Характеристика Helicobacter pylori, выделенных при различных формах хеликобактериоза в Таджикистане

Актуальность темы

Открытие этиологической и патогенетической роли микробов рода Helicobacter в генезе различной патологии человека, в частности, при хронических гастритах, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, явилось важнейшим достижением современной микробиологии и гастроэнтерологии. В настоящее время не вызывает сомнения, что H. pylori играет значительную роль в возникновении гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (Аруин JI. И., 1997,1999; Lehmann F.S. et al., 2002; Salih B.A., 2004; Vaira D. et al., 2005). Этот микроб обнаруживают у 95% больных, страдающих язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБДПК), у 70−80% больных язвенной болезнью желудка и в 60−70% случаев при раке желудка (Rodrigues M.N., 2004; Tsai C.J. et al., 2005; Mueller A., 2005).

Многочисленные эпидемиологические исследования, проведенные почти во всех странах, свидетельствуют о широком распространении хеликобактериоза. H. pylori обнаружен на всех континентах, практически в каждой обследованной популяции (Mitchell Н.М., 1992; Gasbarini G., 1995; Fallone C.A., 2000; Kim S.Y., 2001; Leanza A., 2004).

Существуют два варианта распространенности H.pylori. Согласно первому варианту, характерному в основном для развивающихся стран, H. pylori выявляется с высокой частотой уже в детском возрасте (до 90%), а к 30-ти годам H. pylori инфицировано почти все население. При другом варианте распространенности H. pylori идет постепенное нарастание инфицированное&tradeс возрастом человека (возрастная когорта) — у детей в 5−15% случаев, а у взрослых в 20−65%. Этот вариант распространенности H. pylori встречается в основном в экономически развитых странах (Klein P.D., at al., 1991; Goodman K.J. at al., 1997; Семин С. Г., 2000; Kivi M., 2003;).

Несмотря на то, что во многих ведущих научных центрах мира проводятся исследования, посвященные различным аспектам хеликобактериоза, многие вопросы этой проблемы остаются открытыми. В частности, неизвестно, почему при инфицированности в различных странах от 70 до 100% населения, частота Н.ру1оп-ассоциированных страданий гораздо меньше. Не до конца ясно, почему одни и те же штаммы бактерий могут участвовать в столь различных заболеваниях, как гастрит и MALT-лимфома.

Дискутабельным остается и вопрос, связанный с механизмом заражения хеликобактерами. Большинство исследователей считает, что основными источниками инфекции является больной человек или бактерионосители. Имеются указания (Webb P.M. at al., 1996; Андерсен A., 2003), что H. pylori могут переноситься домашними животными (кошки, собаки). Однако роль этих и других домашних животных, как источников инфекции для человека требует более глубокого изучения.

В научной литературе накапливаются данные о гетерогенности выделяемых штаммов H.pylori. В настоящее время при помощи ПЦР полностью расшифрована генная структура H.pylori. Путем молекулярного анализа хромосомной ДНК установлено, что геном H. pylori содержит 1600 генов и по наличию основных генов патогенности их распределяют на генотипы (Kersulete D., at al., 1999, 2000; Говорун В. М. и соавт., 2000, 2002; Catalano H.I. at al., 2002).

Другим фактором, обусловливающим актуальность данной проблемы, является факт клинической значимости cagA и vacA генотипов H. pylori в возникновении рака желудка (Ashour А.А., 2002; Штыгашева О. В. и соавт., 2004; Макаренко Е. В., 2005), что послужило основанием считать H. pylori-инфекцию канцерогенной для человека.

Поэтому проблема ранней диагностики и адекватного лечения заболеваний верхних отделов пищеварительного тракта приобретает не только медицинское, но и социальное значение. В Таджикистане до начала настоящего исследования бактериологическая диагностика заболеваний хеликобактерной природы не проводилась. Серологические и гистологические методы, а также тестовые диагностические подходы, применяемые в некоторых научных центрах г. Душанбе, не позволяли судить о распространенности H. pylori в Таджикистане. Отсутствие эффективной лабораторной диагностики хеликобактериоза в нашей стране не позволяло составить антибиотикограмму H. pylori, циркулирующих в нашем регионе и разработать схему антихеликобактерной терапии с учетом особенностей местных штаммов. Оценка эффективности антихеликобактерной терапии с применением генетических методов диагностики у больных хеликобактериозом в Таджикистане не проводилась.

Мы считаем, что микробиологическое и генетическое изучение штаммов.

H.pylori, циркулирующих в различных специфических регионах Таджикистана имеет важное научно-практическое и социальное значение.

Исходя из выше изложенного, целью настоящей работы являлось изучение микробиологической характеристики, ПЦР-анализ и генотипирование штаммов H. pylori, изолированных из биопсийного материала СОЖ при различных формах гастродуоденальной патологии в Таджикистане.

Задачи исследования.

I. Изучить частоту обнаружения H. pylori' в биопсийном материале при различных клинических формах гастродуоденальной патологии в Таджикистане и определить чувствительность выделенных штаммов к антихеликобактерным препаратам.

2. Определить сравнительную диагностическую ценность полимеразной цепной реакции по сравнению с другими диагностическими тестами при.

H.pylori-инфекции.

3. Провести молекулярно-генетический анализ хромосомной ДНК H. pylori в биопсийном материале слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, используя для этой цели полимеразную цепную реакцию.

