Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы

Диссертация: Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Впервые исследованы равновесные и кинетические параметры сорбции панкреатических ферментов сверхспштыми сорбентами Стироеорб, различающимися условиями синтеза, в частности, количеством катализатора. Показано, что наибольшей емкостью и улучшенными кинетическими характеристиками обладают Стиросорбы, полученные в присутствии 1−3 моль катализатора. Осуществлен выбор оптимального носителя — Стиросорба… Читать ещё >

Содержание

  • 1. Литературный обзор
    • 1. 1. Ферменты поджелудочной железы. Свойства и применение в медицине
    • 1. 2. Основные физико-химические методы, используемые для выделения и очистки ферментов
    • 1. 3. Хроматографические методы очистки белков
      • 1. 3. 1. Полимерные носители для хроматографии
      • 1. 3. 2. Виды хроматографических процессов. Ионообменная и щдрофобная хроматография
    • 1. 4. Термодинамический и кинетико-динамический анализ сорбционнных процессов. Оптимизация хроматографического разделения БАВ
  • 2. Экспериментальная часть. а
    • 2. 1. Объекты исследования
      • 2. 1. 1. Структура и свойства панкреатических ферментов
      • 2. 1. 2. Физико-химические характеристики сорбентов
    • 2. 2. Методы исследования
      • 2. 2. 1. Определение концентрации белка по методу Лоури
      • 2. 2. 2. Метод определения углеводов
      • 2. 2. 3. Определение активности ДНК-азы
      • 2. 2. 4. Метод определения активности РНК-азы
      • 2. 2. 5. Определение протеолитичеекой активности
      • 2. 2. 6. Гельхроматографический анализ
    • 2. 3. Методики проведения сорбционных экспериментов
      • 2. 3. 1. Исследование сорбции белков в статических условиях (рН -зависимость и изотермические процессы сорбции)
      • 2. 3. 2. Исследование кинетики сорбции белков
      • 2. 3. 3. Проведение процесса сорбции и десорбции в динамических условиях
    • 2. 4. Математические методы обработки результатов
  • 3. Результаты и их обсуждение
    • 3. 1. Изучение равновесных и кинетических параметров сорбции панкреатических ферментов на различных хроматографических носителях
      • 3. 1. 1. Сорбция панкреатических ферментов на ионогенных и молекулярных сорбентах с модифицированной и немодифицированной поверхностью
  • 3. 1.2. Сорбция панкреатических ферментов на сверхсшитых полиетирольных сорбентах Стиросорб
    • 3. 2. Исследование динамических процессов сорбции и десорбции
      • 3. 2. 1. Теоретический анализ условий оптимизации. Изучение влияния скорости подвижной фазы на процесс сорбции ферментов из многокомпонентной смеси
      • 3. 2. 2. Изучение сорбции ферментов из экстракта поджелудочной железы на сорбентах с модифицированной поверхностью
      • 3. 2. 3. Изучение сорбции и десорбции ферментов в динамических условиях на сверхсшитых сорбентах Стиросорб
    • 3. 3. Масштабирование хроматографического способа очистки РНК-азы
  • Выводы

Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Производство ферментных препаратов является одним из перспективных направлений в биотехнологии. Ферментные препараты широко используются во многих отраслях промышленности: медицинской, микробиологической, парфюмерной, сельскохозяйственной и других. Особое значение в настоящее время приобретает получение лекарственных средств на основе ферментов из животного сырья, которые могут успешно заменить препараты аналогичного действия, производимые химическим и микробиологическим синтезом.

Гидролитические ферменты из поджелудочной железы крупного рогатого скота — рибонуклеаза (РЖ-аза), дезоксирибонуклеаза (ДНК-аза), трипсин и химотрипсин — обладают выраженным противовоспалительным и противоотечным действием и эффективны при лечении гнойно-воспалительных процессов различной локализации и этиологии. Кроме того, нуклеазьг являются природными регуляторами механизма противовирусной защиты, что позволяет рекомендовать их для лечения и профилактики вирусных инфекций. Поэтому, для использования гидролитических ферментов в медицинской практике путем внутримышечного и, в особенности, внутривенного введения степень очистки препаратов должна быть высокой.

Проблема повышения качества препаратов требует создания новых подходов к методам их выделения и очистки. Используемые в настоящее время промышленные методы выделения и очистки гидролитических ферментов недостаточно эффективны. Первичное концентрирование ферментов из экстракта поджелудочной железы крупного рогатого скота проводится по ионообменой технологии с использованием сульфокатионита КУ-23, однако дальнейшее получение ферментов проводят путем дробного фракционирования сульфатом аммония с последующей индивидуальной доочисткой каждого из ферментов. При этом используются одностадийные статические физико-химические методы (осаждение, диализ, экстракция, высаливание), которые не обеспечивают высокого выхода целевых продуктов, получения препаратов необходимой степени чистоты, связаны е использованием больших объемов органических растворителей и токсичных веществ (в частности, фенол), а также длительны по времени. 5.

