inhibitor through structure-based drug design. II J. Med. Chem. 43: 3482−3486 (2000).
  37. Baigent S.J., Bethell R.C., and McCauley J.W. Genetic analysis reveals that both hemagglutinin and neuraminidase determine the sensitivity of naturally occurng avian influenza viruses to zanamivir in vitro. // Virol. 263: 323−338 (1999).
  38. Barman S., Adhikary L., Chakrabarti A.K. et al. Role of transmembrane domain and cytoplasmic tail amino acid sequences of influenza A virus neuraminidase in raft association and virus budding. II J. Virol. 78: 5258−5269 (2004).
  39. Barman S., Adhikary L., Chakrabarti A.K. et al. Role of transmembrane domain and cytoplasmic tail amino acid sequences of influenza A virus neuraminidase in raft association and virus budding. II J. Virol. 78: 5258−5269 (2004).
  40. Barman S., and Nayak D.P. Analysis of the transmembrane domain of influenza virus neuraminidase, a type II transmembrane glycoprotein, for apical sorting and raft association.// J. Virol. 74: 6538−6545 (2000).
  41. Baum L.G. and Paulson J.C. The N2 neuraminidase of human influenza virus has acquired a substrate specificity complementary to the hemagglutinin receptor specificity. // Virol. 180: 10−15 (1991).
  42. Berezin I.V., Martinek K. Basics of physical chemistry of enzymatic catalysis, High School, Moscow (1977).
  43. Blick T.J., Sahasrabudhe A., McDonald M. et al. The interaction of hemagglutinin and neuraminidase mutations in influenza virus in resistance to 4-guanidino-Neu5Ac2en. // J. Virol. 246: 95−103 (1998).
  44. Blok J. and Air G.M. Block deletions in the neuraminidase genes from some influenza A viruses of the N1 subtype. // Virol. 118: 229−234 (1982).
  45. Boom R, Sol CJ, Schuurman T, et al. Human cytomegalovirus DNA in plasma and serum specimens of renal transplant recipients is highly fragmented.// J Clin Microbiol. 40(11): 4105−13 (2002).
  46. Bossart-Whitaker P., Carson M., Babu Y.S. et al. Three-dimensional structure of influenza A N9 neuraminidase and its complex with the inhibitor 2-deoxy-2,3-dehydro-N-acetyl neuraminic acid. II J. Mol. Biol. 232: 1069−1083 (1993).
  47. Branden C. and Tooze J. Beta structures. In Introduction to protein structure.// Corland Publishing, New York: 72 (1998).
  48. Buxton R.C., Edwards B., Juo R.R. et al. Development of a sensitive chemiluminescent neuraminidase assay for the determination of influenza virus susceptibility to zanamivir. // Anal. Biochem. 280: 291−300 (2000).
  49. Calfee D.P., Hayden F.G. New approaches to influenza chemotherapy. // Drugs. 56(4): 537 553 (1998).
  50. Cass L.M., Brown J., Pickford M. et al. Pharmacoscintigraphic evaluation of lung deposition of inhaled zanamivir in healthy volunteers. // Clin. Pharmacok. 36(1): 21−31 (1999).
  51. CDC. FluView. 2008−2009 Influenza Season Week 12 ending March 28, 2009. // httv://www.cdc.gov/flu/weeklv/weeklvarchives2008−2009/weeklvl2.html (2009).
  52. Cheam A.L., Barr I.G., Hampson A.W. et al. In vitro generation and characterisation of an influenza B variant with reduced sensitivity to neuraminidase inhibitors. // Antiviral Res. 63: 177— 81 (2004).
  53. Choppin P.W., Schild A. The role of viral glycoproteine in adsorption, penetration and pathogenicity of viruses.// Rev.Infect.Diseases. 2(1): 40−61 (1980).
  54. Collins P.J., Haire L.F., Lin Yi Pu et al. Crystal structures of oseltamivir-resistant influenza virus neuraminidase mutants. // Nature 453: 1258 1262 (2008).
  55. Colman P.M. NA enzyme and antigen. // In The influenza viruses (R. M. Krug, ed.). Plenum Publishing Corporation, New York: 175−218 (1989).
  56. Colman P.M., Smith B.J. The trypanosomal trans-sialidase: two catalytic, functions associated with one catalytic site. // Structure. 10: 1466−1468 (2002).
  57. Colman P.M., Varghese J.N., Laver W.C. Structure of the catalytic and antigenic sites in influenza virus neuraminidase II Nature. 303: 41−44 (1983).
