Морфологические изменения матки при действии эстрогенов в условиях длительного повышения концентрации глюкокортикоидных гормонов

АКТУАЛЬНОСТЬ.

Эстрогеновые гормоны оказывают существенное влияние на гистофи-зиологию матки и индуцируют возникновение характерных морфологических изменений. Проявления эстроген-индуцированных изменений различны и имеет доказанный многочисленными исследованиями эффект зависящий от дозы и времени воздействия эстрогенов. Показано, что при кратковременном воздействии эстрогенов происходит увеличение интенсивности пролиферации во всех структурах матки, без изменения морфологического строения (Couse J.F. et al., 1999). При длительном воздействии эстрогенов происходит не только увеличение индекса пролиферации, но и изменение морфологического строения матки, проявляющиеся в гипертрофии и гиперплазии всех компонентов органа, и даже формирование гиперплазии эндометрия и рака матки (Лагучев С.С., 1975; Топчиева О. И. и др., 1978; Волкова О. В., 1983; Martin L. et al., 1973; Niwa К. et al., 1998; Liehr J.G., 2000). Направленность эстроген-индуцированных морфологических изменений может изменяться при воздействии эстрогенов совместно с другими гормональными и негормональными факторами (Волкова О.В., 1983; Bigsby R.M., 1993; Vertes Z. et al., 1995; Kaushic C. et al., 1995; Kirkland J. et al., 1995; Tessier C. et al., 1995; Boettger-Tong H.L. et al., 1995; Asselin et al., 1996; Wu W.X. et al., 1996; Zheng et al., 1996).

Есть разнообразные факторы, изменяющие чувствительность матки к эстрогенам (Couse J.F. and Korach, 1999; Emons G. et al., 2000). Одним из таких факторов являются глюкокортикоидные гормоны. При кратковременном воздействии они снижают интенсивность пролиферации в матке, вызываемую эстрогенами, а при длительном введении вызывают увеличение индекса пролиферации в клетках стромы и миоцитах матки (Gunin A.G., 1998; Gunin A.G. et al., 2000; Gunin A.G. et al., 2001; Tchernitchin A.N. et al., 1975; Campbell P. S., 1978; Markaverich B.M. et al., 1981; Monheit et al., 1981; Stewart et al., 1983; Rabin D.S. et al., 1990; Bigsby R.M., 1993; Sahlin L., 1995). Таким образом, эффект глюкокортикоидов на эстроген-индуцируемые процессы в матке зависит от продолжительности их собственного действия и от продолжительности действия эстрогенов. Однако, во всех исследованиях этой области использовали экзогенные глюкокор-тикоиды. Показнано, что действие эндогенных и экзогенных глюкокортикоидов не равнозначны. При использовании экзогенных глюкокортикоидов происходит угнетение функции гипофизарно-надпочечниковой системы (Zennaro М.С., 1998). Напротив, увеличение уровня эндогенных глюкокортикоидов происходит за счет повышения деятельности гипофизарно-надпочечниковой системы, основным компонентом которой является АКТГ (Zennaro М.С., 1998). Следовательно, эффекты влияния экзогенных и эндогенных глюкокортикоидов на эстроген-зависимые процессы в матке могут быть различны. Однако, влияние эндогенных глюкокортикодов на уровень пролиферации в матке не исследовано, а морфологические эффекты возникающие в матке при совместном длительном воздействии эстрогенов и экзогенных или эндогенных глюкокортикоидов неизвестны. Кроме того, мало изучены пути реализации эффектов глюкокортикоидов в матке.

Следовательно, исследование уровень пролиферации и морфологических изменений в матке, происходящих при длительном воздействии глюкокортикоидов и эстрогенов, является актуальной научной задачей в морфологии, имеющей своей целью выяснение не только морфологических характеристик данных процессов, но и установления возможных механизмов действия глюкокортикоидов в матке, которые помогут расширить наши представления о возникновении, течении и предупреждении эстроген-зависимых злокачественных опухолей. Заболеваемость этими формами патологии ежегодно возрастает, что определяет особую актуальность изучения данной проблемы (Geddes et al., 1994; Walter S.D. et al., 1994; Brooks et al., 1995).

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

.

Целью настоящей работы являлось изучение морфологических изменений матки при длительном введение эстрогенов на фоне повышенной концентрации глюкокортикоидов.

В соответствии с целью были определены следующие задачи:

1. Исследовать морфологию матки при сочетанном длительном воздействии эстрогенов на фоне повышенного уровня глюкокортикоидов, вызванного введением глюкокортикоида дексаметазона и введением АКТГ.

2. Исследовать пролиферативные процессы в матке при сочетанном длительном воздействии эстрогенов на фоне повышенного уровня глюкокортикоидов, вызванного введением глюкокортикоида дексаметазона и введением АКТГ.

3. Исследовать состояние рецепции половых гормонов (эстрогенов и гестагенов) и глюкокортикоидов в матке мышей при сочетанном длительном воздействии эстрогенов и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона или на фоне повышения уровня эндогенных глюкокортикоидов, вызванного введением АКТГ.

4. Исследовать состояние системы (3-катенина и гликоген синтазы ки-назы-ЗР в матке мышей при сочетанном длительном воздействии эстрогенов и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона или на фойе повышения уровня эндогенных глюкокортикоидов, вызванного введением АКТГ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

В проведенных исследованиях впервые охарактеризованы изменения пролиферативных процессов и морфологического строения матки при сочетанном длительном влиянии эстрогенов и эндогенных глюкокортикоидов, в сравнении с действием только эстрогенов.

Впервые изучены особенности экспрессии эстрогеновых рецепторова, глюкокортикоидных и прогестероновых рецепторов, а также содержания р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр в матке при совместном действии экзогенных глюкокортикоидов и эстрогенов в сравнении с действием только эстрогенов.

Впервые исследовано изменение экспрессии эстрогеновых рецепторов-ос, глюкокортикоидных и прогестероновых рецепторов, а также содержания Р-катепина и гликоген синтазы киназы-ЗР в структурах матки мышей подвергшихся совместному воздействию эндогенных глюкокортикоидов и эстрогенов.

Впервые показано различие в действие экзогенных и эндогенных глюкокортикоидов на изменение уровня эстроген-индуцированной пролиферации, морфологического строения, изменения уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов-ос, глюкокортикоидных, прогестероновых рецепторов, Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Практическая значимость настоящей работы заключается в использовании полученных данных, о влиянии совместного воздействия экзогенных или эндогенных глюкокортикоидов и эстрогенов на уровень пролиферации и морфологическое строение, при проведении научных исследований в морфологии, эндокринологии, патологической анатомии, акушерстве и гинекологии, онкологии и при изучении этиологии, патогенеза и лечения различных видов эстрогензависимой патологии, такой как рак тела матки, фибромиоматоз матки и других предраковых процессов женских гениталий. Кроме того, довольно часто в практической деятельности врача встречаются состояния и заболевания, при которых уровень глюкокортикоидных гормонов повышен. Более того, фармакологические препараты глюкокортикоидных гормонов широко применяются в медицине, поэтому необходимо знать и учитывать при их использовании выявленные в настоящем исследовании эффекты моделирования глюкокортикоидами действия эстрогенов в матке.

Результатами данной научной работы явились новые теоретические знания о формировании морфологических изменений, возникающих в матке при совместном действии эстрогенов и глюкокортикоидных гормонов, а также возникающих при этом изменений рецепторного аппарата матки и активности регуляторных клеточных путей.

Учитывать результаты в разработке лечения эстроген-индуцированных предраковых процессов, а также онкологических больных с различными гормонально-зависимыми опухолями.

