Наночастицы гидрофобных природных соединений как адъюванты

6. Выводы.

1. Получены и охарактеризованы наночастицы, несущие либо положительный, либо отрицательный заряд, на основе тритерпеноидов бересты, дигидрокверцетина и гликосфинголипидов с размером частиц 100−400 нм. Разработаны методы получения двух последних типов наночастиц.

2. Было показано, что основную роль в стабилизации САНЧ играет кофеат бетулина, придавая им значительный отрицательный заряд, препятствующий их агрегации (дзета-потенциал САНЧ -32 мВ). При рН>9 образуются сферические частицы, понижение рН приводит к образованию частиц, отличных от сферических, и нестабильных дисперсий. Образование САНЧ происходит путем последовательного формирования двух структур: сфер размером около 400 нм и цепочек с характерным для САНЧ размером 100 нм.

3. САНЧ при концентрации. 55 мкг/мл в сыворотке практически не взаимодействуют с эритроцитами, но ассоциируются почти со 100% клеток иммунной системы (грануло'цитами, лимфоцитами и моноцитами). Наиболее выраженное взаимодействие САНЧ наблюдается с фагоцитирующими клетками (гранулоцитами и моноцитами). Выявлены основные белки плазмы крови, которые' адсорбируются на САНЧ: альбумин, АроА-1У, АроЕ, Состав адсорбирующихся белков должен способствовать увеличению циркуляции частиц в крови- (альбумин) и нацеливанию их в мозг (АроА-1У, АроЕ, АроХ). Было показано, что САНЧ в концентрации 0.835 мг/мл адсорбируют от 47 до 62% билирубина при его содержании в плазме крови, превышающем норму от 1.5 до 12 раз.

4. Было установлено, что подобранные композиции на основе тритерпеноидов1 бересты, дигидрокверцетина и гликосфинголипидов обладают выраженными адъювантными свойствами. Экспериментальные вакцины на основе расщепленного вируса гриппа птиц Н5Ы1 А/Вьетнам/1194/2004 и рекомбинантного НВэА§с применением САНЧ из тритерпеноидов бересты в качестве адъювантов показали наилучшие результаты. По иммуногенности они превосходили аналогичные вакцины с гидроксидом алюминия.

5. Было показано, что САНЧ из СТБ не оказывают цитотоксического эффекта на клетки НеЬа и 1игка1 вплоть до концентрации СТБ-512 мкг/мл, в то время как дисперсии < «гликосфинголипидов с мирамистином цитотоксичны при концентрациях выше 50 мкг/мл.

6. Было разработано несколько вариантов установок для непрерывного процесса получения дисперсии САНЧ. Замена стадии упаривания ультрафильтрацией существенно ускоряет процесс концентрирования дисперсии САНЧ.

7. Были разработаны: метод определения концентрации САНЧ тритерпеноидов бересты, основанный на измерении концентрации кофеата бетулина, и метод определения концентрации ТГФ с помощью ВЭЖХпоказано, что в конечных дисперсиях САНЧ содержание ТГФ в миллионы раз меньше ЛД50. Подобран криопротектор (сахароза) для лиофилизации САНЧ.

7. Благодарности.

Выражаю благодарность:

• фирме «Биолек» за любезно предоставленные липиды;

• д.б.н. В. И. Попенко, ИМБ им. В. А. Энгельгардта РАН за электронную микрофотосъемку;

• K.X.H. C.B. Еремину за помощь в проведении ВЭЖХ;

• О. Г. Роговой, РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН за внимание и помощь в проведении измерений распределения частиц по размерам на автокорреляционном спектрофотометре «Наносайзер»;

• О. С. Харченко, ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ за лиофилизацию нанодисперсий;

• A.C. Гамбарян, ГУ ИПВЭ им. М. П. Чумакова РАМН за внимание и помощь в проведении биологических испытаний адъювантов;