  58. Copeland R.A. Enzymes: A practical introduction to structure, mechanism, and data analysis, Wiley-VCH, Inc., New York, Chichester, Weinheim, Brisbane, Singapore, Toronto 257 258 (2000).
  59. Couceiro J.N.S.S. and Baum L.J. Characterization of the hemagglutinin receptor specificity and neuraminidase substrate specificity of clinical isolates of human influenza A viruses. // Mem. Inst. Oswaldo Cruz Rio de Janeiro 89: 587−591 (1994).
  60. Dapat C., Saito R., Kyaw Y. et al. Epidemiology of human influenza A and B viruses in Myanmar from 2005 to 2007. II Intervirology. 52: 310−20 (2009).
  61. Dapat C., Suzuki Y., Saito R. et al. Rare influenza A (H3N2) variants with reduced sensitivity to antiviral drugs.// Emerg. Infect. Dis. 16(3): 493−6 (2010).
  62. Davies H.W., Appleyard G., Cunnighan P. and Pereira M.S. The use of continuous cell line for the isolation of influenza virus.// Bull. WHO. 56: 1991−1993 (1978).
  63. Deyde V. M., Sheu T. G., Trujillo A. A. et al. Detection of molecular markers of drug resistance in 2009 pandemic influenza A (H1N1) viruses by using pyrosequencing.// Antimicrob. Agents Chemother. 54: 1102−1110 (2009).
  64. Dutkowski R. Oseltamivir in seasonal influenza: cumulative experience in low- and high-risk patients. // J. Antimicrob. Chemother. 65(2): 11−24(2010).
  65. Eisen M.B., Sabesan S., Skehel J.J. et al. Binding of the influenza A virus to cell-surface receptors: structures of five hemagglutinin-sialyloligosacharide complexes determined by X-ray crystallography. // J. Virol. 232: 19−31 (1997).
  66. Eschenfelder V. and Brossmer R. 5-Bromo-indol-3-yl 5-acetamido-3,5-dideoxy-a-D-glycero-D-galactononulopyranosidonic acid, a novel chromogenic substrate for the staining of sialidase activity. // Glycoconjugate J. 4: 171−178 (1987).
  67. Fouchier R.A.M., Munster V. J., Wallensten A. et al. Characterization of a novel influenza A virus hemagglutinin subtype (H16) obtained from black-headed gulls. // J. Virol. 79: 2814−2822 (2005).
  68. Freund B., Gravenstein S., Elliot M. et al. Zanamivir a review of clinical safety.// Drug Suf. 21: 267−281 (1999).
  69. Fritz R.S., Hayden F.G., Calfee D.P. et al. Nasal cytokine and chemokine responses in experimental influenza A virus infection: results of a placebo-controlled trial of intravenous zanamivir treatment. IIJ Infect Dis. 180(3): 586−93 (1999).
  70. Gambaryan A.S., Matrosovich M.N. A solid-phase enzyme-linked assay for influenza virus receptor-binding activity. 11 Journal of Virological Methods. 39: 111—123 (1992).
  71. Gambaryan A, Yamnikova S, Lvov D. et al. Receptor specificity of influenza viruses from birds and mammals: new data on involvement of the inner fragments of the carbohydrate chain. // Virology. 334(2): 276−83 (2005).
  72. Govorkova E.A., Ilyushina N.A., McClaren J.L. et al. Susceptibility of highly pathogenic H5N1 influenza viruses to the neuraminidase inhibitor oseltamivir differs in vitro and in a mouse model. // Antimicrob. Agents Chemother. 53(7): 3088−96 (2009).
  73. Govorkova E.A., Leneva I.A., Goloubeva O.G. et al. Comparison of efficacies of RWJ-270 201, zanamivir, and oseltamivir against H5N1, H9N2, and other avian influenza viruses. // Antimicrob Agents Chemother. 45: 2723−2732 (2001).
  74. Gubareva L.V. Molecular mechanisms of influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors.// Virus Res. 103(1−2): 199−203 (2004).
  75. Gubareva L.V., Bethell R.C., Hart GJ. et al. Characterization of mutants of influenza A virus selected with the neuraminidase inhibitor 4-guanidino-Neu5Ac2en. // J. Virol. 70: 1818−1827 (1996).
  76. Gubareva L.V., Kaiser L., Haiden F.G. Influenza virus neuraminidase inhibitors. // The Lanset. 355: 827−35 (2000).
  77. Gubareva L.V., Matrosovich M.N., Brenner M.K. et al. Evidence for zanamivir resistance in an immunocompromised child infected with influenza B virus. // J. Infect. Dis. 178: 1257−1262 (1998).
