Биохимическое и фармакокинетическое исследование воспроизведенных препаратов ловастатина в эксперименте и клинике

Атеросклероз и его осложнения в течение многих десятилетий сохраняют лидирующие позиции по смертности, социальному и экономическому ущербу во всех индустриально развитых странах мира [11, 69].

Основным фактором высокого риска развития атеросклероза является повышенный уровень холестерина липопротеидов низкой плотности в крови. Эпидемиологические исследования последних лет показали прямую корреляцию между нарушениями липидного обмена и риском развития сердечнососудистых осложнений [24]. В настоящее время в качестве основных препаратов выбора для первичной и вторичной профилактики атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, рекомендуется использовать статины, которые по механизму действия являются ингибиторами ГМГ-КоА-редуктазы [87, 104, 198].

Первым препаратом этой группы, внедренным в клиническую практику, был ловастатин, полученный методом микробиологического синтеза. Несмотря на применение в клинике новых статинов, ловастатин в настоящее время, является наиболее широко апробированным препаратом с доказанной клинической эффективностью и безопасностью [77, 189].

В развитых странах мира препараты группы статинов с успехом применяют миллионы больных. В России назначение этих препаратов в практической кардиологии явно недостаточно, несмотря на многочисленные доказательства преимущества статинов [111].

Основной причиной ограниченного использования препаратов этой группы является высокая стоимость лекарственных средств зарубежного производства [104, 117]. Проблема может быть решена путем выпуска отечественных воспроизведённых препаратов (дженериков), что позволит значительно снизить расходы на лекарственную терапию и сделать её более доступной для пациента. Однако, любой дженерик должен быть эквивалентен (биоэквивалентен) ориги 8. нальному препарату. Поэтому важное практическое значение имеет оценка биоэквивалентности отечественных воспроизведённых препаратов по сравнению с оригинальными. Совершенствование этих исследований, разработка новых методов определения статинов, сопоставление данных эксперимента и клинических испытаний, совершенствование методики изучения биоэквивалентности конкретных лекарственных средств является актуальным для биохимии, фармакологии и клинической фармакологии.

Ловастатин метаболизируется в печени с помощью семейства изофермен-тов цитохрома Р 450 ЗА4 в основной метаболит — ргидроксикислоту, которая, являясь конкурентным ингибитором фермента ГМГ-КоА редуктазы подавляет синтез холестерина [64]. В литературе имеются данные о внутри — и межвидовой вариабельности метаболизма лекарственных препаратов цитохромом 3А4 [92]. Поэтому представляется интересным сопоставить фармакокинетические параметры ловастатйна и его метаболита у животных и людей.

Другим фактором, ограничивающим широкое применение статинов, является наличие побочных явлений, которые наблюдаются при длительном применении препаратов. Ловастатин избирательно действует в клетках печени и оказывает воздействие на ее функцию — вызывает повышение активности ами-нотрансфераз, холестатические изменения- [38, 267]. Механизм повреждения печени до конца не известен, поэтому гепатотоксичность требует более детального изучения и контроля безопасности лечения- [178]. Подавляя синтез холестерина на этапе образования мевалоната, статины вызывают снижение количества промежуточных продуктов (фурнезола и геранилгараниола), тем самым, снижая скорость посттрансляционной модификации регуляторных белков и оказывая токсическое действие на миоциты [77, 290]. Наиболее опасным побочным эффектом статинов считается рабдомиолиз, биохимическим маркером которого является повышение активности КФК сыворотки крови, более чем в 10 раз по сравнению с верхней границей нормы [24].

Механизм действия статинов на липидный обмен связан со снижением синтеза холестерина, т.к. холестерин является предшественником целого ряда биологически активных соединений, в том числе стероидных гормонов, то при длительной терапии статинами может нарушаться синтез и этих веществ. Данные о влияние ловастатина на уровень стероидных гормонов противоречивы [5, 72, 82] и включают ограниченное число параметров.

Биохимические эффекты, фармакокинетика статинов в эксперименте и клинике изучены недостаточно. Указанные причины особенно актуальны для воспроизведенных препаратов, так как они регистрируются на основе сокращенного досье, без предоставления результатов экспериментальных и клинических исследований эффективности и безопасности.

Цель исследования Исследование влияния воспроизведенного препарата ловастатина на активность ферментов и гормональный статус в эксперименте, а также сравнительная оценка видовых особенностей фармакокинетики препарата.

Задачи исследования.

1. Разработать методику совместного количественного определения ловастатина и его метаболита в плазме крови и ткани печени методом ВЭЖХ.

2. Изучить активность ферментов (АЛТ, ACT, ЛДГ, у-ГТП, ЩФ, КФК и а-амилазы) в сыворотке крови крыс при курсовом назначении воспроизведенного препарата ловастатина «Холетар».

3. Оценить влияние курсового назначения воспроизведенного препарата ловастатина «Холетар» на гормональный статус (уровень тестостерона, эстра-диола, прогестерона, кортизола, пролактина, ФСГ, ТТГ, ЛГ) крыс.

4. Исследовать особенности фармакокинетики ловастатина и его метаболита в сыворотке крови и ткани печени крыс при многократном введении препарата, во взаимосвязи с активностью ферментов и уровнем гормонов.

5. Изучить динамику концентрации ловастатина и его метаболита в плазме крови у здоровых испытуемых и кроликов при однократном введении препарата и сопоставить фармакокинетические параметры ловастатина и его метаболита у людей и животных.