Другая сторона практического использования полученных результатов — использование этих данных в программах кафедр гистологии, патологической анатомии, акушерства и гинекологии, физиологии и эндокринологии при обучении студентов медицинских вузов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Эстроген-индуцированные морфологические изменения в матке овариоэктомированных мышей претерпевают изменения под воздействием экзогенного глюкокортикоида дексаметазона, и проявляются снижением пролиферативной активности во всех структурах матки, снижением выявляемое&tradeгиперплазии эндометрия, в том числе и атипической гиперплазии эндометрия, снижением количества конгломератов желез матки, выявляемое&tradeпсевдомногослойного и атипического многослойного эпителия желез, и увеличением количества случаев простой неатипической гиперплазии с кистозно расширенными железами и призматическим эпителием. Действие дексаметазона в матке опосредуется увеличением уровня экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов-а, в клетках эпителия эндомерия, желез, стромы и миометрии матки, снижением уровня экспрессии глюкокортикоидных рецепторов в эпителии эндометрия, желез, клетках стромы и миоцитах, а также увеличением содержания р-катенина и гликоген синтазы киназы-ЗР в клетках эпителия эндометрия и желез.

2. Морфологические изменения в матке овариоэктомированных мышей, возникающие при воздействии эстрогенов, существенно изменяются под влиянием эндогенных глюкокортикоидов, концентрация которых, повышается при введении АКТГ, что выражается в значительном снижении индекса пролиферации в эпителии эндометрия, желез и клетках стромы и увеличением в миоцитахпредотвращении формирования неатипической и атипической, простой и комплексной гиперплазии эндометрияснижением выявляемости патологических форм желез и желез псевдомногослойным и атипическим многослойным эпителием, и увеличением количества случаев пролиферирующего эндометрия и простой гиперплазии. Эндогенные глю-кокортикоиды влияют на матку опосредованно понижением уровня экспрессии глюкокортикоидных и эстрогеновых рецепторов-а, глюкокортикоидных рецепторов, увеличением уровня экспрессии прогестероновых рецепторов в эпителии эндометрия и желез, клетках стромы и миоцитах и снижением в эпителии эндометрия и железах уровня Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр.

3. Воздействие экзогенных и эндогенных глюкокортикоидов на уменьшение эстрогенового влияния на матку различно в их действии на морфологию, пролиферацию, экспрессии эстрогеновых рецепторов-а, Р-катенина и концентрации гликоген синтазы киназы-ЗР тканей матки.

АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Результаты исследования по теме диссертации доложены и обсуждены на совместном заседании кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии и патологической анатомии Чувашского государственного университета.

2007 г.- кафедры гистологии Российского университета дружбы народов 2007 г. Результаты работы отражающие основные положения диссертации представляли на научных конференциях: 4 Международной конференции по функциональной нейроморфологии «Колосовские чтения — 2002», 29−31 мая 2002 г.- 18th U1CC International Cancer Congress, 30 июня-5 июля 2002 г.- 1 Oth Meeting of the European Neuroendocrine Association, 12—14 сентябрь 2002 г.- 5th International Congress of Neuroendocrinology, 31 августа -4 сентября 2002 г.- World Congress of Stress, 12−15 сентября 2002 г.- World Congress Gynecological Endocrinology, сентябрь 2002 г.- третей междисциплинарной конференции с международным участием НБИТТ-21, Петрозаводск, 21−23 июня 2004 г.- научно-практической конференции, посвященной 75-летию профессора Г. М. Воронцовой, апрель 2004 г.

выводы.

1. В условиях длительного сочетанного введения эстрадиола и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона в выстилающем эпителии, эпителии желез, клетках стромы эндометрия и миоцитах миометрия матки мышей наблюдается угнетение пролиферативной активности, оцениваемой по показателям митотического индекса и доли BrdU-положительных клеток. При длительном введении эстрадиола на фоне повышения эндогенной концентрации глюкокортикоидов, вызванной введением АКТГ, также наблюдается снижение пролиферативной активности во всех структурах матки, за исключением клеток стромы эндометрия, где обнаруживается повышение активности клеточного деления.

2. В эндометрии животных, получавших длительное сочетанное введение эстрадиола и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона обнаружено увеличение количества желез нормальной формы с однослойным эпителием по сравнению с таковыми показателями животных с длительным введением эстрадиола без дексаметазона. У животных с длительным введением эстрадиола на фоне повышения эндогенной концентрации глюкокортикоидов, вызванной введением АКТГ, также наблюдается возрастание численности желез эндометрия с нормальной формы и однослойным однорядным эпителием по сравнению с таковыми данными в матке мышей, которым осуществляли введение эстрадиола без АКТГ.

3. При длительном сочетанном введении эстрадиола и дексаметазона экспрессия глюкокортикоидных рецепторов снижается, а экспрессия а-эстрогеновых и прогестероновых рецепторов возрастает во всех структурах матки мышей, получавших длительное сочетанное. Во всех структурах матки мышей, которым осуществляли длительное сочетанное введение эстрадиола и АКТГ, наблюдали снижение экспрессии глюкокортикоидных и а-эстрогеновых рецепторов и некоторое возрастание экспрессии прогестероновых рецепторов.

4. Экспрессия Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр, являющихся компонентами межклеточных адгезионных контактов и ключевыми молекулами Wnt-системы, существенно возрастает в выстилающем эпителии и эпителии желез эндометрия мышей, которые получали длительное введение эстрадиола и дексаметазона. Экспрессия этих протеинов снижается в выстилающем эпителии и эпителии желез эндометрия мышей в условиях длительного сочетанного введения эстрадиола и АКТГ.

5. Отсутствие эффектов глюкокортикоидов на пролиферацию, статус рецепторов половых гормонов и системы Р-катенин — гликоген синтаза ки-наза Зр в матке у мышей, которым не проводили введения эстрадиола, свидетельствует о том, что действие глюкокортикоидных гормонов на вышеназванные параметры осуществляется путем их влияния на механизм действия эстрогеновых гормонов.

6. Совокупность полученных данных об изменениях в строении и пролиферативной активности структур матки, вызванных длительным повышением уровня глюкокортикоидов, позволяют сделать вывод о том, что действие глюкокортикоидов опосредованы а-эстрогеновыми, глюкокорти-коидными и прогестероновыми рецепторами, а также системой «Р-катенин — гликоген синтаза киназа-ЗР» .

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

1.1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ, ОЦЕНКА И СУЩНОСТЬ ЭСТРОГЕН-ИНДУЦИРОВАННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В МАТКЕ.

Из всех органов женского организма матка наиболее чувствительна к действию эстрогенов (Епифанова О.И., 1965). Эстрогеновые гормоны являются главным фактором индуцирующим пролиферативные процессы и морфологические изменения в матки (Levenson A.S. et al., 1994; Buchanan D.L. et al., 1999; Cooke P. S. et al., 1997; Cunha G.R. et al., 2004). Они увеличивают индекс пролиферации в клетках эпителия эндометрия, желез, стромы и миоцитах, в результате чего происходит развитие гиперплазий эндометрия матки, а при длительном воздействии, и развитие опухолей матки.

