Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Конструирование питательных сред для выделения бактерий рода Haemophilus и Neisseria meningitidis

Диссертация: Конструирование питательных сред для выделения бактерий рода Haemophilus и Neisseria meningitidis
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Актуальность проблемы. Известно, что Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, в частности, Н. influenzae серотипа b (Hib), Streptococcus pneumoniae являются этиологическим фактором тяжелейших заболеваний, в том числе угрожающих жизни, особенно маленьких детей. Наиболее тяжёлой нозологической формой является гнойный бактериальный менингит (ГБМ). Следует отметить, что в России регистрируется… Читать ещё >

Содержание

  • СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • ГЛАВА 1. N. meningitidis И Н. influenzae — ВОЗБУДИТЕЛИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
    • 1. 1. Инвазнвные и неинвазивные заболевания, вызываемые
    • N. meningitidis и Н. influenzae
      • 1. 2. Носительство N. meningitidis и Н. influenzae
  • ГЛАВА 2. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ N. meningitidis И Н. influenzae
    • 2. 1. Схемы выделения бактерий из лабораторно — диагностического материала
    • 2. 2. Физиолого-биохимические особенности бактерий рода Haemophilus и. N. meningitidis
    • 2. 3. Питательные среды для выделения бактерий рода Haemophilus и N. meningitidis

Конструирование питательных сред для выделения бактерий рода Haemophilus и Neisseria meningitidis (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. Известно, что Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, в частности, Н. influenzae серотипа b (Hib), Streptococcus pneumoniae являются этиологическим фактором тяжелейших заболеваний, в том числе угрожающих жизни, особенно маленьких детей. Наиболее тяжёлой нозологической формой является гнойный бактериальный менингит (ГБМ). Следует отметить, что в России регистрируется заболеваемость, связанная с генерализованными формами менингококковой инфекции (ГФМИ), входящими в ГБМ, которые отдельно не учитываются, поэтому невозможно вычленить ни заболеваемость ГБМ менингококковой этиологии, ни ///¿—менингиты [70]. По данным анализа заболеваемости ГФМИ и ГБМ в 37 регионах, проведенного Российским центром по эпидемиологическому надзору за менингококковой инфекцией и гнойными бактериальными менингитами, отмечено, что в 2002;2004гг в этиологии ГБМ значительно преобладали N. meningitidis (66,1% случаев), далее по частоте выделения следовали S. pneumoniae и Н. influenzae серотипа b (14,5% и 6,2% случаев соответственно). При этом летальность от ГФМИ и ГБМ составила 12,4%, а от ГБМ неменингококковой этиологии — 13,1% [54, 55].

К тяжёлым заболеваниям, вызываемым приведенными микроорганизмами, относятся различные формы пневмоний. Так, показано доминирование при хронической пневмонии детей бескапсульной формы Н. influenzae и S. pneumoniae (соответственно, 80% и 47% выделенной микрофлоры, из которых 27% приходится на долю их ассоциаций) [32]. При анализе материала со слизистой надгортанника детей, больных острым эпиглоттитом, в 52,8% выделен Н. influenzae серотипа b ив 19,4% и 2,8% случаев соответственно S. pneumoniae и N. meningitidis [34].

Вместе с тем широко распространено носоглоточное носительство приведенных видов микроорганизмов. Попадая на слизистую ротоглотки человека, они осуществляют колонизацию эпителия, которая, как показано на примере менингококка, протекает бессимптомно и трактуется как здоровое носительство, завершающееся чаще всего освобождением от возбудителя [45], в то же время в эпидемическом процессе менингококковой инфекции скрытым звеном является именно назофарингеальное носительство [28]. Микрофлора полости рта является одним из основных источником инфицирования как при госпитальных, так и при внебольничных пневмониях [6].

Установление этиологического агента заболевания обосновывает адекватное своевременное антибактериальное лечение больных, от которого зависит исход заболевания, а выявление назофарингеального носительства определяет тактику применения профилактических средств [39]. В тоже время оценка состояния лабораторной диагностики ГФМИ и ГБМ не менингококковой этиологии показала её низкий уровень (в среднем 30 — 40% и до 20% в некоторых регионах) [55, 56]. Совершенствование традиционных-и разработка новых методов диагностики нашли своё отражение в действующих нормативных документациях, которые в настоящее время наиболее соответствуют своей цели, определяя комплексный подход к лабораторной диагностике [51, 64]. Несмотря на всё более широкое использование некультуральных методов выявления бактериальных антигенов и ДНК, бактериологические исследования остаются необходимым и обязательным этапом лабораторной диагностики.

Как известно, бактерии рода Haemophilus и вида N. meningitidis относятся к микроорганизмам, весьма требовательным к питательным веществам и факторам роста, в связи с чем для их выделения и выращивания используются сложные комплексные питательные среды: сывороточный, «шоколадно» — кровяной, кровяной агары лабораторного приготовления (на различных высоко питательных основах). Существует отечественная коммерческая среда — «Менингоагар» (ФГУП ГНЦ прикладной микробиологии, Оболенск), к которой добавляют нормальную сыворотку, однако эта среда пока ещё не получила должной оценки практики. Для усиления ростовых свойств «шоколадного» агара при выделении гемофильных бактерий JI.K. Катосова [32] предложила добавлять дрожжевой экстракт или НАД (никотинамидадениндинуклеотид).

В качестве добавок, ингибирующих рост посторонней микрофлоры, рекомендовано использование ристомицина или линкомицина, бацитрацина [58, 64], что важно при анализе заведомо контаминированных диагностических образцов (например, носоглоточной слизи, мокроты). Для этих же целей в НИИВС им. И. И. Мечникова была предложена питательная среда на разработанной ранее основе, состоящей из кислотного гидролизата казеина средней степени расщепления (используемого при производстве столбнячного анатоксина в ОАО «Биомед» им. Мечникова), препарата «Аминопептид» (выпускаемого ООО «Самсон-мед», Санкт-Петербург), экстракта кормовых дрожжей, получившая название КАЭ [73], к которой для придания ей селективных свойств в отношении бактерий рода Haemophilus был добавлен бацитрацин [24]. При испытании в лабораторно-диагностических исследованиях эта питательная среда не уступала селективному агару НАЕ (bioMerieux, Франция).

В диагностической практике используют импортный коммерческий стандартный селективный «шоколадный» агар «Haemophilus» (НАЕ), включающий антимикробную добавку (бацитрацин 50 ME/мл, ванкомицин 3 мкг/мл и амфотерицин В 3 мкг/млbioMerieux, Франция), ингибирующую рост сопутствующих грамположительных бактерий, дрожжеподобых грибов. Для выделения N. meningitidis на Западе чаще всего используют тот же «шоколадный» агар с коммерческой добавкой PolyViteX и ингибиторной смеси VCN (ванкомицин 3 мкг/мл, колистин 7,5 мкг/мл и нистатин 12,5 ЕД/млbioMerieux, Франция), подавляющих не только рост большинства грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжеподобых грибов, но и непатогенных видов нейссерий [107, 113, 122, 125].