• С. О. Мироновой, вед. инж. Т. И. Игнашковой, Б. Б. Шайбонову НИИ ОПП РАМН за проведение исследований токсичности НЧ in vitro;

• Т. Н. Лыу за помощь в проведении исследований по взаимодействию САНЧ с клетками и белками крови;

• к.б.н. М. И. Лукашиной, РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН за помощь в проведении экспериментов на проточном цитофлуориметре;

• А. М. Бичучер, ФБУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского за забор крови и выделение плазмы;

• И. А. Деминой, НИИ физико-химической медицины, сотруднице ООО «PYNNY» за проведение двумерного гель-электрофореза белков плазмы крови;

• И. А. Тинькову, сотруднику ИБХ им. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН за возможность использования ультрацентрифуги;

• проф., д.х.н. А. П. Каплуну, студентам кафедры биотехнологии и биотехнологии: за то, что сдали кровь для экспериментов;

• также благодарю весь коллектив кафедры биотехнологии и биотехнологии за оказанную помощь и поддержку, особенно О. В. Есипову, Д. А. Безрукова;

• отдельное спасибо моей семье за понимание, помощь и поддержку.

1. A. Pashine, J.B. Ulmer, N.M. Valiante // Innate immune mechanisms and the identification of immune potentiators as vaccine adjuvants // Immunopotentiators in modem vaccines. 2006. P. 57−72.

2. S.A. Plotkin // Vaccines: the Fourth Century // Clin. Vaccine Immunol. 2009. V. 16 (12). P.1709−1719.

3. R. Rappuoli, C.W. Mandl, S. Black, E. De Gregorio // Vaccines for the twenty-first century society //Nat. Rev. Immunol. 2011. V. 11 (12). P. 865−872.

4. B.B. Красильникова // Алгоритм выбора наночастиц как носителей лекарственных субстанций // Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. МИТХТ им. М. В. Ломоносова. Москва. 2009.

5. V.E.J.C Schijns // Immunological concepts of vaccine adjuvant activity // Curr. Opin. Immunol. 2000. V. 12 (4). P. 456−463.

6. V.E.J.C. Schijns // Mechanisms of vaccine adjuvant activity: initiation and regulation of immune responses by vaccine adjuvants // Vaccine. 2003. V. 21. P. 829−831.

7. R. Brunner, E. Jensen-Jarolim, I. Pali-Scholl // The ABC of clinical and experimental adjuvantsa brief overview // Immunol. Lett. 2010. V. 128 (1). P. 29−35.

8. K. Kawakami, T. Yoshikawa, Y. Moroto, E. Kanaoka, K. Takahashi, Y. Nishihara, K. Masuda // Microemulsion formulation for enhanced absorption of poorly soluble drugs. I. Prescription design. // J. Cont. Release. 2002. V.81. P. 65−74.

9. A.C. Allison // Squalene and squalane emulsions as adjuvants // Methods 1999. V. 19. P. 87−93.

10. A. Roux, A. Marx, O. Burkhardt, B. Schweiger, A. Borkowski, A. Banzhoff, M.W.R. Pletz, H. Lode // Impact of corticosteroids on the immune response to a MF59-adjuvanted influenza vaccine in elderly COPD-patients // Vaccine. 2006. V. 24. P. 1537−1542.

11. A. Podda // The adjuvanted influenza vaccines with novel adjuvants: experience with the MF59-adjuvanted vaccine // Vaccine. 2001. V. 19. P. 2673−2680.

12. A. Podda, G. Del Giudice, D.T. O’Hagan // MF59: a safe and potent adjuvant for human use // Immunopotentiators in Modem Vaccines. 2006. P. 149−159.

13. I. Azuma // Synthetic immunoadjuvants: application to non-specific host stimulation and potentiation of vaccine immunogenicity // Vaccine. 1992. V. 10. P. 1000−1006.

14. A.C. Allison, N.E. Byars // Immunological adjuvants: desirable properties and side-effects // Mol. Immunol. 1991. V. 28. P. 279−284.

