Активация и транспорт в ядро МАР-киназы под действием эпидермального фактора роста (ЭФР) в клетках с различными мутациями рецептора ЭФР

ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Следует отметить, что ни в одной из работ, касающихся активации МАР-киназы в клетках, экспрессирующих мутантный рецептор ЭФР, не исследовался ее транспорт в ядро, то есть на вопрос требуется ли для транспорта в ядро МАР-киназы активация всех (или некоторых) сигнальных путей, стимулируемых ЭФР, ответа пока не получено. Таким образом, очевидно, что процессы ЭФР-стимулированной активации и ядерного… Читать ещё >

Содержание

1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- 2. 1. Эпидермальный фактор роста (ЭФР) и его рецептор
- 2. 2. Связывание с лигандами и активация ЕгЬВ
- 2. 3. Передача сигнала с ЭФР-Р
- 2. 4. МАР-киназный каскад
  - 2. 4. 1. Активация МАР-киназного каскада рецептором ЭФР
  - 2. 4. 2. Регуляция МАРК каскада
  - 2. 4. 3. Мишени МАР-киназы
  - 2. 4. 4. Субклеточное распределение участников ЕГЧК каскада
- 2. 5. Участие цитоскелета в проведении сигнала
- 2. 6. Взаимодействие сигнальных путей
- 2. 7. Транспорт в ядро сигнальных молекул
  - 2. 7. 1. Классический путь
  - 2. 7. 2. Альтернативные пути транспорта
  - 2. 7. 3. Регуляция транспорта в ядро
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
- 3. 1. Культивирование клеток
- 3. 2. Обработка клеток нокодазолом, цитохалазином Д, колхицином, таксолом и циклогексимидом
- 3. 3. Антитела
- 3. 4. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток
- 3. 5. Конъюгация пероксидазы с антителами
- 3. 6. Получение антител
- 3. 7. Иммунопреципитация
- 3. 8. Субклеточное фракционирование
- 3. 9. Аффинная хроматография
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
- 4. 1. МАР-киназа активируется различными агонистами
- 4. 2. Исследование роли тирозинкиназы и С-терминального домена рецептора в активации и ядерном транспорте МАР-киназы
- 4. 3. Влияние нокодазола и цитохалазина на активацию и транспорт МАР-киназы в ядро
- 4. 4. МАР-киназа ассоциирована с эндоплазматическим ретикулумом
- 4. 5. Транспорт МАР-киназы в ядро не опосредуется кариоферином а
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ

Активация и транспорт в ядро МАР-киназы под действием эпидермального фактора роста (ЭФР) в клетках с различными мутациями рецептора ЭФР (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Действие эпидермального фактора роста (ЭФР) на клетки реализуется через специфический рецептор — крупный трансмембранный белок, обладающий тирозинкиназной (ТК) активностью и несколькими сайтами автофосфорилирования, находящимися на С-конце рецептора. Связывание ЭФР с рецептором приводит к стимуляции ТК и инициирует два ряда событий: активацию сигнальных путей и интернализацию ЭФР-рецепторных комплексов. Среди сигнальных путей, стимулируемых ЭФР, особое место занимает МАР-киназный каскад, которому в последнее время отводится едва ли не самая главная роль в опосредовании клеточного ответа на внешний стимул. Этот каскад включает ряд серин-треониновых протеинкиназ и состоит из двух способов активации МАР-киназы (МАРК) разных субклассов. В настоящее время выделяют три субкласса МАР-киназ: ERK, JNK (SAPK) и р38МАРК (Marshall, 1994). Активация так называемого ERK-пути происходит посредством активации малой ГТФазы Ras. Сигнал с активированного Ras передается на каскад серин-треониновых протеинкиназ, первой из которых явялется c-Raf киназа. Сигнал с c-Raf передается на киназу МАРК (МАРКК или МЕК), которая в свою очередь активирует фосфорилированием МАР-киназу. Активная форма МАР-киназы транслоцируется затем в ядро, где фосфорилирует белки Elk-1 и Elf-1, входящие в тернарный комплекс транскрипционных факторов, а также транскрипционный фактор Sapla. В настоящее время описано семь различных изоформ ERK, две из которых являются основными — р42 и р44 МАР-киназа (или ERK1, 2). Другие два субкласса МАРК активируются клеточным стрессом по механизму «стресс — Rho — МАРКК4.6 — р38МАРКSAPK «. Активные формы этих киназ также регулируют работу генов раннего ответа через Elk-1 (Landeret al., 1996).

