Генетическая трансформация половых клеток кроликов и хряков с использованием ретровирусных векторов

Актуальность темы

.

Разработка методов генетической модификации животных, основанных на использовании половых клеток в качестве векторов для переноса генов, рассматривается как альтернатива традиционному методу получения трансгенных животных — микроинъекции ДНК в пронуклеус зигот [Коржикова C.B., 2002; Савченкова И. П. и др., 2006; Новгородова И. П. и др., 2008; Эрнст JI.K. и др., 2008; Волкова H.A. и др., 2011]. Интерес к данному направлению связан, прежде всего, с природной способностью клеток сперматогенного эпителия самцов поглощать чужеродную ДНК (чДНК) и переносить ее в яйцеклетку посредством оплодотворения [Gandolfi F., 1998]. При этом интегрированная в геном организма чДНК может устойчиво передаваться в ряде поколений. Ввиду проведения манипуляций на: взрослых животных значительно сокращаются материальные и временные затраты на получение трансгенного потомства.

Несмотря на то, что для трансформации половых клеток (спермиев) используют ряд методов (липофекцию, электропорацию и вирусную трансдукцию), сегодня не разработаны системы, позволяющие эффективно доставлять рекомбинантную ДНК в данные клетки-мишени. Разработка эффективного метода генетической модификации половых клеток позволит получить простой и удобный способ создания трансгенных животных, т.к. искусственное осеменение давно успешно используется в сельскохозяйственной практике.

Одним из возможных путей решения данной проблемы является трансформация половых клеток на ранних стадиях их дифференцировки с использованием генных конструкций, полученных на основе рекомбинантных ретровирусов.

Цель и задачи.

Исходя из вышеизложенного, целью диссертационной работы явилось изучение эффективности использования ретровирусных векторов для генетической трансформации половых клеток хряков и самцов кроликов.

Для достижения указанной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изучить компетентность клеток сперматогенного эпителия семенников кроликов и хряков к ретровирусным векторам in vitro.

2. Осуществить трансформацию клеток сперматогенного ряда прямым введением генных конструкций в семенники кроликов и хряков in vivo.

3. Определить факторы, влияющие на эффективность трансформации клеток сперматогенного эпителия семенников кроликов и хряков in vivo (кратность введения, концентрация и тип используемого препарата).

4. Изучить результативность генетической трансформации сперматогенных клеток кроликов и свиней in vivo генными конструкциями, содержащими кДНК инсулина человека.

5. Исследовать характер интеграции и экспрессии рекомбинантной ДНК в клетках сперматогенного эпителия семенников кроликов и хряков.

Научная новизна.

Впервые исследованы механизмы доставки рекомбинантной ДНК в клетки сперматогенного эпителия кроликов и хряков посредством использования ретровирусных векторов. Изучены факторы, влияющие на эффективность генетической модификации клеток сперматогенного ряда in vivo. Дана характеристика паттернов интеграции и экспрессии рекомбинантных генов (GFP, инсулин) в половых клетках самцов кроликов и хряков.

Практическая значимость.

Отработан метод введения генных конструкций в семенники самцов кроликов и хряков in vivo, позволяющий трансформировать клетки сперматогенного ряда с эффективностью до 0,48±0,12 и 0,57±0,10%, соответственно. Оптимизированы условия введения ретровирусных векторов в органы-мишени: отработан способ подготовки генных конструкций для инъекций и определена концентрация генных конструкций, эффективная для интеграции рекомбинантной ДНК в клетки сперматогенного эпителия. Показана способность трансформированных сперматогоний к дальнейшей дифференцировке. Доказано наличие рекомбинантной ДНК в спермиях опытных животных по достижении ими половой зрелости.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Опосредованный ретровирусами перенос генов как способ генетической трансформации клеток сперматогенного ряда in vitro и in vivo.

