Морфофункциональные изменения тимуса и иммунобиохимические показатели крови при воздействии цеолитсодержащим трепелом

Актуальность темы

.

Проблема иммунодефицитов во всем мире имеет большое практическое и теоретическое значение. Многие факторы — экологические, геологические, климатические, а также стрессовые и физические нагрузки— снижают иммунологическую реактивность (Караулов А.В., 2000; Ильина Н. И. и др., 2000). Иммуносупрессию различного характера и глубины также вызывают лекарственные препараты, широко используемые для лечения многих заболеваний (Крылов Ю.Ф. и др., 2005). Кроме того, на развитие иммуноза-висимых заболеваний влияет такой немаловажный фактор, как несбалансированное питание. Факторами риска стали ограниченное потребление натуральных неочищенных продуктов и переход к рафинированным, лишенным витаминов, минералов, клетчатки (Тутельян В.А., Суханов Б. П., 2004; тендеров Б.А., 2006). Это негативно отражается на здоровье человека, снижая качество его жизни и трудоспособность. Хронический дефицит витаминов и минералов требует обязательной коррекции (Сусликов В.Л., 2002).

С иммунологических позиций состояние здоровья населения на современном этапе характеризуется двумя особенностями: снижением иммунологической реактивности и, как следствие этого, повышением уровня острых и хронических заболеваний с вялым, непрерывнорецидивирующим течением, плохо поддающихся антибактериальной и симптоматической терапии (Хаитов P.M., Пинегин Б. В., 2000).

Анализ многочисленных исследований по клинической иммунологии показывает, что практически при всех заболеваниях человека имеются нарушения иммунной системы (Обухова О. О. и др., 2004). Их глубина и направленность варьируют в зависимости от нозологии, формы и тяжести болезни, этиологических факторов, генетической предрасположенности, возраста, пола и т. д.

В связи с этим интерес врачей всех специальностей к проблеме иммунотерапии необычайно возрос. Препараты, оказывающие воздействие на иммунитет, стали широко применяться в клинической практике при лечении самых разнообразных заболеваний (Девойно JI.B. и др., 1993; Хаитов P.M., Пинегин Б. В., 2003; Маркова Т. П., 2004; Лусс Л. В., 2005). Строгой классификации иммунотропных препаратов не существует, их можно условно разделить на природные вещества и синтетические. Вещества природного происхождения подразделяются, в свою очередь, на экзогенные и эндогенные (Хаитов Р. М, Пинегин Б. В., Авдронова Т. М., 2004; Лусс Л. В., 2005). Выделена еще одна группа препаратов — иммуномодуляторы, это вещества, оказывающие разнонаправленное действие на иммунную систему в зависимости от ее исходного состояния (Воробьев А.А., 2002; Хаитов P.M., Пинегин Б. В., 2004).

В последние годы появилось большое количество биологически активных добавок, используемых для профилактики ряда иммунодефицитных состояний, а также для устранения дефицита витаминов и микроэлементов (Кульбачинский В.В., 2005; Литвинов Н. Н., Иванов В. М., 2005; Тутельян В. А., и др., 2005). Их преимуществом является то, что источником необходимых организму витаминов, минералов, аминокислот, полиненасыщенных жирных кислот, растительного волокна (клетчатки) служит растительное, животное или минеральное сырье (Гравель И.В., 2005). В литературе появились сообщения о применении минеральной биологически активной добавки — цеолитсодержащего трепела (Колотилова М.Л., 2000; Волков А. Н., 2000; Булыгина И. Е., 2002). По составу он сходен с биологически активными добавками «Полисорб» и «Литовит», рекомендованными к приему при различных патологиях (Новоселов Я.Б., Ронинсон А. Г., 1998; Потапова Г. В., и др., 2000; Чуйкова К. И., Вожаков С. В., 2005). Одним из месторождений данного вещества является село Первомайское Алатырского района Чувашской республики, что создает для республики определенное удобство в получении препарата и его доставке, а также экономическую выгоду.

В последнее десятилетие сформировалась новая наука — нейроиммуно-эндокринология, находящаяся на стыке трех важнейших интегративных систем организма — нервной, эндокринной и иммунной. Представление о нейроиммуноэндокринных процессах играет большую роль как в понимании закономерностей функционирования организма в норме, так и для объяснения патогенеза многих иммунопатологических, нервно-психических и эндокринных расстройств (Корнева Е. А, 2003). Тимус является важным звеном кооперации нейроэндокринной и иммунной систем. Иммунорегуляторными факторами, обеспечивающими функции тимуса, наряду с цитокинами и тимиче-скими гормонами, являются биогенные амины (Кветной И.М. и др., 1999; Hadden J.W., 1998). Несмотря на кажущуюся изученность различных струк-турнофункциональных характеристик тимуса, следует отметить, что роль биогенных аминов в его функции, особенно в условиях иммуностимуляции, изучена недостаточно. Всестороннее исследование влияния иммунотропных препаратов на органы иммунной системы, особенно на тканевом уровне, необходимо для избирательного, целенаправленного воздействия на нарушенные гистофизиологические процессы, что является обязательным условием успешной иммуномодуляции (Труфалкин В.А., Шурлыгина А. В., 2002).