Известно, что эстрогены связываются со специфическими рецепторами клеток матки — эстрогеновыми рецепторами (Green S. et al., 1987; Parker M.G., 1993; Levin E. et al., 1993; Maaroufi Y. et al., 1994; Zhang D. et al., 2006). В течение первых часов действия эстрогенов на эстрогеновые рецепторы происходит изменение уровня специфических мРНК различных белков клетки (Thampan R.V., 1985; Thampan R.V., 1988; Lutz W.H. et al., 1986; KommB.S. et al., 1987; Brantley K.M. et al., 1990; Usuki S., 1992; Ya-mashita S., 1995; Huynh H. 1998; Carpenter K.D. et al., 2003). Так, через 8−10 часов после воздействия эстрогенов повышается уровень мРНК циклина D1 и мРНК гена Wnt4, что соответствует G1 фазе клеточного цикла, и через 16−24 часа увеличивается мРНК циклина В1, и снижает уровень мРНК Wnt5a Wnt7a, что соответствует G2 и М фазе клеточного цикла, и совпадает с изменением локализации циклин D1, который начинает локализоваться в ядре клеток (Zhang Z. et al., 1998; Katayama S. et al., 2006; Shiozawa T. et al., 2004; Ruhul Q.M. Quddus et al., 2002). При увеличение экспрессии циклина D1 в ядрах клеток, происходящим под действием эстрогенов, происходит укорочение всех периодов клеточного цикла в клетках матки и стимуляция выхода клеток из GO в Gl-фазу клеточного цикла, и, как следствие этого, к возрастание содержания ДНК, и резкая активация митотиче-ской активности всех клеток матки (Лагучев С.С., 1970; Лагучев С. С., 1975; Galand P. et al., 1992; Cicatiello L. et al., 1993; Bhattacharyya N. et al., 1994). Результатом этих событий является закономерное повышение количества клеток, проходящих S-фазу, и, естественно, возрастание численности делящихся клеток, которые хорошо выявляются окрашиванием срезов железным гематоксилином (Sato В. et al., 1983; Hanazono М. et al., 1990; Galand P. et al., 1992; Jansen H.T. et al., 1993; Malini T. et al., 1993; Gunin A.G. et al., 2001; Gunin A.G. et al., 2002; Gunin A.G. et al., 2004; Gunin A.G. et al., 2004; Gunin A.G. et al., 2005). В S-периоде клеточного цикла происходит репликация ДНК.

Визуализировать клетки, проходящие S период клеточного цикла, позволяет применение бромдезоксиуридина. Бромдезоксиуридин является искусственно синтезированным веществом и превосходно выявляется им-муногистохимическими методами. Установлено, что бромдезоксиуридин способен встраиваться в молекулу комплементарной, вновь синтезированной ДНК, вместо цитозина в S-периоде клеточного цикла.

Помимо избирательности в отношении ДНК, к числу достоинств бромдезоксиуридина относится его доступность для тканей, быстрота включения в структуры, синтезирующие ДНК, и кратковременное пребывание в свободном состоянии в организме животных. Существенным обстоятельством является также стабильность образующейся метки, которая может быть «разбавлена» лишь в ходе последовательных клеточных делений. Следовательно, бромдезоксиуридин является маркером клеток, проходящих клеточный цикл, которые обязательно вступят в митоз. Поэтому применение бромдезоксиуридина является прекрасным средством для оценки пролиферативной активности клеток.

В экспериментах всем животным бромдезоксиуридин вводился за 2 часа до забоя. Выбор именно этого времени введения основывается на многочисленных литературных данных (Gunin A.G., 1996; Gunin A.G., 1997; Gunin A.G., 1998; Gunin A.G. et al., 2000; Gunin A.G. et al., 2001; Gunin A.G. et al., 2002; Gunin A.G. et al., 2003). Установлено, что вызванное эстрогенами увеличение уровня пролиферации во всех структурах матки обусловлено снижением длительности всех периодов клеточного цикла, возрастанием доли клеток, находящихся в Sи С2-периодах клеточного цикла, при этом продолжительность G1-периода колеблется от 6 до 8 часов, S-периода — 5−6 часов, С2-периода — 6−8 часов (Лагучев С.С., 1970; Ла-гучев С.С., 1975), причем, время синтеза ДНК снижается с 5 до 2,6 часов. Следовательно, использованный в настоящем исследовании период времени от введения бромдезоксиуридина до изъятия матки, в 2 часа является оптимальным для определения количества клеток, находящихся в S-периоде клеточного цикла.

Следовательно, достоверными методами оценки проявлений эстро-генных влияний на матку является выяснение степени пролиферативных измений матки, посредством подсчета бромдезоксиуридин положительных клеток, и количества делящихся клеток, окрашенных железным гематоксилином.

Кратковременное воздействие эстрогенов вызывает повышение Индекса пролиферации во всех структурах матки, однако морфологические перестройки структур матки не формируются (Couse J.F. et al., 1999). Изменение морфологического строения матки происходит только при длительном, длительном действии эстрогенов (Martin L. et al., 1973; Gunin A.G. et al., 2001). При этом под воздействием эстрогенов повышается уровень пролиферации эпителиальных клеток желез базального слоя и их миграция на поверхность эпителиальной выстилки эндометрия, происходит формирование новых маточных желез, в последующем железы удлиняются, становятся извитыми, слизистая утолщается, происходит отек стромы (Chaves М.С. et al., 1993). В матке формируются простые, неразветвленные трубчатые железы, покрытые однослойным цилиндрическим эпителием. В норме на данном этапе, примерно в середине менструального цикла, действие эстрогенов в матке нивелируется действием прогестерона, и в дальнейшем более значительные морфологические изменения не формируются.

При продолжении действия эстрогенов, происходит дальнейшее нарастание морфологических изменений, меняется гистоархитектоника матки — начинает преобладать железистый компонент над стромальным, стромы претерпевает обратное развитие. Изменяется форма желез: формируются кистозно-расширенные железы, образуются конгломераты железкроме того, изменяется тип эпителия желез, вместо однослойного призматического, эпителий становится псевдомногослойным или атипическим многослойным эпителием (Scully R.E. et al., 1994; Winterhager E. et al., 1994; Gunin A.G. et al., 2001). При более продолжительном воздействии эстрогенов может сформироваться апипическая гиперплазия эндометрия матки, которая является предраковым состоянием, и в последующем перерождается в рак эндометрия. Таким образом, степень выраженности морфологических изменений, при воздействии эстрогенов на матку, имеет прямо пропорциональную зависимость от времени воздействия — чем длительнее воздействуют эстрогены, тем более выражены морфологические изменения и вероятность формирования гиперплазий и рака эндометрия. Поэтому формирование эстроген-индуцированных гиперплазий матки, и в частности, атипической гиперплазии матки, а в последующем и опухолей матки, является цепью закономерных событий (Берштейн JI.M., 2000).

Действие эстрогенов в матке опосредуется двумя типами эстрогеновых рецепторов: эстрогеновыми рецепторами-а и эстрогеновыми рецепто-рами-p. Эффектами эстрогенов, возникающими при действии на эстрогеновые рецепторы-а являются увеличение индекса пролиферации, роста клеток, экспрессии прогестероновых рецепторов, белка Ki-67, комплимента СЗ, цитокина TL-1 (3, инсулинподобного фактора роста-1, снижение синтеза фактора роста сосудов, в то время как при воздействии на эстрогеновые рецепторы-Р происходит ослабление всех вышеперечисленных эффектов (Zhang W. et al., 2000; Lubahn D.B. et al., 1993; Orimo A. et al., 1999; Syed et al., 2000). Поэтому, наиболее значительная роль в эстроген-индуцированном канцерогенезе матки принадлежит эстрогеновым рецеп-торам-а, а исследование уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в тканях матки является более информативным методом оценки позволяющим оценить силу эстрогеновых влияний, нежели исследование уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов-р.