• Способ подготовки, концентрация, кратность введения ретровирусных векторов в семенники кроликов и хряков in vivo как факторы, влияющие на результативность трансгенеза.

• Характер интеграции и экспрессии рекомбинантной ДНК в клетках сперматогенного эпителия кроликов и хряков.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на международной конференции: «ЕС-Россия: 7-я Рамочная программа в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи»", Уфа, 2010 г.- на научных конференциях Центра биотехнологии и молекулярной диагностики животных ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии.

Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы, в том числе в центральных научных журналах, рекомендованных ВАК (Достижения науки и техники АПК, Сельскохозяйственная биология) — 2.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 102 страницах, состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Диссертационная работа содержит 11 таблиц и 16 рисунков. Библиографический список включает 161 источников, в том числе 121 на иностранных языках.

1. Абдрахманов, И. К. Характеристика линий клеток, упаковывающих рекомбинантные ретровирусные векторы, в переносе экзогенной ДНК в клетки млекопитающих / Абдрахманов И. К. // Автореф. диссер. канд. биол. наук.- Дубровицы. 2001. С. 22.

2. Алиев, A.A. Экспериментальная хирургия / Алиев A.A.// М.: НИЦ Инженер. 1998. -445с.

3. Баранов, B.C. Включение макромолекул в половые клетки самцов мышей при помощи электропорации и диметилсульфоксида / Баранов B.C., Гапала И., Грияч П. // Цитология и генетика. 1990. — Т.24. — № 3. — С.3−7.

4. Брем, Г. Экспериментальная генетика в животноводстве / Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. // М.:РАСХН. 1995. С. 326.

5. Волкова, JT.A. Эффективность генетической трансформации соматических и эмбриональных клеток животных с использованием различных типов клеток — упаковщиц / Волкова JI.A. // Автореф. дисс. канд. биол. наук.- Дубровицы. 2005. С. 25.

6. Волкова, H.A. Генетическая трансформация сперматогоний петухов in vitro и in vivo / Н. А. Волкова, H.A. Зиновьева, JI.A. Волкова, Т. О. Котова, Л. К. Эрнст // Доклады РАСХН, — 2011. -№ 1.-С. 39−41.

7. Галат, В. В. Методы микроинъекции спермиев как инструмент вспомогательной репродукции и изучения биологии оплодотворения / Галат В. В. //Онтогенез. 2000. Т.31. — № 1. — С.5−13.

8. Гвоздь, И. М. Изучение закономерностей и оптимизация экспрессии рекомбинантных белков в молоке соматических и генеративныхтрансгенных сельскохозяйственных животных / Гвоздь И. М. // Автореф. дисс.. канд. биол. наук. Дубровицы. — 2004. — 21с.

9. Грезина, Н. М. Гистологические и цитологические особенности молочной железы кроликов как объекта генно-инженерных манипуляций / ГрезинаН.М. //Автореф. дисс.. канд. биол. наук. Дубровицы. — 2004. — 21 с.

10. Данилова, Л. В. Сперматогонии, сперматоциты, сперматиды//В кн.: Современные проблемы сперматогенеза. / Данилова Л. В. // М: Наука. -1982. С.25−72.

11. Зиновьева, Н. А. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве / Н. А. Зиновьева, А. Н. Попов, Л. К. Эрнст, Н. С. Марзанов, В. В. Бочкарев, Н. И. Стрекозов, Г. Брем // Дубровицы, 1998. 47 с.

12. Зиновьева, Н. А. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно-генетические аспекты трансгенеза вживотноводстве / Зиновьева H. А., Эрнст JI. К., Брем Г. // Дубровицы: ВИЖ. 2001.С. 128.

13. Коржикова, C.B. Выделение, характеристика и транплантация сперматогоний типа, А хряка / Коржикова C.B. //Автореф. дисс.. канд. биол. наук. Дубровицы. — 2002. — 19с.