Несмотря на то, что изучено морфофункциональное состояние тимуса после иммуносупрессии на фоне приема цеолитсодержащего трепела (Стручко Г. Ю., 2003), отсутствуют сведения об изменении структуры тимуса и состоянии биоаминсодержащих структур тимуса и крови при приеме цеолитсодержащего трепела без сопутствующих патологических состояний при разной длительности его приема. Более детальное изучение иммуноморфоло-гических изменений организации тимуса позволит выяснить точки приложения цеолитсодержащего трепела в иммунном процессе.

Цель исследования: Изучить морфофункциональное состояние тимуса и показатели крови крыс через 2, 3 и 4 недели кормления цеолитсодержащим трепелом для оценки возможных иммуномодулирующих свойств препарата.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Провести морфометршо коркового и мозгового вещества долек тимуса у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели приема ЦТ.

2. Изучить люминесцирующие структуры тимуса, выявить изменения содержания биогенных аминов в них и определить их соотношение через 2, 3 и 4 недели приема ЦТ.

3. Изучить состояние тучноклеточной популяции тимуса в эти же сроки приема ЦТ.

4. Определить количество эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, уровень гемоглобина, а также распределение биогенных аминов в форменных элементах и плазме периферической крови у интактных крыс через 2, 3 и 4 недели кормления ЦТ.

5. Исследовать показатели иммунограммы (уровень иммуноглобулинов, ЦИК, активность системы комплемента, фагоцитарная активность ней-трофилов) у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели кормления ЦТ.

6. Определить биохимические показатели крови (мочевина, креатинин, мочевая кислота, кальций, общий белок) у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели кормления ЦТ.

7. Провести корреляционный анализ изученных показателей.

8. Оценить и сопоставить полученные данные для определения направленности воздействия ЦТ.

Научная новизна работы:

1. Впервые в динамике прослежены изменения морфологической характеристики тимуса при приеме ЦТ. Кормление ЦТ сопровождается увеличением ширины коркового, диаметра и площади мозгового вещества долек тимуса.

2. Установлено, что на фоне кормления ЦТ возрастают количество и размеры люминесцирующих гранулярных клеток тимуса.

3. Впервые показано, что прием ЦТ сопровождается значительным уменьшением уровня гистамина во всех биоаминсодержащих структурах тимуса, увеличением содержания катехоламинов в структурах тимуса с максимальным повышением через 3 недели, резким уменьшением уровня всех биоаминов в люминесцирующих структурах тимуса через 4 недели приема ЦТ;

4. В работе установлено, что прием ЦТ приводит к росту количества тучных клеток за счет дегранулированных форм.

5. Впервые показано, что на фоне кормления ЦТ соотношение (серотонин + гистамин) / катехоламины в структурах тимуса и клетках крови ниже значений у интактных крысв структурах тимуса максимальное снижение наблюдается через 3 недели, в клетках крови — через 4 недели приема ЦТ.

6. Впервые обнаружено, что кормление ЦТ приводит к увеличению содержания IgG и IgA через 2 и 4 недели, повышению количества лейкоцитов, волнообразным и разнонаправленным изменениям показателей активности системы комплемента и уровня ЦИК.

7. Впервые установлено, что прием ЦТ приводит к нарастанию силы корреляционных взаимодействий между биогенными аминами структур тимуса и крови и показателями крови.

Научно-теоретическая значимость работы:

Материалы диссертационного исследования дополняют представление о морфофункциональном состоянии тимуса в условиях иммунокоррекции, позволяют выработать подходы к регуляции функционирования различных звеньев иммунной системы. Полученные данные об изменении биогенных аминов в тимусе и периферической крови, общих, биохимических и иммунологических показателей крови при приеме ЦТ представляют определенный интерес для гистологов и иммунологов.

Практическая значимость работы:

Результаты данного исследования могут служить обоснованием применения ЦТ в качестве иммуномодулирующего средства. Работа представляет несомненный интерес для фармакологов и практических врачей — терапевтов и иммунологов.

Результаты работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий и семинаров на кафедрах цитологии, гистологии и эмбриологии, патологической физиологии, функциональной и лабораторной диагностики Чувашского государственного университета. Итоги исследования отражены в опубликованных статьях и тезисах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Прием ЦТ сопровождается значительным увеличением ширины коркового, диаметра и площади мозгового вещества долек тимуса, ростом количества гранулярных шоминесцирующих и тучных клеток. Во всех изучаемых структурах тимуса отмечается значительное снижение уровня гистамина на всех сроках и возрастание катехоламинов, особенно через 3 недели кормления ЦТчерез 4 недели приема ЦТ наблюдается резкое снижение уровня биогенных аминов во всех биоаминсодержащих структурах тимуса и крови.