  78. Gubareva L.V., Nedyalkova M.S., Novikov D.V. et al. A release-competent influenza A virus mutant lacking the coding capacity for the neuraminidase active site. // J. Gen. Virol. 83: 2683−2692 (2002).
  79. Gubareva L.V., Webster R.G., Hayden F.G. Detection of influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors by an enzyme inhibition assay. // Antiviral Res. 53: 47−61 (2002).
  80. Guo C.-T., Sun X.-L., Kanie O. et al. An O-glycoside of sialic acid derivative that inhibits both hemagglutinin and sialidase activities of influenza viruses // Glycobiology 12: 183−190 (2002).
  81. Hanessian S., Wang J., Montgomery D., et al. Design, synthesis, and neuraminidase inhibitory activity of GS-4071 analogues that utilize a novel hydrophobic paradigm. // Bioorg Med Chem Lett. 12: 3425−3429 (2002).
  82. Harris A., Cardone G., Winkler D.C. et al. Influenza virus pleiomorphy characterized by cryoelectron tomography. // PNAS. 103:19 123−19 127 (2006).
  83. Harvala H., Gunson R., Simmonds P. et al. The emergence of oseltamivir-resistant pandemic influenza A (H1N1) 2009 virus amongst hospitalised immunocompromised patients in Scotland, November-December, 2009. // Euro Surveill. 15(14) (2010).
  84. Hay A.J. Amantadine and rimantadine mechanisms.// In book: Antiviral Drug Resistance, RichmanD. (ed), WilleyJ. and Sons Ltd, Chichester, UK: 43−58 (1996).
  85. Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. // Annex 5-Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic. Geneva, 2−4 October. (2002).
  86. He G., Massarella J., Ward P. Clinical pharmacokinetics of the prodrug oseltamivir and its active metabolite Ro 64−0802.// Clin Pharmacokinet. 37(6): 471−84 (1999).
  87. Sheu T.G., Deyde V.M., Okomo-Adhiambo M. et al. Surveillance for neuraminidase inhibitor resuistance among human influenza A and B viruses circulating worldwide from 2004−2008J IAntimic. Agents and Chemother. 52(9): 3284−3292 (2008).
  88. Hindiyeh M., Ram D., Mandelboim M. et al. Rapid detection of influenza A pandemic (H1N1) 2009 virus neuraminidase resistance mutation H275Y by real-time reverse transcriptase PCR. HJ. Clin. Microbiol. 48(5): 1884−7 (2010).
  89. Hughes M.T., McGregor M., Suzuki T. et al. Adaptation of influenza A viruses to cells expressing low levels of sialic acid leads to loss of neuraminidase activity. // J. Virol. 75: 37 663 770 (2001).
  90. Hurt A.C., Barr I., Hartel G. et al. Susceptibility of human influenza viruses from Australasia and South East Asia to the neuraminidase inhibitors zanamivir and oseltamivir. // Antiviral Res. 62: 37−45 (2004).
  91. Hurt A.C., Hohen J.K., Barr I.G. In vitro generation of neuraminidase inhibitor resistance in A (H5N1) influenza viruses. // Antimicrob. Agents Chemother. 53(10): 4433−40 (2009).
  92. Hurt A.C., Hohen J.K., Parker M. et al. Zanamivir-resistant influenza viruses with a novel neuraminidase mutation. // J Virol. 83(20): 10 366−73 (2009).
  93. Hurt A.C., Holien J.K., Parker M.W. et al. Oseltamivir resistance and the H274Y neuraminidase mutation in seasonal, pandemic and highly pathogenic influenza viruses. // Drugs. 69(18): 2523−31 (2009).
  94. Hurt A.C., McKimm-Breschkin J.L., McDonald M. et al. Identification of a human influenza type B strain with reduced sensitivity to neuraminidase inhibitor drugs. // Virus Res. 103(1−2): 205−11 (2004).
  95. Jackson D., Barclay W., Zurcher T. Characterization of recombinant influenza B viruses with key neuraminidase inhibitor resistance mutations. J Antimicrob Chemother 55: 162−9 (2005).
  96. Janakiraman M.N., White C.L., Laver W.G. et al. Structure of influenza virus neuraminidase B/Lee/40 complexed vith sialitic acid and dehydro analog at 1.8-Ao resolution: implications for the catalytic mechanism. //Biochem. 33: 8172−8179 (1994).
  97. Janakiraman M.N., White C.L., Laver W.G. et al. Structure of influenza virus neuraminidase B/Lee/40 complexed vith sialitic acid and dehydro analog at 1.8-Ao resolution: implications for the catalytic mechanism. //Biochem. 33: 8172−8179 (1994).
