Виды патологического материала

От больных животных берут кровь в период лихорадочного состояния, а также фракции лейкоцитов, мазки из носа и конъюнктивы. От свежих трупов (не менее чем 3−4) мазки-отпечатки со слизистых оболочек глаз, век, носовой полости и других отделов респираторного тракта, мочевого пузыря, миндалин, лимфатических узлов, кусочки лёгкого, трахеи, селезёнки, почек, головного мозга, мочевой пузырь.

Для серологических исследований берут кровь как можно быстрее после проявления клинических признаков и повторно спустя 14−21 день. Материал отправляют нарочным в термосе со льдом. Подготовку материала для выделения вируса проводят общепринятым методом.

Этапы лабораторной диагностики

Индикация вируса

Игнатов П.Е. (1995) отмечает, что имеющиеся в настоящее время методы лабораторной диагностики (РДСК, РПГА и ИФА) дают нестабильные результаты и что наиболее перспективным представляется обнаружение вируса в экскретах с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод позволяет обнаружить вирус в первые дни заболевания в крови, в носовых и конъюнктивальных смывах, а также в патологическом материале. ПЦР характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью. Тест-систему для обнаружения вируса чумы плотоядных методом полимеразной цепной реакции производят НПО «Нарвак» и ФГУ ВГНКИ.

С помощью ПЦР следует исследовать материал от невакцинированных собак с обязательным подтверждением диагноза другими методами.

Был предложен экспресс-метод индикации в РИГА антител к вирусу чумы плотоядных, позволяющий получить результат в течение 3 часов. Желательно исследовать парные пробы сывороток (с определенным интервалом), чтобы проследить рост или спад титров антител, однако и однократного взятия бывает достаточно для заключения о состоявшемся контакте непривитого животного с вирусом чумы.

Реакция диффузной преципитации (РДП). Преципитирующий АГ появляется в органах животных на 3−4-й день болезни и всегда обнаруживается в органах павших животных. В качестве антигенов используют 10%-ую суспензию органов больных животных (селезенка, лимфоузлы, костный мозг, тимус, головной мозг, легкие, печень, почки, слюнные железы, поджелудочная железа, моча, перитоне-альная жидкость).

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Позволяет поставить быстрый и ранний прижизненный диагноз. У хорьков самые надежные результаты при исследовании мазков крови. РИФ используют также для исследования кусочков органов от павших животных. Наиболее пригодны мозжечок, желудок, легкие, большой и продолговатый мозг. В РИФ антигены вируса чумы обнаруживали в мазках костного мозга, фиксированных ацетоном, в лейкоцитах крови и эпителиальных клетках конъюнктивы. В мононуклеарных клетках крови его обнаруживали на 2−3-й день после экспериментального заражения. Ряд авторов рекомендуют применять ИФ для обнаружения вирусного АГ в ЦНС, а также проводить гистологическое исследование препаратов мочевого пузыря, почечной лоханки и кожи.

Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет обнаружить вирус в секретах и экскретах животных одновременно с появлением клинических признаков болезни. Shestopalov A.M. et al. (1996), Сазонкин В. Н. (1998) успешно испытали твердофазный точечный ИФА на нитроцеллюлезе (dot-ИФА) для индикации вируса чумы собак в окулоназальных выделениях. Однако при исследовании паренхиматозных органов павших пушных зверей в некоторых зверохозяйствах Приморья встречались случаи ложных положительных результатов. Изредка такие же результаты можно получить и после вакцинации, но в большинстве случаев вакцинный вирус не выявлялся.

В 2002 г. сотрудники фирмы «Нарвак» разработали свой вариант ИФА для индикации антигена вируса чумы плотоядных в более широком ассортименте биологического материала — в конъюнктивальных и назальных смывах, в крови, головном мозге.

Метод флуоресцирующих антител (МФА) при чуме собак применяют уже более 20 лет как рутинный при экспресс-диагностике. Широкое признание получил прямой метод, когда меченные ФИТЦ антитела наносят непосредственно на мазки-отпечатки. По чувствительности он незначительно уступает иммуноферментному анализу (ИФА).

В связи с отсутствием стандартных по активности и специфичности коммерческих флуоресцирующих сывороток МФА как перспективный метод не нашел должного применения на практике.

Вирусоскопия, электронная и иммуноэлектронная микроскопия широко не используются. чума животное патанатомическое вирус.