Известно, что связывание лиганда с рецептором ЭФР приводит к димеризации рецепторов и активации тирозинкиназы, которая фосфорилирует пять тирозинов, расположенных на карбоксильном конце рецептора (Никольский и др., 1987). Эти фосфорилированные тирозины являются сайтами для ассоциации с сигнальными белками. Различные изменения (точечные мутации и делеции в регуляторных и функциональных зонах рецептора) приводят к нарушению работы этой цепочки. Проводимые исследования на клетках линии К721, экспрессирующих рецептор ЭФР с неактивной ТК, продемонстрировали отсутствие активации таких важнейших клеточных регуляторов, как белки STAT1, р62, Gap, однако, вопрос о статусе фосфорилирования МАРК остается открытым. О роли С-конца рецептора в процессе активации сигнальных каскадов можно судить по данным, полученным на клеточных линиях, экспрессирующих рецепторы, лишенные 123, 165, 196 и 214 С-концевых аминокислот. Эти результаты свидетельствуют о том, что отсутствие или замена всех сайтов автофосфорилирования не снимают лиганд-зависимое активирование МАР-киназ, которые, возможно, используют некоторые клеточные белки, фосфорилированные по тирозину, как суррогат (Li et al., 1994).

Несмотря на определенные успехи в идентификации белков, участвующих в активации ERK, существует мало сведений о ядерной транслокации этой протеинкиназы. Было показано, что транспорт ее в ядро при стимуляции клеток эмбриональной сывороткой достигает максимума через 3 ч, в то время как стимуляция клеток ростовыми факторами или непосредственными активаторами МАРК приводит к быстрому ее накоплению в ядре уже к 15-ой минуте (Sano et al., 1995). Была продемонстрирована способность ERK активироваться и перемещаться в ядро под действием TGF в пролиферативной части цикла и не активироваться в ответ на тот же митоген в процессе дифференцировки фибробластов (Sauma et al., 1995). Безусловно, небольшое количество данных о ядерной транслокации МАР-киназы объясняется тем, что в настоящий момент совершенно неизвестен механизм ядерного импорта этого фермента. Поскольку у ERK не обнаружена ни одна из известных последовательностей ядерного импорта (NLS), существует несколько предположений относительно способов транспорта МАР-киназы в ядро. Так как известно, что только фосфорилированная форма МАРК способна к ядерной транслокации, был предложен механизм ассоциации МАРК и МАРКК, как необходимое условие для импорта в ядро. Однако этот механизм не может быть универсальным, поскольку он не объясняет, например, процесс транспорта микроинъецированной активной МАРК (Fukuda et al., 1997). Но какими бы ни были разногласия относительно механизмов транслокации ERK в ядро, все исследователи единодушны в одном — для этого процесса необходимо наличие фосфорилированнной ERK.

Регуляция транспорта в ядро белковых молекул может происходить на нескольких уровнях, в том числе и на уровне заякоривания комплекса на ядерной поре и его транслокации в ядро. Следует отметить, что именно этот способ регуляции может зависеть от целостности клеточного цитоскелета, поскольку белки ядерного порового комплекса тесно связаны как с ядерными ламинами (промежуточные филаменты), так и с цитоплазматическим актином и, возможно, с тубулином.

В настоящее время существует мало данных о роли как актинового, так и тубулинового цитоскелета в регуляции активации и транспорта в ядро различных сигнальных молекул. Недавно было продемонстрировано, что ядерный транспорт протеинкиназы С, не имеющей последовательности ядерной локализации, требует наличия интактного цитоскелета (Schmalz et al., 1996). Также показана роль микротрубочек в транспорте капсидов вируса герпеса от плазматической мембраны в ядро (Sodeiketal., 1997).