2. Кормление ЦТ приводит к увеличению содержания лейкоцитов крови за счет абсолютного увеличения уровня лимфоцитов, повышению фагоцитарной активности нейтрофилов, уровня IgG и IgA и к некоторому снижению уровня гемоглобина и количества эритроцитов через 4 недели приема ЦТ.

3. Суммируя вышеизложенные данные, можно полагать, что ЦТ оказывает существенное влияние на иммунную систему, причем наиболее выраженный стимулирующий эффект наблюдается через 3 недели приема препарата.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на IV международной конференции по функциональной нейроморфологии «Ко-лосовские чтения — 2002» (С.-Петербург, 2003), V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Москва, 2004), I съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано И научных работ, из них 7 — статей, 4 — тезисы в материалах международных, всероссийских научных конференций.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста (собственно текста — 110 страниц), состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, пяти разделов собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 49 рисунками, включая 15 микрофотографий.

Список литературы

содержит 352 источника, в том числе 128 зарубежных.

выводы.

1. Прием ЦТ приводит к увеличению ширины коркового, диаметра и площади мозгового вещества долек, росту количества и величины люминесцирующих гранулярных клеток субкапсулярной и кортико-медуллярной зон.

2. Морфологические изменения в тимусе после приема ЦТ сопровождаются изменениями функционального состояния его биоаминсодержащих структур: а) во всех изучаемых структурах тимуса значительно уменьшается уровень гистаминаб) в премедуллярных и субкапсулярных клетках регистрируется увеличение содержания катехоламинов с максимальным повышением через 3 недели кормления ЦТв) через 4 недели приема ЦТ уровень всех биоаминов в биоаминсодержащих структурах тимуса резко уменьшается;

3. Кормление ЦТ сопровождается нарастанием числа тучных клеток со значительным увеличением количества дегранулированных Т-2 и Т-3 форм через 3 и 4 недели.

4. Прием ЦТ приводит к изменению содержания биогенных аминов в клеточных элементах и плазме крови: а) в лимфоцитах через 2 недели кормления ЦТ наблюдается увеличение уровня гистамина и снижение содержания серотонинаб) в плазме крови уровень катехоламинов, серотонина и гистамина постепенно увеличивается до 3-х недельного срока с дальнейщим значительным снижением через 4 недели.

5. При приеме ЦТ соотношение (серотонин+гистамин)/катехоламины во всех изучаемых структурах тимуса ниже значения у интактных крыс на всех сроках кормленияв полиморфноядерных лейкоцитах соотношение (ГСТ+СТ)/КА также уменьшается, с достижением минимального значения через 4 недели кормления ЦТ.

6. Кормление ЦТ сопровождается изменениями показателей крови: а) возрастает количество лейкоцитов за счет увеличения абсолютного содержания лимфоцитов на всех сроках кормления ЦТб) наблюдается увеличение уровней IgG и IgA через 2 и 4 недели приема ЦТв) уровень базального и стимулированного фагоцитоза постепенно нарастаетг) снижается количество эритроцитов и уровень НЬ.

7. Минимальная корреляционная зависимость в корреляционных парах наблюдается через 2 недели кормления ЦТ, затем сила корреляционных взаимодействий постепенно увеличивается с достижением наибольшего количества сильных корреляционных связей через 4 недели.

8. Изменения уровня биогенных аминов, морфологической характеристики тимуса и показателей крови свидетельствуют об иммуномодулирующем действии ЦТ, особенно выраженном при 3-х недельном приеме.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Современная патология характеризуется ростом заболеваний, связанных с вторичной иммунологической недостаточностью. Она проявляется в частых, вялотекущих, рецидивирующих инфекционно-воспалительных заболеваниях дыхательного, желудочно-кишечного и урогенигальнош трактов, кожи и мягких тканей Применение антибактериальных лекарственных средств нередко бывает малоэффективным или вообще неэффективным (Хаитов P.M., Пинегин Б. В., Андронова Т. М, 2004). Становится очевидным, что без повышения иммунологической реактивности трудно или невозможно добиться хорошего клинического эффекта при лечении различных хронических инфекционно-воспалительных процессов. Одним из главных методов коррекции иммунитета является применение иммунотропных лекарственных средств (Хаитов Р. М, Пинегин Б. В., 1996).

Достаточно большой интерес вызывает применение биологически активной добавки — цеолитсодержащего трепела. В литературе стали появляться данные о положительном влиянии трепела на иммунную систему животных и человека (Иванов Г. И. и др., 1999; Колотилова М. Л. и др., 2000). В работах Стручко Г. Ю. (2003) показано, что ЦТ проявляет иммунокорригирую-щее действие на фоне иммуносупрессии, вызванной спленэктомией.