14. Кузнецов, А. В. Исследования переноса чужеродных генов сперматозоидами в яйцеклетки мидии Mytilus Galloprovincialis Lam. / Кузнецов А. В., Пиркова A.B., Дворянчиков Г. А. //Онтогенез. 2001. — Т.32. -№ 4. — С.309−318.

15. Меркурьева, Е. А. Генетика / Меркурьева Е. А. //М.: Агропромиздат. 1991. -247с.

16. Микроскопическая техника: Руководство / под ред. Д. С. Саркизова, Ю. П. Перова. М.: Медицина, 1996. — 544 с.

17. Новгородова, И. П. Характеристика половых клеток семенников кроликов как мишеней для генно-инженерных исследований / Новгородова И. П. // Автореф. дисс.. канд. биол. наук. Дубровицы. — 2004. — 21с.

18. Новое в клонировании ДНК. Методы. / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1989. — 368с.

19. Прасолов, B.C. Ретровирусные векторы эффективная система переноса и экспрессии чужеродных генов в клетках млекопитающих / Прасолов B.C. // Молекулярная биология. 1989. Т. 23, вып. 2. С. 8−12.

20. Райцина, С. С. Регенерация семенников у млекопитающих//Бюл. эксперим. биологии и медицины / Райцина С. С. // 1956. № 9. — С.51−55.

21. Райцина, С. С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции / Райцина С. С. // М.: Наука. 1985. — 207с.

22. Райцина, С. С. Травма семенника и аутоиммунитет / Райцина С. С. // М.: Медицина. 1970. — 182с.

23. Райцина, С. С. Цикл сперматогенного эпителия и кинетика сперматогенеза у млекопитающих//Успехи современной биологии./ Райцина C.C.II 1967. Т.63. — С.135−153.

24. Реунов, A.A. Сперматогенез многоклеточных животных/ Реунов A.A. // М.: Наука. 2005. — 123с.

25. Реунов, A.A. Ультраструктурные аспекты сперматогенеза многоклеточных животных/ Реунов A.A. //Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Владивосток. -1998. 42с.

26. Ромейс, Б. Микроскопическая техника / Б. Ромейс. Пер. с нем. В .Я. Александрова, З. И. Кроковой / Ромейс, Б // М.: Изд.-во иностр. лит.-ры, 1953. 718с.

27. Рузен-Ранге, Э. Сперматогенез у животных / Рузен-Ранге Э //М.: Мир. 1980. -255с.

28. Сурикова, К.К. К вопросу о цитологических и гистохимических изменениях при сперматогенезе//Вестник ЛГУ / Сурикова K.K.// Т.15. 1957. С.53−71.

29. Титова, В.А. Молекулярно-генетические аспекты использования ретровирусных векторов для трасгенеза в животноводстве /В.А.Титова // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Дубровицы, 2001. — 22 с.

30. Фалин, JI.И. Развитие половых желез и происхождение половых клеток в эмбриогенезе человека//Архив анатомии, гистологии, эмбриологии/ Фалин Л.И.// 1968. Т.54. — № 2, — С.3−27.

31. Филатов, Ф. П. Рекомбинантный поверхностный белок вируса гепатита В, экспонирующий иммунодоминанту мембранного белка вируса ВИЧ1/ Филатов Ф. П., Тугизов Ш. М., Савченкова И. П // ДАН. 1992. -Т.327(1). — С.172−175.

32. Хесин, Р. Б. Непостоянство генома / Хесин Р. Б// М.: Наука. 1984.-471с.

33. Хэм, А. Гистология: Пер. с англ./ Хэм А., Кормак Д// М.: Мир. -1983. -Т.5. 296с.

34. Эрнст, Л. К. Некоторые аспекты использования ретровирусных векторов для переноса чужеродной ДНК in vivo и in vitro / Эрнст Л. К., Зиновьева Н. А., Волкова Н. А., Титова В. А // М.: РАСХН. 2003. 84 с.

