Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Метод LOWRY. 
Количественное определение содержания белка

РефератПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Метод относительно чувствительный, но требует больше времени, чем другие, и чувствителен ко многим соединениям (таблица). Корректному определению мешают: детергенты, углеводы, глицерин, трицин, ЭДТА, Трис, соли калия, сульфгидрильные соединения, дисульфиды, фенолы, гуанин, ксантин, магний и кальций. Многие из этих веществ используются в буферах для гомогенизации или подготовки белковых проб. Это… Читать ещё >

Метод LOWRY. Количественное определение содержания белка (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Этот метод основан на двух различных реакциях. Первая реакция состоит в образовании комплекса катионов меди с амидными связями, с последующим восстановлением меди в щелочных условиях. Получаемый продукт называется биуретовым хромофором, который необходимо стабилизировать добавлением тартрата [4]. Вторая реакция — восстановление реагента Folin-Ciocalteu комплексом восстановленной меди с амидными связями, а также аминокислотными остатками тирозина и триптофана. Реагент Folin-Ciocalteu в восстановленном виде имеет синий цвет, поэтому детектируется спектрофотометрически в диапазоне длин волн 500−750 нм. Сама по себе биуретова реакция не очень чувствительна. Использование реагента Folin-Ciocalteu повышает чувствительность метода почти в 100 раз.

Метод относительно чувствительный, но требует больше времени, чем другие, и чувствителен ко многим соединениям (таблица). Корректному определению мешают: детергенты, углеводы, глицерин, трицин, ЭДТА, Трис, соли калия, сульфгидрильные соединения, дисульфиды, фенолы, гуанин, ксантин, магний и кальций. Многие из этих веществ используются в буферах для гомогенизации или подготовки белковых проб. Это является одним из основных ограничений этого метода. Помимо этого, метод мало пригоден для измерения содержания гидрофобных белков или содержания белка в мембранных фракциях. Также метод Lowry чувствителен к изменениям в содержании аминокислотных остатков тирозина и триптофана. Линейность калибровочного графика при использовании БСА в качестве стандарта наблюдается до концентрации белка в пределах 1500−2000 мкг/мл. Хотя спектр поглощения окрашенного продукта реакции приходится на 500−750 нм, обычно используют длину волны 660 нм. Другие длины волн также могут использоваться, и это позволяет уменьшить эффект от «загрязнения» пробы посторонними веществами. Например, в образцах, выделенных из растительных объектов, хлорофилл будет мешать измерению при 660 нм, но не при 750 нм. Если при 660 нм значения оптической плотности оказались низкими, то измерение поглощения при 750 нм может повысить чувствительность.

Показать весь текст
Заполнить форму текущей работой