Исходя из изложенного следует, что в лабораторно — диагностической практике для выделения N. meningitidis и бактерий рода Haemophilus из материала, обсеменённого посторонней флорой, применяются питательные среды лабораторного приготовления в связи с отсутствием отечественных коммерческих питательных основ и селективных питательных сред, что определяет актуальность их разработки.

При конструировании селективных питательных сред одними из основных требований должно быть обеспечение высоких ростовых свойств в отношении искомых штаммов, в частности, способствующих быстрому формированию хорошо развитых колоний. Известно, что такой эффект можно получить путем добавления к питательным средам экстрактов лекарственных растений, содержащих различные факторы роста, способствующие увеличению размера колоний изученных штаммов шигелл, стафилококков, коринебактерий [3].

Цель исследования — конструирование новых питательных сред для выделения бактерий рода Haemophilus и вида Neisseria meningitidis.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить влияние экстрактов некоторых лекарственных растений на ростовые свойства питательной среды в отношении бактерий рода Haemophilus.

2. Сконструировать селективную питательную среду для выделения бактерий рода Haemophilus.

3. Определить возможность использования разработанной питательной среды с экстрактом лекарственных растений для выращивания N. meningitidis.

4. Сконструировать селективную питательную среду для выделения N. meningitidis.

5. Изучить сравнительную диагностическую ценность разработанных селективных питательных сред при их лабораторном испытании.

Научная новизна работы.

Разработана новая питательная среда, обладающая высокими ростовыми свойствами для бактерий рода Haemophilus (увеличение диаметра колоний и жизнеспособности клеток, уменьшение их полиморфизма). Увеличение ростовых свойств достигнуто за счёт введения в известную основу экстракта семян льна, как наиболее эффективного стимулятора роста. Новизна исследования подтверждена патентом № 2 320 714 «Питательная среда для выращивания бактерий рода Haemophilus».

Показана возможность использования разработанной питательной среды для выращивания N. meningitidis без добавления в неё сыворотки.

Разработаны и испытаны селективные питательные среды для выделения бактерий рода Haemophilus и вида N. meningitidis, не уступающие стандартным коммерческим средам фирмы bioMerieux, Франция.

Обоснован способ выявления гемофильных бактерий в более короткие сроки (через сутки от начала исследования) за счёт одновременного использования набора сред, состоящего из селективной среды, среды для выращивания бактерий рода Haemophilus, контрольной среды, на которой отсутствовал рост бактерий данного рода, и питательной среды для дифференциации Н. influenzae и Н. parainfluenzae.

Практическая значимость работы.

Установлена диагностическая значимость разработанных селективных питательных сред и показана перспективность их использования для выделения бактерий рода Haemophilus и N. meningitidis в лабораторной практике.

Разработана и передана на экспертизу в ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича нормативно-техническая документация на «Питательную среду для выделения бактерий рода Haemophilus».

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Сконструирована питательная среда для выращивания бактерий рода Haemophilus и вида Neisseria meningitidis на основе, состоящей из кислотного гидролизата казеина, препарата «Аминопептид» и дрожжевого экстракта, с добавлением экстракта семян льна, обладающая достаточно высокими ростовыми свойствами.

2. Селективные свойства разработанных питательных сред достигнуты за счёт введения антибиотических добавок: для выделения бактерий рода Haemophilus — бацитрацина и вида N. meningitidis — смеси ванкомицина и колистина в определённых концентрациях.

3. Предложенные селективные питательные среды имеют высокую диагностическую ценность и не уступают по качеству импортным коммерческим селективным средам («шоколадныму агару „Haemophilus“» и «шоколадному агару с добавкой PolyViteX» и ингибиторной смесью VCN, bioMerieux, Франция). Среда для выделения менингококка превосходит используемую в практике здравоохранения среду с добавлением сыворотки и линкомицина по подавлению роста посторонней микрофлоры, в том числе, непатогенных нейссерий.

Апробация работы состоялась 17 декабря 2007 года на научной конференции отдела микробиологии ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН. Материалы диссертационной работы доложены на 1 Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов» (Москва. 2004), на Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва, 2006), на заседании секции медицинской и фармацевтической микробиологии Московского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в их числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 1 патент и 2 в материалах и тезисах докладов.

Объём и структура работы. Диссертация изложена на 124 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 37 таблицами и 8 рисунками, состоит из введения, 2 глав обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка цитированной литературы, включающего 129 источников, из них 86 отечественных работ.

выводы.

1. Разработана новая питательная среда для выращивания бактерий рода Haemophilus, для усиления ростовых свойств которой в рецептуру известной основы КАЭ (кислотный гидролизат казеина, препарат «Аминопептид», экстракт кормовых дрожжей) введён экстракт семян льна в качестве стимулятора роста данного рода бактерий.

2. На основе созданной среды для выращивания бактерий рода Haemophilus за счёт введения в неё бацитрацина определённых концентраций сконструирована селективная питательная среда (SAH) для выделения бактерий данного рода, обладающая высокими ростовыми и ингибирующими свойствами, пригодная для промышленного выпуска.

3. Разработан способ ускоренного (через 24 часа) выявления носительства гемофильных бактерий с помощью одновременного использования набора сред, включающего, селективную среду для выделения бактерий рода Haemophilus, питательную среду для их выращивания и контрольную, на которой отсутствует рост бактерий данного рода, а также среду для дифференциации Н. influenzae и Н. parainfluenzae.

4. Установлена диагностическая ценность разработанной селективной питательной среды для выделения бактерий рода Haemophilus при обследовании детей на назофарингеальное носительство, не уступающая по эффективности коммерческой референс-среды зарубежного производства.

5. Показана возможность выращивания музейных и свежевыделенных от больных штаммов N. meningitidis на разработанной питательной среде без добавления сыворотки.

6. Разработана селективная питательная среда для выделения N. meningitidis путём добавления в питательную среду для выращивания менингококка антибиотической добавки, включающей ванкомицин (3 мкг/мл) и колистин (15 мкг/мл), ингибирующей рост сопутствующей посторонней микрофлоры, в том числе непатогенных нейссерий.

7. При обследовании детей на назофарингеальное носительство N. meningitidis показано, что разработанная селективная питательная среда по подавлению посторонней микрофлоры, в том числе непатогенных нейссерий, превосходит используемые в отечественной практике сывороточные среды с добавлением линкомицина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

Этиологическим фактором тяжелейших инфекционных заболеваний, особенно маленьких детей, в том числе угрожающих жизни пациентов, часто являются Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae. Вместе с тем широко распространено носоглоточное носительство приведенных видов, часть из которых относится к условнопатогенным микроорганизмам. Известно, что в эпидемическом процессе, в частности, менингококковой инфекции скрытым звеном является именно назофарингеальное носительство [28, 45]. Микрофлора полости рта является одним из основных источником инфицирования при пневмониях [6]. Эти положения обосновывают необходимость своевременного установления этиологического агента заболевания и выявление назофарингеального носительства, что определяет тактику применения антибактериальных и профилактических препаратов. В тоже время, несмотря на широкое использование некультуральных методов выявления бактериальных антигенов, особенно бактерий рода Haemophilus и N. meningitidis, обладающих высокими питательными потребностями, в том числе в разнообразных факторах роста, бактериологическая диагностика, являющаяся необходимым этапом лабораторных исследований, остаётся на низком уровене [54, 55, 56]. В действующих документациях для выделения этих микроорганизмов регламентирована возможность применения питательных сред лабораторного приготовления. Из-за отсутствия отечественных эффективных стандартных коммерческих питательных сред затруднена бактериологическая диагностика.