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

6. ВЫВОДЫ.

1. Для транспорта в ядро МАР-киназы под действием ЭФР необходимо присутствие активной тирозинкиназы рецептора ЭФР, поскольку динамика активации и ядерного импорта в клеточных линиях, экспрессирующих как рецептор ЭФР полной длины (НЕР14), так и рецептор ЭФР, лишенный основных сайтов автофосфорилирования (С0126) является одинаковой, а клетки, несущие рецептор ЭФР, лишенный ТК-активности, не обладают способностью к ЭФР-зависимой активации и транспорту в ядро МАР-киназы.

2. Для эффективного транспорта в ядро МАР-киназы требуется присутствие интактного актинового цитоскелета.

3. Деполимеризация тубулинового цитоскелета стимулирует активацию и ядерный импорт МАР-киназы и усиливает транспорт в ядро МАРК в клетках, обработанных ЭФР.

4. Неактивная форма МАР-киназы частично локализуется на мембранах эндоплазматического ретикулума, и именно ЭПР-ассоциированная МАР-киназа участвует в транспорте в ядро.

5. МАР-киназа не ассоциируется с кариоферином а, следовательно, механизм ее ядерной транслокации отличается от классического.

Показать весь текст

Список литературы

Корнилова Е.С., Соркин А. Д., Никольский Н. Н. 1987. Динамика компартментализации эпидермального фактора роста в клетках А431. Цитология. 29: 904−910.
Никольский Н.Н., Соркин А. Д., Сорокин А. Б. 1987. Эпидермальный фактор роста. Л.: Наука. 200 с.
Никольский Н.Н., Богданова Н. П., Виноградова Н. А., Нестеров A.M., Соркин А. Д., Сорокин А. Б. 1985. Стимулирующее действие эпидермального фактора роста и инсулина на фосфорилирование уридина в клетках ЗТЗ и ЗТ6. Цитология. 27(12): 1367−1373.
Соколова И.П., Арнаутов A.M., Никольский Н. Н., Корнилова Е. С. 1998. Исследование ассоциации малой ГТФ-азы Rab7 с эндосомами клеток, экспрессирующих нормальный и мутантные формы рецептора эпидермального фактора роста. Цитология. 40(10): 862−868.
Adam S.A., Sterne Marr R., Gerace L. 1990. Nuclear protein import in permeabilized mammalian cells requires soluble cytoplasmic factors. J. Cell. Biol. 111: 807−816.
Alimandi M., Romano A., Curia M.C., Murano R., Fedi P., Aaronson S.A., DiFiore P.P., Kraus M.H. 1995. Cooperative signalling of ЕгЬВЗ and ErbB2 in neoplasmic transformation and human mammary carcinomas. Oncogene. 10:1813−1821.
Avruch J., Zhang X.F., Kyriakis J.M. 1994. Raf meets Ras: complet-ing the framework of a signal transduction pathway. Trends Biochem. Sci. 19: 279−283.
Brunet A., Roux D., Lenormand P., Dowd S., Keyse S., Pouyssegur J. 1998. Nuclear translocation of p42/p44 mitogen-activated protein kinase is required for growth factor-induced gene expression and cell cycle entry. EMBO J. 18: 664−674.
Carpenter G. 1992. Receptor tyrosine kinase substrates: src homology domains and signal transduction. FASEB J. 6: 3283−3289.
Carraway K.L., Carraway C.A. 1995. Signaling, mitogenesis and the cytoskeleton: where the action is. Bioessays. 17: 171−175.
Chang H., Riese D.J., Gilbert W., Stern D.F., McMahan U.J. 1997. Ligands for ErbB family receptors encoded by a newly-characterized neuregulin-like gene. Nature. 387: 509−512.
Charlesworth A., Rozengurt E. 1997. Bombesin and neuromedin B stimulate the activation of p42(mapk) and p74(raf-1) via a protein kinase C-independent pathway in Rat-1 cells. Oncogene. 14: 2323−2329.