Вместе с тем, современное состояние развития препаративной хроматографии биологически активных веществ позволяет успешно решать вышеуказанные проблемы.

Целью работы являлось изучение закономерностей сорбции панкреатических ферментов на молекулярных и ионогенных носителях различной структуры и разработка на их основе хроматографического способа очистки. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучение равновесных, термодинамических и кинетических закономерностей сорбции ферментов на различных хроматографических носителях и выбор оптимального сорбента для препаративной хроматографии.

2. Теоретическое обоснование условий разделения компонентов смесиоптимизация хроматогафического процесса по скорости подвижной фазы.

3. Выбор оптимальных физико-химических условий селективной элюции.

4. Масштабирование хроматографического процесса очистки для полупроизводственных условий.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

ВЫВОДЫ Показана возможность эффективного хроматографического выделения и очистки панкреатических ферментов на сорбентах с модифицированной поверхностью непосредственно из производственного экстракта поджелудочной железы: предварительная очистка от балластных примесей может осуществляться во фронтальном процессе на модифицированных молекулярных сорбентах Полисорб и СКН, а селективная сорбция и десорбция — на модифицированном КУ-23.

2. Впервые исследованы равновесные и кинетические параметры сорбции панкреатических ферментов сверхспштыми сорбентами Стироеорб, различающимися условиями синтеза, в частности, количеством катализатора. Показано, что наибольшей емкостью и улучшенными кинетическими характеристиками обладают Стиросорбы, полученные в присутствии 1−3 моль катализатора. Осуществлен выбор оптимального носителя — Стиросорба 1, который предложено использовать для индивидуальной доочистки ферментов на заключительных стадиях.

3. Установлен преобладающий вклад гидрофобных взаимодействий в изменение свободной энергии процесса сорбции гидролитических ферментов сверхспштыми сорбентами. Это учтено при выборе физико-химических условий элюции с обострением хроматограф ических зон целевых компонентов. Показано, что оптимальным элюирующим раствором является 30−50% этиловый спирт с рН=2−3.

4. Предложена теоретическая модель, позволяющая в зависимости от соотношений между равновесно-кинетическими параметрами сорбции прогнозировать оптимальную скорость хроматографического процесса, при которой возможно максимальное разделение компонентов или изменение порядка их выхода из хроматографической колонки. Получено экспериментальное подтверждение модели при разделении РНК-азы и ДНК-азы.

5. Разработан и запатентован новый способ очистки РНК-азы из производственного высола фермента с использованием сверхсшитого.

110 сорбента Стнросорб 1, позволяющий повысить удельную активность в 1,5−2 раза, увеличить выход фермента с единицы сырья в 3,7−4 раза при сокращении времени технологического цикла очистки в 5 раз. Проведено масштабирование процесса хроматографической очистки РНК-азы для полупроизводственных условий и рассчитаны оптимальные параметры препаративной колонки.