Таким образом, разработка отечественных селективных питательных сред для использования в лабораторно — диагностической практике для выделения N. meningitidis и бактерий рода Haemophilus является актуальной.

Предпосылкой данной работы явилось успешное использование разработанной ранее питательной среды для выращивания продуцентов ферментов сайт-специфической рестрикции, относящихся к роду.

Haemophilus [73]. Основу этой среды составляют кислотный гидролизат казеина, «Аминопептид» и экстракт кормовых дрожжей (КАЭ), к которым добавляли экстракты лекарственных растений, содержащих различные, факторы роста, способствующие увеличению размера колоний шигелл, стафилококков, коринебактерий [3]. На основании анализа накопления биомассы Н. influenzae серотипа Ъ 11/64, жизнеспособности клеток (по КОЕ) по сравнению с референс-средой (PC), для дальнейшей работы была отобрана среда (№ 4) с экстрактом семян льна (КАЭ + JI), как обладающая наиболее высокими ростовыми свойствами, в которую, как во все среды для бактерий рода Haemophilus, добавляли V и X факторы роста. Применение этой среды, по сравнению с PC, способствовало увеличению жизнеспособности клеток и диаметра колоний, а также большей однородности в мазках культур не только капсульного (Н. influenzae серотипа Ъ 11/64), но и бескапсульного штамма вида Н. influenzae — Н. influenzae № 8143, и относящегося к другому виду — Н. parainfluenzae № 4101. Новизна исследования подтверждена патентом на питательную среду для выращивания бактерий рода Haemophilus (№ 2 320 714).

Возможности этой питательной основы были расширены после посевов N. meningitidis В 13 090 на среду АК (вариант среды КАЭ + JI без V и X факторов, которая является контрольной при посеве бактерий рода Haemophilus) и на «менингоагар» (ФГУП НПЦ прикладной микробиологии, Оболенск) (МА) с добавлением 5% инактивированной сыворотки крупного рогатого скота. Отмечено, что на среде АК (без сыворотки), также как на МА с сывороткой при посеве N. meningitidis В 13 090 из разведения 10″ 1 выявлен сплошной рост, причем в мазках из этих культур большая однородность клеток наблюдалась на АК. Возможность использования этой среды АК для выращивания менингококков была подтверждена при посевах ранее выделенных и идентифицированных штаммов из коллекции РЦ. В качестве среды сравнения был использован «шоколадный агар с добавкой PolyViteX» (bioMerieux). При этом на среде АК наблюдался рост 6 из 7 штаммов менингококка при росте всех 7 штаммов на среде сравнения. Таким образом было определено, что разработанная новая питательная среда, в которой к известной ранее основе КАЭ добавлен экстракт семян льна, вполне могла быть использована в качестве питательной основы при разработке сред для выделения как бактерий рода Haemophilus, так и вида N. meningitidis.

При конструировании селективной питательной среды прежде всего следует учитывать два основные требования к такой среде: она должна обладать высокими ростовыми свойствами в отношении искомых штаммов, способствующими быстрому развитию крупных колоний, и ингибировать сопутствующую микрофлору. Если первую задачу можно было считать выполненой, то решение второй задачи особенно важно при посевах диагностического материала, контаминированного посторонней микрофлорой (например, при высевах из носоглотки).

Выбор антибиотических добавок для придания разработанным средам селективных свойств в отношении бактерий рода Haemophilus и N. meningitidis основан на данных литературы и лабораторно — диагностической практики. Так, для выделения бактерий рода Haemophilus целесообразно применение бацитрацина, который используют как в виде диагностических дисков, так и как добавку к среде, например, к селективному «шоколадному агару Haemophilus» (bioMerieux). В состав селективного «шоколадного» агара (bioMerieux) для выделения патогенных нейссерий входит ингибиторная смесь VCN (ванкомицин, колистин, нистатин) (среда ША+PV+VCN), предупреждающая рост посторонней микрофлоры, в которой антибактериальными свойствами обладают ванкомицин (в основном в отношении большинства грамположительных бактерий) и колистин (подавляет в том числе рост непатогенных видов нейссерий [107, 115]). В России для подавления сопутствующей (контаминирующей) микрофлоры используют линкомицин или ристомицин.

При определении концентрации бацитрацина, не снижающей ростовые свойства среды в отношении Н. influenzae, по сравнению с контролем (средой без антибиотика), было показано, что такой концентрацией может быть 100 мкг/мл бацитрацина фирмы ICN. При этом изучение влияния широкого диапазона концентраций бацитрацина (от 5 до 500 мкг/мл) на рост 8 тест-штаммов показало, что даже при посеве из разведения 10″ 1 концентрация бацитрацина 5 мкг/мл тормозила рост N. meningitidis и S. pyogenes, а доза 50 мкг/мл тормозила рост двух других изученных штаммов — S. aureus и Е. faecalis. В то же время при посеве даже из большого разведения (10~б) не наблюдалось подавление роста Е. coli, Р. aeruginosa и P. mirabilis максимальной использованной (500 мкг/мл) концентрацией бацитрацина.

В результате изучения селективных свойств среды КАЭ+JI со 100 мкг/мл бацитрацина в отношении двух штаммов Н. influenzae и тест-штаммов S. aureus и Е. faecalis было показано, что при посеве смеси штаммов микроорганизмов не происходит ингибирования Н. influenzae, в то время, как полностью подавляется рост как S. aureus, так и Е. faecalis.

Таким образом, введение бацитрацина фирмы ICN в концентрации 100 мкг/мл в питательную среду КАЭ+JI было оправдано, так как эта среда обладала хорошими ростовыми и селективными свойствами в отношении изученных штаммов Н. influenzae и ингибировала рост наиболее возможной сопутствующей микрофлоры (стафилококков, стрептококков, нейссерий, энтерококков), хотя и не подавляла рост изученных штаммов грамотрицательных бактерий. Такую питательную среду можно назвать КАЭ + JI + Б или SAH — селективный агар для выделения бактерий рода Haemophilus.

Для предварительного изучения разработанной селективной питательной среды в качестве сред сравнения были использованы обычно применяемый в повседневной практике «шоколадный» агар лабораторного приготовления (ША) и селективный «шоколадный агар Haemophilus» (НАЕ) (bioMerieux, Франция). При обследовании 49 детей в закрытом детском коллективе на носоглоточное носительство бактерий рода Haemophilus, был использован весь приведенный выше набор питательных сред (SAH, АН, АК,.

AK+V). Анализ результатов первичных посевов показал наибольшее количество положительных высевов бактерий рода Haemophilus при использовании разработанной питательной сред SAH (87,5%) и среды сравнения НАЕ (75,0%), по сравнению с применяемым в практике ША (16,7%) (при р<0,01).