  98. Jin H., Leser G.P., Zhang J. et al. Influenza virus hemagglutinin and neuraminidase cytoplasmic tails control particle shape. UEMBOJ. 16: 1236−1247 (1997).
  99. Katinger D., Mochalova L., Chinarev A. et al. Specificity of neuraminidase activity from influenza viruses isolated in different hosts tested with novel substrates. II Arch. Virol. 149: 21 312 140 (2004).
  100. Kaverin N.V., Gambaryan A.S., Bovin N.V. et al. Postreassortment changes in influenza A virus hemagglutinin restoring HA — NA functional match. // Virol. 244: 315−321 (1998).
  101. Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. Avian to human transmission of the PB1 gene of influenza A virus in the 1957 and 1968 pandemics.// J. Virol. 63: 4603−4608 (1989).
  102. Kilander A., Rykkvin R., Dudman S.G. et al. Observed association between the HA1 mutation D222G in the 2009 pandemic influenza A (H1N1) virus and severe clinical outcome Norway 2009−2010.I/Euro Survell. 15(9): (2010).
  103. Kim C.U., Lew M., Williams H. et al. Structure activity relationship studies of novel carbocyclic influenza neuraminidase inhibitors. // J. Med. Chem. 41: 2451−2460 (1998).
  104. Kiso M., Mitamura K., Sakai-Tagawa Y. et al. Resistant influenza A viruses in children treated with oseltamivir: descriptive study. II Lancet 364:759−65 (2004).
  105. Kobasa D., Kodihalli S., Luo M. et al. Amino acid resides contributing to the substrate specificity of the influenza A virus neuraminidase. // J. Virol 73: 6743−6751 (1999).
  106. Kobasa D., Wells K., and Kawaoka Y. Amino acids responsible for the absolute sialidase activity of the influenza A virus neuraminidase: relationship to growth in the duck intestine. // J. Virol. 75: 11 773−11 780 (2001).
  107. Kundu A., Avalos R.T., Sanderson C.M. et al. Transmembrane domain of influenza virus neuraminidase, a type II protein, possesses an apical sorting signal in polarized MDCK cells.// J Virol. 70: 6508−15 (1996).
  108. Lambre C.R., Terzidis II., Greffard A. et al. Measurement of anti-influenza neuraminidase antibody using a peroxidase-linked lectin and microtitre plates coated with natural substrates. // J. Immunol. Meth. 135: 49−57 (1990).
  109. Le Q.M., Kiso M., Someya K. et al. Avian flu: isolation of drug-resistant H5N1 virus. // Nature 437: 1108 (2005).
  110. Leneva I.A., Roberts N., Govorkova E.A. et al. The neuraminidase inhibitor GS4104 (oseltamivir phosphate) is efficacious against A/Hong Kong/156/97 (H5N1) and A/Hong Kong/1074/99 (H9N2) influenza viruses.// Antiviral Res. 48(2): 101−15 (2000).
  111. Leneva I.A., Russell R.J., Boriskin Y.S. et al. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: Implications for mechanism of anti-influenza action of arbidol.// Antivir. Res. 81: 132−140 (2009).
  112. Li W., Escarpe P.A., Eisenberg EJ. et al. Identification of GS 4104 as an orally bioavailable prodrug of the influenza virus neuraminidase inhibitor GS 4071. // Antimicrob. Agents Chemother. 42(3): 647−53 (1998).
  113. Liu Y., Misulovin, Z., Bjorkman, P.J. The molecular mechanism of sulfated carbohydrate recognition by the cysteine-rich domain of mannose receptor. // J.Mol.Biol.: 305: 481−490 (2001).
  114. Lizheng G., Garten R.J., Foust. A.S. et al. Rapid Identification of Oseltamivir-Resistant Influenza A (H1N1) Viruses with H274Y Mutation by RT-PCR/Restriction Fragment Length Polymorphism Assay. //Antivir. Res. 82(1): 29−33 (2009).
  115. Luther P, Adamczyk B, Bergmann KC. Simple test for detection of virus neuraminidase and antineuraminidase using lectins (lectin-neuraminidase test system).// Zentralbl Bakteriol A. 248(3):281−5 (1980).
  116. Lyon E. Mutation detection using fluorescent hybridization probes and melting curve analysis//Expert. Rev. Mol. Diagn. 1: 92−101 (2001).
  117. Matrosovich M., Matrosovich T., Gray T. et al. Neuraminidase is important for the initiation of influenza virus infection in human airway epitelium.// J.Virol. 78: 12 665−12 667 (2004).