Роль изменения экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в развитии гиперпластических процессов и опухолей матки показана в многочисленных исследованиях. Общепринятым является представление о том, что одним из главных физиологических регуляторов экспрессии эстрогеновых рецепторов-а внутри клеток-мишеней является уровень циркулирующих свободных эсторогеновых гормонов. При длительном повышении уровня циркулирующих эстрогенов в тканях матки происходит снижение экспрессии эстрогеновых рецепторов и развитие гиперпластичеких изменений (Но С.К. et al., 1999). По данным Martin J.D. при повышенной экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в матке не наблюдается развитие гиперпластических процессов и, благодаря этому, существенно снижается риск развития неоплазий матки (Martin J.D. et al., 1983). Напротив, экспрессия эстрогеновых рецепторов снижается ступенчато при формировании сначала гиперплазии, а затем, аденокарциномы. На фоне данных процессов экспресия Ki-67 и циклина D1 в клетках матки напротив увеличивается (Nunobiki О. et al., 2003). Следует отметить, что опухоли матки с повышенным уровнем экспрессии эстрогенновых рецепторов-а, при лечении имеют более благоприятный прогноз, возможно, это происходит, вследствие воздействия на гены регуляторов роста, таких как c-myc (Hanahan D. et al., 1996), и инги-бирования ангиогенеза, вследствие чего снижается метастатический и ин-вазивный потенциал опухоли (Syed Hamid АН S.H. et al., 2000). Более того, в высокодифференцированных опухолях матки экспрессия эстрогеновых рецепторов-а повышена (Emons G. et al., 2000), при этом, количество эстрогеновых рецепторов снижается при снижении степени дифференцировки опухоли (АН S.H. et al., 2000), в низкодиффериенцированных опухолях уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов наиболее низкий (Sivridis Е. et al., 2001). Соответственно, опухоли матки с высоким уровнем экспрессии эстрогеновых рецепторов имеют более благоприятный прогноз при лечении и хорошо поддаются терапии антиэстрогенами, эти опухоли менее автономны, их рост зависит от влияния эстрогенов, и они, как правило, являются высокодифференцированными опухолями. Возможно, морфологические характеристики высокодифференцированных опухолей связанны с воздействием эстрогенов на эстрогеновые рецепторы клеток таких опухолей, что приводит, кроме увеличения уровень пролиферации, к активации специфических генов и соответствующем изменениям в клетках матки. Опухоли матки со сниженным уровнем экспрессии эстрогеновых рецепторов или с полным их отсутствием, как правило, являются низкодифферен-цированными опухолями, воздействие антиэстрогенов в которых не снижает интенсивность пролиферации, при этом морфологическое строение таких опухолей может быть связанно с отсутствием морфологических перестроек в клетках из-за отсутствия или снижения влияния связанно с эст-рогеновыми рецепторами-а (Sivridis Е. et al., 2001).

Для понимания роли изменения экспрессии эстрогеновых рецепторов в развитии опухолей матки рассмотрим изменение их экспрессии при различных патогенетических вариантах. В высокодифференцированных опухолях матки, как правило ассоциированных с первым патогенетическим вариантом, стимуляция интенсивности пролиферации клеток происходит под воздействием эстрогенов, при этом из них возникают опухоли с высоким уровнем экспрессии эстрогеновых рецепторов, чувствительные к терапии антиэстрогенами, то есть в этих опухолях стимуляция пролиферации происходит в основном за счет эстрогеновых рецепторов. Следовательно, в высокодифференцированных опухолях матки нарушается регу-ляторный механизм пролиферации связанный с эстрогеновыми рецепторами, уровень которых по непонятным причинам повышен. Однако, стимуляция пролиферации в клетках матки происходит также и за счет других факторов (Bigsby R.M., 2002; Bigsby R.M. et al., 2003).

В низкодифференцированных опухолях матки, возникновение которых связанно со вторым патогенетическим вариантом, клетки делятся в условиях гипоэстрогении, при этом уровень эстрогеновых рецепторов в них снижен, следовательно, увеличение индекса пролиферация происходит под воздействием других факторов не эстрогеновой природы. Так, например, клетки эндометрия без эстрогеновых рецепторов сохраняют способность делиться, получая ростовые сигналы от клеток стромы (Bigsby R.M., 2002; Bigsby R.M. et al., 2003).

Следовательно, изучение изменения экспрессии эстрогеновых рецепторов, под воздействием эстрогенов и других факторов в нормальных тканях матки, необходимо для понимания природы возникновения и прогрессии опухолей матки.

Однако, остается неясным, какой из процессов является первичным в матке: понижение уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов приводит к гиперпластическим процессам, или же первоначально в матке происходит развитие гиперпластических процессов, и как следствие этого снижается уровнь экспрессии эстрогеновых рецепторов, а значит и сила влияния эстрогенов на матку, что должно привести к снижению пролиферативной активности клеток матки и нормализации гистофизиологии матки.

Литературные данные показывают наличие нарушений в системе передачи митогенного сигнала в ядро клеток, опосредующиеся в матке эстрогеновыми рецепторами как причину возникновения и развития гиперплазий и неопластических трансформаций (Епифанова О.И., 1997). Поэтому, справедливо утверждение о том, что изменение экспрессии эстрогеновых рецепторов может влиять на морфологические строение матки.

Многочисленными исследованиями показано, что эстрогеновые гормоны липофильны, поэтому они легко проходят через липидную мембрану клеток матки и взаимодействуют со специфическими цитоплазматически-ми рецепторами — эстрогеновыми рецепторами, а и Р (Green S. et al., 1987; Parker M.G., 1993; Levin E. et al., 1993; Maaroufi Y. et al., 1994; Zhang D. et al., 2006), при этом происходит конформационная перестройка молекулы рецепторного белка, сопряженного с другими белками, диссоциация и освобождение от белков-ингибиторов, в частности, от белка теплового шока (hsp90), и образование димеров, обладающих повышенным сродством к ДНК. Образовавшейся димер гормоный-рецепторный комплекс связывается с регуляторными участками генов ДНК, которые носят название гор-мон-респонсивные элементы. Это короткие симметричные фрагменты ДНК, которые выполняют функции усилителей (энхансеров) транскрипции. Каждый гормон-рецепторный комплекс узнает собственный участок связывания и инициирует транскрипцию лишь одного контролируемого этим участком гена, что существенно важно для сохранения специфичности гормонального действия (Schwartz J.A. et al., 1993; Zhou Y. et al., 1993; Zhou X. et al., 1998; Anolik J.H. et al., 1995; Amso N.N. et al., 1994; Ben-Hur et al., 1995; Zhang D. et al., 2006; Knox A.J. et al., 2006). Связывание димеров рецептора с гормон-респонсивным элементом ведет к стимуляции, реже — к ингибированию, транскрипции соседних генов. Так, при действии гормона в течение нескольких часов происходит изменение уровня специфических мРНК различных белков клетки (Thampan R.V., 1985; Thampan R.V., 1988; Lutz W.H. et al., 1986; Komm B.S. et al., 1987; Brantley K.M. et al., 1990; Usuki S., 1992; Yamashita S., 1995; Huynh H. 1998; Carpenter K.D. et al., 2003). При действие эстрогенов на эстрогеновые рецепторы-а происходит увеличение уровня специфических мРНК (Wu W.X. et al., 2003). Следовательно, максимальное воздействие эстрогенов на генетический аппарат клеток матки будет наблюдаться при большой концентрации эстрогеновых рецепторов в цитозоле, и при снижению экспрессии эстрогеновых рецепторов, действие эстрогенов на матку будет снижаться. Поэтому течение многих биосинтетических реакций, интенсивность которых усиливается эстрогенами, тесно и прямо коррелирует с количеством рецепторов эстрогенов в клетках, с численностью рецепторов, связанных с хроматином, с концентрацией эстрогенов в крови. Вследствие этого, первоначально в ин-тактной матке экспрессия эстрогеновых рецепторов должна быть высокой, для того, чтобы обеспечить адекватный ответ на воздействие эстрогенов. При возникновении гиперпластических процессов в матке экспрессия эстрогеновых рецепторов напротив должна снижаться, для того, чтобы снизить влияние эстрогенов и предотвратить дальнейшее усиление эстроген-индуцированных морфологических изменений в матке. Таким образом, изменение морфологического строения маки может влиять на уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов.

Таким образом, изменение количества эстрогеновых рецепторов является специфическим эффектом данных гормонов в матке, а степень экспрессии эстрогеновых рецепторов-а четко отображает силу эстрогенновых влияний на матку.

Возможными путями реализации регуляторных эффектов эстрогенов, не связанных с изменением экспрессии эстрогеновых рецепторов, может быть изменение активности регуляторных клеточных путей и межклеточных взаимодействий под действием других гормонов, и изменение экспрессии рецепторов этих гормонов.