На наш взгляд, для облегчения последующей дифференциации выделенных бактерий рода Haemophilus, кроме SAH, должны быть использованы следующие варианты среды КАЭ + JI:

• АН — агар для выращивания бактерий рода Haemophilus: среда КАЭ + JI с факторами роста (V, X), без бацитрацина;

• АК — агар контрольный для контроля чистоты выделенной культуры и определения, относятся ли выделенные бактерии к роду Haemophilus: среда КАЭ + JI без факторов роста и бацитрацина (как отмечено выше, эта среда была успешно использована для N. meningitidis)',.

• АК + V — агар для дифференциации Н. influenzae (нет роста) от Н. parainfluenzae: среда КАЭ + JI с V — фактором роста.

Исследование, проведенное с использованием всего набора перечисленных питательных сред и общепринятых тестов, позволило показать видовую структуру бактерий рода Haemophilus, высеваемых у здоровых детей в детском коллективе, причём как в монокультуре, так и в ассоциациях, а разработанная селективная питательная среда для выделения бактерий рода Haemophilus SAH не уступает общепринятым питательным средам, используемым обычно для выделения бактерий данного рода.

Изучение диагностической значимости питательной среды SAH проведено в двух обследованиях детей в доме ребёнка № 15 в г. Москве. При этом в первом исследовании обследовано 62 ребёнка от 8 мес. до 2-х лет с первичным посевом мазков из носоглотки на селективные питательные среды SAH и НАЕ, а на второй день подозрительные колонии были пересеяны сектором на АН, АК и АК + V. В результате на разработанной селективной среде SAH выделено 4 штамма Н. influenzae и три из них серотипа b. Во втором исследовании было обследовано 43 ребёнка от 9 мес. до 4-х лет с посевом в первый день на среду SAH и варианты АН, АК и АК + V, а во второй день, при росте всех морфологически типичных колоний только на селективных средах, была изучена принадлежность выделенных культур к бактериям рода Haemophilus и проведена их видовая дифференциация. Следует отметить, что уже при первичном посеве селективная среда SAH позволила выделить бактерии рода Haemophilus в чистой культуре, что было выявлено в 30 анализах при наличии нетипичного для данного рода бактерий роста на других средах. В 11 анализах на SAH полностью отсутствовал рост при наличии нетипичного для данного рода бактерий роста на других средахтолько в 2-х случаях отмечен рост посторонней микрофлоры, по морфологии колоний, напоминающей грибы. Таким образом, выявлен высокий процент носительства Н. influenzae (у 27 из 43 детей, т. е. в 62,7%) в обследованном коллективе. Приведенные данные свидетельствуют в пользу необходимости разработки профилактического препарата, предупреждающего заболевания, вызываемые не только Н. influenzae серотипа Ъ, но и всеми бактериями данного вида, поскольку известно, что ряд заболеваний, в частности, нижних дыхательных путей, обусловлены, в том числе персистенцией нетипируемых (бескапсульных) штаммов Н. influenzae.

Таким образом, проведенные лабораторно — диагностические исследования с использованием селективной питательной среды для выделения бактерий рода Haemophilus — SAH, показали, что она позволяла выделять бактерии данного рода при первичном высеве в чистой культуре, а использование всего набора сред (включая АН, АК + V, АК) подтвердило предположение о наличии бактерий данного рода. Во ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича передан на экспертизу проект документации и образцы разработанной питательной среды для выделения бактерий рода Haemophilus (05.07.2007, вх. № 2691).

Для придания питательной среде АК для выращивания нейссерий, о которой говорилось выше, селективных свойств в отношении-N. meningitidis, поэтапно была изучена целесообразность добавления антибиотиков ванкомицина и колистина. Было отмечено, что добавление к среде АК ингибитора роста посторонней микрофлоры — ванкомицина в концентрации 3 мкг/мл не приводило к ингибированию изученных штаммов менингококка и не нарушало ростовые свойства среды АК в отношении менингококка. При обследовании 34 детей на носоглоточное носительство менингококка было показано, что эта среда не ингибирует рост посторонней микрофлоры и слабее подавляет рост непатогенных нейссерий, по сравнению с 1IIA+PV+VCN.

В связи с этим было проведено изучение целесообразности добавления к среде, кроме ванкомицина, других антибиотиков, в частности, колистина (К) (7,5 мкг/мл, как в ША+PV+VCN) и линкомицина (JI, 5 мкг/мл). Полученные результаты показали, что ни один из изученных вариантов сред, даже общепринятое добавление линкомицина, не тормозил рост изученных тест — штаммов: S. aureus 209-Р, S. aureus Wood-46, S. pyogenes Dick, E. faecalis 696/2. Можно предположить, что при добавлении к питательной среде АК линкомицина, влияющего на белковый синтез микроорганизмов, снижая его путём повреждения пептидных связей [108], отмеченное отсутствие эффекта перекрывается высокими ростовыми свойствами использованной питательной среды с экстрактом семян льна.

Ещё в работах основоположников питательной среды Thayer-Martin (ТМ) [113, 125] отмечено, что антибиотические добавки PR (полимиксин и ристоцитин) и, особенно, VCN, подавляют рост непатогенных нейссерий. На среде ТМ с VCNT при изучении фарингеального носительства менингококка и гонококка [115] определено ингибирование роста непатогенных нейссерий, которые выделяли лишь в 0,4% (N. lactamica), 0,2% (N. flavescens) и 0,1% (N. subflava). В то же время, при фарингеальном обследовании 773 здоровых школьников в Канаде с использованием питательной среды только с колистином (7,5мкг/мл) у 2% обнаружено носительство N. meningitidis, у 14%.

— N. lactamica и у 0,5% - N. polysacchareae [88]. При высеве из цервикального канала больной псориатическим артритом [107] штамма, идентифицированного как N. cinerea, выявлена его чувствительность к колистину, как и у тест-штаммов N. flavescens, и В. catarrhalis при устойчивости N. gonorrhoeae. Приведенные исследования свидетельствуют о возможном ингибирующем действии колистина на непатогенные нейссерии. В наших исследованиях перспективным могло оказаться определение концентрации колистина, которая подавляла бы рост непатогенных нейссерий, не ухудшая рост менингококка, для чего были составлены варианты сред, включающие различные концентрации колистина (7,5- 15 и 30 мкг/мл). Результаты этого исследования показали, что колистин в концентрации 7,5 мкг/мл не ингибировал рост изученных штаммов нейссерий (N. flavescens, N. subflavia, N. sicca, N. meningitides, N. gonorrhoeae) — частичное ингибирование непатогенных нейссерий отмечено при 15 мкг/мл и полное их подавление — при 30 мкг/мл колистина, при отсутствии воздействия на изученные штаммы менингококка и гонококка.

Изучение ростовых свойств питательной среды АК в сравнении с МА с сывороткой в отношении тест — штамма N. meningitidis серогруппы В № 13 090 также показало, что добавление к обеим средам 15 мкг/мл колистина не подавляло рост, в то время как при 30 мкг/мл было отмечено небольшое торможение роста тест-штамма.