  118. Matrosovich M.N., Krauss S., and Webster R.G. II9N2 influenza A viruses from poultry in Asia have human virus-like receptor specificity. // J. Virol. 281: 56−162 (2001).
  119. Matrosovich M.N., Zhou N., Kawaoka Y. et al. The surface glycoproteins of H5 viruses isolated from humans, chikens, and aquatic birds have distinguishable properties.// J. Virol. 73: 1146−1155(1999).
  120. McCoy D, Wong E, Kuyumjian AG, et al. Treatment of respiratory syncytial virus infection in adult patients with hematologic malignancies based on an institution-specific guideline. // Transpl Infect Dis. (2010).
  121. McKimm-Breschkin J.L. Management of influenza virus infections with neuraminidase inhibitors: Detection, incidence, and implications of drug resistance.// Treat.Respir.MedA: 107−116 (2005).
  122. McKimm-Breschkin J., Trivedi Т., Hampson A. et al. Neuraminidase sequence analysis and susceptibilities of influenza virus clinical isolates to zanamivir and oseltamivir. // J. Antimicrob. Chemother. 47: 2264−72 (2003).
  123. McKimm-Breschkin J.L. Resistanse of influenza viruses to neuraminidase inhibitors-a review. И Antiviral Res. 47: 1−17 (2000).
  124. McKimm-Breschkin J.L., Selleck P., Usman T. et al. Reduced sensitivity of influenza A (H5N1) to oseltamivir. Emerg. IIInfect. Dis. 13: 1354−1357 (2007).
  125. Meijer A., Lackenby A., Hungnes O. et al. Oseltamivir-resistant influenza virus A (H1N1), Europe, 2007−08 season. II Emerg Infect Dis. 15: 552−60 (2009).
  126. Meijer, A., Lackenby A., Hay A. et al. Influenza antiviral susceptibility monitoring activities in relation to national antiviral stockpiles in Europe during the winter 2006/2007 season. // Euro Surveill. 12: E3-E4 (2007).
  127. Meindl P., Bodo G., Palese P., et al. Inhibition of neuraminidase activity by derivatives of 2-deoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid. II J. Virol. 58(2): 457−63 (1974).
  128. Mishin V.P., Hayden F.G., Gubareva L.V. Susceptibilities of antiviral-resistant influenza viruses to novel neuraminidase inhibitors.// J. Antimicrobal Agents and Chemoterapy. 11: 45 154 520 (2005).
  129. Mitnaul J., Matrosovich M. N, Castrucci M.R. et al. Balanced hemagglutinin and neuraminidase activities are critical for efficient replication of influenza A viruses. // J. Virol. 74: 6015−6020 (2000).
  130. Mitnaul J., Matrosovich M. N, Castrucci M.R. et al. Balanced hemagglutinin and neuraminidase activities are critical for efficient replication of influenza A viruses. // J. Virol. 74: 6015−6020 (2000).
  131. MMWR. Update: Drug Susceptibility of Swine-Origin Influenza A (H1N1) Viruses, April 2009. // http://www.cdc.sov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm581баб.htm 58(16): 433−435 (2009).
  132. MMWR. Update: Novel influenza A (H1N1) virus infections worldwide, May 6, 2009. // http://www.cdc.sov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm5817al.htm 58(17): 453−458 (2009).
  133. MMWR. Swine origin influenza A (H1N1) virus infection in a school New York City, April 2009. // http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm5817a6.htm 58(17): 470−472 (2009).
  134. Mochalova L., Gambaryan A., Romanova J. et al. Receptor-binding properties of modern human influenza viruses primarily isolated in Vero and MDCK cells and chicken embryonated eggs. // Virol. 313: 473−480 (2003).
  135. Mochalova L., Kurova V., Shtyrya Y. et al. Oligosaccharide specificity of influenza H1N1 virus neuraminidases. IIArch. Virol. 152: 2047−2057(2007).
  136. Mochalova L.V., Korchagina E.Y., Kurova V.S. et al. Fluorescent assay for studying the substrate specificity of neuraminidase. И Anal. Biochem. 341: 190−193 (2005).
  137. Monto A.S., Kimm-Breschkin J.L., Macken C. et al. Detection of influenza viruses resistant to neuraminidase inhibitors in global surveillance during the first 3 years of their use. II J. Antimicrob. Chemother. 50: 2395−402 (2006).