Было показано существование регуляторных механизмов пролиферации, апоптоза и морфогенеза в клетках матки не связанных с эстрогеновы-ми рецепторами, которые также могут изменять морфологическое строение матки (Gunin A.G., 1995; Bigsby R.M., 2002; Klotz D.M. et al., 2002). Известно также, что морфологические перестройки структур матки под действием эстрогенов связанны с изменением характера межклеточных взаимодействий. Эти изменения происходят в системе межклеточных связей, также регулируемых эстрогенами (Linden P.J. et al.,. 1995; Brackin M.N. et al.,. 2002; Bauersachs S. et al., 2005). Поэтому, возможно возникновение ситуации, когда в матке первоначально будет меняться морфологическое строение, и только потом изменится уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов.

Межклеточные связи клеток матки формируют различные белкикадгерины, десмоглеины, винкулины, танзины, талины, а, Р-интегрины, а, Р, у-катенины и др. Роль р-катенина в формировании эстроген-индуцированных морфологических изменений матки остается малоизученной.

Р-катенин многофункциональный белок, он входит в состав десмосом и катгеринового комплекса Е-кадгерин/р-катенин, играющего ключевую роль в формировании межклеточной адгезии, и поддержании тканевой архитектуры, а также Wnt регуляторного клеточного пути (Miller J.R. et al., 1999). Wnt путь передает сигналы из цитозоля клеток в ядро о клеточном окружении посредством р-катенина. Когда концентрация Р-катенина в клетках увеличивается, р-катенин входит в ядро и воздействует на экспрессию специфических генов влияющих на пролиферацию, апоптоз, адгезию клеток (Miller J.R., 2002). Увеличение индекса пролиферации клеток под воздействием р-катенина опосредуется накоплением в ядре клеток циклина D1 и изменением транскрипции (Shih Н.С. et al., 2003). Исследование Р-катенина и его значение в возникновении опухолей различных органов начали сравнительно недавно. У позвоночных Wnt путь регулирует морфогенез в эмбриональном периоде, функционируя так же и в постна-тальном периоде и периоде взрослого развития. Активность Wnt пути повышается при различных предопухолевых и опухолевых процессах, например в клетках аденоматозных полипов толстого кишечника, опухоли молочной железы и некоторых других опухолях (Morin P.J., 1999). Установлено, что после воздействия специфических сигналов на Wnt рецепторы, Р-катенин взаимодействует с Т-клеточным фактором (регулятором транскрипции), образует комплекс с молекулой ДНК, в результате чего меняется активность генов (Kawasoe Т. et al., 2000). В клетках рака кишечника, меланомы и первого типа эндометриального рака Р-катенин накапливаясь в ядре клеток образует комплекс с Т-клеточным фактором-4 (Tcf-4) и лимфоид активирующем фактором 1 (Lef-1) активирует генную экспрессию регуляторных белков, таких как циклин D1, которые стимулируют пролиферацию и ингибируют апоптоз (Narita F. et al., 2003). Накопление циклина D1 ассоциированное с увеличением содержания Р-катенина в ядре клеток наблюдается в 70% рака эндометрия со степенью дифферен-цировки G1, в 50% случаев рака эндометрия со степенью дифференциров-ки G2, и никогда не наблюдается в клетках рака эндометрия со степенью дифференцировки G3 (Narita F. et al., 2003). Кроме того, Wnt регуляторный клеточный путь контролирует ориентацию митозов, по отношению к ба-зальной мембране, у дрожжей, Drosophila и Caenorhabditis elegans и в тканях млекопитающих (Bowerman В. et al., 1999, Miller J.R. et al., 1999, Schlesinger A. et al., 1999, Jan Y.N. et al., 2000).

Показано, изменение активности Wnt/p-катенин регуляторного клеточного пути в течение менструального цикла и при формировании рака эндометрия (Miyamoto S. et al., 2000; Fukuhara K. et al., 2002; Kitajewski J. et al., 2000; Heikkila M. et al., 2001). На повышение активности Wnt/p-катенин регуляторного клеточного пути в течение менструального цикла указывает увеличение экспрессии Р-катенина в клетках матки и накопление его в ядрах клеток после воздействия эстрогенов в средней, поздней пролиферативной и ранней секреторной фазе менструального цикла. Снижение активности Wnt/p-катенин регуляторного клеточного пути наблюдается при снижении содержания (3-катенин в секреторной фазе (Sassoon D., 1999; Shih Н.С. et al., 2004). Причем наибольшее содержание Р-катенина в ядрах клеток отмечено при формировании гиперплазии и опухолей матки (Abu-Jawdeh G. et al., 1999; Nei H. et al., 1999). Помимо этого, обнаружено участие Wnt пути в эмбриональном развитии, постнатальном морфогенезе матки (Но C.K.u et al., 2004).

Однако, роль Р-катенина в канцерогенезе матки неясна до настоящего времени. Есть работы, в которых повышенный уровень Р-катенина связывают с формированием рака (Calvisi D.F. et al., 2001; Semba S. et al., 2001), повышением уровня пролиферации (Ito Т. et al., 2000; Kuhnen C. et al., 2000; Sellin J.H. et al., 2001), снижением апоптоза (Cadoret A. et al., 2001; Ling Y. et al., 2001). По другим данным Р-катенин проявляет противоопухолевую активность (Fujimoto J. et al., 1998; Miyamoto S. et al., 2000). Согласно другим исследованиям, высокое содержание Р-катенина в ядрах отмечается при формировании гиперплазии и опухолей матки (Abu-Jawdeh G. et al, 1999; Nei H. et al, 1999).

В норме Р-катенин связан с Е-кадгерином — представителем семейства трансмембранных гликопротеинов, осуществляющих построение межклеточных контактов адгезионного типа. При изменении гена Е-кадгерина (мутации, делеции, метилирование) происходит переключение функции Р-катенина: он перестает функционировать в качестве транскрипционного фактора, и взаимодействуя с актиновыми микрофиламентами участвует в регуляции реорганизации цитоскелета. Данный механизм влияния Р-катенина характерен для опухолей желудочно-кишечного тракта, рака молочной железы, яичника и ряда других новообразований.

В несвязанном с Е-кадгерином состоянии Р-катенин очень нестабилен. Ключевую роль в регуляции его времени жизни и транскрипционной активности играют опухолевые супрессоры АРС и аксин. АРС связывает одновременно и Р-катенин и аксин, в результате чего образуется сложный комплекс, к которому рекрутируется гликоген синтаза киназа-Зр. Гликоген синтаза киназа-ЗР регулирует уровень Р-катенина. Гликоген синтаза кина-за-ЗР фосфорилирует Р-катенин, результатом чего является разрушение Р-катенина убиквитином и снижении активности Wnt/p-катенин регулятор-ного клеточного пути (Miller J.R., 2002; Van Noort М. et al., 2002). Фосфо-рилируя определенные сериновые остатки Р-катенина, гликоген синтаза киназа-ЗР индуцирует связывание его с Е2-убиквитин-лигазой. Убиквити-нированный Р-катенин направляется в протеосомы, где происходит его деградация. При стрессах, происходит активация р53 и включается дополнительный механизм деградации Р-катенина. В этом случае происходит повышение экспрессии белка Siahl, который рекрутирует другой тип комплексов Е2-убиквитин-лигазы, также и к нефосфорилированному по N-концу Р-катенину. Таким образом, достигается, по-видимому, более эффективная деградация несвязанного с кадгеринами Р-катенина.