35. Amann, R.P. Sperm production rates / Amann R. P //In: Johnson A.D., Gomes W.R., VanDemark N.L. The Testis. Academic Press, New York. 1970. -V.l. -P.433−482.

36. Archibald, A.L. Molekular Biological Approaches and their Possible Aplications / Archibald, A. L// in J.W. Owen and R.F.E. Axford (eds), Breeding for Disease Resistance in Farm Animals, C.A.B. International, UK. 1991. -P.100−122.

37. Arezzo, F. Sea urchin sperm as a vector of foreign genetic information / Arezzo F//Cell Biol. Int. Rep. 1989. — V.13(4). — P.391−404.

38. Bachiller, D. Liposome-mediated DNA uptake by sperm cells/ Bachiller D., Schellander K" Peli J/ZMol. Reprod. Dev. 1991. — V.30(3). — P. 194−200.

39. Behr, J.P. Cene transfer with synthetic cationic amphiphiles: Prospects for gene therapy /Behr J. P//Bioconjugate Chemistry. 1994. — V.5. — P.382−389.

40. Berardino, M. Development and chromosomal constitution of nuclear transplants derived from male germ cells / Berardino M., Hoffher M//J. of Exper. Zoology. 1976. — V.176(1). — P.61−72.

41. Boulo, V. Transient expression of luciferarase reporter gene after lipofection of oyster (Crassostrea gigas) primary cell cultures/ Boulo V., Cadoret J.P., Le Marrec F//Mol. Marine Biol. Biotech. 1996. — V.5(3). — P. 167−174.

42. Braskett, B.G. Uptake of heterologous genome by mammalian spermatozoa and its transfer to ova through fertilization / Braskett B.G., Baranska W., Sawicki W //Proc. Natl. Acad. Sci. 1971. — V.68. — P.353−357.

43. Brinster, R.L. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation / Brinster R.L., Avarbock M. R//Proc. Natl. Acad. Sci. 1994a. -V.91. -P.l 1303−11 307.

44. Brinster, R.L. Spermatogonial stem cell transplantation, cryopreservation and culture / Brinster R.L., Nagano M//Semin. Cell. Dev. Biol. -1998. V.9(4). — P.401−409.

45. Brinster, R.L. No simple solution for making transgenic mice/ Brinster R.L., Sandgren E.P., Behringer R.R., Palmiter A. F//- 1989. V.59. — P.239−241.

46. Brinster, R.L. Spermatogenesis following male germ-cell transplantation / Brinster R.L., Zimmerman W//Developmental biology. 1994b. -V.91.-P.l 1298−11 302.

47. Cadoret, J.P. Microinjection of bivalve eggs: application in genetics / Cadoret J.P., Gendreau S., Delecheneau J. M //Mol. Marine Biol. Biotech. 1997b. — V.6(l).-P.72−77.

48. Capecchi, M.R. High efficiency transformation by direct microinjection of DNA into cultured mammalian cells/ Capecchi M. R //Cell. -1980. V.22(27). — P.9139−9143.

49. Capecchi, R.L. Science / Capecchi R. L// 1989. V.244. — P. 1288−1292.

50. Capel, B. The battle of the sexes/ Capel B //Mechanisms of Development. 2000. — V.92. — P.89−103.

51. Castrillon, D.H. The human VASA gene is specifically expressed in the germ cell lineage/ Castrillon D.H., Quade B.J., Wang T.Y., Quigley C., Crum C. P//Proceedings National Academy of Sciences. 2000. — V.97. — P.9585−9590.

52. Castro, F.O. Introduction of foreign DNA into the spermatozoa of farm animals/ Castro F. O //Theriogenology. 1990. — V.34. — P. 1099−1110.

53. Clermont, Y. Kinetics of spermatogenesis in mammals: Seminiferous epithelium cycle and spermatogonial renewal/ Clermont Y //Physiol. Rev. 1972. -V.52. — P.198−236.