Таким образом, разработанный вариант питательной среды (АК) без добавления сыворотки, с введением в неё в качестве добавки, ингибирующей рост непатогенных нейссерий и посторонней сопутствующей микрофлоры, ванкомицина (3 мкг/мл) и колистина (15 или 30 мкг/мл), особенно 15 мкг/мл, не тормозило рост менингококка. Эти варианты селективной питательной среды для выделения N. meningitidis (SAM) были исследованы в лабораторно.

— диагностической практике.

Изучение диагностической значимости питательных сред для выделения Neisseria meningitidis (SAM) проведено в двух обследованиях школьников: в первом — 79 детей 14−15 лет (8−9 классы) и во втором — 70 детей 12−16 лет (59 классы).

Анализ результатов показал, что вариант питательной среды АК с ванкомицином и 15 мкг/мл колистина не отличался по количеству выделенных на нём культур менингококка от широко используемого коммерческого селективного агара — среды сравнения ША+PV+VCN: на этих средах выделено по 5 культур. В то же время на среде с 30 мкг/мл колистина выделено на одну культуру меньше (выделено 4 из 5 штаммов), т. е. наблюдается 20% ингибиция роста менингококка по сравнению с приведенными выше средами. Между тем необходимо отметить, что в двух обследованиях (149 детей) на среде с линкомицином менингококк выделен у 8 детей (5,4%), а на AK+V+K15 — у 6 детей (4%). Эти результаты требуют дальнейшего изучения.

С другой стороны, при обследовании на назофарингеальное носительство менингококка проведение анализов затрудняется необходимостью их дифференциации с непатогенными нейссериями. Отсутствие роста на двух разработанных вариантах сред и на ША+PV+VCN, при наличии роста в 47 анализах на средах с линкомицином и без антибиотиков (но в смешанной культуре), а также морфология колоний и мазки из них позволили предположить, что эти культуры относятся к непатогенным видам нейссерий.

Было также показано подавление роста микрофлоры при использовании разработанных вариантов сред и среды сравнения: из 70 проб рост колоний (в виде монокультур) отмечен в 22, 16 и 10 анализах соответственно на средах AK+V+K15, AK+V+K30 и ША+PV+VCN (что составляет 32%, 23% и 14%), т. е. ингибиция роста составляет, соответственно, — 68%, 77% и 86% при 100% росте смешанных культур на среде с линкомицином. Таким образом показано, что добавление к питательной среде линкомицина, регламентированное нормативными документами, слабо задерживает рост I посторонней микрофлоры. При этом рост посторонней микрофлоры в монокультуре на разработанных средах с ванкомицином и колистином (AK+V+K15 и AK+V+K30) наблюдали в 23% и 16% случаев (т.е. соответственно, в 16 и 11 пробах из 70- для сравнения: на ША+PV+VCNтолько в 5 пробах, что составляет 7%).

Таким образом, разработана питательная среда для выделения N. meningitidis, в которой селективные свойства в отношении менингококка обеспечены введением в качестве антибактериальной добавки ванкомицина (3 мкг/мл) и колистина (15 мкг/мл), ингибирующих рост непатогенных нейссерий и посторонней микрофлоры. При этом основу среды для выделения менингококка составляет разработанная ранее питательная среда для выращивания бактерий рода Haemophilus (но без факторов роста) и, что особенно важно, без сыворотки. На данном этапе исследований отмечено, что 30 мкг/мл колистина на 84% тормозит рост посторонней микрофлоры, но в то же время на этой среде на 20% ингибирован рост менингококка (на ней выделено на 1 культуру меньше, чем на среде сравнения — ША+PV+VCN). Следует отметить, что на примере чувствительности некоторых штаммов гонококка к ванкомицину, исследователи советуют при выделении его из образцов, наряду с использованием наиболее эффективной селективной питательной среды с VCN, проводить первичный посев и на среду без антибиотической добавки [120]. В связи с этим, на наш взгляд, целесообразно проводить высев на оба разработанных варианта среды для выделения менингококка (AK+V+K15, AK+V+K30).