Показать весь текст

Список литературы

  1. Т.Е., Варламов В. П., Самсонова О. Л., Рогожин C.B. Биоспецифическая хроматография нуклеаз.// В кн.: Нуклеазы. Биологическая роль и практическое использование. Киев: Наукова Думка, 1985. — С. 51−56.
  2. Г. Е., Варламов В. П., Рогожин C.B. Способ вьщеления и очистки бактериальной эндонуклеазы из Serratia marcescens.//Авторское свидетельство СССР № 1 392 902. Опубл. 7.05.90.
  3. И. Д., Бердыш ев Г. Д. Дезоксирибонуклеазы из внутренних органов карпа. Выделение и некоторые свойства.// В кн.: Разнокачественность онтогенеза у рыб. — Киев: Наукова Думка, 1980. — С. 114−128.
  4. Г. С., Ляпунов H.A. К вопросу о применении катамина при создании готовых лекарственных средств.// Фармация, 1988. № 1. — С.35−38.
  5. Безбород ова С. И. Рибонуклеазы и родственные белки, а также ингибиторы рибонуклеаз.// Прикладная биохимия и микробиология, 1991. Т.27, № 3. — С. 308−329.
  6. Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии. Пер. с англ., в 2 томах. М.: Мир, 1989. — Т.2. — 590 с.
  7. Л.Д. Хроматографические и адсорбционные свойства сверхсшитых полистирольных адсорбентов «Стиросорб».// В сб.: Всероссийский симпозиум по теории и практике хроматографии и электрофореза. Самара: Самарский Университет, 1999.- С. 151−162.
  8. Л.Д., Василевская О. В., Цюрупа М. П., Даванков В.А.
  9. Адсорбционные и хроматографические свойства полимерных сорбентов типа «Стиросорб».// ЖФХ, 1995. Т.69, № 4. — С. 696−700.
  10. Л.Д., Василевская O.B., Цюрупа М. П., Даванков В.А.
  11. Адсорбционные и хроматографические свойства микросферических полимерных сорбентов типа «Стиросорб».// ЖФХ, 1996. Т.70, № 8. — С. 1476−1481.
  12. A.B., Клячко H.K., Левашов A.B., Мартинек К., МожаевВ.В, Хмельницкий Ю. Л. Иммобилизованные ферменты. М.: Высшая школа, 1987. — 160 с.
  13. О.В., Ищенко Л. С., Глазова Н. В. Использование хроматографических методов для получения ферментного препарата «Рибонуклеаза».// Тез. Республиканской научной конференции молодых ученых медицинских вузов России. Самара, 1999, — С. 33.
  14. В.П. Хроматографическое выделение гидролаз (нуклеаз, фосфатаз, хитиназ) и их использование в биотехнологических процессах.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени докт. хим. наук. Москва, 1994. -51с.
  15. Н.В., Ефимова Т. Б., Игонина Л. М., Дмитренко Л.В.
  16. Использование хроматографических методов для оценки эффективности очистки ферментных препаратов.// Тез. докладов Всесоюзной научной конференции «Технология ключевых соединений, используемых в синтезе БАВ*. Пенза, 1991, — С. 105−112.
  17. Н.В. Сорбционное разделение смесей Б AB в квазиравновесных и неравновесных условиях.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». СПб, 1996.- С. 11.
  18. Н.В., Елькин Г. Э., Рудометова Н. В. Оптимизация ионообменных процессов с использованием ПЭВМ. СПХФИ, 1993. — 19 с.
  19. .М. Об участии РНК-азы в механизме противовирусной защиты организма при клещевом энцефалите.// Журн. невропатологии и психиатрии, 1970. Т. 70, вып. 1. — С. 45−48.
  20. В. Д., Сергиеико В. И., Владимиров В. Г. Селективные гемосорбенты. М.: Медицина, 1989. — 224 с.
  21. И.М. Технология ферментных препаратов. М.: Агропромиздат, 1987. — 335 с.
  22. А.Н., Лесников Е. П., Салганик Р. И., Кривошеее Б. Н. ДНК-аза в терапии простого рецидивирующего герпеса.// Вестник дерматологии и венерологии, 1976. -№ 11. С. 75−78.
  23. А. Практическая химия бежа.// Пер. с англ.- М.: Мир, 1989. 623 с.
  24. A.A., Салганик Р. И. Терапевтическая активность ДНК-азы при инфекционном мононуклеозе.// Сов. Медицина, 1983. № 8. — С. 91−92.
  25. М., Уэбб Э. Ферменты,— М.: Мир, 1992. 1117 с.
  26. Г. Э. Концепция регулярности режима сорбции в теории и практике ионного обмена органических ионов.// Межвузовский сборник: Ионный обмен и ионометрия, 1990. Вып. 7. — С. 3−15.
  27. Г. Э. Теоретические основы выбора оптимальных режимов сорбции и хроматографии БАВ.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». -СПб, 1996, СЛ.