54. Clermont, Y. The cycle of the seminiferous epithelium in man/ Clermont Y. //Am. J. Anat. 1963. — V. l 12. — P.35−51.

55. Clermont, Y. Two classes of spermatogonial stem cells in thr monkey (Cercopithecus aethiops)/ Clermont Y//Am. J. Anat. 1969. — V. l26. — P.57−72.

56. Clermont, Y., Bustos-Obregon E. Re-examination of spermatogonial renewal in the rat by means of seminiferous tubules mounted «in toto"/ Clermont Y //American J. of Anatomy. 1968. — V.122. — P.237−247.

57. Clermont, Y. Spermatogonial stem cells and their behavior in the seminiferous epithelium of rats and monkeys//In: Stem cells of renewing cell populanions/ Clermont Y., Hermo L. //Acad. Press. 1976a. — P.273−287.

58. Clermont, Y. Effect of a spermatogonial chalone on the growing rat testis/ Clermont Y., Mauger A //Cell and Tissue Kinetics. 1976b. — V.9. — P.99−104.

59. Clouthier, D.E. Rat spermatogenesis in mouse testis/ Clouthier D.E., Avarbock M.R., Maika S.D., Hammer R. L //Nature. 1996. — V.381. — P.418−421.

60. De la Fuente, J. Sperm mediated foreign DNA transfer experiments in different species/ De la Fuente J., Castro F.O., Hernandez 0//Presented at Biotech. USA, Ramada Renaissance Tech. Wored. Washington, DC. — November 27−29. -1990. -P.247−262.

61. De Rooij, D.G. Proliferation and differentiation of spermatogonial stem cells/ De Rooij D. G//Reproduction. 2001. — V.121. — P.347−354.

62. De Rooij, D.G. All yor wanted to know about spermatogonia but were afraid to ask/ De Rooij D.G., Russel L. D //J. of Andrology. 2000. — V.21. — P.776−798.

63. De Rooij, D.G. Regulation of proliferation and differentiation of stem cells in the male germ line/De Rooij D.G., van Dissel-Emiliani F.M.P//Stem Cells. 1997. -P.283−313.

64. De Rooji, D.G. Spermatogonial stem cells/ De Rooji D.G., Grootegoed J. A//Curr. Opin. Cell Biol. 1998. — V.10. — P.694−701.

65. Dobrinski, I. Germ cell transplantation from large domestic animals into mouse testes/ Dobrinski I., Avarbock M.R., Brinster R. L //Molecular Reproduction and Development. 2000. — V.57(3). — P.270−279.

66. Dobrinski, I. Transplantation of germ cells from rabbits and dogs into mouse testes/ Dobrinski I., Avarbock M.R., Brinster R. L //Biol. Reprod. 1999a. -V.61. — P.1331−1339.

67. Dolci, S. Combined action of stem cell factor, leukemia inhibitory factor and cAMP on in vitro proliferation of mouse primordial germ cells/ Dolci S., Pesce M., Felici M. de/Mol. Reprod. Dev. 1993. — V.35 — P. — 134−139.

68. Dym, M. Effects of x-rays on type A spermatogonia in the rat/ Dym M., Clermont Y//Anat. Rec. 1967. — V. 157 — P.238.

69. Dym, M. Role of the spermatogonia in the repair of the seminiferous epithelium following X-irradiation of the rat testis/ Dym M., Clermont Y//Amer. J. Anat. 1970. — V.128. — P.265−282.

70. Dym, M. Expression of c-kit receptor and its autophosphorylation in immature rat type A spermatogonia/ Dym M., Jia M.-C., Dirami G., Price J. M//Biology of reproduction. 1995 — Y.52. — P.8−19.