Chen Q., Kinch M.S., Lin T.H., Burridge K., Juliano R.L. 1994. Integrin-mediated cell adhesion activates mitogen-activated protein kinases. J. Biol. Chem. 269: 26 602−26 605.
Chen R.H., Sarnecki C., Blenis J. 1992. Nuclear localization and regulation of erk- and rsk-encoded protein kinases. Mol. Cell. Biol. 12:915−927.
Chen W.S., Lazar C.S., Poenie M" Tsien R.Y., Cill G.N., Rosenfeld M.G. 1987. Requirement for intrinsic protein tyrosine kinase in the immediate and late action of the EGF-receptor. Nature. 328: 820−823.
Chen W., Martindale J.L., Holbrook N.J., Liu Y. 1998. Tumor promoter arsenite activates extracellular signal-regulated kinase through a signalling pathway mediated by epidermal growth factor receptor and She. Mol. Cell. Biol. 18: 5178−5188.
Coker K.J., Staros J.V., Guyer C.A. 1994. A kinase-negative epidermal growth factor receptor that retains the capacity to stimulate DNA synthesis. Proc. Natl. Acad. Sci. 91: 6967−6971.
Coffer P.J., Kruijer W. 1995. EGF receptor deletions define a region specifically mediating STAT transcription factor activation. Biochem. Biophys. Res. Comm. 210: 74−81.
Cohen B.D., Green J.M., Foy L., Fell H.P. 1996. HER4-mediated biological and biochemical properties in NIH3T3 cells. J. Biol. Chem. 271:4813−4818.
Coso O.A., Chiariello M., Yu J.C., Teramoto H., Crespo P., et al. 1995. The small GTP-binding proteins Rac1 and Cdc42 regulate the activity of the JNK/SAPK signaling pathway. Cell. 81: 11 371 146.
Cowley S., Paterson H., Kemp P., Marshall C.J. 1994. Activation of MAP kinase kinase is necessary and sufficient for PC 12 differentiation and for transformation of NIH 3T3 cells. Cell. 77: 841 852.
Daub H., Wallasch C., Lankenau A., Herrlich A., Ulrich A. 1997. Signal characteristic of G protein-transactivated EGF receptor. EMBO J. 16: 7032−7044.
Daub H., Weiss F.U., Wallasch C., Ullrich A. 1996. Role of transactivation of the EGF receptor in signalling by G-protein-coupled receptors. Nature. 379: 557−560.
Davis R.J. 1988. Independent mechanism account for the regulation by PKC of the EGFR affinity and tyrosine kinase activity. J. Biol. Chem. 263: 9462−9469.
Davis R.J. 1993. The mitogen-activated protein kinase signal transduction pathway. J. Biol. Chem. 268: 14 553−14 556.
Dhanasekaran N., Reddy E., Premkumar P. Signaling by dual specificity kinases. 1998. Oncogene. 17:1447−1455.
Downward J., Parker P., Waterfield M.D. 1984. Autophosphorylation sites on the epidermal growth factor receptor. Nature. 311:483−485.
Elliott G., O’Hare P. 1997. Intercellular trafficking and protein delivery by a herpesvirus structural protein. Cell. 88: 223−233.
Englmeier L., Olivo J.C., Mattaj I.W. 1999. Receptor-mediated substrate translocation through the nuclear pore complex without nucleotide triphosphate hydrolysis. Curr. Biol. 9: 30−41 .
Ferrigno P., Posas F., Koepp D., Saito H., Silver P.A. 1998. Regulated nucleo/cytoplasmic exchange of HOG1 MAPK requires the importin J3 homologs NMD5 and XP01. EMBO J. 17: 5606−5614.
Fleischer S., Kervina M. 1974. Subcellular fractionation of rat liver. Methods Enzymol. 31: 6−41.
Floer M., Blobel G., Rexach M. 1997. Disassembly of RanGTP-karyopherin beta complex, an intermediate in nuclear protein import. J. Biol. Chem. 272: 19 538−19 546.