4. Провести генотипирование H. pylori, полученных от больных, проживающих в различных регионах Таджикистана.

Научная новизна диссертационной работы,.

I. Показана значимость бактериологических и молекулярно-генетических методов исследования при различных формах H. pylori страданий в специфических социально-бытовых и климатических условиях Таджикистана.

2. На примере штаммов H. pylori, изолированных в Таджикистане от больных с хеликобактериозом, подтверждена особенность антибиотикочувствительности микроорганизмов, циркулирующих в различных географических регионах.

3. Показано преимущество ПЦР диагностики по сравнению с другими диагностическими методами при различных H. pylori страданиях.

4. Показана широта распространенности генов, кодирующих основные факторы патогенности у штаммов H. pylori, и распределение генотипов.

H.pylori в различных регионах Таджикистана.

Теоретическая и практическая значимость диссертационной работы.

ПЦР-анализ хромосомной ДНК позволил изучить молекулярно-генетическую характеристику и провести генотипирование штаммов H. pylori, циркулирующих в различных регионах Таджикистана. Сопоставление результатов различных методов индикации и идентификации H. pylori-инфекции позволило сделать вывод о том, что среди диагностических методов при хеликобактериозе наибольшей чувствительностью и специфичностью обладает ПЦР-анализ. Показано, что распределение генотипов H. pylori в регионах Республики Таджикистан имеет большую географическую специфичность.

Составлена антибиотикограмма и определены антибиотики выбора для H. pylori, что позволяет клиницистам разработать эффективную схему эрадикационной терапии хеликобактериоза с учетом особенностей местных штаммов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Частота обнаружения H. pylori в биопсийном материале при различных формах хеликобактериоза зависит от применяемого для этой цели метода индикации и идентификации микроорганизма.

2. Диагностическая ценность различных методов лабораторной диагностики не одинакова. Молекулярно-генетические методы характеризуются высокой специфичностью и чувствительностью.

3. Антибиотикограмма штаммов H. pylori, изолированных в Таджикистане, характеризуется своей специфичностью.

4. Штаммы H. pylori, циркулирующие среди взрослого населения Таджикистана, характеризуются специфическими генетическими свойствами.

5. Распределение генотипов H. pylori в различных регионах Таджикистана не одинаково.

Достоверность полученных результатов подтверждается следующим:

1. Высокой эффективностью использованных в работе питательных сред и реактивов для культивирования и выделения H.pylori.

2. Высокой специфичностью использованного в работе молекулярно-генетического метода исследования (ПЦР).

3. Проведением статистической обработки полученных данных общепринятыми методами.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на научной конференции кафедры микробиологии (2004 г.), на годичных научных конференциях сотрудников Таджикского государственного медицинского университета (2003, 2004, 2005 гг.), на заседании проблемной комиссии ТГМУ по теоретическим медицинским дисциплинам (2004 г.).

Структура и объем диссертации

.

Материалы диссертации изложены на 117 страницах компьютерного текста, включающего введение, описание материалов и методов исследований, 2 главы собственных исследований, заключение, выводы и список литературы. Работа проиллюстрирована 17 таблицами и 7 рисунками. Указатель литературы содержит 214 источников.

ВЫВОДЫ.

1. Частота обнаружения H. pylori в биоптатах СОЖ больных с гастродуоденальной патологией в Таджикистане не одинакова. Высокая высеваемость отмечается из биопсийного материала больных с ЯБДК (81%) и низкаяпри гастритах (40%).

2. Наиболее чувствительным методом индикации H. pylori и диагностики хеликобактериоза является ПЦР. Специфичность и чувствительность данного метода составляет 100%. Высокая информативность сохраняется за бактериологическим методом исследования.

3. H. pylori, изолированные в Таджикистане характеризуются высокой чувствительностью к амоксациллину (84,1%) и доксациклину (82,3%), при сравнительно высокой резистентности к метронидазолу (52,0%).

4. Хромосома всех (100%) штаммов Hpylori, циркулирующих в Таджикистане содержит ген ureC. Данный ген можно использовать как зонд и маркер для эпидемиологического мониторинга и микробиологической диагностики H. pylori инфекций.

5. Гены, кодирующие основные факторы вирулентности, широко распространены среди штаммов H. pylori, изолированных из биопсийного материала при различных формах гастродуоденальной патологии. H. pylori различного происхождения отличаются между собой по частоте встречаемости различных генотипов.

6. Распределение генотипов H. pylori в регионах РТ имеет большую географическую специфичность. В г. Душанбе чаще встречается комбинированный ureB + cagA + cagH генотип H. pyloriв Согдской области — преимущественно генотипы vacSl и vacA2- в Кулябской зоне Хатлонской области — cagH генотип.

Практические рекомендации.

1. Бактериологическое исследование биопсийного материала при хеликобактериозе является наиболее высокоинформативным методом диагностики, который позволяет определить чувствительность H. pylori к антихеликобактериальным препаратам. Данный метод необходимо использовать во всех практических лабораториях нашей республики.

2. ПЦР является высокоспецифичным и высокочувствительным методом, позволяющим определить возбудителя при единичных копиях ДНК. Данный метод необходимо наладить во всех городских и областных бактериологических лабораториях Таджикистана.