15. H.S. Warren, F.R. Vogel, L.A. Chedid // Current status of immunological adjuvants // Ann. Rev. Immunol. 1986. V. 4. P. 369−388.

16. H.F. Stills // Adjuvants and antibody production: dispelling the myths associated with Freund’s complete and other adjuvants // ILAR J. 2005. V. 46. P. 280−293.

17. D. Stewart-Tull // The future potential for the use of adjuvants in human vaccines. In: A.A. Hincal, H.S. Kas // Biomedical Science and Technology: Recent Developments in the Pharmaceutical and Medical Sciences. NY: Plenum Press. 1998. P. 129−136.

18. P.C. Ferber, P. Ossent, F.R. Homberger, R.W. Fischer // The generation of monoclonal antibodies in mice: influence of adjuvants on the immune response, fusion efficiency and distress //Lab. Anim. 1999. V. 33. P. 334−350.

19. D.E. Stewart-Tull // Adjuvant formulations for experimental vaccines // Methods Mol. Med. 2003. V. 87. P. 175−194.

20. V.M. Jennings // Review of selected adjuvants used in antibody production H J. ILAR. 1995. V. 37. P. 119−125.

21. E. Ribi, J.L. Cantrell, K. Takayama, N. Qureshi, J. Peterson, H.O. Ribi // Lipid A and immunotherapy//Rev. Infect. Dis. 1984. V. 6. P. 567−584.

22. F.R. Vogel, M.F. Powell // A compendium of vaccine adjuvants and excipients. In: M.F. Powell, M.J. Newman // Vaccine Design. The Subunit and Adjuvant Approach. NY: Plenum. Press. 1995. P. 141−227.

23. S.K. Sahoo, V. Labhasetwar // Nanotech approaches to drug delivery and imaging // Drug Deliv. Today. 2003. V. 8. N. 24. P. 1112−1120.

24. P. S. Gill, B.M. Espina, F. Muggia, S. Cabriales, A. Tulpule, J.A. Esplin, H.A. Liebman, E. Forssen, M.E. Ross, A.M. Levine // Phase I/II clinical and pharmacokinetic evaluation of liposomal daunorubicin//J. Clin. Oncol. 1995. V. 13 (4). P. 996−1003.

25. J.M. Sual, A. Annapragada, J.V. Natarajan, R.V. Bellamkonda // Controlled targeting of liposomal doxorubicin via folate receptor in vitro. // J. Cont. Rel. 2003. V. 92. P. 49−67.

26. C.R. Alving // Liposomes as carriers of antigens and adjuvants // J. Immunol. Methods. 1991. V. 140. P. 1−13.

27. D.D. Lasic, J.J. Vallner, P.K. Working // Sterically stabilized liposomes in cancer therapy and gene delivery // Curr. Opin. Мої. Ther. 1999. V. 1. N. 2. P. 177−185.

28. S.K. Singh, P. S. Bisen // Adjuvanticity of stealth liposomes on the immunogenicity of synthetic gp41 epitope of HIV-1 //Vaccine. 2006. V. 24. P. 4161−4166.

29. I.N. Mbawuike, P.R. Wyde, P.M. Anderson // Enhancement of the protective efficacy of inactivated influenza A virus vaccine in aged mice by IL-2 liposomes // Vaccine. 1990. V. 8. P.347−352.

30. N.C. Phillips, A. Emili // Enhanced antibody response to liposome-associated protein antigens: preferential stimulation of IgG2a/b production//Vaccine. 1992. V. 10. P. 151−158.

31. J.D. Almeida, D.C. Edwards, C.M. Brand, T.D. Heath // Formation of virosomes from influenza subunits and liposomes // Lancet. 1975. N.8. P. 899−901.

32. А. П. Каплун, Л. Б. Шон, Ю. М. Краснопольский, В. И. Швец // Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ // Вопр. Мед. Хим. 1999. Вып. 1. Т. 5.