Fornerod M., Ohno M., Yoshida M., Mattaj I.W. 1997. Crmlp is an export receptor for leucine rich nuclear export signals. Cell. 90: 1051−1060.
Frost J.A., Steen H., Shapiro P., Lewis T., Ahn N. Shaw P.E., Cobb M.H. 1997. Cross-cascade activation of ERKs and ternary complex factors by Rho family proteins. EMBO J. 16: 6426−6438.
Fukuda M., Gotoh Y., Nishida E. 1997. Interaction of MAP kinase with MAP kinase kinase: its possible role in the control of nucleocytoplasmic transport of MAP kinase. EMBO J. 16: 19 011 908.
Gale N.W., Kaplan S., Lowenstein E.J., Schlessinger J. Bar-Sagi D. 1993. Grb2 mediates the EGF-dependent activation of guanine nucleotide exchange on Ras. Nature. 363: 88−92.
Goillot E., Raingeaud J., Ranger A., Tepper R.I., Davis R.J., Harlow E., Sanchez I. 1997. Mitogen-activated protein kinase-mediated Fas apoptotic signalling pathway. Proc. Natl. Acad. Sci. 94: 3302−3307.
Gorlich D. 1998. Transport into and out of the cell nucleus. EMBO J. 17: 2721−2727.
Gorlich D., Mattaj I.W. 1996. Nuclearcytoplasmic transport. Science. 271: 1513−1518.
Gorlich D., Prehn S., Laskey R.A., Hartmann E. 1994. Isolation of a protein that is essential for the first step of nuclear protein import. Cell. 79: 767−778.
Gotoh Y., Nishida E., Sakai H. 1990. Okadaic acid activates microtubule-associated protein kinase in quiescent fibroblastic cells. Eur. J. Biochem. 193: 671−674.
Graus-Porta D., Beerli R.R., Daly J.M., Hynes N.E. 1997. ErbB2, the preferred heterodimerization partner of all erbB receptors, is a mediator of lateral signalling. EMBO J. 16:1647−1655.
Guyton K.Z., Liu Y., Gorospe M" Xu Q., Holbrook N.J. 1996. Activation of mitogen-activated protein kinase by H202. Role in cell survival following oxidant injury. J. Biol. Chem. 271: 4138−4142.
Heldin C.H. 1995. Dimerization of cell surface receptors in signal transduction. Cell. 80: 213−223.
Hill C.S., Wynne J., Treisman R. 1995. The Rho family GTPases RhoA, Rac1, and CDC42Hs regulate transcriptional activation by SRF. Cell. 81: 1159−1170.
Hirano M., Osada S., Aoki T., Hirai S., Hosaka M., Inoue J., OhnoS. 1996. MEK kinase is involved in tumor necrosis factor alpha-induced NF-kB activation and degradation of IkB-a. J. Biol. Chem. 71: 13 234−13 238.
Huang C-X.F., Ferrell J.E. 1997. Ultrasensitivity in the mitogen-activated protein kinase cascade. Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 10 078−10 083.
Huang R.P., Wu J.X., Fan Y., Adamson E.D. 1996. UV activates growth factor receptors via reactive oxygen intermediates. J. Cell Biol. 133:211−220.
Jaaro H., Rubinfeld H., Hanoch T., Seger R. 1997. Nuclear translocation of mitogen-activated protein kinase kinase (MEK1) in response to mitogenic stimulation. Proc. Natl. Acad. Sci. 94: 37 423 747.
Kalab P., Kubiak J.Z., Verlhac M.H., Colledge W.H., Maro B. 1996. Activation of p90rsk during meiotic maturation and first mitosis in mouse oocytes and eggs: MAP kinase-independent and -dependent activation. Development. 122: 1957−1964.
Karunagaran D., Tzahar E., Beerli R., Chen X., Graus-Porta D., Ratzkin B.J., Seger R., Hynes N.E., Yarden Y. 1996. ErbB-2 is a common auxiliary subunit of NDF and EGF receptors: Implications for breast cancer. EMBO J. 15: 254−264.
Kashles 0., Szapary D., Bellot F., Ullrich A., Schlessinger J., Schmidt A. 1988. Ligand-induced stimulation of epidermal growth factor receptor mutants with altered transmembrane regions. Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 9567−9571.