В научной литературе широко освещено участие мутантного Р~ катенина в инициации и прогрессии опухолей матки. Показано, что мутации в экзоне 3 гена Р-катенина с вовлечением 33, 34, 37, 41, и 45 кодонов выявляются в клетках атипически измененного эндометрия и эндометрио-идного рака. Такие мутации Р-катенина приводят к уменьшению содержания Р-катенина клеточных мембран и увеличению содержания ядерного Ркатенина, не воздействуя на уровень экспрессии мРНК (3-катенина в клетке в целом, влияя тем самым только на внутриклеточное распределение (3-катенина. Указанные выше мутации часто встречаются при низкодиффе-ренцированном раке эндометрия, и раке эндометрия с метастазами в лимфатические узлы (Saegusa М. et al., 2001). При исследовании аденокарци-пом матки также часто выявляются мутации в гене (3-катенина (Lax S.F. et al., 2004). Кроме того, было показано отличие общей экспрессии генов в эндометриоидной аденокарциноме с дефектным (3-катенином в сравнении с общей экспрессей генов в эндометриоидной аденокарциноме без такового дефекта. (Shedden К.А. et al., 2005). В эндометриоидной карциноме без дефекта в гене (3-катенина уровень экспрессии цитоплазматического (3-катенина снижается, по сравнению с его содержанием в нормальных железах пролиферативной фазы, причем содержание в цитоплазме (3-катенина в опухолях имеет тенденцию к понижению при понижении степени диффе-ренцировки высокодифференцированной опухоли.

Уровень экспрессии (3-катенина в ядре клеток эпителия желез в поздней пролиферативной и ранней секреторной фазах такой же, как и в высо-кодифференцированных опухолях. Повышение содержания (3-катенина в ядре ассоциировано с понижением содержания в цитоплазме Е-кадгерина, что может приводить к изменению межклеточных взаимодействий и повышению агрессивности опухоли (Shih Н.С. et al., 2004). В клетках новообразований часто реализуется и другой путь повышения транскрипционной активности (3-катенина, связанный с нарушениями работы систем его деградации. Так, в клетках опухолей толстой кишки, печени, простаты часто обнаруживаются либо мутации (3-катенина в участках, которые фосфо-рилируются гликоген синтазой киназой-3(3 и взаимодействуют с убикви-тин-лигазой, либо мутации опухолевого супрессора АРС, нарушающие взаимодействие гликоген синтазы киназы-3(3 с (3-катенином. Либо, значительно реже, мутации аксина, делающих невозможным его связывание с АРС или гликоген синтазой киназой-Зр. При этом мутации АРС блокируют работу обоих систем деградации Р-катенина, тогда как указанные выше мутации самого Р-катенина или аксина нарушают только одну из систем деградации. В результате всех этих событий Р-катенин активирует транскрипцию гена циклина D и протоонкогена MYC, что вызывает стимуляцию клеточной пролиферации.

Поэтому, оценка содержание Р-катенина и гликоген синтазы киназы-ЗР являются одним из достоверных индикаторов степени изменения межклеточных взаимодействий и влияния эстрогенов на Wnt/p-катенин регу-ляторный клеточный путь, в клетках матки при действии эстрогенов на матку.

Эстрогеновые гормоны воздействуют на ткани матки не изолированно, а совместно с другими гормонами и биологически активными веществами, являющимися одними из основных компонентов в сложной системе регуляции процессов роста и пролиферации тканей матки, при отсутствии надлежащего слежения в которой может развиться неконтролируемый рост тканей матки, что в последующем приведет к развитию злокачественных опухолей. Эти сведения подтверждаются многочисленными лабораторными исследованиями и клиническими данными (Аминева Х.К. и др., 1974; Li S. et al., 1994; Leeuwen F.E. et al., 1994; Yoshida A. et al., 1994; Yoshida A. et al., 2000; Bucher J.R. et al., 1995). Поэтому, как в организме животных, так и в организме человека, возникновение эстрогенов-индуцированных предопухолевых и опухолевых состояний в матке связанно с нарушением в работе систем регулирующих действие эстрогенов в матке.

В литературном обзоре было описано множество факторов изменяющих силу эстрогенового влияния на матку, многие из которых снижают выраженность этроген-индуцированных изменений матки, препятствуя формированию гиперплазий и рака матки. Одним из таких регуляторов эс-трогенового влияния в матке являются глюкокортикоидные гормоны.

Исследование совместного воздействия эстрогенов и глюкокортикоидов на ткани матки возможно как в организме животных, так и в культуре тканей матке. Однако, исследование действия глюкокортикоидов на изменение морфологии матки, возможно только в живом организме, так как in vitro будет отсутствовать нормальное соотношение и взаимосвязь между клетками матки.

Поэтому целью нашего исследования было изучение эстроген индуцированного морфогенеза в матке мышей в сравнении с морфологическими изменениями тканей матки, возникающего при совместном длительном воздействии глюкокортикоидых гормонов и эстрогенов, а также сравнительный анализ длительного влияния экзогенных и эндогенных глюкокортикоидов на эстроген-индуцированный морфогенез в матке мышей.

Необходимым условием проведения опытов и получения достоверных результатов являлось поддержание неизменных, одинаковых концентраций эстрогеновых и глюкокортикоидных гормонов в организме животных. Для этого у всех мышей должны отсутствовать циклические колебания уровней гормонов яичников — эстрогенов и гестагенов, наблюдаемых в течение эстрального цикла. Исходя из данного условия, для проведения опытов возможным было использование половозрелых овариэктомированных или неполовозрелых не овариэктомированных самок мышей, которым будет вводиться стандартная доза эстрогенов, по общепринятой схеме (Bigsby R.M., 1993; Shelley М.Е. et al., 1994). Однако, у препубертатных не овариэктомированных животных еще не полностью сформированы рецеп-торные системы, способные воспринимать гормональные сигналы, поэтому морфологические изменения матки половозрелых и неполовозрелых мышей на половые гормоны могут существенно различаться (Остин К. и др., 1987; Terada N. et al, 1985; Fertuck K.C. et al, 2003). Кроме того, если проводить продолжительные во времени опыты на неполовозрелых животных вполне возможно начало циклической деятельности яичников у исходно пубертатных животных. Указанных недостатков лишена экспериментальная модель в которой используются половозрелые овариэктомиро-ванные мыши.

Поэтому все исследования проводили на половозрелых овариэктоми-рованных мышах. Следует отметить, что овариэктомированные животные используются во многих исследованиях и являются классической моделью для изучения действия половых гормонов в тканях-мишенях (Bigsby R. M, 1993; Nephew К.Р. et al, 2000).

Овариэктомированные животные брали в опыты через 1 неделю после билатеральной овариэктомии. Данный промежуток времени выдерживался с двумя целями. Во-первых, несмотря на то, что гормоны удаленных яичников — эстрогены и гестагены, после удаления яичников продолжают циркулировать в крови животных около 36 часов, для обратного развития морфологических эффектов этих гормонов в матки, и формирования однотипных морфологических изменений характерных для кастрации, необходим больший промежуток времени. С другой стороны, оперативное вмешательство неизбежно вызовет стрессовую реакцию, в результате которой повысится уровень эндогенных глюкокортикостероидов, которые также будут воздействовать на матку. Несомненно, последствие влияния стресса на матку и повышенный уровень эндогенных глюкокортикоидов должны быть ликвидированы до начала опытов. В подтверждении правильности наших рассуждений добавим, что после выполнения овариэктомий и других подобных операций, схожий промежуток времени выдерживается многими исследователями (Лагучев С. С, 1970; Панкова Т. Г. и др, 1985; Kerr М.В. et al, 1991; Rajkumar К, 1993; Das S.K. et al, 1994; Suburo A.M. et al, 1995).