В последние годы во всем мире растет интерес к исследованию функций иммунной системы на тканевом уровне. Понимание патогенеза нарушений иммунной системы и адекватная коррекция возможны лишь при всестороннем изучении внутритканевых и межклеточных механизмов регуляции иммунных процессов и их изменений под действием иммунотропных препаратов (Ильина Н.И. и др., 2000; Москалец О. В. и др., 2002; Труфалкин В. А., Шурлыгина А. В., 2002).

Биогенные амины в тимусе играют важную роль в обеспечении местного гомеостаза и взаимодействиями с другими органами и системами организма (Кветной И.М., и др., 1999). В создании биоаминного окружения основная роль отводится шоминесцирующим аминсодержащим структурам тимуса, в частности, премедуллярным и субкапсулярным клеткам, которые обеспечивают местный нейрогуморальный гомеостаз тимуса (Сергеева В.Е., Гордон Д. С., 1992). Природа люминесцирующих гранулярных клеток окончательно не установлена. Предполагается, что часть J11K является дендритными клетками (Сергеева и др., 1999, Стручко Г. Ю., 2003), часть является макрофагами, а часть клеток до сих пор имеет невыясненную природу. Как известно, дендритные клетки играют важную роль в иммунном ответе: они продуцируют цитокины, индуцируют Т-клеточный ответ, поддерживают баланс между Thl и Th2, стимулируют рост и активацию различных клонов Т-клеток, представляют на своей поверхности антигены (Макаренкова В.П., и др., 2002).

Согласно нашим данным, прием ЦТ приводит к достоверному увеличению ширины коркового, диаметра и площади мозгового вещества дольки уже через 2 недели кормления. Максимальное увеличение размеров долек тимуса наблюдается через 3 недели приема ЦТ, затем величина коркового и мозгового вещества несколько уменьшается, однако остается больше, чем у интактных крыс. Мы полагаем, что такие изменения размеров долек в первые 3 недели кормления ЦТ происходят за счет активации процессов пролиферат ции и дифференцировки лимфоцитов. Через 4 недели течение этих процессов, вероятно, несколько замедляется. Процессы пролиферации и дифференцировки лимфоцитов могут быть опосредованы включением продукции факторов, контролирующих рост и развитие лимфоцитов (Хаитов P.M., Пинегин Б. В., 2000). Кроме этого, на фоне кормления ЦТ долыш приобретают неправильную форму, появляются «долыш-сателлиты», что косвенно указывает на активацию функции тимуса. Прием трепела вызывает изменения в люминес-центно — гистохимической картине тимуса. Они проявляются увеличением количества и размеров ЛГК за счет субкапсулярных и внутримозговых клеток, причем максимальное число ЛГК в поле зрения также наблюдается через 3 недели приема трепела. Известно (Гордон Д.С., и др., 1993), что ЛТК, резко реагирующие на активацию иммунитета, находятся именно в субкап-сулярной зоне тимусной дольки. На 3-х недельном сроке изменяются положение и размеры премедуллярных клеток, они располагаются хаотическими скоплениями вокруг мозгового вещества. Мы полагаем, что наблюдаемое увеличение количества и величины внутримозговых и субкапсулярных клеток также указывает на повышение активности иммунных процессов в тимусе. По данным литературы, премедуллярные и субкапсклярные клетки проявляют свойства дендритных клеток (Гордон Д.С., 1999; Стручко Г. Ю., 2003), а дендритные клетки являются источником сигналов, обеспечивающих развитие Тлимфоцитов (Литвинова М. М, и др., 2004; Хаитов P.M. 2000; Малыжев В. А, 2002).

Подобные изменения описаны в структуре тимуса крыс в работах Стручко Г. Ю. (2003), Михайловой М. Н. (2004) при введении препаратов с клинически доказанным иммуномодулирующим действием — полиоксидония и иммунофана на фоне индуцированного иммунодефицитного состояния.

С помощью цитоспектрофлюометрии мы установили, что прием ЦТ приводит к изменению биоаминообеспечения структур тимуса. Снижается содержание ГСТ во всех структурах тимуса во все сроки исследования, особенно в тимоцитах. Известно, что ГСТ обладает супрессорной активностью, связываясь с Нг-рецепторами Т-супрессоров, а также, действуя через цАМФ (Дюговская Л.А., 1981; Schnaper H.W. et al., 1987; Inage Z. et al., 1990), тормозит реакцию фагоцитоза нейтрофилов, пролиферацию и дифференцировку лимфоцитов в Ти В-эффекторные клетки, клеточные и гуморальные реакции на антигены (Земсков A.M., 1997). Таким образом, мы предполагаем, что именно снижение гистамина способствует усилению фагоцитарной активности нейтрофилов, что мы и отмечали в своих исследованиях, а также пролиферации и дифференцировке лимфоцитов.