  28. Г. Э., Глазова Н. В., Курдявка Л. В. Модификация свойств поверхности макропористых сополимеров путем адсорбции поверхностно-активных веществ.// ЖФХД994.-Т.68, № 10, — С. 1782−1783.
  29. Г. Э., Бабенко Г. А., Селезнева A.A., Самсонов Г. В. Кинетика сорбции белков ионообменными смолами. Сорбция химотрипсиногенакарбоксильными катионитами.// Коллоидный Журнал, 1972. Т.34, № 2. -€.208−212.
  30. Н.В. Получение и сравнительный анализ свойств гиалуронидаз из различных источников.// Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук. СПб: СПХФА, 1998. — 140с.
  31. Л.М. Хроматографическое выделение и изучение свойств фермента гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота // Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук. СПб: СПХФА, 1996.
  32. Л.М., Глазова Н. В., Дмитренко Л. В., Заинкова Н. В. Применение сорбционно-хроматографических методов очистки ферментного препарата «Лидаза».// В кн.: Химия и технология лекарственных веществ.-СП6.-1994.-с.14.
  33. Л.М., Глазова Н. В., Заинкова Н. В. Использование сорбентов для удаления примесей из инъекционного препарата «Лидаза»// Тез. докладов Международного симпозиума «Проблемы сорбционной детоксикации внутренней среды организма. «-Новосибирск,-1995.
  34. Л.М., Д.Коррадини, Н. В. Глазова, Г. Э. Елькнн, Д.Канарса. Влияние ионов двухвалентных металлов на порядок следования белков при ионообменной ВЭЖХ. // Журнал прикладной химии, 1998. Т. 78, № 7. -С. 1094—1098.
  35. Иониты. Черкассы: НПО «Пластмассы», 1980, — 32 с.
  36. Каталог хроматографичееких материалов для научных исследований.// РАН, Главное Управление материально-технического обеспечения. М.: Наука, 1992.-63 с.
  37. И.Г. Разработка методов выделения и очистки бактериальных эндотоксинов.// Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук. -СПб.: СПХФИ. -1995.
  38. Г. А. Влияние панкреатических рибонуклеаз на клетки и организм животных: клеточный механизм противовирусного действия.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. биол. наук. Казань, 1986. -19 с.
  39. Ю.А., Золотарев П. П., Елькин Г. Э. Теоретические основы ионного обмена. Л: Химия, 1986. — 280 с.
  40. Е.Ю. Структурно-функциональный анализ рибонуклеазы, А и родственных белков.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. хим. наук. Москва, 1996. — 22 с.
  41. В.М., Мчедлишвили Б. В. Хроматография белков на макропористых кремнеземах. Л. .Химия, 1986. — 192 с.
  42. М.В., Пилявская A.C. Пептидазы. Киев: Наукова Думка, 1982. — 176 с.
  43. .Н., Мотовилова H.H., Салганик Р. И., Савиных Ж. М., Стадиик К. И. ДНК-аза в комплексной терапии герпетиформной экземы Капоши.// Вестник дерматологии и венерологии, 1987. № 1. — С. 29−33.
  44. A.C., Губенко U.C., Корочкин Л. И., Салганик Р.й.
  45. Фармакологическая активность и токсичность нуклеаз.// Фармакология и токсикология, 1977. — Т. ЗЗ, № 2. — С. 210−212.
  46. Ю.Я. Теория хроматографии медленно диффундирующих веществ. Типы режимов.// ЖФХ, 1995. Т.69, № 6. — С. 1080−1084.
  47. Ю.Я. Теория хроматографии медленно диффундирующих веществ. Обращение порядка элюирования компонентов.// ЖФХ, 1997. Т.71, № 6. — С. Ш7−1120.
  48. И.Б., Клейнер Г. И., Паэгле Б. Я., Знаменская Л.В., Михлин
  49. Э.Д. Способ получения внеклеточной щелочной рибонуклеазы.// Авторское свидетельство СССР № 1 010 125. Опубл. 7.04.83.
  50. O.H., Писарев O.A., Муравьева Т. Д. и др. Десорбция противоопухолевого антибиотика даунорубицина с гелевых и гетероеетчатых карбоксильных катионитов.// ЖПХ, 1991. Т.64, № 6. — С. 1361−1363.
  51. A.A. Хроматографические материалы /справочник/. -М.: Химия. 1978. — 440 с.
  52. В.И. Стабильность ферментов при очистке.// В кн.: Кристаллические ферменты: методы получения, их характеристика и использование. Вильнюс, 1975. — С.22−25.
  53. H.H., Цацаниди К. Н., Пугаев A.B. и др. Применение панкреатической РНК-азы в комплексе консервативной терапии острого панкреатита.//Хирургия, 1982. Коб.-С. 8−17.
  54. В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971. — 404 с.
  55. .В., Коли ко в В.М., Черкасов А. Н. Трековые мембраны в процессах тонкой очистки.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». С-Петербург, 1996. — С. 13.