33. H.S. Kim, Y.S. Park // Effect of lipid, compositions on gene transfer into 293 cells using Sendai F/HN-virosomes// J. Biochem. Мої. Biol. 2002. V. 35. P. 459−464.

34. J. Shoji, Y. Tanihara, T. Uchiyama, A. Kawai // Preparation of virosomes coated with the vesicular stomatitis virus glycoprotein as efficient gene transfer vehicles for animal cells // Microbiol. Immunol. 2004. V. 48. P. 163−174.

35. R.S. Haddad, L.M. Hutt-Fletcher // Depletion of glycoprotein gp85 from virosomes made with Epstein-Barr virus proteins abolishes their ability to fuse with virus receptor-bearing cells // J. Virol. 1989. V. 63. P. 4998−5005.

36. R.K. Scheule // Novel preparation of functional Sindbis virosomes // Biochemistry. 1986. V. 25. P.4223−4232.

37. R. Gluck, R. Mischler, S. Brantschen, M. Just, B. Althaus, S J. Jr Cryz // Immunopotentiating reconstituted influenza virus virosome vaccine delivery system for immunization against hepatitis A // J. Clin. Invest. 1992. V. 90. P. 2491−2495.

38. E. Waelti, N. Wegmann, R. Schwaninger, A. Wetterwald, C. Wingenfeld, B. Rothen-Rutishauser, C.D. Gimmi // Targeting her-2/neu with antirat Neu virosomes for cancer therapy // Cancer Res. 2002. V. 62. P. 437−444.

39. R. Gluck, K.G. Burri, I. Metcalfe // Adjuvant and antigen delivery properties of virosomes // Curr. Drug Deliv. 2005. V. 2. P. 395¹⁰⁰.

40. C.R. Kensil // Immunomodulatory adjuvants from Quillaja saponaria // Immunopotentiators in Modern Vaccines. 2006. P. 109−122.

41. R.E. Smith, A.M. Donachie, F.H. McLaren, A.M. Mowat // Preservation of mucosal and systemic adjuvant properties of ISCOMS in the absence of functional interleukin-4 or interferon-gamma// Immunology. 1998. V. 93. P. 556−562.

42. H.X. Sun, Y. Xie, Y.P. Ye // ISCOMs and ISCOMATRIX™ // Vaccine // 2009. V. 27. P.4388−4401.

43. M.A. Thapar, E.L. Parr, J.J. Bozzola, M.B. Parr // Secretory immune responses in the mouse vagina after parenteral or intravaginal immunization with an immunostimulating complex (ISCOM) //Vaccine. 1991. V. 9. P. 129−133.

44. J. Myschik, D.G. Lendemans, W.T. McBurney, P.H. Demana, S. Hook, T. Rades // On the preparation, microscopic investigation and application of ISCOMs // Micron. 2006. V. 37 (8). P. 724−734.

45. G.F. Kersten, D.J. Crommelin // Liposomes and ISCOMS as vaccine formulations // Biochim. Biophys. Acta. 1995. V. 1241. P. 117−138.

46. A.M. Mowat, A.M. Donachie, G. Reid, O. Jarrett // Immune-stimulating complexes containing Quil A and protein antigen prime class I MHC-restricted T lymphocytes in vivo and are immunogenic by the oral route // Immunology. 1991. V. 72. P. 317−322.

47. A.M. Mowat, K.J. Maloy, A.M. Donachie // Immune-stimulating complexes as adjuvants for inducing local and systemic immunity after oral immunization with protein antigens // Immunology. 1993. V. 80. P. 527−534.

48. H. Takahashi, T. Takeshita, B. Morein, S. Putney, R.N. Germain, J.A. Berzofsky // Induction of CD8+ cytotoxic T cells by immunization with purified HIV-1 envelope protein in ISCOMs // Nature. 1990. V. 344. P. 873−875.