Для создания эстрогенового фона животным вводился внутримышечно масляный раствор эстрадиола дипропионата, каждую неделю однократно, в дозе 2 мкг на 100 г массы тела животного. Эстрадиол дипропионат, по сравнению с другими женскими половыми гормонами — эстриолом и эстроном, обладает более выраженной эстрогенной активностью и имеет большую продолжительность действия — до 1 недели, что дает нам возможность использовать минимальное количество инъекций и минимальный объем вводимого вещества. Все эти факты обусловили предпочтение в выборе именно этого эстрогена для проведения экспериментов (Остин К. и др., 1987; Теппермен Д. и др., 1989). Выбор дозы эстрадиола в 10 микрограмм, и кратности введения был сделан на основании анализа многочисленных исследований посвященных изучению физиологического действия эстрогенов на матку, в которых применяли сходные дозировки эстрадиола, поэтому выбор данной дозировки и частоты инъекций является вполне оправданным (Епифанова О.И., 1965; Лагучев С. С., 1970; Schirar A. et al., 1980; Mukku V.R. et al., 1982; Rajkumar K., 1993; Bigsby R.M. et al., 1994; Bani G. et al., 1995).

Изъятие и исследования матки производили через 30 суток после первой и через три дня после последней инъекции эстрадиола, который вводился 1 раз в неделю, внутримышечно. Эти сроки были выбраны не случайно. Как было сказано выше, после введения эстрогенов начинает возрастать количество митозов во всех тканях матки. Максимальных значений пролиферативная активность клеток матки достигает в сроки с 24 до 36 часов (Епифанова О.И., 1965; Лагучев С. С., 1970; Лагучев С. С., 1975), однако морфологические проявления действия эстрогенов в матке за этот период времени не развиваются. Морфологические перестройки структур матки регистрируются только при длительном воздействии эстрогенов, причем наиболее выраженные гистологические изменения структур матки наблюдаются с 30 по 90 дни воздействия эстрогенов (Gunin A.G. et al.,.

1996; Deligdisch L., 2000; Silverberg S.G., 2000). Данные многих других исследователей также подтверждают эти сведения (Локтионов А.С. и др., 1981; Lavia L.A. et al., 1984; Terada N. et al., 1985; Conti C.J. et al., 1981; Galand P. et al., 1992; Cicatiello L. et al., 1993; Bhattacharyya N. et al., 1994; Bigsby R.M. et al., 1994; Finn C.A. et al., 1995; Gunin A.G. et al., 2001; Gunin A.G. et al., 2002; Gunin A.G. et al., 2005; Gunin A.G. et al., 2004; Gunin A.G. et al., 2005). Поэтому, наиболее оптимальным сроком, для исследования пролиферации и морфологических изменений матки в ответ на воздействия эстрогенов, был выбран промежуток времени в 30 дней со дня первой инъекцией, причем последнюю инъекцию животные получали за три дня до изъятия матки. При использовании данной экспериментальной модели в матке формируются типичные, описанные в многочисленных исследованиях, морфологические изменения характерные для длительного эстроге-нового влияния (Niwa К. et al., 1998; Couse J.F. et al., 1999; Deligdisch L., 2000).

В проведенных экспериментах для моделирования воздействия экзогенных глюкокортикоидов на матку использовали введение глюкокорти-коида дексаметазона. Глюкокортикоидные гормоны животные получали в питьевой воде, то есть per os, в дозе 2 миллиграмм/литр, при этом введении доза дексаметазона составила 0,035 миллиграмм на 100 грамм массы тела в день. Характерной особенностью химического строения дексаметазона является наличие в его молекуле атома фтора. Выбор именно этого экзогенного глюкокортикоида был обусловлен несколькими причинами: во-первых, по действию на организм он близок к другим глюкокортикосте-роидам, но более активен, и не обладает минералокортикоидным действием, во-вторых, дексаметазон вызывает сильное угнетение гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, что исключает возможность нежелательного воздействия эндогенных глюкокортикоидов. Кроме того, несомненным достоинством является путь введения дексаметазона per os, и отсутствие необходимости в ежедневных инъекциях дексаметазона, что снижает нежелательное стрессирование опытных животных. Использованная доза дексаметазона применяется при изучении действия глюкокортикоидов на матку различными исследователями (Gunin A.G. et al., 2000; Gunin A.G. et al., 2000; Rhen T. et al., 2003).

Исследовать сочетанное длительное воздействие эндогенных глюкокортикоидов и эстрогенов на матку возможно, применив одну из двух различных экспериментальных моделей. Для проведения опытов с первой экспериментальной моделью животным необходимо вводить эстрогены и кортиколиберин. Кортиколиберин регулирует эндокринные функции надпочечников опосредованно повышением секреции АКТГ гипофизом, который увеличивает секрецию эндогенных глюкокортикоидов надпочечниками. Однако ввиду относительно короткого времени его полураспада — менее 60 мин, концентрация кортиколиберина в организме животных будет изменяться с течением времени в широких пределах, что нежелательно при проведении опытов. Использование второй экспериментальной модели основано на введении эстрогенов и АКТГ. АКТГ непосредственно^ воздействует на надпочечники. Его действие заключается в активации секреции глюкокортикоидов пучковой зоны надпочечников и опосредованно рецепторами АКТГ, при этом в организме животных формируется хроническое гиперкортикостероидное состояние, со стабильным уровнем эндогенных глюкокортикоидов в крови мышей. Следует отметить, что и в клинической практике широко используются препараты АКТГ для повышения секреции глюкокортикостероидов надпочечниками (Agha A. et al., 20 065- Zwermann О. et al., 2005). Использование искусственно синтезированного АКТГ — си-нактен депо (АКТГ1−24), имеет ряд преимуществ, по сравнению с естественным АКТГ1−39. Вопервых, действие синактен депо (АКТГ1 24) на увеличение секреции глюкокортикоидов надпочечниками четко документировано, и применение данного вещества уже стало общепринятым, как для создания эндогенной гиперкортикомии в экспериментальных условиях, так и для лечения гипокортикоидных состояний (Zwermann О. et al., 2005; Agha A. et al., 2006). Во-вторых, эффекты фрагмента 1−24 полностью идентичны эффектам эндогенного АКТГ по биологической активности, и отличаются от эндогенного АКТГ только более продолжительным действием в организме животных, что является несомненным достоинством при его применении. В-третьих, АКТГ1−24 практически полностью лишен иммунологической активности, обусловленной С-концевым фрагментом 25−33 «хвоста» цепи АКТГ, поэтому сохраняя количественно и качественно гормональную активность нативного АКТГ, синактен депо не вызывает иммунных ответов при введении его человеку и животным.

Наряду с положительными свойствами введение синактен депо (АКТГ1″ 24) имеет ряд недостатков: АКТГ взаимодействует с другими пептидными гормонами (пролактином, вазопрессином, TRH, VIP, опиоид-ными пептидами и др.), а также с медиаторными системами моноаминов гипоталамуса, ускоряет выработку небольших количеств андрогенов и эстрогенов, повышает чувствительность клубочковой зоны коры надпочечника к веществам, активирующим выработку альдостеронав жировой ткани стимулирует расщепление жиров, поглощение аминокислот и глюкозы мышечной тканью, высвобождение инсулина из |3-клеток поджелудочной железы, вызывая гипогликемию. По этому поводу можно сказать, что изменения секреции данных веществ крайне невелико, и их эффект, по сравнению с эффектами повышенных концентраций эндогенных глюкокортикоидов, на матку весьма и весьма незначительно. И, кроме того, введение кортикостерона неизбежно приведет к уменьшению секреции АКТГ, и, следовательно, снижению его взаимодействия с указанными выше веществами. Поэтому, абсолютно любое вмешательство, затрагивающее секрецию хотя бы одного гормона, неизбежно приведет к реагированию механизмов обратных связей и, в конце концов — к изменению профиля многих ки. Уменьшение массы матки под действием глюкокортикоидов также может быть связанно с тем, что глюкокортикостероиды понижают проницаемость сосудистой стенки во всем организме, и в матке в частностиблагодаря этому снижаются индуцированное эстрогенами накопление воды тканями матки и, разумеется, масса матки (Campbell P. S. 1978; Stewart et al, 1983). Отсутствие изменений массы матки в контрольных группах без воздействия эстрадиола, вне зависимости от воздействия дексаметазона, указывает на то, что эффект глюкокортикоидов на изменение массы матки связан с эстрогенами. Полученные сведения воздействия эстрадиола на изменение массы матки сходны с литературными данными (Gunin A.G. et al, 2001; Skarda J. 2002), поэтому примененное воздействие можно считать эффективным. Таким образом, возрастание массы матки мышей является закономерным результатом длительного воздействия эстрогеновых гормонов.