  56. Д.Й., Дмитренко Л. В., Самсонов Г. В. Взаимодействие инсулина с полиэлектролитами макропористой структуры. // Изв. АН СССР. Сер.хим., 1973. № 5. — С. 1145−1146.
  57. H.H. Сравнительная биохимическая и физиологическая характеристика ферментных препаратов поджелудочной железы.// Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. мед. наук. -Ростов-на-Дону, 1987. 16 с.
  58. Й.Ф., Чиеханова М. А., Лиходед B.C. Исследование РНК-азы, связанной с гистонами печени и селезенки крыс.// Биохимия, 1972. — Т.37, № 3. — С. 585−589.
  59. Патент JP № 460 031 476. Способ выделения физиологически активных веществ из экстракта поджелудочной железы млекопитающих.// Amano pharm К. К. Опубл. 22.07.85.
  60. Патент US № 4 973 554. Аффинный способ очистки и стабилизации трипсина.-Опубл. 27.11.90.
  61. О.В., Хохлова Т. Д., Петрова В. Н. Применение трековых мембран для разделения белковых смесей.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биоеепарация-96». С-Петербург, 1996. — С. 15.
  62. O.A., Кручина-Богданов И.В., Глазова Н. В., Быченкова О. В. Кинетическое регулирование селективности сорбции в жидкостной хроматографии низкого давления.// ДАН, 1998. Т.362, № 3. — С. 357−360.
  63. O.A., Кручина-Богданов И.В., Глазова Н. В., Быченкова О. В. Хроматографические разделения БАВ в кинетически селективных режимах динамики сорбции.// ЖФХ, 1999. Т.73, № 9. — С. 750−754.
  64. O.A., Самсонов Г. В., Богданова Л. П., Муравьева Т. Д. Ионно-гидрофобное взаимодействие эремомицина с сетчатыми структурно сегрегированными биосорбентами.// ЖПХ, 1993. Т.66, № 12. — С. 2825−2828.
  65. Н.Г., Горбунов Г. В., Полянская Н. Л. Методы исследования ионитов. М.: Химия, 1976. — 208 с.
  66. И.Г., Пономаренко М. Н., Глазова Н. В., Йозеп A.A. Исследование полимерных комплексов, включающих ферменты и растворимые полимеры.// ЖПХ, 1997. Т.70, № 6. — С. 1040−1043.
  67. Н.В. Разработка сорбционного хроматографического выделения панкреатических ферментов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. — СПб.: СПбТИ, 1994.
  68. Р.И., Тухачев A.A., Баталина Т. А. Противовирусное действие дезокеирибонуклеазы и рибонуклеазы.// В кн.: Ингибиторы вирусной активности. Рига: Зинатне, 1972. — С. 147−152.
  69. Г. В., Тростянекая Е. Б., Елькин Г. Э. Ионный обмен. Сорбция органических веществ. Л.: Наука, 1969. — 333 с.
  70. Г. В., Меленевский А. Т. Сороционно-хромато графические методы физико-химической биотехнологии. Л.: Наука, 1986.
  71. Г. В., Писарев O.A. Новые принципы ионообменной препаративной хроматографии и их применение для выделения, очистки и суперочистки антибиотиков.// Прикладная химия и микробиология, 1992. -Т.28,Ш.-С. 5−18.
  72. A.A., Бабенко Г. А., Елькин Г. Э. и др. Кинетика сорбции ферментов в поверхностном слое карбоксильных катионитов.// Коллоид. Журн, 1974. -Т.36,№ 3. -С.511−514.
  73. A.A., Дубинина H.H., Бабенко Г. А., Лукницкая 0.Ф., Самсонов Г. В. Особенности сорбции белков карбоксильным катионитом.// Коллоид. Журн., 1975. Т.37, № 6. — С. 1138−1142.
  74. В.Ф. Обменные процессы и межмолекулярные взаимодействия в системе ионит-вода-аминокислота.// Автореферат диссертации на соискание степени доктора химических наук. Воронеж: В ГУ, 1993. — 49 с.
  75. Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985. — 224 с.
  76. H.H., Аронова Е. Б., Беленький Б. Г., Наследов Д. Г. Экспериментальное исследование поведения белков на ионообменной хромато графической мембране.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». С-Петербург, 1996. — С.22.
  77. В.В., Плаченов Т. Г., Картель Н. Г. Углеродные адсорбенты. М., Наука, 1983.- 170 с.
  78. A.A., Ярве В. Ю., Сийгур Ю. Р., Аавиксар В. А. Способ выделения эндонуклеазы из яда кобры.// Авторское свидетельство СССР № 1 203 902. Опубл. 30.11.90.
  79. Т.Б. Полимерные мембранные адсорберы. Высокоэффективная мембранная хроматография белков.// Тезисы докладов Всерос. симпозиума «Биосепарация-96». С-Петербург, 1996. — С. 13−14.
  80. В.Б. Электролиты и ферменты поджелудочного сока.// В кн.: Руководство по физиологии. Физиология пищеварения. Л.: Наука, 1974. -С.339−359,