49. A.M. Mowat, A.M. Donachie // ISCOMS a novel strategy for mucosal immunization? // Immunol. Today. 1991. V. 12. P. 383−385.

50. J. Ekstrom, K.F. Hu, K.L. Bengtsson, B. Morein // Iscom and iscom-matrix enhance by intranasal route the IgA responses to OVA and rCTB in local and remote mucosal secretions // Vaccine. 1999. V. 17. P. 2690−2701.

51. S. Sjolander, D. Drane, R. Davis, L. Beezum, M. Pearse, J. Cox // Intranasal immunisation with influenza-ISCOM induces strong mucosal as well as systemic antibody and cytotoxic' T-lymphocyte responses // Vaccine. 2001. V. 19. P. 4072−4080.

52. M.P. Pileni, J. Tanori, A. Filankembo // Biomimetic strategies for the control of size, shape and self-organization of nanoparticles // Coll. Surfaces A: Physicochem. Engineer. Aspects. 1997. V. 123−124. P. 561−573.

53. M.P. Desai, V. Labhasetwar, E. Walter, R.J. Levy, G.L. Amidon // The mechanism of uptake of biodegradable microparticles in Caco-2 cells is size dependent // Pharm. Res. 1997. V. 14.1. N. 11. P. 1568−1573.

54. M. Chorny, I. Fishbein, H.D. Danenberg, G. Golomb // Study of the drug release mechanism from tyrphostin AG-1295-loaded nanospheres by in situ and external sink methods // J. Control. 2002. V. 83. P. 401−414.

55. T. Banerjee, S. Mitra, A.K. Singh, R.K. Sharma, A. Maitra // Preparation, characterization and biodistribution of ultrafine chitosan nanoparticles // Int. J. Pharm. 2002. V. 243. P. 93−105.

56. R. Langer // Tissue engineering: a new field and its challenges // Pharm Res. 1997. V. 14. N. 7. P. 840−841.

57. R.J. Raghuvanshi, A. Mistra, G.P. Talwar, R.J. Levy, V. Labhasetwar // Enhanced immune response with a combination of alum and biodegradable nanoparticles containing tetanus toxoid // J Microencapsul. 2001. V. 18. P. 723−732.

58. T. Pitaksuteepong, N.M. Davies, M. Baird, T. Rades // Uptake of antigen encapsulated in polyethylcyanoacrylate nanoparticles by D1-dendritic cells // Pharmazie. 2004. V. 59. P. 134−142.

59. Y. Fujita, H. Taguchi // Current status of multiple antigen-presenting peptide vaccine systems: Application of organic and inorganic nanoparticles // Chem. Cent. J. 2011. V. 5 (1).

60. R. Levy, U. Shaheen, Y. Cesbron, V. See // Gold nanoparticles delivery in mammalian livecells: a critical review // Nano. Rev. 2010. V. 1.i.

61. C. Villiers, H. Freitas, R. Couderc, M.-B. Villiers, P. Marche // Analysis of the toxicity of gold nano particles on the immune system: effect on dendritic cell functions // J. Nanopart. Res. 2010. V. 12 (1). P. 55−60.

62. A. Tomii, F. Masugi // Production of anti-platelet-activating factor antibodies by the use of colloidal gold as carrier // Jpn. J. Med. Sci. Biol. 1991. V. 44 (2). P. 75−80.

63. Y.S. Chen, Y.C. Hung, W.H. Lin, G.S. Huang // Assessment of gold nanoparticles as a size-dependent vaccine carrier for enhancing the antibody response against synthetic food-and-mouth disease virus peptide //Nanotechnol. 2010. Y. 21 (19).

64. S. Parween, P.K. Gupta, V.S. Chauhan // Induction of humoral immune response against PfMSP-l (19) and PvMSP-l (19) using gold nanoparticles along with alum // Vaccine. 2011. V., 29 (13). P. 2451−2460.

65. M.O. Oyewumi, A. Kumar, Z. Cui // Nano-microparticles as immune adjuvants: correlating particle sizes and the resultant immune responses // Expert Rev Vaccines. 2010. V. 9 (9). P. 1095−1107.

