Воздействие гипертермии на уровень HSP70 в нейтрофилах в разных возрастных группах

Интенсивность стресс-индуцированного ответа на многие стимулы в старости снижается [Calderwood et al., 2009]. Для того чтобы оценить, как с возрастом в нейтрофилах в нашей модели клеточного стресса меняется уровень HSP70, было произведено сравнение уровня этого белка после воздействия ТШ в разных возрастных группах. Аналогично уровню HSP70базальный, уровень белка, зарегистрированный сразу после окончания ТШ (HSP70ТШ) достоверно не отличался между молодыми, пожилыми донорами и долгожителями.

В то же время, значение параметра, который рассчитывался в виде разницы между HSP70ТШ и HSP70базальный (ДHSP70ТШ) для каждого донора, с возрастом достоверно увеличивалось (Рис.12Б).

Таким образом, параметр ДHSP70ТШ, который, как мы предполагаем, косвенно указывает на количество HSP70, взаимодействующего с нарушенными белками-субстратами, связан с процессом старения.

Высвобождение HSP70 из нейтрофилов во внеклеточное пространство

Известно, что клеточный стресс в ряде случаев инициирует транслокацию HSP70 на плазматическую мембрану и/или высвобождение этих белков во внеклеточное пространство.

В данной модели клеточного стресса методом проточной цитометрии не удалось зарегистрировать HSP70 на поверхности нейтрофилов ни одними из используемых в работе коммерческих (в том числе к Hsp70 и Hsc70) и полученных к разным концевым участкам моноклональных антител. Поверхностная экспрессия белков была зарегистрирована только при окрашивании клеток поликлональными антителами к HSP70. Это можно объяснить тем, что нейтрофилы экспонируют на своей поверхности слишком мало HSP70 с доступными для распознавания эпитопами.

В то же время, на моноцитах, в которых индукция белков HSP70 ярко выражена, с помощью большинства имеющих в нашем распоряжении антител, распознающих HSP70, была зарегистрирована поверхностная экспрессия этих белков, что подтверждает предположение о том, что на поверхности не всех клеток экспрессируются белки HSP70 либо представлено достаточное количество HSP70 с доступными для распознавания эпитопами.

Содержание внеклеточных HSP70 было измерено в культуральной среде нейтрофилов с помощью иммуноферментного анализа с использованием двух коммерческих тест-систем для определения конститутивного (Hsc70) и индуцируемого (Hsp70) белков семейства HSP70. Анализу подвергались образцы надосадочной жидкости, полученной от интактных, а также подвергнутых тепловой обработке нейтрофилов сразу после ТШ и через 60 мин после его окончания. Результаты экспериментов показали, что содержание внеклеточных HSP70 возрастает после ТШ, причем это относится как к индуцируемой, так и конститутивной формам белка.

Как было упомянуто выше, в течение анализируемого периода времени жизнеспособность нейтрофилов практически не изменялась. Следовательно, присутствие внеклеточных белков HSP70 в клеточном надосадке не являлось следствием пассивного высвобождения исследуемых белков из некротических нейтрофилов.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют в пользу того, что в нейтрофилах в условиях клеточного стресса реализуется высвобождение как конститутивного, так и индуцируемого белков HSP70.