Kim B., Feldman E.L. 1998. Differential regulation of focal adhesion kinase and mitogen-activated protein kinase tyrosine phosphorylation during insulin-like growth factor-l-mediated cytoskeletal reorganization. J. Neurochem. 71: 1333−1336.
Klemm J.D., Schreiber S.L., Crabtree G.R. 1998. Dimerization as a regulatory mechanism in signal transduction. Annu. Rev. Immunol. 16: 569−592.
KolchW., Heidecker G., Kochs G., Hummel R., Vahidi H., Mischak Finkenzeller G., Marme D., Rapp U.R. 1993. Protein kinase C alpha activates RAF-1 by direct phosphorylation. Nature. 364: 249−252.
Kozma R., Ahmed S., Best A., Lim L. 1996. The GTPase-activating protein n-chimaerin cooperates with Rac1 and Cdc42Hs to induce the formation of lamellipodia and filopodia. Mol. Cell. Biol. 16: 5069−5080.
Kutay U" Bischoff F.R., Kostka S., Kraft R., Gorlich D. 1997. Export of importin a from the nucleus is mediated by a specific nuclear transport factor. Cell. 90: 1061−1071.
Maher P.A. Nuclear translocation of fibroblast growth factor (FGF) receptors in response to FGF-2. J. Cell Biol. 1996. 134: 529 536.
Maloney J.A., Tsygankova O., Szot A., Yang L., Li Q., Williamson J.R. 1998. Differential translocation of protein kinase C isoformes by phorbol ester, EGF, and ANGII in rat liver WB cells. Am. J. Cell Phisiol. 274: 974−982.
Mansour S.J., Matten W.T., Hermann A.S., Candia J.M., Rong S., Fukasawa K., Vande W.G., Ahn N.G. 1994. Transformation of mammalian cells by constitutively active MAP kinase kinase. Science. 265: 966−970.
Margolis B., Rhee S.G., Felder S., Mervic M., Lyall R., Levitzki A., Ullrich A., Zilberstein A., Schlessinger J. 1989. EGF induces tyrosine phosphorylation of phospholipase C—II: a potential mechanism for EGF receptor signaling. Cell. 57: 1101−1107.
Marshall K. 1994. The MAPK cascade. Curr. Op. Gen. Devel. 4: 82−90.
Mizukami Y., Yoshioka K., Morimoto S., Yoshida K. 1997. A novel mechanism of JNK1 activation. Nuclear translocation and activation of JNK1 during ischemia and reperfusion. J. Biol. Chem. 272: 16 657−16 662.
Nakielny S., Dreyfuss G. 1998. Import and export of the nuclear protein import receptor transports by a mechanism independent of GTP hydrolysis. Curr. Biol. 8: 89−95.
Nobes C.D., Hall A. 1995. Rho, rac, and cdc42 GTPases regulate the assembly of multimolecular focal complexes associated with actin stress fibers, lamellipodia, and filopodia. Cell. 81: 53−62.
Pemberton L.F., Blobel G., Rosenblum J.S. 1998. Transport routes through the nuclear pore complex. Curr. Op. Cell Biol. 10: 392−399.
Perona R., Montaner S., Saniger L., Sanchez-Perez I., Bravo R., Lacal J.C. 1997. Activation of the nuclear factor NFkB by Rho, CDC42, and Rac-1 proteins. Genes Dev. 11: 463−475.
Porfiri E., McCormick F. 1996. Regulation of epidermal growth factor receptor signaling by phosphorylation of the ras exchange factor hSOS1. J. Biol. Chem. 271: 5871−5877.
Pumiglia K.M., Decker S.J. 1997. Cell cycle arrest mediated by the MEK/mitogen-activated protein kinase pathway. Proc. Natl. Acad. Sci. 94: 448−452.
Radu A., Blobel G., Moore M.S. 1995. Identification of a protein complex that is required for nuclear protein import and mediates docking of import substrate to distinct nucleoporins. Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 1769−1773.