71. Ewing, L.L. Int. Rev. Physiol / Ewing L.L., Davis J.C., Zirkin B. R // 1980.-V.22.-P.41−115.

72. Forster, W. Gene transfer by electroporation/ Forster W., Neumann E//In: Electroporation and electrofiision in cell biology/Press. New York and London. 1989. — P.299−318.

73. Franca, L.R. Germ cell genotype controls cell cycle during spermatogenesis in the rat/ Franca L.R., Ogawa T., Avarbock M.R., Brinster R.L., Russell L. D//Biol. Reprod. 1998. — V.59(6). — P. 1371−1377.

74. Fransolini, M. Evidence for nuclear internalization of exogenous DNA into mammalian sperm cells/ Fransolini M //Mol. Reprod. and Dev. 1993. — V.34. — P.133−139.

75. Gahne, M.B. Electroporation of bovine spermatozoa to carry foreign DNA in oocytes/ Gahne M.B., Pothier F., Sirard M. A //Mol. Reprod. Dev. 1991. -V.29.-P.6−15.

76. Gandolfi, F. Spermatozoa, DNA binding and transgenic animals/ Gandolfi F//Trasgenic Research. 1998. — V.7. — P.147−155.

77. Gendreau, S. Transient expression of a luciferase reporter gene after ballistic introduction into Artemia franciscana (Crustacea) embrios/ Gendreau S., Lardans V, Cadoret J.P., Mialhe E //Aquaculture. 1995. — V.133. — P.199−205.

78. Gruendbaum, J. Sperm cells as vectors for generation of transgenic chickens / Gruendbaum J., Revel E., Yarns S., Fainsod A //J. Cell Biochem. -1991. Suppl.15. — P.194.

79. Hannah-Alava, A. Premeiotice studies of spermatogenesis/ HannahAlava A//Adv. Genet. 1965. — P.157−226.

80. Heller, C.G. Kinetics of the germinal epithelium in man/ Heller C.G., Clermont Y//Recent Progr. Hormone Res. 1964. — V.20. — P.545−571.

81. Hericson, B. Translocation heterozygoty in a boar/ Hericson B., Backstrom L//Herditas. 1964. — V.52. — P. 166−170.

82. Higashi, T. Hamster cell line suitable for transfection assay of transforming genes/ Higashi T., Sasai H., Suzuki F//Proc. Natl. Sci. 1990. — V.87. P.2409−2413.

83. Hochi, S. Fate of exogenous DNA carried into mouse eggs spermatozoa/ Hochi S., Ninomiya T., Mizuno A., Honma M., Yulci A //Anim. Biotech. 1990. — V.l. — P.21−31.

84. Holstein, A.F. Organisation und Regulation der Gametenreifung /Holstein A. F //HVBG. 1999. — V.4. — P. 15−30.

85. Huguet, E. Foreign DNA introduced into the vas deferens is gained by mammalian spermatozoa/ Huguet E., Esponda P//Mol. Reprod. Dev. 1998. -V.51(l). — P.42−52.

86. Izadyar, F. Isolation and purification of type A spermatogonia from the bovine testis/ Izadyar F., Spierenberg G.T., Creemers L.B., den Ouden K., Dirk de Rooij D. G//Reproduction. 2002. — V. l24. — P.85−94.

87. Izadyar, F. Spermatogonia! stem cell transplantations/Molecular and Cellular Endocrinology/ Izadyar F., van Dissel-Emiliani F., van Pelt A., de Rooij D.G. // 2000. V. l69. — P.21−26.

88. Oakberg, E.F. Spermatogonial stem cell reneval in the mouse/ Oakberg E. F//Anat. Rec. 1971. — V. 169. — P.515−532.

89. Ogawa, T. Transplantation of testis germinal cells into mouse seminiferous tubules/ Ogawa T., Arechaga J.M., Avarbock M.R., Brinster R. L//International Journal of Developmental Biology. 1997. — V.41. — P. 111−122.