В заключение следует отметить, что в результате проведенных исследований разработаны новые питательные среды для выращивания и выделения бактерий рода Haemophilus (SAH) и вида Neisseria meningitidis (SAM) и показана их диагностическая ценность, что может привести к облегчению выделения этих микроорганизмов как при диагностических обследованиях, так и при выявлении носительства.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Г. П., Денисова С. В., Илиджев А. К., Смирнова Г. А., Ратникова Т. Н., Арепьева А. А., Мельникова В. А. Разработка стимуляторов роста бактерий из растений. Журн. микробиологии, 1988, № 1, с. 13−17
  2. И.П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., Медицина, 1962.
  3. Н.Г., Адлова Т. П., Мельникова В. А. Влияние экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов. Журн. микробиологии, 2001, № 5, с. 71−72.
  4. И.А. Стресс у бактерий. М., Медицина, 2003 г., 135 с.
  5. И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М., Медицина, 1992 г., 192 С.
  6. А.С., Сидоренко С. В., Комаров P.M., Писарев В. В. Сравнительная клиника экономическая оценка применения антибиотиков при лечении госпитальных пневмоний. Качественная клиническая практика, 2002, № 4, с. 1−9.
  7. Г. В., Королёва И. С. Клинико-эпидемиологические особенности менингитов. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2007, № 2, с. 20−23.
  8. С.М., Воронина Л. Г. Антибиотикорезистентность Н. influenzae, выделенных от детей с хроническими воспалительными заболеваниями бронхов и легких. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия, 2006, т.8, № 2, Приложение 1, с. 11−12.
  9. Л.Г. Инвазивные инфекции, вызванные Haemopilus influenzae, у детей Екатеринбурга: 15-летнее исследование. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия, 2007, т.9, № 2, Приложение 1, с. 16−17.
  10. JI.Г., БАКСУ*. Этиологическая диагностика гнойных бактериальных менингитов у детей на Среднем Урале. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2005, № 3, с. 18−23.
  11. Л.Г., Грубер И. М., Варгина А. К. Питательная среда для бактерий рода Haemopilus. Тезисы докладов Всесоюзной научно-практической конференции «Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике «, Москва, 18−19 мая 1983 г., с. 173−174.
  12. О.В. Персистенция патогенных бактерий. М., Медицина, 1999, с. 127.
  13. О.В., Усвяцов Б. Я., Карташова О. Л. Биология патогенных кокков. Глава 3. Менингококки. М., Медицина, 2002, с. 123 168
  14. A.A., Иванова М. В., Скрипченко Н. В., Карасев В. В., Иванова Г. П., Пульман Н. Ф., Современные клинические особенности пневмококковых и гемофильных менингитов у детей. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2005, № 3, с. 56−58.
  15. Л.А., Герасимова М. В., Фаустова М. Е., Васильева М. Г., Джаракьян О. Т. Питательная среда для выделения и культивирования пневмококка и гемофильных палочек. Лаборат. дело, 1981, № 1, с. 38−40.
  16. А.Г., Алиева P.O. Разработка рецептуры и технологии приготовления среды для выделения патогенных нейссерий. Сборник
  17. БАКСУ исследовательская группа врачей — бактериологов Среднего Урала.трудов. Разработка и стандартизация бактериологических питательных сред. Москва, 1980 г., с. 46−50.
  18. А.Г., Алиева P.O. О возможности использования казеиново-дрожжевого агара как основы сред для выделения Str. pneumoniae и Н. influenzae. Сборник научных трудов. Острые менингиты. Москва, 1982 г., с. 27−30.
  19. А.Г., Костюкова Н. Н., Алиева P.O., Титова О. В., Берлин С. И., Боришполец З. И. Применение сухого казеиново-дрожжевого агара для культивирования и выделения гонококка. Лаборат. дело, 1981, № 11, с. 688−690.
  20. Гемофильная палочка. Гемофильная инфекция. В кн. «Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований «, под ред. А. С. Лабинской, Л. П. Блинковой, А. С. Ещиной, М., Медицина, 2005, с. 172−181.
  21. И.М., М.Н. Дмитриева, Н. А. Гаврилова, О. В. Жигунова, В. Ф. Нисилевич. Выживаемость факультативно-анаэробных бактерий при использовании коммерческих транспортных систем. Журн. микробиологии, 2001, № 2, с. 10−12.
  22. И.М., Жданова Л. Г., Мохов Ю. В., Горбачев И. Д., Варгина А. К., Ершова З. И. Физиологические особенности пневмококка. Журн. микробиологии, 1981, № 12, с. 24−29.
  23. И.М., Мельникова В. А., Селективная питательная среда для бактерий рода Haemophilus. Клинич. лабораторн. диагностика, 2004, № 1, с. 50−52.
  24. Е.В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. JL, Медицина, 1973, с. 21−31.
  25. А.А., Семенов Б. Ф., Розенквист Э., Робинсон Д.Г. Neisseria meningitidis', от антигенной структуры к новому поколению вакцин. М. Медицина, 2000, 250 С.
  26. А.А. Эпидемиология инвазивных форм заболеваний, обусловленных Н. influenzae тип Ъ. «Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики инфекции, вызываемой Н. influenzae тип Ь. Пастер Мерье Коннот. М., 1998, с.5−8.
  27. Иммунопрофилактика 2007. Справочник — 8-е изд., дополн. ред. В. К. Таточенко, Н. А. Озерецковского. М., 2007.
  28. В.И. Синтетическая питательная среда для управляемого культивирования менингококка и получения группоспецифического В — полисахарида. Дис. канд. мед. наук, 03.00.04-Биологическая химия. М., 1986.
  29. Катосова J1.K. Клинико-биологическая оценка пневмотропной флоры при острых и хронических бронхолегочных болезнях у детей. Автореф. дис. докт. биол. наук. 03.00.07.-Микробиология. М., 1990.
  30. JI.К. Особенности носительства Н. influenzae, S. pneumoniae и сравнительная характеристика штаммов, выделенных от здоровых и больных острыми и хроническими респираторными заболеваниями. Журн. микробиологии, 1994, Приложение, с. 55−59.
  31. Л.К., Богомильский М. Р., Жилина A.M. Haemophilus, influenzae типа b в этиологии острых эпиглоттитов у детей. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия, 2005, т.7, № 2, Приложение 1, с. 32.
  32. Т.В. Разработка методов получения диагностических пневмококковых сывороток. Дис. канд. мед. наук, 03.00.07 -микробиология. М., 1981 г.
  33. В.Г., Марченко В. А., Сыровежко Н. В. Лекарственные растения: мифы и реальность. Традиционная (народная) медицина в объективе науки. СПб., СПХФЛ, 1998, с. 261.
  34. О.В., Гоева C.B., Соболева М. К., Чернышова Л. И., Симантовская Т. П. Особенности этиологии и антибактериальной терапии острого эпиглоттита у детей. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия, 2005, т.7, № 2, Приложение 1, с. 36.
  35. И.С., Белошицкий Г. В., Спирихина Л. В., Закроева И. М., Грачёва A.M. Чистякова Г. Г., Мясников В. А. Эпидемиологические особенности гнойных бактериальных менингитов. Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2006, № 3, с. 8−14.
  36. И.С., Белошицкий Г. В., Лыткина И. Н., Чистякова Г. Г., Заикин В. Л., Малышев H.A., Соловьева Л. Я., Липчанская Т. Я., Этиология и лабораторная диагностика гнойных бактериальных менингитов. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2005, № 3, с. 5−9.
  37. И.С., Белошицкий Г. В., Спирихина Л. В., Закроева И. М., Грачёва А. Чистякова Г. Г., Мясников В. А. Эпидемиологические особенности гнойных бактериальных менингитов. Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2004, № 3, с.8−14.