Ray L.B., Sturgill T.W. 1987. Rapid stimulation by insulin of a serine/threonine kinase in 3T3-L1 adipocytes that phosphorylates microtubule-associated protein 2 in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. 84: 1502−1506.
Ren X.D., Kiosses W.B., Schwartz M.A. 1999. Regulation of the small GTP-binding protein Rho by cell adhesion and the cytoskeleton. EMBO J. 18: 578−585.
Renshaw M.W., Ren X-D., Schwartz M.A. 1997. Growth factor activation of MAP kinase requires cell adhesion. EMBO J. 16: 55 925 599.
Rexach M., Blobel G. 1995. Protein import into nuclei: association and dissociation reactions involving transport substrate, transport factors and nucleoporins. Cell. 83: 683−692.
Ribbeck K., Kutay U., Paraskeva E., Gorlich D. 1999. The translocation of transportin-cargo complexes through nuclear pores is independent of both ran and energy. Curr. Biol. 9: 47−50.
Riese D.J., Stern D.F. 1998. Specificity within the EGF family/ErbB receptor family signalling network. BioEssays. 20: 41−48. J Cell Biol 1995 Mar- 128(6): 1111−9
Rosette C., Karin M. 1995. Cytoskeletal control of gene expression: depolymerization of microtubules activates NF-kappa B. J. Cell Biol. 128: 1111−1119.
Rosette C., Karin M. 1996. Ultraviolet light and osmotic stress: activation of the JNK cascade through multiple growth factor and cytokine receptors. Science. 274: 1194−1197.
Sano M., Kohno M., Iwanaga M. 1995. The activation and nuclear translocation of extracellular signal-regulated kinases (ERK-1 and -2) appear not to be required for elongation of neurites in PC12D cells. Brain Res. 688: 213−218.
Sauma S., Huang F., Winawer S., Friedman E. 1995. Colon goblet cells lose proliferative response to TGF alpha as they differentiate. Int. J. Cancer. 61: 848−853.
Scherf U., Kalab P., Dasso M., Pastan I., Brinkmann U. 1998. The hCSE1/CAS protein is phosphorylated by HeLa extracts and MEK-1: MEK-1 phosphorylation may modulate the intracellular localization of CAS. Biochem. Biophys. Res. Commun. 250: 623−628.
Schmalz D., Hucho F., Buchner K. 1998. Nuclear import of protein kinase C occurs by a mechanism distinct from the mechanism used by proteins with a classical nuclear localization signal. J. Cell Sci. 111: 1823−1830.
Schmidt A., Hall M.N. 1998. Signalling to the actin cytoskeleton. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 14: 305−338.
Seedorf M., Silver P.A. 1997. Importin/karyopherin protein family members required for mRNA export from the nucleus. Proc. Natl. Acad. Sci. 94: 8590−8595.
Segal M., Willumsen B.M. Levitzki A. 1993. Residues crucial for Ras interaction with GDP-GTP exchangers. Proc. Natl. Acad. Sci. 90: 5564−5568.
Shtil A.A., Mandlekar S., Yu R" Walter R.J., Hagen K., Tan T.H., Roninson I.B., Kong A.N. 1999. Differential regulation of mitogen-activated protein kinases by microtubule-binding agents in human breast cancer cells. Oncogene. 18: 377−384.
Siomi M.C., Eder P. S., Kataoka N. Wan L., Liu Q., Dreyfuss G. 1997. Transportin-mediated nuclear import of heterogeneous nuclear RNP proteins. J. Cell Biol. 138: 1181−1192.
Sodeik B., Ebersold M.W., Helenius A. 1997. Microtubule-mediated transport of incoming herpes simplex virus 1 capsids to the nucleus. J. Cell. Biol. 136: 1007−1021.