Через 3 недели кормления ЦТ наблюдается увеличение СТ в субкапсулярных клетках, тимоцитах коркового и мозгового вещества, что, возможно, связано со снижением ГСТ. Известно, что снижение ГСТ приводит к уменьшению связывания ацетилхолина, тогда как ацетилхолин освобождает из тканей связанный серотонин (Kallfelt B.J. et al., 1977). В. А. Юсин и др. (1972) отмечают, что серотонин при небольших дозах вызывает пролиферацию клеток мозгового вещества долек тимуса, рост количества эпителиальных телец и появление плазматических клеток, расположенных на границе коркового и мозгового веществ. Другими словами, увеличение содержания серотонина, наблюдаемое нами в эксперименте, также свидетельствует об усилении иммуногенеза при приеме ЦТ.

В премедуллярных и субкапсулярных клетках, тимоцитах коркового и мозгового вещества клетках наблюдается увеличение содержания КА, что, возможно, связано с тем, что освобождающийся серотонин, соединяясь с мембранным компонентом рецепторов через внутриклеточный передаточный механизм, активирует синтез цГМФ, который стимулирует поступление кальция в клетку (Горизонтов П.Д., 1981; Саркисов Д. С., 1986; Ялкут С. И. и др., 1987), что приводит к снижению рН во внеклеточных пространствах. Низкие величины рН внеклеточной среды стимулируют секрецию катехола-минов (Fujiwara N. Et al., 1994). Поскольку КА активируют иммунокомпе-тентные клетки за счет стимуляции генной транскрипции и увеличения синтеза РНК, повышают хелперный эффект Т-лимфоцитов, стимулируют анти-телообразование, влияют на розеткообразование, скорость созревания гепарина и дегрануляцию тучных клеток (Денисенко П.П., 1977; Девойно А. Л., 1985; Любовцева JI.A., 1993), то подобные изменения содержания КА в структурах тимуса, по нашему мнению, таюке доказывают иммуностимулирующий эффект ЦТ. Кроме того, КА участвуют в иммунном ответе через влияние на макрофаги путем стимуляции выделения лизосомальных ферментов и активации процессов фагоцитоза (Козлов В.И., 1977). КА, являясь модуляторами продукции ИЛ-1, ИЛ-8 и фактора некроза опухоли (Vizi E.S., Elenkov I.J., 2002), активируют региональные иммунные ответы.

Известно, что на функциональную активность клеток влияет не только абсолютное содержание биогенных аминов, но и их соотношение в клетке. Для того, чтобы охарактеризовать суммарно-направленное действие биогенных аминов нами вычислялось соотношение (СТ+ГСТ)/КА, увеличение которого косвенно свидетельствует о подавлении активности клетки, снижение — о ее стимуляции (Стручко Г. Ю., 2003). Достоверное снижение этого соотношения в премедуллярных, субкапсулярных, тучных клетках, а также в тимоцитах коркового и мозгового вещества на 2-х и 3-х недельном сроке также указывает на иммуностимулирующее действие ЦТ. Через 4 недели приема ЦТ в вышеуказанных структурахпо сравнению с предыдущим сроком это соотношение увеличивается, что свидетельствует о некотором угнетении активности этих клеток.

Параллельно с изменением уровня биогенных аминов отмечается увеличение количества тучных клеток в строме тимуса. Их абсолютное число максимально возрастает через 3 недели кормления ЦТ, в основном за счет частично или полностью дегранулированных Т-2 и Т-3 форм. Как известно, тучные клетки многофункциональны и являются активными участниками иммунных процессов (Бережная Н.М., Сепиашвили Р. И., 2003; Lorentz A., et al., 2000), а потому увеличение их числа и изменение функциональной активности в виде дегрануляции в эксперименте говорит об активации протекания иммунных реакций. Известно, что дегрануляция тучных клеток наступает при переполнении их одним из своих компонентов: или биоаминами, или гепарином, или вследствие наличия комплекса антиген-антитело на ее мембране (Юрина Н.А., 1988; Любовцева Л. А., 1993). При дегрануляции тучных клеток выделяется большое количество разнообразных медиаторов и цито-кинов, участвующих в иммунных реакциях, ангиогенезе и в выполнении других биологических функций, что позволяет рассматривать их как важные иммунорегуляторные клетки. Являясь главным источником ИЛ-4 (Бережная Н.М., Сепиашвили Р. И., 2003), тучные клетки обеспечивают дифференци-ровку и созревание ТЬ2-хелперов.