90. Ogawa, T. Leuorolide, a gonadotropin-releasing hormone agonist, enhances colonization after spermatogonial transplantation into mouse testes/ Ogawa T., Dobrinski I., Avarbock M.R., Brinster R. L//Tissue Cell. 1998. -V.30(5). — P.583−588.

91. Ogawa, T. Transplantation of male germ line stem cells restores fertility in infertile mice/ Ogawa T., Dobrinski I., Avarbock M.R., Brinster R. L//Nature Medicine. 2000. — V.6. — P.29−34.

92. Ogawa, T. Xenogeneic spermatogenesis following transplantation of hamster germ cells to mouse testes/ Ogawa T., Dobrinski I., Avarbock M.R., Brinster R. L //Biol. Reprod. 1999a. — V.60. — P.515−521.

93. Ogawa, T. Recipient preparation is critical for spermatogonial transplantation in the rat/ Ogawa T., Dobrinski I., Brinster R.L. //Tissue Cell. -1999b. V.31.-P.461−472.

94. Orsi, A.M. Definition of the stages of the cycle of the seminiferous epithelium of the opossum/ Orsi A.M., Ferreira A. L//Acta anat. 1978. — V.100. -P.153−160.

95. Ortavante, R. Action de la duree d' eclairment sur les processus spermatogenetuques chez le Bolier/ Ortavante R//C. r. Soc. Boil. 1956. — V.150.P.471−474.

96. Ortavante, R. Spermatogenesis and morphology of spermatozoon/ Ortavante R//In: Reproduction in domestic animals. 1959. — V.7. — P. 1−51.

97. Parreira, C.G. Development of germ cell transplants in mice/ Parreira C.G., Ogawa T., Avarbock M.R., Franca L.R., Brinster L.R., Russel L. D//Biology of Reproduction. 1998. — V.59. — P.1360−1370.

98. Passoni, L. Sperm cells mediated gene transfer: presence of foreign DNAinto bovine blastocyst obtained from in vitro fertilization/ Passoni L., Mauri L., Luciano A., Pocar P., Ajmone-Marsan//A preliminary report. 1995. — P.427−428.

99. Pittoggi, C. Complete culture system for the chick embryo / Pittoggi C., Beraldi R//Nature. 2006. Vol. 331. P. 70−72.

100. Reis, M.M. Xenogeneic transplantation of human spermatogonia/ Reis M.M., Tsai M.C., Schlegel P.N., Feliciano M., Raffaelo R., Rosenwaks Z., Palermo D//Zygote. 2000. — V.8. — P.97−105.

101. Rex, A. Hess. Spermatogenesis/ Rex A. Hess //Biol. Reprod. 1999. -V.4. — P.539−545.

102. Robertson, E.J. Using embryonic stem cell to introduce mutations into the mouse germ line/ Robertson E. J//Biol. Reprod. 1991. — V.44. — P.238−245.

103. Rodriguez, A. Exogenous cloned DNA can penetrate living sperm cells/ Rodriguez A., Castro F. O., Guillen J. et al. //Advances in Gene Technology: Feeding the World in the 21st Century. 1991. — P.53.

104. Roosen-Runge, E.C. The process of spermatogenesis in Animals/ Roosen-Runge E. C //Cembridge Univ. Press. 1977. — P.326−335.

105. Roosen-Runge, E.C. The process of spermatogenesis in mammals/ Roosen-Runge E. C//Biol. Rev. 1962. — V.37. — P.343.

106. Rose, J.K. A new cationic liposome reagent mediating nearly quantitative transfection of animal cells/ Rose J.K., Buonocore L. and Whitt M.A. //Biotechniques. 1991. — V. 10. — P.520−525.

107. Rossi, P. A novel c-kit transcript, potentially encoding a truncated receptor, originates within a kit gene intron in mouse spermatids/ Rossi P., Marziali G., Albanesi C//Dev. Biol. 1992. — V.152. — P.203−207.