66. S.D. Xiang, A. Scholzen, G. Minigo, et al. // Pathogen recognition and development of particulate vaccines: does size matter? // Methods. 2006. V. 40 (1). P. 1−9.

67. P.L. Mottram, D. Leong, B. Crimeen-Irwin, et al. // Type 1 and 2 immunity following vaccination is influenced by nanoparticle size: formulation of a model vaccine for respiratory syncytial virus // Mol. Pharm. 2006. V. 4 (1). P. 73−84.

68. J.M. Brewer, K. G J. Pollock, L. Tetley, D.G. Russell // Vesicle size influences the trafficking, processing, and presentation of antigens in lipid vesicles // J. Immunol. 2004. V. 173. P. 6143−6150.

69. J.W. Yoo, S. Mitragotri //Polymer particles that switch shape in response to a stimulus // PNAS. 2010 V. 107 (25). P. 11 205−11 210.

70. H. Zhang, H. Zhao, J. Wang, J. Chen, Y. Lu, J. Yun // Facile preparation of monodisperse pharmaceutical colloidal spheres of atorvastatin calcium via self-assembly // Small. 2009. V. 5 (16). P. 1846−1849.

71. A.H. Бастрич // Магистерская диссертация. МИТХТ им. М. В. Ломоносова. Москва 2006.

72. M.J. Francis, N. Gulati, R.M. Pashley // The dispersion of natural oils in de-gassed water // J. of Colloid and Interface Sci. 2006. V. 299. P. 673−677.

73. MJ. Francis, R.M. Pashley // A study of de-gassed oil in water dispersions as potential drug delivery systems// Colloids Surf. A. 2005. V. 260. P. 7−16.

74. V. Tandon, S.K. Bhagavatula, W.C. Nelson, B.J. Kirby // Zeta potential and electroosmotic mobility in microfluidic devices fabricated from hydrophobic polymers: 1. The origins of charge // Electrophoresis. 2008. V. 29. P. 1092−1101.

75. V. Tandon, В J. Kirby // Zeta potential and electroosmotic mobility in microfluidic devices fabricated from hydrophobic polymers: 2. Slip and interfacial water structure // Electrophoresis. 2008. V. 29. P. 1102−1114.

76. E. Kovac-Besovic, K. Duric, Z. Kalodera, E. Sofic // Identification and isolation of pharmacologically active triterpenes in Betuale cortex, Betula pendula Roth., Betulaceae // Bosn. J. Basic. Med. Sci. 2009 V. 9 (1). P. 31−38.

77. P.A. Krasutsky // Birch bark research and development // Nat. Prod. Rep. 2006. V. 23, P. 919−942.

78. P. W. Linder, A. Voye // Potentiometrie investigations of the equilibria between caffeic acid and copper (II), zinc (II), iron (II) and hydrogen ions in aqueous solution // Polyhedron. 1987. V. 6. Iss. 1. P. 53−60.

79. M. Wegener, M. Fevre, A.R. Paschedag, M. Kraume // Impact of Marangoni instabilities on the fluid dynamic behaviour of organic droplets // International Journal of Heat and Mass Transfer. V. 52. (11−12). 2009. P. 2543−2551.

80. M. Wegener, A. Paschedag, M. Kraume // Mass transfer enhancement through Marangoni instabilities during single drop formation // International Journal of Heat and Mass Transfer. 2009. N. 52. P. 2673−2677.

81. M. Howard, M.D. Shapiro // Practical flow cytometry //Forth edition. Wiley-Liss. 2003. P. 721.

82. M. Luck, B.-R. Paulke, W. Schroder, T. Blunk, R.H. Muller // Analysis of plasma protein adsorption on polymeric nanoparticles with different surface characteristics // John Wiley & Sons. Inc. 1998. P. 478−485.