  81. С.С., Константинов В. Л., Манойлов С. Е., Дмитриева В.А.
  82. Заводское производство аморфных и кристаллических лечебных препаратовферментов трипсина, химотрипеина и РНК-азы из панкреатической железы.// Труды ЛХФИ, 1967. Вып.20. — С.9−18.
  83. Ю.В., Кожемяко В. Б., Рассказов В. А. Способ получения кислой дезоксирибонуклеазы.// Авторское свидетельство СССР № 1 100 308. Опубл. 30.06.84.
  84. М.Н., Беиедик М.Дж., Уразов Н. Г., Лещинская И.Б.
  85. Полидисперсность нуклеазы Serratia marcescens при оптимальном значении pH.// Прикладная биохимия и микробиология, 1999. Т.35, № 1. — С. 20−24.
  86. Хмара М Е. Влияние РНК-азы на интерферирующие, интерферогенные и цитопатичеекие свойства некоторых РНК-содержащих вирусов.// Здравоохранение Белоруссии, 1977. № 8. — С. 14−16.
  87. М.П., Ослонович К). В., Нистратов А. И., Радченко Л. Г., Даванков В. А. Фазовое расслоение в условиях синтеза сверхсшитых полистирольных сеток в среде циклогекеана.// ВМС, 1995. Т.37А, № 6. — С.964−968.
  88. М.П., Даванков В. А., Кривоносова Л. Г., Селеменев В. Ф., Чикин Г. А. Поглощение окрашенных веществ из ферментационных растворов лизина сверхсшитым сорбентом.// Прикладная биохимия и микробиология, 1985. Т.21, ML — С.72−77.
  89. М.П., Панкратов Е. А., Даванков В. А. Влияние среды синтеза на физико-химические свойства макросетчатых изопористых полимеров стирола.// ВМС, 1980. Т.22Б, № 10. — С.746−748.
  90. М.П. Структура и свойства полимерных сорбентов на основе сверхсшитого полистирола.// Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук. ~ Москва, 1988.
  91. А.Н., Пасечник В. А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. Л.: Химия, 1991.-240 с.
  92. Н.В., Пейсениекс В. Э., Залите Й. К. Способ получения рибонуклеазы из E.eoli.// Авторское свидетельство СССР № 1 495 377. Опубл. 23.07.89.
  93. B.C. Нуклеазы. М.: Медицина, 1968. 212 с.
  94. Л.К., Кузнецова H.H., Елькин Г. Э. Карбоксильные катиониты в биологии. Л.: Наука, 1979. — 229 с.
  95. В.Д., Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Р.: Зинанте, 1988. 104 е.
  96. И.И., Берелавичус В. Ю., Владимиров В. Г. Использование РНК-азы в терапии острого панкреатита.// Сов. медицина, 1981. № 1. — С. 50−54.
  97. Г. А., Кошева Е. П., Елькин Г. Э., Воробьева В. Я., Самсонов Г. В. Кинетика сорбции дезоксирибонуклеазы Actinomyces streptomycini из нативного раствора карбоксильным катионитом КМТ.// Хим.-фарм. Журнал, 1974. № 10. — С.47−51.
  98. Atkinson В., Mavituna F. Biochemical Engineering and Biotechnology Handbook.- England: Macmilan Publishes Ltd., 1983.
  99. Aranyl P., Laszlo B. Sorption equilibria between proteins and cation exchangers.// J. Chromatogr., 1974. ?.89. — P.239−250.
  100. Bemtema J.J., Hofsteen J., Jwama M., Morita Т., Ohgi K., Irie M., Sugijama R.H., Schieven G.L. Amino-acid sequence of the nonsecretory ribonuclease.// Biochem., 1988. V.27. — P. 4530−4538.
  101. Bell D.J., Hoare M., Dunniil P. Formation of Protein Precipitates and Their Centrifugal Recovery.// Adv. Biochem. Eng./ Ed. Fiechter A. Berlin, N. Y., 1983.- V.26. P. 2.
  102. Ben-Naim A. Water aqueous solutions interactions to a molecular theory. N.Y., L.: Plenum Press, 1974. — 474 p.
  103. Biotechnoiogical Applications of Proteins and Enzymes./ Ed. by: Zvi Bohak, Nathan Sharon. N. Y., San-Francisco, London: Academic Press, 1977. — 368 p.
  104. Blackburn P., Moore S. The Enzymes./ Ed. P.O. Boyer, 1982. V.15. — P. 317 433.
  105. Brooks C.L. Proteins: A theoretical perspective of dynamics, structure and thermodynamics. N.Y. etc.: Wiley and Sons, 1988. — XIII, 259 p. — Advances in chem. Physics, ?.71.
  106. Bucke C. The biotechnology of enzyme isolation and purification.// In Principles of Biotechnology. Glasgow: Blackie and Son Ltd., 1983. — P. 151−171.
  107. Cafaro V., Bracale A., Formiggini F., Notomista E., B’Alessio G., Di Donato A. Protein engineering of ribonucleases.// Biochemie, 1998.—?.80, № 11. P. 905 909.
  108. Comprehensive biotechnology./ Ed. Cooney C.L., Humphrey R.E. N. Y, L.: Pergamort Press, 1985. — V.2. — 632 p.