  138. Moscona A. Neuraminidase Inhibitors for Influenza.// NEJM. 353(13): 1363−1373 (2005).
  139. Moscona A. Oseltamivir Resistance — Disabling Our Influenza Defenses.// NEJM. 353(25): 2633−2636 (2005).
  140. Mossad S. B. The resurgence of swine-origin influenza A (H1N1). HCleve Clin J Med. 76(6): 337−43 (2009).
  141. Mungall B.A., Xu X., Klimov A. Assaying susceptibility of avian and other influenza A viruses to zanamivir: comparison of fluorescent and chemiluminescent neuraminidase assays. // Avian Dis. 47(3): 1141−4 (2003).
  142. Neumann G., Noda T., Kawaoka Y. Emergence and pandemic potential of swine-origin H1N1 influenza virus. II Nature. 459(7249): 931−9 (2009).
  143. Nicholson K.G., Aoki F.Y., Osterhaus A.D. et al. Efficacy and safety of oseltamivir in treatment of acute influenza: a randomised controlled trial. II Lancet. 356(9244): 1845−50 (2000).
  144. Nicol S.T., Airkawa J., and Kawaoka Y. Emerging viral diseases. // PNAS. 97: 1 241 112 412 (2000).
  145. Ohuchi M., Feldmann A., Ohuchi R. et al. Neuraminidase is essential for fowl plague virus hemagglutinin to show hemagglutinating activity. II J. Virol. 212(1): 77−83 (1995).
  146. Okomo-Adhiambo M., Nguyen H.T., Sleeman K. et al. Host cell selection of influenza neuraminidase variants: implications for drug resistance monitoring in A (H1N1) viruses.// Antiviral Res. 85(2): 381−8 (2010).
  147. Oxford J.S., Bossuyt S., Eswarasaran R. et al. Drugs to combat the epidemic and pandemic faces of influenza. II In Influenza (C.W. Potter ed.) Elsevier: 201−234 (2002).
  148. Oxford J.S., Bossuyt S., Eswarasaran R. et al. Drugs to combat the epidemic and pandemic faces of influenza. // In Influenza (C. W. Potter ed.) Elsevier: 201−234 (2002).
  149. Palmer S., Boltz V., Maldarelli F. et al. Selection and persistence of non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor-resistant HTV-1 in patients starting and stopping non-nucleoside therapy. // AIDS 20: 701−710(2006).
  150. Paulson J.C., Weinstein J., Dorland L. et al. Newcastle disease virus contains a linkage-specific glycoprotein sialidase. II J. Biol. Chem. 257: 12 734−12 738 (1982).
  151. Peiris J.S.M., de Jong M.D., and Guan Y. Avian influenza virus (H5N1): a threat to human health. II J. Microb. Rev. 20:243−267 (2007).
  152. Pont-Kingdon G., Lyon E. Direct molecular haplotyping by melting curve analysis of hybridization probes: beta 2-adrenergic receptor haplotypes as an exampldINucleic Acids Res. 33(10): 89 (2005).
  153. Potier M., Mameli L., Belisle M. et al. Fluororaetric assay with a sodium (4-methylumbelliferyl-a-D-N-acetylneuraminate) substrate. Il Anal. Biochem. 94: 287−296 (1979).
  154. Rameix-Welti M.-A., Enouf V., Cuvelier F. et al. Enzymatic Properties of the Neuraminidase of Seasonal H1N1 Influenza Viruses Provide Insights for the Emergence of Natural Resistance to Oseltamivir//PathogA (7):e 1 000 103 18 654 625 (2008).
  155. Reece P.A. Neuraminidase inhibitor resistance in influenza viruses. // J. Medical Virology. 79: 1577−1586 (2007).
  156. Richardson J.C.W., Scolera V. et Simmonds N.L. Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.// Biophys. Acta. 673: 26−36 (1981).
  157. Roberts N.A. and Govorkova E.A. The activity of neuraminidase inhibitor oseltamivir against all subtypes of influenza viruses.// Nova Science Publ. 7: 93−118 (2009).
  158. Rudneva I.A., Kovaleva V.P., Varich N.L. et al. Influenza A virus reassortants with surface glycoprotein genes of avian parent viruses: effects of HA and NA gene combinations on virus aggregation. // Arch. Virol. 133:437−450(1993).
  159. Rudneva I.A., Sklyanskaya E.I., Barulina O.S. et al. Phenotypic expression of HA NA combinftions in human — avian influenza A virus reassortants. // Arch. Virol. 141: 1091−1099 (1996).
  160. Rudneva I.A., Sklyanskaya E.I., Barulina O.S. et al. Phenotypic expression of HA NA combinftions in human — avian influenza A virus reassortants. // Arch. Virol. 141: 1091−1099 (1996).
