Роль динеин-динактинового комплекса в организации системы микротрубочек в интерфазных клетках
Ингибирование динеина, вызванное разобщением с динактином, приводит к нарушению удержания микротрубочек на центросоме, при этом нуклеирующая активность центросомы сохраняется.2. Подавление экспрессии протеинкиназы LOSK приводит к уменьшению содержания динактина на центросоме, нарушению удержания микротрубочек на центросоме и к хаотизации системы микротрубочек клетки.3. Субъединица динактинового… Читать ещё >
Содержание
- ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- Строение микротрубочек
- Динеин-зависимый транспорт молекул и органелл по микротрубочкам
- Структура динеин-динактинового комплекса
- Участие динеин-динактинового комплекса во внутриклеточном транспорте
- Взаимодействие динеин-динактинового комплекса с микротрубочками
- Организация микротрубочек в клетке
- Нуклеация миктротрубочек на центросоме
- Участие динеина в процессах нуклеации микротрубочек
- Заякоривание микротрубочек на центросоме
- Участие динеин-динактинового комплекса в заякоривании микротрубочек на центросоме
- Роль протеинкиназ в регуляции организации микротрубочек
- Строение и функции протеинкиназы LOSK
- ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
- Молекулярное клонирование
- RT-PCR
- Электрофорез белков в полиакриламидном геле и Вестерн-блоттинг
- Экспрессия в бактериях и аффинная очистка белка
- Соосаждение с микротрубочками
- Сборка микротрубочек на центросомах in vitro
- Киназная реакция in vitro
- Получение поликлональной сыворотки
- Антитела
- Культивирование клеток
- Микроскопия
- РЕЗУЛЬТАТЫ
- Полученные в работе ДНК-конструкты
- Оценка степени радиальности микротрубочек
- Ингибирование динеина, вызванное разобщением с динактином, приводит к нарушению удержания микротрубочек на центросоме, при этом нуклеирующая активность
- Микроскопия, РЕЗУЛЬТАТЫ
- Полученные в работе ДНК-конструкты
- Оценка степени радиальности микротрубочек
- Ингибирование динеина, вызванное разобщением с динактином, приводит к нарушению удержания микротрубочек на центросоме, при этом нуклеирующая активность центросомы сохраняется
- Нокдаун протеинкиназы LOSK приводит к хаотизации системы микротрубочек, уменьшению содержания динактина на центросоме и нарушению поляризации аппарата Гольджи на краю раны в монослое
- Субъединица динактинового комплекса белок pl50Glued является субстратом фосфорилирования LOSK (Thr 145−147) in vitro
- Фосфорилирование динактина по П1Г145.147 способствует поддержанию радиальной организации микротрубочек
Белок pl50Glued экспрессируется в виде двух изоформ, отличающихся длиной МТ-связывающего участка. Изоформы pl50Glued по-разному взаимодействуют с микротрубочками: pl50Glued-lA, имеющая большее сродство, распределяется по всей длине микротрубочек, а менее аффинная pl50Glued-lB — локализуется на «плюс"-концах микротрубочек.
Белок р150С1ие (1тканеспецифично экспрессируется в виде двух изоформ. Изоформа pl50Glued-lA доминирует в тканях нервного происхождения и в минорных количествах обнаруживается в культивируемых клетах- изоформа pl50GIued-lB экспрессируется повсеместно.
Экспрессия изоформы pl50Glucd-lA в культивируемых клетках увеличивается при нарушении конфлюэнтности монослоя, и этот белок преимущественно распределяется вдоль микротрубочек, обращенных к ведущему краю клетки.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ:.
Роль динеин-динактинового комплекса в организации системы микротрубочек в интерфазных клетках (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
1. Ингибирование динеина, вызванное разобщением с динактином, приводит к нарушению удержания микротрубочек на центросоме, при этом нуклеирующая активность центросомы сохраняется.2. Подавление экспрессии протеинкиназы LOSK приводит к уменьшению содержания динактина на центросоме, нарушению удержания микротрубочек на центросоме и к хаотизации системы микротрубочек клетки.3. Субъединица динактинового комплекса белок pl50G l u e d является субстратом фосфорилирования протеинкиназой LOSK in vitro. Сайт фосфорилирования представляет собой три следующих друг за другом остатка треонина (145−147). Фосфорилирование р150 и е по этим положениям способствует поддержанию радиальной организации микротрубочек в клетке.4. Белок pl50G l u e d тканеспецифично экспрессируется в виде двух изоформ, отличающихся длиной участка связывания микротрубочек. Изоформа pl50G l u e d-lA доминирует в тканях нервного происхождения и в минорных количествах обнаруживается в культивируемых клеткахизоформа pl50G l u e d-lB экспрессируется повсеместно.5. Изоформы р150 и е по-разному взаимодействуют с микротрубочками: pl50 G u e -1А, имеющая большее сродство, распределяется по всей длине микротрубочек, а менее аффинная pl50G l u e d-lB — локализуется на плюс-концах микротрубочек.6. Экспрессия в культивируемых клетках изоформы pl50 G u e -1А увеличивается при нарушении конфлюэнтности монослоя, и эта изоформа преимущественно распределяется вдоль микротрубочек, обращенных к ведущему краю клетки.