  109. Corradini D, Filippetti, Corradini C. Salt mediated elution behavior of proteins on a silica-based stationary phase for size exclusion high performance liquid chromatography.// J. Liquid Chromatog., 1993. V. 16. — P.3393−3408.
  110. Cramer J.A., Bailey L.C. A reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography method for bovine testicular hyaluronidase.// Anal. Bioehem., 1991. V.196, № 1. — P. 183−191.
  111. Curling J.M. Methods of plasma protein fractionation. N.Y.: Academic Press, 1980. — 532 p.
  112. Davankov V.A., Tsyurupa M.P. Structure and properties of porous hypercrosslinked polystyrene sorbents styrosorb.// Pure and Appl. Chem., 1989. -V.61.-P. 1881−1888.
  113. Davankov V.A., Tsyurupa M.P. Structure and properties of hypercrosslinked polystyrene the lsl representative of a new class of polymer networks.// Reactive Polymers, 1990. — V. 13. — P. 27−42.
  114. Desifets C.P., Rounds M.A., Regnier F.E. Semipermeable-surface reversed-phase media for high-performance liquid chromatography.// J. Chromatogr., 1991. -Y.544. P.25.
  115. Desnuelle P. In the Enzymes.// 2nd Ed. Academic Press, New York, 1960. V.4. -P.93.
  116. Engelhardt H. Hochdruck-flussigkeits-chromatographie. Berlin: Springer. -Verlag, 1977.
  117. Fritz J.S. et al. Ion chromatography. Heidelberg etc.: Huthig, 1982. — X, 203 p.
  118. Glazova N.V., fgonina L.M., Elkiii G.E. Chromatographic purification of enzyme medicines from macromolecular impurities.// Macromolecular Symposia. -Bratislava, 1995.
  119. Glazova N.V. Sorption technology protein medicines including of non-equilibrium chromatographic effects. // 10-th International Symp. of Chromatography in Industry.-Bratislava, 1996. P. 173−174.
  120. Glukhov V.M., Jerusalimsky A.P., Canter V.M., Salganik R.I. Ribonuclease treatment of tick-born encephalitis.// Arch. Neurol., 1976. — V.33. — P. 598−603.
  121. Gomes E., SerzedeHo A., Da SHva R. Purification and physico-chemical properties of a ribonuclease produced by Aspergillus flavipes.// Microbiol., 1998. -V.96,№ 383. P. 39−50.
  122. Gozzinf L., Moiitecucclii P.C. High performance liquid chromatography in protein and peptide chemistry. Berlin, N.Y.: Walter de Gruyter, 1981. — 365 p.
  123. Grabender G.C., Giafz C.E. Protein precipitation: analysis of particle size distribution and kinetics.// Chem. Eng. Commun., 1981. V. 12. — P. 203.
  124. Hagglund I. Development of new and modified stationary phases in chromatography: Doctoraithesis. Stockholm, 1994. — 102 p.
  125. Henschen, K.P. Hupe, F. Loitspeieh, W. Voelten High Performance Liquid Chromatography in Biochemistry, пер. с англ., под ред. JI.B. Березина. М.: Мир, 1988. — 687 с.
  126. Janca J. Size exclusion chromatography.// J. of Liquid Chromatogr. V.13, № 9. -P. 1669.
  127. Jansen J.C., fled man P. Large scale chromatography of proteins.// Advances in Biochemical Engineering, 1982. V.25. — P. 43−49.
  128. Josic D., Reutter W., Molnar I. Practical aspect of modern HPLC. Berlin, N.Y.: Waiter de Gruyter, 1982. — 123 p.
  129. Karlstom В., Vincent J., Jochansson В., Bryno C. A simple purification method of squeezed krill for obtaining high levels of hydrolytic enzymes.// Prep.Biochem. -1991. -V.21, т.- P. 237−256.
  130. Kato Y. High-performance hydrophobic interaction chromatography of proteins. Advances in chromatography// Eds. Giddings J.C., Grashka E., Brown P.K. New York, Basel: Marcel Dekker Inc., 1987. — V.26. — P.97−115.
  131. Khng Hwee Peng, Cimfiffe В., Davies S., Turner N.A., Vulfson E.N. Hie synthesis of sub-micron magnetic particles and their use for preparative purification of proteins.// Biotechnol. and Bioeng., 1998. V.60, № 4. — P. 419−424.
  132. Kolbanovskaya E.Yu., Satfryanarayana B.K., Wlodaver A., Karpeisky M.Ya. Intramolecular interactions in pancreatic ribonucleases.// Protein Science, 1992. -V.l.-P. 1050- 1060.
  133. Melander W., Horvath C. Salts effects on hydrophobic interaction in precipitation and chromatography of proteins.// Arch. Biochem. Biophys., 1977. V.183. -P.200−215.