108. Roth, E. Untersuchungen zur Keimdrusenentwicklung bei mannlichen Veredelten Landschweinen/ Roth E., Smidt D//Zuchtungs kunde. 1970. — B.2. -S. 144−160.

109. Rottman, O. Liposomemediated gene transfer via spermatozoa into avian egg cells/ Rottman O., Antes R., Hofer P., Maierhofer G //J. Anim. Breed. Genet. 1991. — V. 109. — P.64−70.

110. Rottman, O. A method for transferring organic and inorganic substances to egg cells and somatic cells of animals and composition for use therein/ Rottman O., Hoffer P//World patent WO 87/5 325. 11.09.1987. P.227−236.

111. Ruysschaert, J.-M. A novel cationic amphiphile for transfection of mammalian cells/ Ruysschaert J.-M., Ouahabi A., Willeaume V//Biochem. and Bioph. Res. Comm. 1994. — V.203(3). — P. 1622−1628.

112. Sato, M. Direct injection of foreign DNA into mouse testis as a possible alternative of sperm-mediated gene transfer/ Sato M., Iwase R., Kasai K., Tada N//Animal Biotechnology. 1994. — V.5(l). — P.19−31.

113. Spadafora, C. Sperm cells and foreign DNA: a controversial relation. Bioassays/ Spadafora C// 1998. P.302−324.

114. Sperandio, S. Sperm-mediated DNA transfer in bovine and swine species/ Sperandio S., Lulli V., Bacci M., Forni M., Maioni B//Anim. Biotech. -1996. -V.7. -P.59−77.

115. Stewart, C.L. Stem cells from primordial genu cells can reenter the germ line/ Stewart C. L//Dev. Biol. 1994. — V.161. — P.626−628.

116. Swierstra, E.E. Cytology and kinetics of spermatogenesis in the rabbit/ Swierstra E.E., Foote R. H//J. Reprod. Fertil. 1963. — V.5. — P.309−322.

117. Tan, J.C. The dominant W42 spoting phenotype results from a missence mutation in the c-kit receptor kinase/ Tan J.C., Nocka K., Ray P., Traktman P., BesmerP //Science. 1990. — V.247. — P.209−212.

118. Tsai, H.J. Sperm as a carrier to introduce an exogenous DNA fragment into the oocyte of Japanese abalone (Haliotis divorsicolor suportexta/ Tsai H.J., Lai C.H., Yang H. S //Transgenic Res. 1997. — V.6(l). — P.85−95.

119. Uckert, W. Retrovirus-mediated gene transfer in cancer therapy/ Uckert W., Walther W//Pharmac. Ther. 1994. — V.63. — P.323−247.

120. Van der Kooy, D. Why stem cells?/ Van der Kooy D., Weiss S//Science. 2000. — V.287. — P.1439−1441.

121. Watt, F.M. Out of Eden: stem cells and their niches/ Watt F.M., Hogan B. L//Science. 2000. — V.287. — P. 1427−1430.

122. Wheeler M.B. Development and validation of swine embryonic stem cells: a review/ Wheeler M. B//Reprod. Fertil. Dev. 1994. — V.6. — P.563−568.

123. Yamazaki, Y. In vivo gene transfer to mouse spermatogenic cells by deoxyribonucleic acid injection into seminerous tubules and subsequent electroporation/ Yamazaki Y., Fujimoto H., Ando H//Biol. Reprod. 1998. — V.59. — P.1439−1444.

124. Yamazaki, Y. In vivo gene transfer to mouse spermatogenic cells using green fluorescent protein as a marker/ Yamazaki Y., Yagi T., Ozaki T., Imoto K//J. Exp. Zool. 2000. — V.286(2). — P.212−218.

125. Yu, Z. Gene expression profiles in different stages of mouse spermatogenic cells during spermatogenesis/ Yu Z., Guo R., Ge Y //Biol. Reprod. -2003.-V.69(l).-P.37−47.