  38. И.С., Белошицкий Г. В., Спирихина Л. В., Лыткина И. Н., Чистякова Г. Г., Грачева A.M., Закроева И. М. Актуальные вопросы эпидемиологии и вакцинопрофилактики гнойных бактериальных менингитов. Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2005, № 2, с. 26−30
  39. И.С., Лыткина И. Н., Чистякова Г. Г., Свистунова Т. С., Быкова Р. Н. Эпидемиологические особенности носительства Haemophilus influenzae, типа Ъ. Эпидемиология и инфекционные болезни, 2000, № 3, с. 15−19.
  40. М.П., Малеев В.В. Hib-инфекция: вопросы профилактики. М., «Медицина для всех», 1998, с. 6−18.
  41. H.H. Молекулярно-биологические механизмы менингококкового бактерионосительства. Журн. микробиологии, 2000, № 4. Приложение, с. 17−22.
  42. H.H., Бехало В. А. Современные представления о механизмах патогенного действия менингококка. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2005, № 3, с. 40−43.
  43. H.H., Гаджиева А. Г., Алиева P.O., Татарников В. М., Полянин В. А., Хайкина Б. Г., Егорова Т. В. Казеиново-дрожжевой агар для выделения и идентификации менингококка. Лаборат. дело, 1980, № 9, с. 551−553.
  44. H.H., Гаджиева А.Г, Фаньковская Э. К., Боришполец З. И. Стандартизация условий посева и принципы оценки пригодностиплотных питательных сред для менингококка. Лаборат. дело, 1979, № 5, с. 266−269.
  45. М.П., Воронина Л. Г. Изучение назофарингеальногоIносительства Haemophilus influenzae у детей среднего Урала. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия, 2005, т. 7, № 2. Приложение 1, с. 39.
  46. Лабораторная диагностика менингококковых инфекций и гнойных бактериальных менингитов. МУК 4.2.1887−04. М., 2005.
  47. Менингококки. Менингококковая инфекция. В кн. «Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований «, под редакцией А. С. Лабинской, Л. П. Блинковой, А. С, Ещиной. М., Медицина, 2005, с. 64−74.
  48. Менингококковая инфекция и гнойные бактериальные менингиты в Российской Федерации-2003г. Информационно-аналитический обзор. М., 2005.
  49. Менингококковая инфекция и гнойные бактериальные менингиты в Российской Федерации-2005г. Информационно-аналитический обзор. М., 2006.
  50. Менингококковая инфекция и гнойные бактериальные менингиты в Российской Федерации-2006г. Информационно-аналитический обзор. М., 2007.
  51. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. МЗ СССР, М., 1980.
  52. Методические рекомендации по диагностике бактерий рода Haemophilus. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия. 2000, т. 2, № 2, с. 93−109.
  53. Методические рекомендации по применению реакции коагглютинации для быстрой диагностики генерализованных форм менингококковой инфекции у детей. МЗ РСФСР., Куйбышев, 1982.
  54. Методические указания по клинике, диагностике, лечению и профилактике менингококковой инфекции. М., 1973.
  55. И.Б. Эпидемиологическая и микробиологическая характеристика менингококкового носительства в период спада заболеваемости. Дисс. канд. мед. наук., М., 1992.
  56. Ю.В. Рост и размножение S. pneumoniae при глубинном культивировании. Дис. канд. мед. наук 03.00.07 микробиология, М., 1982.
  57. О мерах по усилению эпидемиологического надзора и профилактики менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов. Приказ МЗ РФ № 375 от 23.12.1998 г. М., 1998.
  58. Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностическихлабораториях лечебно профилактических учреждений. Приказ № 535 МЗ СССР от 22 апреля 1985 г. М., 1985, с. 18−19.
  59. С.М. Сухие питательные среды для культивирования пневмококка и менингококка. Дис. канд. мед. наук, 03.00.07-Микробиология. М., 1990.
  60. Г. Г. Актуальные вопросы обеспечения санитарного и эпидемиологического благополучия населения Российской Федерации. Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2007, № 3 с. 6−22.
  61. O.E. Влияние компонентов питательной среды на рост и синтез капсульного полисахарида Haemophilus influenzae В. Дис. канд. биол. наук, 03.00.07-Микробиология. М., 2004.
  62. O.E., Ястребова Н. Е., Елкина С. И. Особенности состава синтетических питательных сред для культивирования Haemophilus influenzae типа В с позиций современных представлений о метаболизме этих бактерий. Журн. микробиологии, 2001, № 3, с. 111−117.
  63. А.Е., Королева И. С., Платонова О. В., Покровский В. И. и Московская группа по исследованию гемофильных менингитов*. Заболеваемость гнойными менингитами у детей в возрасте до 5 лет в Москве. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2006, № 4, 36−43.
  64. А.Е., Николаев М. К. Заболеваемость гнойными менингитами у детей в возрасте до 5 лет в регионах России. Эпидемиология и инфекцион. болезни, 2007, № 3 с. 10−18.
  65. В состав Московской группы по исследованию гемофильных менингитов входит 25 представителей ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Центра Гсэн в Москве, 8 профильных стационаров.
  66. В.М., Мельникова В. А., Грубер И. М., Смирнова Г. А., Раскин Б. М. Конструирование питательной среды для бактерий рода Haemophilus продуцентов рестриктирующих эндонуклеаз. Журн. микробиологии, 1989, № 3, с. 3−8.
  67. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Под редакцией JI.C. Страчунского, Ю. Б. Белоусова, С. Н. Козлова. М., 2002, с. 212−228.
  68. Н.А., Минаева О. В., Романова Т. М. Особенности спектра возбудителей пневмонии в Мордовии. Клинич. микробиология и антимикробн. химиотерапия, 2007, т.9, № 2, Приложение 1, с. 35.
  69. .М., Мельникова В. А., Денисова С. В., Перельман Е. В., Лобова Е. А., Штанчаева С. М. Перспективы использования кровезаменителей отечественного производства с истекшим сроком годности. Журн. микробиологии, 1978, № 6, с. 85−89.
  70. Санитарные правила «Профилактика менингококковой инфекции», (СП 3.1.2.2156−06). 2007.
  71. Стимулятор роста Haemophilus influenzae жидкий. ФСП -425 662 505. Ростовский научно — исследовательский институт микробиологии и паразитологии. Срок введения установлен «07.07.2006». Срок действия до «07.07.2011».
  72. JI.A., Генчиков JI.A. О распространении носительства менингококка. Журн. микробиологии, 1966, № 9, с. 25−29.
  73. Э.К., Костюкова Н. Н., Круман И. И. Культивирование N. meningitidis серогруппы, А на полусинтетических жидких питательных средах. Журн. микробиологии, 1975, № 9, с. 92−96.
  74. В. Вакцинация против инфекции, вызванной Haemophilus influenzae типа b: неоправданная инициатива или насущная потребность? Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2006, № 2, с. 4−7.
  75. В.П., Виноградов Е. Я., Раскин Б. М., Мельникова В. А. Питательная среда для культивирования менингококков. Авт. свид. № 990 810. Бюл. № 3, 1983 г.
  76. Altman G., Egoz N., Bogokovsky В. Observation on asymptomatic Infections with Neisseria meningitidis. Amer. J. Epidem., 1973, Vol.98, № 6, P. 446−452.
  77. Anand C.M., Ashton F., Shaw H., Gordon R. Variability in growth of Neisseria polysaccharea on colistin-containing selective media for Neisseria spp. J. Clin. Microbiol., 1991, Vol.29, № 11, P.2434−2437.
  78. Berger U. Neue Elektivnahrboden fur N. meningitidis and N.gonorrhoeae. Z. Med. Mikrobiol. Immunol., 1966, Bd. 152, S. 169−172.
  79. Berger U. Studies on the number of meningococcal carriers. Z. Med. Microbiol, 1967, Bd.153, S. 190−193.
  80. Bol P., Spanjard L, Arends A. Epidemiology of Haemophilus influenzae meningitis in children 0−6 years of age. Thesis, the University of Amsterdam, 1987. P. 125−140.