  134. Moore S., Stein W.H. Chemical structure of pancreatic ribonuclease and deoxyribonuclease.// Science, 1973. V. 180, № 4085, — P. 458−464.
  135. Morita T., Sanda A., Takizava Y., Ohgi K., Irie M. Distribution of a kidney acid-ribonuelease-like enzyme and the other ribonucleases in bovine organs and body fluids.//Agr. Biol. Chem., 1987. V.51. — P. 2751−2761.
  136. Net Kenneth E. Cooperativity in enzyme function: equilibrium and kinetic aspects.// Meth. in Enzymol., 1980. -V.64. -P. 139−192.
  137. Norde W., Zouugrana T. Surface-induced changes in the structure and activity of enzymes physically immobilized at solid/liquid interfaces.// Biotechnol. and Appl. Biochem., 1998. V.28, № 2. — P. 133−143.
  138. Optimization of Chromatographic Selectivity.// Ed. Peter G. Schoenmakers. -Amsterdam etc., 1986.
  139. Paul A.B., Cussler E.L. Bioseparations: Downstream processing for biotechnology. N.Y. etc.: Wiley and Sons, 1988. — XVI, 368 p.
  140. Petebauer Z., Lukas J., Svec F., Kadal J. Morphology of polymeric sorbents based on glyeidyl methacrylate copolymers.// J. Chromatogr., 1979. V. 171, № 1. -P. 101−107.
  141. Proteases and antiproteases.// American J. of respiratory and critical care medicine. V. 150, № 6. — P.2.
  142. Protein Missassemhly.// Ed. by R.Wetzel. San Diego etc.: Academic Press, 1997. — XX, 282 p.
  143. Ravindranath B. Principles and practice of chromatography. Chichester: Horwood- N.Y. etc.: Halsted Press, 1989. — 502 p.
  144. Recovery and Purification of Byproducts.// Ed. M.-R.Kula, Steven M. Cramer. -N.Y. etc.: Wiley, 1995. P. 301−427, 429−555.
  145. Richards F.M., Wichoff H.G. Bovine pancreatic ribonuclease.// The Enzymes/ Ed. Boyer P.D. New York: Academic Press, 1971. — V.4. — P. 647−806.
  146. Richards F.M., Wichoff H.G. Atlas of molecular structures in biology. Oxford: Clarendon Press, 1973. — V. 1. — 369 p.
  147. Sewell P.A., Clarke B. Chromatographic separations. London: Chichester etc.: Wiley and sons on behalf of ACOL, Thames Polytechnic, 1987. — XX, 333 p.
  148. Svec F., Frechet J.M.J. Modified poiy (glycidyl methaciylate-co-ethylene dimethaeiylate) continuous rod columns for preparative scale ion-exchange chromatography of proteins.// J. Chromatogr., 1995. V.702A. — P.89−95.
  149. Tanford C. The hydrophobic effect. Formation of micelles and biological membranes. N. Y.: Willey-Interscience, 1973. — 200 p.
  150. Tennfkova T.B., Svec F.// J. Chromatogr., 1992. V.590. — P.353.
  151. Ultrafiltration, Membranes and Application.// Ed. by A. Cooper. N.Y.: Plenum Press, 1980. -705 p.
  152. Wang Q.C., Svec I ., Frechet J.M.J. Rod of macroporous polymers stationary phase as continuous separation medium for reversed phase chromatography.// Anal. Chem., 1993. V.65. — P.2243−2248.
  153. Wang Q.C., Svec F., Frechet J.M.J. Reversed-phase chromatography of small molecules and peptides on a continuous rod of macroporous poly (styrene-co-divinylbenzene).// J. Chromatogr., 1994. V.669. — P.230−235.
  154. Wfodawer A. In: Biological Macromolecules and Assemblies. V.2: Nucleic Acids and Interactive Proteins./ Ed. A. McPherson, F. Jurnak. N.Y.: Wiley and Sons, 1985.-P. 395−439.
  155. Wolf M., Ransberger K. Enzyme-therapy.- New York: Vantage Press, 1972. -232 p.
  156. Zegers I., Maes D., Dao-TM M.-H., Poortmans F., Palraer R., Wyns L. Thestructures of Rnase A complexed with 3-CMP and d (CpA): active site conformation and conserved water molecules.// Protein Sci., 1994. V.3. — P. 2322−2339.
  157. По данной технологии получена субстанция фермента с удельной активностью 15 000−18 000 Ед/мг.
  158. Показано, что сорбционная технология является перспективной .так как:
  159. Уменьшается время технологического цикла очистки производственного высола рибонуклеазы в 5 раз-
  160. Сокращаются потери целевого продукта и увеличивеатся съем фермента с единицы сырья в 3.7−4 раза-
  161. Увеличивается удельная активность препарата в 2 раза.
  162. К.х.н., доцент СПХФА Глазова Н.В.1. Шенгер А.А.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!