Soderquist A.M., Carpenter G. 1984. Glycosylation of the epidermal growth factor receptor in A-431 cells. The contribution of carbohydrate to receptor function. J. Biol. Chem. 259: 12 586−12 594 .
Soh J.W., Lee E.H., Prywes R., Weinstein I.B. 1999. Novel roles of specific isoforms of protein kinase C in activation of the c-fos serum response element. Mol. Cell. Biol. 19: 1313−1324.
Spencer W., Kwon H., Crepieux P., Leclerc N., Lin R., Hiscott J. 1999. Taxol selectively blocks microtubule dependent NF-kappaBactivation by phorbol ester via inhibition of IkappaBalpha phosphorylation and degradation. Oncogene. 18: 495−505.
Stern D.F., Kamps MP. 1988. EGF-stimulated tyrosine phosphorylation of p185neu: A potentional model for receptor interactions. EMBO J. 7: 995−1001.
Strahl T., Gille H., Shaw P.E. 1996. Selective response of ternary complex factor Sapla to different mitogen-activated protein kinase subgroups. Proc. Natl. Acad. Sci. 93:11 563−11 568.
Tsakiridis T., Wang Q., Taha C., Grinstein S., Downey G., Klip A. 1997. Involvement of the actin network in insulin signalling. Soc. Gen. Physiol. Ser. 52: 257−271.
Truant R., Cullen B. R. 1999. The arginine-rich domains present in human immunodeficiency virus type 1 Tat and Rev function as direct importin -dependent nuclear localization signals. Mol. Cell. Biol. 19: 1210−1217.
Ullrich A., Schlessinger J. 1990. Signal transduction by receptors with tyrosine kinase activity. Cell. 61: 203−212.
Vincent S., Settleman J. 1997. The PRK2 kinase is a potential effector target of both Rho and Rac GTPases and regulates actin cytoskeletal organization. Mol. Cell. Biol. 17: 2247−2256.
Watanabe N. Madaule P., Reid T., Ishizaki T., Watanabe G., et al. 1997. p140mDia, a mam-malian homolog of Drosophila diaphanous, is a target protein for Rho small GTPase and is a ligand for profilin. EMBO J. 16: 3044−3056.
Wright J.D., Reuter C.W., Weber M.J. 1995. An incomplete program of cellular tyrosine phosphorylations induced by kinase-defective epidermal growth factor receptors. J. Biol. Chem. 270: 12 085−12 093.
Yin M.-J., Christerson L.B., Yamamoto Y., Kwak Y.-T., Xu S., Mercurio F., Barbosa M., Cobb M.H., Gaynor R.B. 1998. HTLV-1 Tax protein binds to MEKK1 to stimulate IkB kinase activity and NF-kB activation. Cell. 93: 875−884.
Yoon Y., Pitts K.R., Dahan S" McNiven M.A. 1998. A novel dynamin-like protein associates with cytoplasmic vesicles and tubules of the endoplasmic reticulum in mammalian cells. J. Cell Biol. 140: 779−793.
Zheng C.F., Guan K.L. 1994. Cytoplasmic localization of the mitogen-activated protein kinase activator MEK. J. Biol. Chem. 269: 19947−19 952.
В заключение хочу выразить искреннюю благодарность моему научному руководителю Николаю Николаевичу Никольскому за чуткое руководство и помощь в написании этой работы, а также за внесение здорового пессимизма в мой нездоровый оптимизм.
Особую благодарность и признательность хочу выразить моей жене и другу Ире Арнаутовой за моральную поддержку и чувство русского языка.
Также хочу поблагодарить всех сотрудников лаборатории физиологии клеточного цикла за помощь в работе.
Огромное спасибо хочу сказать моим родителям и всем близким за их заботу и понимание сложностей работы в науке.

Заполнить форму текущей работой