Важной особенностью тучных клеток является их способность инакти-вировать высокие уровни биогенных аминов путем связывания их с гликоза-миногликанами (Быков В.Л., 1999), что может быть причиной наблюдаемого резкого снижения уровня биоаминов во всех структурах тимуса через 4 недели приема ЦТ. Известно, что инактивация биоаминов может происходить и под действием гепарина, который высвобождается в большом количестве при дегрануляции тучных клеток в межклеточные пространства (Быков B. JL, 1999, 2000; Galli S.J., 1993). Инактивация биогенных аминов сопровождается резким снижением флуоресценции биоаминсодержащих структур (Гордон Д. С., 1974).

Еще одной возможной причиной снижения уровней всех биогенных аминов в люминесцирующих структурах тимуса через 4 недели может быть повышение активности субкапсулярных клеток. Как указывалось выше, при приеме ЦТ наблюдается увеличение количества и размеров ЛГК, в том числе, за счет субкапсулярных клеток. По литературным данным (Гордон Д.С. и др., 1982; Сергеева В. Е. и др. Д992), эти клетки рассматриваются как поглотители биоаминов. Можно предположить, что наблюдаемое уменьшение уровней биогенных аминов на этом сроке также может быть связано и с активацией ферментов — моноаминооксидазы (МАО), катехоламин-о-метилтрансферазы (КОМТ), гистаминазы, диаминооксидазы, инактивирую-щих биогенные амины.

Кормление ЦТ приводит к изменению содержания биогенных аминов в клеточных элементах и плазме крови.

Анализ изменения уровня серотонина в лимфоцитах показал постепенное его снижение, причем через 4 недели приема ЦТ его количество снижается в 2,3 раза по сравнению с интактной группой. Поскольку известно, что серотонинергическая система активирует супрессорную активность, влияя на численность Т-супрессоров, уменьшая выработку IgM и IgG В-лимфоцитами, активируя миграцию супрессоров в костный мозг, а также контролируя скорость пролиферации иммунокомпетентных клеток (Девойно Л.В. и др., 1983), то мы считаем, что снижение этого биоамина в лимфоцитах будет способствовать иммунопролиферативным процессам.

Наблюдаемое увеличение числа лейкоцитов периферической крови может быть связано с увеличением содержания КА в плазме, которые прямо (рецепторно) либо опосредованно (через гуморальные и клеточные факторы) способны стимулировать клеточный цикл, усиливать синтез прекурсоров гемопоэза и увеличивать выход клеток костного мозга в периферическую кровь (Maestroni G.I.M., 1991). Таким образом, возможно, ЦТ оказывает влияние на дифференцировку гемопоэтических клеток, способствуя их более быстрому созреванию, т. е. обладает лейкопоэтическим эффектом.

Подобно изменениям в тимусе, через 4 недели кормления ЦТ наблюдается резкое снижение содержания биоаминов в плазме и клеточных структурах крови.

Скорее всего, такое снижение уровня биоаминов в структурах тимуса и крови и плазме крови через 4 недели приема ЦТ необходимо для предотвращения аутоиммунных и аллергических реакций, и является необходимой защитной мерой при активации системы иммунитета.

Большой интерес представляет анализ изменения соотношения (ГСТ+СТ)/КА в структурных элементах крови. В плазме крови через 4 недели приема ЦТ это соотношение увеличивается в 1,6 раза по сравнению с ин-тактной группой, в лимфоцитах претерпевает волнообразные изменения, а в полиморфноядерных лейкоцитах и эритроцитах уменьшается. По данным Стручко Г. Ю. (2003) известно, что увеличение соотношения говорит о снижении активности клеток. Таким образом, наблюдаемое нами снижение данного показателя в полиморфноядерных лейкоцитах говорит об активации их биосинтетичёской активности.

Чтобы подтвердить иммуномодулирующий эффект цеолитсодержащего трепела проводилась оценка иммунного статуса до и после приема данного препарата.

Известно (Скребков Г. П., 1997), что ЦТ преимущественно состоит из Si02. Оксид кремния вызывает повышение секреции интерлейкина-1 макрофагами (Куюканова Г. Э., Акугинова З. Д., 2001), под действием которого инициируется активация и пролиферация Т-лимфоцитов, усиливается продукция ИЛ-2, повышается экспрессия клеточных рецепторов. Кроме того, ИЛ-1 способствует пролиферации В-клеток и синтезу иммуноглобулинов, стимулирует синтез белков острой фазы воспаления (СРБ, комплемента и др.), простагландинов и предшественников гемопоэза в костном мозге (Коровина Н.А., Заплатников А. Л., 2000; Геппе Н. А., Зайцева О. В., 2003).

Можно предположить, что волнообразные и разнонаправленные изменения показателей комплементарной активности сыворотки и уровней циркулирующих иммунных комплексов в крови возникают под действием ЦТ и связаны с иммобилизацией ЦИК в тканях. Уже через 2 недели приема ЦТ в крови увеличивается концентрация IgA, а через 4 недели резко увеличивается уровень IgG, что отражает повышение функциональной активности В-клеток и позволяет судить об усилении гуморальных факторов защиты под действием трепела. Более позднее повышение уровня IgG связано с тем, что данная фракция Ig синтезируется на поздней стадии первичного иммунного ответа. Снижение концентрации IgM к этому сроку вероятно обусловлено С"-переюпочением (это переход в течение первичного иммунного ответа с синтеза IgM на синтез IgG).