  161. Russell R.J., Haire L.F., Stevens D.J. et al. The structure of H5N1 avian influenza neuraminidase suggests new opportunities for drug design. II Nature. 44: 45−49 (2006).
  162. Russell R.J., Haire L.F., Stevens DJ. et al. The structure of H5N1 avian influenza neuraminidase suggests new opportunities for drug design. // Nature. 44: 45−49 (2006).
  163. Ryan D.M., Ticehurst J., Dempsey M.H. GG167 (4-guanidino-2,4-dideoxy-2,3-dehydro-N-acetylneuraminic acid) is a potent inhibitor of influenza virus in ferrets. HAntimicrob. Agents Chemother. 39(11): 2583−4 (1995).
  164. Shevchenko E.S., Burtseva E.I., Beliakova N.V., et al. Drug susceptibility of Influenza Viruses circulating in Russia.// Milestones of Innovative Therapeutics. Materials of IDDST-2009. Shanghai, China: 586 (2009).
  165. Shinde V., Bridges C.B., Uyeki T.M. et al. Triple reassortants swine influenza A (H1) in humans in the United States, 2005−2001 IN. Engl J.Med. 360(25): 2616−2625 (2009).
  166. Shtyrya Y, Mochalova L, Voznova G et al. Adjustment of receptor-binding and neuraminidase substrate specificities in avian-human reassortant influenza viruses.// Glycoconj J. 26(1): 99−109 (2009).
  167. Smee D.F., Sidwell R.W., Morrison A.C. et al. Characterization of an influenza A (H3N2) virus resistant to the cyclopentane neuraminidase inhibitor RWJ-270 201. // Antiv. Res. 52: 251−259 (2001).
  168. Staschke K.A., Colacino J.M., Baxter A.J. et al. Molecular basis for the resistance of influenza viruses to 4-guanidino-Neu5Ac2en. // Virol. 214: 642−646 (1995).
  169. Stevens J, Corper AL, Basler CF, et al. Structure of the uncleaved human HI hemagglutinin from the extinct 1918 influenza virus. II Science. 303(5665): 1866−70 (2004).
  170. Straub J.O. An environmental risk assessment for oseltamivir (Tamiflu) for sewage works and surface waters under seasonal-influenza- and pandemic-use conditions. // Ecotoxicol. Environ. Saf. 72(6): 1625−34 (2009).
  171. Subbaro K., Klimov A., Katz J. et al. Characterization of an avian influenza A (H5N1) virus isolated from a child with a fatal respiratory illness. //Science. 279: 393−396 (1998).
  172. Sugaya N, Ohashi Y. Long-acting neuraminidase inhibitor laninamivir octanoate (CS-8958) versus oseltamivir as treatment for children with influenza virus infection. Antimicrob Agents Chemother. 54(6): 2575−82 (2010).
  173. Suzuki T., Takahashi T., Nishinaka D. et al. Inhibition of influenza A virus sialidase activity by sulfatide. // FEBSLett. 553: 355−359 (2003).
  174. Tai C.Y., Escarpe P.A., Sidwell R.W. et al. Characterization of Human Influenza Virus Variants Selected In Vitro in the Presence of the Neuraminidase Inhibitor GS 4071. // Antimicrob. Agents andChemoter. 42: 3234−3241 (1998).
  175. Takahashi T., Suzuki T., Hidari K. I-PJ. et al. A molecular mechanism for the low-pH stability of sialidase activity of influenza A virus N2 neuraminidases. // FEBS Lett. 543: 71−75 (2003).
  176. Taubenberger J.K., Reid A.H., Kraft A.E. et al. Initial genetic characterization of the 1918 «Spanish influenza virus».// Science. 275: 1793−1796 (1997).
  177. Taylor G., Crennell S., Thompson C. et al. The sialidase superfamily: structural theme and variations. // In Sialobiology and other novel forms of glycosylation. (Inoue J., Lee Y.C., and Troy F.A., ed) GakushinPub. Co. Osaka-. 187−195 (1999).
  178. Taylor N.R., von Itzstein M. Molecular modeling studies on ligand binding to sialidase from influenza virus and the mechanism of catalysis.// J Med Chem. 37(5): 616−24 (1994).
  179. Varghese J.N. and Colman P.M. Three-dimensional structure of the neuraminidase of influenza virus A/Tokyo/3/67 at 2.2 A resolution. II J. Mol. Biol. 221: 473−486 (1991).