83. T.M. Goppert, R.H. Muller // Adsorption kinetics of plasma proteins on solid lipid nanoparticles for drug targeting. Int. J. Pharm. 2005. V. 302 (1−2). P. 172−186.

84. M. Torsten, T.M. Goppert, R.H. Muller // Protein adsorption patterns on poloxamerand poloxamine-stabilized solid lipid nanoparticles (SLN) // Eur. J. Pharm, and Biopharm. 2005. V. 60. P. 361−372.

85. S. Schmidt, R.H. Muller // Plasma protein adsorption patterns on surfaces of Amphotericin B-containing fat emulsions // Int. J. Pharm. 2003. V. 254. P. 3−5.

86. J. Kreuter, D. Shamenkov, V. Petrov, P. Ramge, K. Cychutek, C. Koch-Brandt, R. Alyautdin // Apolipoprotein-mediated transport of nanoparticle-bound drugs across the blood-brain barrier // J. Drug Target. 2002. V. 10 (4). P. 317−325.

87. Г. И. Ковалев, P.M. Салимов, В. В. Балакшин, A.H. Чистяков // Ноотропное средство. Патент РФ. RU 2 300 389. 10.06.2007. Бюлл. № 16.

88. Г. И. Ковалев, Д. А. Абаимов, Ю. Ю. Фирстова, В. В. Балакшин, А. Н. Чистяков // Средство для профилактики и лечения болезни Паркинсона. Патент РФ. RU 2 324 492. 20.05.2008. Бюлл. № 14.

89. О. А. Верховский, C.JI. Кальнов, В. В. Балакшин, А. Н. Чистяков // Способ продления жизни больных прионными болезнями. Патент РФ. RU 2 353 379. 27.04.2009. Бюлл. № 12.

90. М.Б. Щербинина// Низкий уровень билирубина крови: возможное диагностическое и прогностическое значение // Клиническая медицина. 2007. Т. 85, № 10. С. 10−14.

91. В. Н. Титов, М. Г. Творогова // Методические приемы исследования билирубина // Клиническая лабораторная диагностика. М.: Медицина. 1994. № 5. С. 36−38.

92. J.B. Landis, H.L. Pardue // Kinetics of the reactions of unconjugated and conjugated bilirubins with p-diazo-benzenesulfonic acid // Clin. Chem. 1978. V. 24. P. 1690−1699.

93. M. Michaelsson // Bilirubin determination in serum and urine // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1961. V. 13. N. 56. P. 1−80.

94. B. Nosslin // The direct diazo reaction of bile pigments in serum. Experimental and clinical studies // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1960. V. 12. N. 49. P. 1−176.

95. S. Meites, C.K. Hogg // Studies on the use of the van den Bergh reagent for determination of serum bilirubin // Clin. Chem. 1959. V. 5. P. 470¹⁷⁸.1Ц P. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл // Биохимия человека. Т. 2. М.: Мир. 1993. 415 с.

96. B.J. Marquis, S.A. Love, K.L. .Braun, C.L. Haynes // Analytical methods to assess nanoparticle toxicity // Analyst. 2009. V. 134. P. 425−439.

97. A.B. Глушкова, A.C. Радилов, B.P. Рембовский // Нанотехнологии и нанотоксикология взгляд на проблему // Токсикологический вестник. 2007. № 6. С. 4−8.

98. A. Dowling, R. Clift, N. Grobert et al. // Nanoscience and nanotechnologies: opportunities and uncertainties // The Royal Society. 2004. P. 116.118 http://www.erowid.org/archive/rhodium/pdf/thfrecovery.pdf.

99. P. Jaaskelainen // Betulinol and its utilization // Paperi ja Puu. 1981. V. 63. N. 10. P.599−603.

100. B.P. Pradhan, A. Hassan, T. Ray I I Reduction of ketones to epimeric alcohols with potassium hydroxide-diethylene glycol // Tetrahedron. 1985. V. 41. N. 12. P. 2513−2516.r.