Научная новизна работы Впервые изучено*влияние курсового назначения воспроизведенного препарата ловастатина «Холетар» на активность ферментов в сыворотке крови: и гормональный статус крыс. Впервые проведен анализ изменения активности ферментов и содержания гормонов в сыворотки крови крыс в соответствии с концентрацией воспроизведенного препарата ловастатина и его метаболита в сыворотке крови и ткани печени. Разработана методика совместного количественного определения ловастатина и его метаболита в плазме крови и ткани печени методом ВЭЖХ. Впервые исследована биоэквивалентность нового воспроизведенного препарата ловастатина «Кардиостатин» (как по активному метаболиту, так и по исходному препарату) в эксперименте и? клинике, изучена относительная биодоступность воспроизведенного препарата ловастатина «Холетар» на кроликах и проведено сопоставление показателей у людей и животных. Выявлены видовые различия процесса выведения воспроизведенных препаратов ловастатина.

Практическая и теоретическая значимость В работе продемонстрирована относительная безопасность исследуемых воспроизведенных препаратов ловастатина в средних дозах в эксперименте на животных по биохимическим показателям, характеризующим функциональное состояние печени. Показано, влияние ловастатина на содержание стероидных гормонов, изменение уровней белково-пептидных гормонов.

Проведенные биохимические и фармакокинетические исследования, позволят повысить клиническую эффективность и снизить вероятность возникновения побочных явлений при назначении ловастатина.

Разработанная методика совместного количественного определения ловастатина и его метаболита в плазме крови с помощью ВЭЖХ может быть ис 11 пользована в клинической лабораторной практике. Доказана биоэквивалентность, воспроизведенных препаратов ловастатина: нового отечественного препарата ловастатина «Кардиостатин» (ЗАО «МАКИЗ-ФАРМА», Россия) и представленного на российском рынке препарата дженерика «Холетар» («KRKA», Slovenia) на животных и добровольцах. Доказана возможность определения биоэквивалентности ловастатина как по активному метаболиту так и по исходному веществу.

На основании полученных результатов по биоэквивалентности, исследуемые препараты могут быть рекомендованы * к медицинскому применению, что позволит расширить арсенал генерических препаратов ловастатина в клинической практике:

Апробация работы Результаты проведенных исследований были представлены на десятой Российской гастроэнтерологической неделе (Москва, 2004) — на ХТТ Российском конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005). на 9-ой международной Пу-щинской школе-конференции молодых ученых «Биология-наука XXI века» (Пущино, 2005) — на научно-практической конференции, посвященной- 60-летию победы в Великой Отечественной войне (Рязань, 2005) — на 7-ой и 9-ой Республиканских научно-практических конференциях с международным участием «Социально-гигиенический мониторинг здоровья населения» (Рязань, 2003, 2005). .

Структура диссертации Диссертация изложена на 145 страницах, машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов исследования, 14 подглав изложения полученных данных, обсуждения результатов и выводов: Работа иллюстрирована 26 таблицами и 43 рисунками.

Список литературы

включает 325 источников, из них отечественной — 201 и зарубежной — 124 источников, за последние 5 лет более 25%.

ВЫВОДЫ.

1. Разработана методика совместного количественного определения ловастатина и его метаболита в плазме крови и ткани печени методом ВЭЖХ.

2. Воспроизведенный препарат ловастатина «Холетар» при курсовом назначении интактным крысам в дозе 20 мг/кг вызывает резкое увеличение активности у-ГТП, повышает активность ЩФ, ACT, AJIT, ЛДГ и КФК, а также снижает активность а-амилазы сыворотки крови.

3. Курсовое назначение воспроизведенного препарата ловастатина «Холетар» изменяет гормональный статус крыс: снижается количество тестостерона, прогестерона, эстрадиола, кортизола, ТТГ и ЛГ, повышается уровень пролактина и фазно изменяется содержание ФСГ.

4. При курсовом введении воспроизведенного препарата ловастатина происходит накопление ловастатина и его метаболита в ткани печени крыс к 30 дню использования препарата. Выявлен концентрационнозависимый характер влияния ловастатина на активность ферментов (АЛТ, ACT, ЛДГ, у-ГТП, КФК) и гормональный статус (тестостерон, прогестерон, эстрадиол, кортизол, ФСГ, пролактин) крыс.

5. Воспроизведённые препараты ловастатина «Кардиостатин» (ЗАО «МАКИЗ-ФАРМА», Россия) и «Холетар» («KRKA», Slovenia) являются биоэквивалентными при исследовании на кроликах и здоровых добровольцах, как по ловастатину, так и по метаболиту. Наблюдаются индивидуальные различия всасывания препаратов ловастатина у кроликов и людей. Выявлены видовые различия фармакокинетики ловастатина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Разработанная ВЭЖХ-методика совместного определения ловастатина и его метаболита в плазме крови и ткани печени может быть рекомендована для более детального изучения распределения и для оценки фармакокинетики препарата в эксперименте и клинике.

2. Для оценки безопасности применения ловастатина с целью профилактики гепатотоксичности в клинике рекомендуется дополнительно исследовать активность у-ГТП и ЩФ.

3. Воспроизведенный препарат ловастатина «Кардиостатин» (ЗАО «МАКИЗ-ФАРМА», Россия) может быть рекомендован для клинического применения, так как является биоэквивалентным оригинальному препарату"Мевакор" («Merck Sharp&-Dohme», Нидерланды).