На основании вышеизложенных данных можно полагать, что ЦТ, повышая функциональную активность Т-лимфоцитов, что подтверждается изменением морфологии и биоаминого обеспечения тимуса, и В-лимфоцитов, что доказывается изменением иммунограммы, усиливает кооперативное взаимодействие между этими двумя важнейшими клеточными популяциями. Иммунная система состоит из ряда тесно связанных в функциональном плане компонентов, задача которых заключается в элиминации из организма чужеродных веществ антигенной природы. У каждого из компонентов этой системы могут быть свои относительно специфические агенты, модулирующие уровень их активности. Вероятно, ЦТ действует на разные уровни иммунной системы, работающей по принципу системы мобилей (Петров Р. В., 1987): активация одного из ее компонентов с помощью иммунных препаратов ведет к активации других участников системы, вследствие чего и получается положительный эффект.

Изменение со стороны фагоцитарной активности клеток крови, наблюдаемые нами практически во все периоды исследования, указывают на усиление поглотительной способности нейтрофилов, а также повышение цито-токсической активности моноцитов, что доказывает укрепление первого этапа защиты при попадании антигена в организм. Усиливается биосинтетическая активность этих клеток, что выражается в синтезе большого количества лизосомальных ферментов, используемых для переваривания фагоцитируемого материала. Это подтверждается снижением соотношения (СТ+ГСТ)/КА в указанных клетках. Таким образом, еще одной мишенью ЦТ в организме являются клетки моноцитарно — макрофагального ряда. Трепел усиливает фагоцитарную функцию клеток этой системы, обеспечивая поглощение и уничтожение микроорганизмов, вероятно за счет активации лизосомальных ферментов и синтеза цитокинов. Стимуляция активности фагоцитарного звена иммунитета приводит к повышению антимикробного иммунитета.

Подобные изменения доказывают, что применение ЦТ, в конечном счете, приводит к усилению реактивности организма.

Помимо положительного влияния на иммунную систему, нами также отмечено повышение содержания общего белка крови на 2-х и 3-х недельном сроке, что можно связать либо с увеличением синтетической функции печени, либо с повышением уровня Ig, имеющих белковую природу.

Поскольку существует прямая связь между уровнем мочевины в крови и повышением уровня бежа, что является компенсаторной реакцией для сохранения азотистого равновесия организма, то мы наблюдаем увеличение мочевины в крови. Мочевина синтезируется в печени, следовательно, можно сделать вывод, что синтетическая функция печени при потреблении ЦТ не страдает. Отсутствие выраженного подъема креатинина и мочевины на 2-х и 3-х недельном сроке, а также нормализация этих показателей через 4 недели кормления ЦТ косвенно исключает токсическое действие ЦТ на почки.

Понижение уровня мочевой кислоты в первые 3 недели приема трепела указывает на то, что не происходит повышенного распада пуриновых оснований. Так как пуриновые основания являются основным компонентом нуклеиновых кислот, то, следовательно, на фоне ЦТ не происходит распада клеточных элементов, таким образом, можно сделать вывод, что ЦТ в указанной дозе приема не обладает токсическим действием на ткани.

Следует отметить тенденцию к снижению уровней холестерина. В силу того, что кристаллическая решетка ЦТ имеет на своей поверхности молекулы большого количества различных катионов, трепел активно адсорбирует как растворимые субстанции, так и микрочастицы, циркулирующие в крови, то снижение этих показателей, по нашему мнению, связано с энтеросорбцион-ным действием ЦТ.

Невозможно не обратить внимание на снижение уровня гемоглобина и количества эритроцитов на фоне приема ЦТ. Если на 2-х и 3-х недельном сроке снижение этих показателей недостоверно и в пределах ошибки, то через 4 недели приема ЦТ наблюдается значимое уменьшение уровня НЬ и числа эритроцитов (р<0,001). Вероятно, это можно связать с выраженным энте-росорбционным действием ЦТ (Колотилова M. JL, 2000; Колотилова M. JL, Иванов JI.H., 2004), благодаря чему наблюдается снижение всасывания железа из кишечника.

При проведении корреляционного анализа следует отметить, что практически во всех биоаминсодержащих структурах тимуса сильная прямая корреляционная взаимосвязь наблюдается в паре СТ-КА как у интактных крыс, так и при кормлении ЦТ. Вероятно, это связано с тем, что серотонин и КА обладают противоположными действиями, взаимно вытесняя друг друга из тканевых резервов (Гордон Д.С. и др., 1982).