  81. Bronson J.-E, Holmberg I, Nygren B, Steeberg S. Vancomycin-sensitive strains of Neisseria gonorrehoeae. A problem for the diagnostic laboratory. Brit. J. vener. Dis, 1973, Vol.49, P.452−453.
  82. Campos J.M. Haemophilus spp. In: Murrey P. R, Baron E J, Pfaller M. A, Tenover F. C, Yolken R. H, editors. Manual of clinical Microbiology. 7th ed. ASM Press- 1999, P. 604−613.
  83. Catlin B.W. Nutritional profiles of Neisseria gonorrehoeae, Neisseria meningitidis and Neisseria lactamica in chemically defined media and the use of growth requirements gonococcal typing. I. Infect. Dis. 1973, August, 128 (2), P. 178−194.
  84. Chin W. L, Lawson J.W. Effect of antibiotics on L-form on Neisseria meningitidis. Antimicrob. Agents Chemiother, 1976, Vol.9, № 6, P.1056−1065.
  85. Claesson B. A, Trollfors B, Ekstrom-Jodal B. Insidence and prognosis of acute epiglotittis in children in a Sweden region. Pediatr. Infecct. Dis, 1984, Vol.3, P. 534−538.
  86. Dabernat H.J. European multicentre study of the prevalence of antibiotic resistance among Haemophilus influenzae strains. The implications and treatment of Haemophilus influenzae infections in the lower respiratory tract. 1994, P. 3−10.
  87. Dajani A. S, Asmur B. I, Thirumoorthi M.B. Systemic Haemophilus influenzae disease: an overview. J. Pediatr, 1979, Vol. 94, P.355−364.
  88. Eikhoff T.C. Meningococcal infections in the United States: a status report with reference to the state of Louisiana. J. Louisiana State. Med. Soc, 1966, Vol.118, № 12, P. 484−492.
  89. Faden H., Duffy L., Wasielewski R. et al. Relationship between nasopharyngeal colonization and the development of otitis media in children. J. Infect. Dis., 1997, Vol.175, P. 1440−1445.
  90. Fleischman R.D., Adams M.D., White O., Clauton R.A., Kirkness E.F., Kerlawage A.R., et.al. Whole genome random sequence and assembly of Haemophilus influenzae Rd. Science, 1995, 269, P.496−512.
  91. Generic Protocol for Population Based Surveillance of Haemophilus influenzae Type b. Document WHO/ VRD/ GEN/95.05/Levine O.S., Schuchat A., Schwartz B. et al-Geneva: World Health Organisation, 1995.
  92. Granoff D.M., Basden M. Haemophilus influenzae type b in Fresno country, California: a prospective study of effects of age, race and contact with case on incidence of disease. J. Infect. Dis., 1980, Vol. 141, P. 40−46.
  93. Greenfield S., Feldman H.A. Familian earners and meningococcal meningitis. N. Engl. J. Med., 1967, № 277, P. 487−502.
  94. Herriot R.M., Meyer E.M., Vogt M., Modar M. Defined medium for growth of Haemophilus influenzae. J. Bacterid., 1970, Feb., P.513−516.
  95. Jacobs N.F. The clinical management of patients with acute and chronic bronchitis. The implications and treatment of Haemophilus influenzae infections in the lower respiratory tract. 1994, P. 39−49.
  96. Knapp J.S., Totten P.A., Mulks M.H., Minshew B.H. Characterisation of Neisseria cinerea, a nonpathogenic species isolated on Martin-Lewis medium selective for pathogenic Neisseria spp. J. Clinical Microbiol., 1984, Vol.19, № 1, P.63−67.
  97. Kristiansen B.E., Rustad L., Spanne O., Bjorvatn B. Effect of subminimal inhibitory concentrations of antimicrobial agents on piliation and adherece of Neisseria meningitidis. Antimicrob. Agents Chemiother., 1983, Vol.24, № 5, P.731−734.
  98. Laboratory Manual for the Diagnosis of Meningitis Caused by Neisseria Meningitidis, Streptococcus Pneumoniae and Haemophilus
  99. Rello J., Sa-Borges M., Correa H. et al. Variation in etiology of ventilator — assotiated pneumonia across four treatment sites. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1999, Vol. 160, P. 608−613.
  100. Renga G., Mellino M., Caruso E. Ricerca di portatori N. meningitidis in corso di recrucescenza di meningite cerebrospinale epidemica. J. Hyg. Med., 1968, Vol. 61, № 5/6, P. 342−358.
  101. Reyn A., Bentzon M.W. Comparison of selective and non-selective medium in the diagnosis of gonorrhea to ascertain the sensitivity of Neisseria gonorrehoeae to vancomycin. Brit. J. vener. Dis., 1972, Vol.48, P.363−368.
  102. Riddell R.H., Buck A.C. Trimethoprim as an additional selective agent in media for isolation of N. gonorrhoeae. J. clin. Path., 1970, Vol.23, P.481−483.
  103. Rohn R.J., Moxon R. Phenotypic variation in Haemophilus influenzae: The interrelationship of colony opacity, capsule and lipopolysaccharide. Microb. Pathog., 1995, Vol.18, P. 129−140. ?
  104. Shilling C.H., Palson B.O. Assessment of the metabolic capabilities of Haemophilus influenzae Rd through a genom scale pathway analysis. J. Theor. Biol., 2000, 203 (3), P.249−284.
  105. Thayer J.D., Martin J.E. Improved medium selective for the cultivation of N. gonorrhoeae and N. meningitidis. Publ. Health Rep., 1966, Vol. 81, № 6, P.559−562.
  106. Tatusov R.L., Mushegian A.R. et al. Metabolism and evolution of Haemophilus influenzae deduced from whole genome comparison with Escherichia coli. Curr. Biol., 1996, 6(3), P.279−291.
  107. Trouiller J-Z., Chastre J., Vuagnat et al. Ventilatorassociated pneumoniae caused by potentially drug resistant bacteria. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1998, Vol. 157, P. 531−539.
  108. Turk D.C. The pathogenicity of Haemophilus influenzae. J. Med. Microbiol., 1984, Vol. 18, P. 1−16.1.fluenzae. Document WHO/ CDS/ CSR/ EDC/ 99.7/ Popovic T., Ajello G., Facklam R. et al Geneva: World Health Organisation, 1999.
  109. Leiberman A., Dagan R., Leibovitz E. et al. Bacteriology of nasopharynx in childhood. Intern. J. Pediatr. Otorinolaryng ., 1999, Vol.49, suppl. l, S.151−153.
  110. Linsk R.Z., Hussain R.S., Ozor C. E Nasopharyngeal colonization in healthy young adult: Proceed. 40th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Washington, 2000, P. 112.
  111. Martin J.E., Armstrong J.H., Smith P.B. New system for cultivating oi Neisseria gonorrhoeae. Appl. Microbiol., 1974, Vol.27, № 4, P.802−805.
  112. Martin J. E., Billing T.E., Hackney J.F., Thayer J.D. Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Publ. Health Rep., 1967, Vol.82, № 4, P. 361−367.
  113. Merrit J., Allard G., O’Tool, Swartz R., Licari P. Development of fed-batch process for the production of capsular polysaccharide from Haemophilus influenzae. J. Biotechnol., 2000, № 8, P. 189−197.
  114. Noble R.C., Cooper R.M., Miller B.R. Pharyngeal colonization by Neisseria gonorrehoeae and Neisseria meningitidis in black and white patients attending a veneral disease clinic. Brit. J.Vener. Dis., 1979, Vol.55, P.14−19.
  115. Pannekoek Y., Van Putten I.P.M., Dankert I. Identification and molecular analysis of a 63-Kilodalton stress protein from Neisseria gonorrhoeae. J. Bacterid., 1992, Vol. 174, № 21, P. 6928−6937.
  116. Peltola H., Kayhty H., Virtanen M., Makela P.H. Prevention of Haemophilus influenzae type b bacteremic infections with the capsular polysaccharide vaccine. N. Engl. J. Med., 1984, Vol. 310, P. 1566−1569.
  117. Reichart C.A., Rupkey L.M., Brady W.E., Hook E.W. Comparison of GC-Lect and modified Thayer-Martin media for isolation of Neisseria gonorrhoeae. J. Clinical Microbiol., 1989, Vol.27, № 5, P.808−811.
  118. WHO-recommended standarts for surveillance of selected vaccine-preventable diseases. WHO, Geneva-2003, P. 41.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!