  180. Varghese J.N., Colman P.M., van Donkelaar A. et al. Structural evidence for a second sialic acid binding site in avian influenza virus neuraminidases. II Biochem. 94: 11 808−11 812 (1997).
  181. Wagner R., Wolf Т., Herwig A. et al. Interdependence of hemagglutinin glycosilation and neuraminidase as regulators of influenza growth: a study by reverse genetics. // J. Virol. 74: 63 166 323 (2000).
  182. Watts A.G., and Withers S.G., The synthesis of some mechanistic probes for sialic acid processing enzymes and the labeling of a sialidase from Trypanosoma rangeli. // Can. J. Chem. 82: 1581−1588 (2004).
  183. Watts A.G., Oppezzo P., Withers S.G. et al. Structural and Kinetic Analysis of Two Covalent Sialosyl-Enzyme Intermediates on Trypanosoma rangeli Sialidase II J. Biol. Chem. 281: 4149−4155 (2006).
  184. Warren L. The thiobarbituric acid assay of sialic acid.IIJ.Biol.Chem.234: 1971−1975 (1959).
  185. Webby R.J. and Webster R.G. Emergence of influenza A viruses. II Phil. Trans. R. Soc. 356: 1817−1828 (2001).
  186. Webster R.G., Bean W.J., Corman O.T. et al. Evolution and ecology of influenza A viruses.11 MicrobioLRev. 56: 152−179(1992).
  187. Webster R.G., Kawaoka Y. Influenza an emerging and re-emerging disease.// Seminar in Virology. 5: 103−111 (1994).
  188. WHO. Influenza virus neuraminidase and neuraminidase inhibition test procedures.//48: 199−202 (1973).
  189. WHO. CDC protocol of real-time RTPCR for swine influenza A (H1N1). // (28 April 2009).
  190. WHO. Influenza A (H1N1) NA-H274 detailed pyrosequencing protocol for antiviral susceptibility testing. // (13 May 2009).
  191. WHO (EuroFlu.org). Еженедельный электронный бюллетень ЕРБ ВОЗ. // http://www. euro flu, ons/czi-files/bulletin v2. cgi 353 (09 апреля 2010).
  192. WHO WER. Update on oseltamivir resistant pandemic A (H1N1) 2009 influenza virus: January 2010. // http://www.who.int/wer 85(6): 37−48 (2010).
  193. WHO, http://www.who. int/csr/disease/swineflu/en/index.html
  194. WHO. Influenza A Virus Resistance to Oseltamivir and Other Antiviral Medicines. // http://www. who. int/csr/disease/influenza/2008−9nhemisummaryreport/en/index. html (2009).
  195. WHO. Influenza A (H1N1) Virus Resistance to Oseltamivir: 2008 Southern HemisphereInfluenzaSeason.///2rt'p.y7www. who.int/csr/disease/influenza/oseltamivir summarysouth 2008/en/index.html (2008).
  196. WHO. H5N1 avian influenza: timeline of major events.// http://www.who.int/csr/disease/ avian influenza/ai timeline/en/index.html (2010).
  197. Wu W.L., Wang G., Chen Y. et al. Mechanism for the emergence and prevalence of H1N1 influenza virus carrying H275Y oseltamivir resistance mutation.// Materials of «Options for the control influenza VII» P-156: 137 (2010).
  198. Qi L., Kash J.C., Dugan V.G. et al. Rule of sialic acid binding specifiti of the 1918 influenza virus hemagglutinin protein in virulence and pathogenesis sor mice.///. Virol. 83(8): 3754−61 (2009).
  199. Yen H.L., Hoffmann E., Taylor G. et al. Importance of neuraminidase active-site residues to the neuraminidase inhibitor resistance of influenza viruses.// J Virol. 80(17): 8787−95 (2006).
  200. Yen H.L., Ilyushina N.A., Salomon R. et al. Neuraminidase Inhibitor-Resistant Recombinant A/Vietnam/1203/04 (H5N1) Influenza Viruses Retain Their Replication Efficiency and Pathogenicity In Vitro and In Vivo II J. Virol. 81: 12 418 12 426 (2007).
  201. Zhang J., Pekosz A., and Lamb R.A. Influenza virus assembly and lipid raft microdomains: a role for the cytoplazmic tails of the spike glycoproteins. // J. Virol. 74: 4634−4644 (2000).
  202. Ztlrcher T., Yates P.J., Daly J. et al. Mutations conferring zanamivir resistance in human influenza virus N2 neuraminidases compromise virus fitness and are not stably maintained in vitro. U JAntimicrob. Chemother. 58(4): 723−32 (2006).
Заполнить форму текущей работой

На отлично!