Обращает на себя внимание, что минимальная корреляционная зависимость между биогенными аминами структур тимуса наблюдается через 2 недели кормления ЦТ, затем сила корреляционных взаимоотношений постепенно увеличивается с достижением наибольшего количества корреляционных связей через 4 недели. Вероятно, это указывает на то, что 2-х — недельная длительность кормления ЦТ еще не приводит к адаптации организма к приему препарата, а через 4 недели происходит направленное включение различных компонентов иммунной системы в иммунный процесс.

Раздельно проанализирована структура заинтересованности различных биогенных аминов в корреляционных взаимодействиях в биоаминсодержа-щих структурах тимуса и крови у интактных крыс и в разные сроки кормления ЦТ. Ведущую роль в этих процессах играют КА.

Обращает на себя внимание усиление силы корреляционных взаимосвязей между биоаминами тимуса и крови к 4 неделям приема ЦТ. При этом, также как и между биоаминами тимуса, крови, минимальная сила связей регистрируется на 2 — х недельном сроке, что подтверждает мысль об отсутствии системного влияния ЦТ при этом сроке кормления.

Поскольку увеличение значения соотношения (СТ+ГСТ)/КА приводит к снижению активности клеток, а его уменьшение, наоборот, характеризует повышение их активности (Стручко Г. Ю., 2003), то наличие отрицательных корреляционных связей между этим соотношением в структурах коркового и мозгового вещества и лимфоцитами крови вполне объяснимы функциональным значением коркового и мозгового вещества тимуса: во внутренней кортикальной и медуллярной зонах происходит антигеннезависимая дифферен-цировка и становление аутотолерантности Т-лимфоцитов (Гриневич Ю.А., Чеботарев В. Ф., 1989). Говоря другими словами, повышение активности клеток коркового и мозгового вещества приводит к увеличению лимфоцитов крови.

Большой интерес представляет увеличение и изменение направленности силы корреляции в отрицательную сторону между серотонином лимфоцитов и полиморфноядерных лейкоцитов и их количеством. Аналогичные изменения коэффициента корреляции наблюдаются между соотношением (СТ+ГСТ)/КА в вышеуказанных структурах и количеством лейкоцитов. Вероятно, это связано с реципрокным увеличением активности серотонинерги-ческой системы вследствие повышения количества лимфоцитов. Скорее всего, это необходимо для поддержания иммунной системы в состоянии равновесия.

Через 3 недели кормления ЦТ наблюдается сильная отрицательная корреляционная связь между ГСТ лейкоцитов крови и фагоцитарной активностью нейтрофилов. Как известно (Земсков A.M., 1997), гистамин через цАМФ тормозит реакцию фагоцитоза нейтрофилов, поэтому повышение уровня ГСТ приводит к снижению их фагоцитарной активности.

Так как ГСТ снижает пролиферацию и дифференцировку лимфоцитов в В-эффекторные клетки, то это приводит к появлению отрицательных корреляционных связей со всеми иммуноглобулинами через 2 и 3 недели приема ЦТ. Подобные корреляционные зависимости наблюдаются между СТ лимфоцитов крови и Ig на этих же сроках. Это связано с тем, что серотонинерги-ческая система активирует супрессорную активность и уменьшает выработку IgM и IgG В-лимфоцитами (Девойно JI.B. и др., 1983).

Невозможно не обратить внимание, что через 4 недели кормления ЦТ коэффициенты корреляции в парах: биоамины структур крови — показатели крови преимущественно принимают положительное значение. С одной стороны, это может быть связано с резким уменьшением уровня биогенных аминов в крови на данном сроке, а с другой стороны — с непосредственным действием ЦТ на структуры крови на этом сроке кормления. Данный результат несопоставим с нормой, а поскольку ЦТ является биологически активной добавкой и целью его приема предполагается иммунокоррекция, то очевидно, что его 4-х недельный прием ЦТ не может быть рекомендован с этой целью, так как это приводит к некоторому напряжению работы иммунной системы.

При применении методов параметрической статистики к имеющимся данным показателей крови обнаружено, что на всех сроках исследования сильная прямая зависимость наблюдается между количеством лейкоцитов и лимфоцитов. Интерес представляет наличие отрицательного знака коэффициента корреляции между IgG и другими Ig через 3 и 4 недели приема ЦТ. Данный факт можно объяснить разным временем начала и завершения синтеза иммуноглобулинов: IgM и IgA начинают синтезироваться значительно быстрее IgG. Отмечается усиление корреляционных взаимоотношений между показателями крови уже через 3 недели кормления ЦТ.

Таким образом, при попытке оценить степень взаимозависимости и взаимообусловленности процессов, происходящих в тимусе и в крови при кормлении ЦТ нами было проанализировано 92 линейные корреляционные пары. При этом максимальное количество слабых корреляционных взаимосвязей наблюдалось через 2 недели приема ЦТ, минимальное — через 4 неде-ли (табл.26).