В ходе исследования матки овариоэктомированных мышей, подвергшихся сочетанному длительному воздействию эстрадиола и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона, было обнаружено существенное изменение морфологического строения матки по сравнению с маткой овариоэктомированных животных, которым вводился только эстрадиол.

В проведенных экспериментах, в условиях длительного воздействия эстрогенов и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона, было обнаружено снижение выявляемое&tradeгиперплазии эндометрия, что выражалось в значительном снижении количества патологических форм желез, а именно конгломератов железа также желез с патологическими типом эпителия, таких как многослойный и псевдомногослойный эпителий с атипическими клетками, а также гиперплазий эндометрия, и в частности атипической гиперплазии эндометрия, которая расценивается как предраковый процесс с низким уровнем дифференцировки клеток, по сравнению с простой гиперплазией (Deligdisch L, 2000, Silverberg S. G, 2000). Однако воздействие эстрадиола и дексаметазона увеличивало количество кистозно-расширенных желез.

Таким образом, глюкокортикоиды тормозят развитие эстроген индуцированных изменений структур матки, в том числе и атипической гиперплазии. Механизмами влияния глюкокортикоидов на морфогенез в матке, возможно, является изменение пролиферации, дифференцировки и апопто-за клеток (King K.L. et al., 1998), а также межклеточных связей клеток матки, что может быть следствием изменения рецепторного аппарата и активности регуляторных клеточных путей клеток матки. Показано, что при воздействии эстрогенов повышается количество перпендикулярных митозов, при воздействии же глюкокориткоидов происходит снижение количества перпендикулярных митозовв свою очередь перпендикулярные митозы должны приводить к удлинению эпителиальной выстилки желез, что должно приводить к увеличению диаметра железы и формированию кис-тозно-расширенной железы с однослойным эпителием, а параллельные митозы должны приводить к формированию многослойного эпителия или конгломерата желез (Gunin A.G. et al., 2001). Возможным механизмом такого изменения поляризации деления клеток эпителия матки является изменение активности Wnt регуляторного клеточного пути (Goldstein В. et al., 2006; Ciruna В. et al., 2006). Следовательно, изменение морфогенеза также возможно происходит за счет блокады эстроген-индуцированного изменения ориентации митозов по отношению к базальной мембране, что вероятно опосредуется Wnt регуляторным клеточным путем. Таким образом, выявленные морфологические изменения следует расценивать как снижение реализации морфологических эффектов эстрадиола в матке под влиянием дексаметазона, а комплекс обнаруженных изменений можно рассматривать как новые, ранее неизвестные морфологические изменений, вызванные длительным воздействием эстрогенов и глюкокортикоидов, которые существенно отличаются от морфологических изменений, вызванных только эстрадиолом.

Рассмотрим изменение показателей пролиферативной активности клеток матки в условиях длительного влияния глюкокортикостероидов на фоне воздействия эстрогенов. В опытной группе животных, получавших глюкокортикоиды, наблюдали уменьшение митотических и BrdU-индексов во всех структурах матки в сравнении с данными животных контрольной группы, которым вводился только эстрадиол. Митотические и BrdU-индексы дают нам представление о количества клеток в Ми S-фазах клеточного цикла соответственно. При уменьшении количества клеток, входящих в S-фазу клеточного цикла снижается число клеток, проходящих М-фазу клеточного цикла. Следовательно, снижение интенсивности проли-ферции в клетках матки опытных мышей может быть связанно с удлинением периода Gl-фазы клеточного цикла, или выходом клеток из G1- в G0-фазу клеточного цикла, или блокадой перехода клеток из G1 в S фазы клеточного цикла. Известно, эстрогены влияют на прогрессию клеточного цикла, стимулируя переход клеток из G1 в S фазу. Регуляция прохождения G1 в S фазу клеточного цикла контролируется эстрогенами посредством независимого увеличения экспрессии с-тус и циклин D1. Результатом такого увеличение активности регуляторных клеточных путей с-тус и циклин D1 является активация циклинового комплекса E-Cdk2. Активность комплекс циклина E-Cdk2 зависит от ингибитора циклин зависимой кина-зы p21(WAFl/CIPl). Эстрогены ингибируют синтез p21(WAFl/CIPl) и ги-перфосфолирируют р130, который активирует циклиновый комплекс Е-Cdk2. Поэтому неактивные комплексы циклина E-Cdk2-p21 переходят в активные комплексы циклина E-Cdk2-pl30 (Doisneau-Sixou S.F. et al., 2003; Prall O.W. et al., 1998). Увеличение длительности Gl-фазы наблюдается и при кратковременном воздействии глюкокортикоидов (King K.L. et al., 1998). Следовательно, эффект глюкокортикоидов на пролиферацию может напрямую опосредоваться изменением экспрессии с-тус, циклина D1 и р21, а также изменением фосфолирирования р 130. Однако, данное утверждение требует дальнейшего исследования. Сообразно с полученными данными, многими исследователями показано снижение уровня эстроген-индуцированной пролиферации во всех структурах матки при кратковременном воздействии глюкокортикоидов (Markaverich В.М. et al., 1981; Rabin D.S. et al., 1990; Sahlin L., 1995 Gunin A.G. et al., 1999). Поэтому изменение уровня эстроген-индуцированной пролиферации при длительном воздействии глюкокортикоидов, вероятно, опосредуется теми же регуля-торными путями, которые задействуются при их кратковременном воздействии. Таким образом, в настоящем исследовании показано снижение показателей эстроген-индуцированной митотической активности в тканях матки при сочетанном длительном воздействии эстрадиола и экзогенных глюкокортикоидов в сравнении с контрольными животными, которым вводился только эстрадиол. Следовательно, характеризуя обнаруженные изменения, можно заключить, что экзогенные глюкокортикоиды способны снижать вызванное эстрогенами увеличение уровня пролиферации во всех структурах матки.

Остановимся на данных изменения уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов-а, как одного из возможных механизмов модификации влияния этрогенов в матке глюкокортикоидами. В проведенных экспериментах при введении эстрадиола на фоне воздействия глюкокортикоидов уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в поверхностном эпителии, эпителии желез, клетках стромы и миометрии были значительно выше, чем у группы контрольных животных, получавших только эстрадиол. Уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов-а при длительном воздействии глюкокортикоидов без эстрогенов не отличался от данных мышей без воздействия. Следовательно, действие глюкокортикоидов на экспрессию эстрогеновых рецепторов в матке опосредуется эстрогенами, что не является строго доказанным. Общепринятым является представление о том, что одним из главных физиологических регуляторов экспрессии эстрогеновых рецепторов-а внутри клеток-мишеней является уровень циркулирующих свободных эсторогеновых гормонов, при этом длительное воздействие эстрогенов происходит снижение экспрессии эстрогеновых рецепторов (Но С.К. et al., 1999). Однако, в проведенных нами опытах при одинаковых концентрациях эстрогеновых гормонов в крови животных уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов в матке опытных и контрольных животных существенно различался. Значит, изменение экспрессии эстрогеновых рецепторов происходит под воздействием глюкокортикоидов. Уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов в тканях определяется их балансом между синтезом и распадом, поэтому увеличение экспрессии эстрогеновых рецепторов под действием глюкокортикоидов может быть связанно с снижением их распада или увеличения их синтеза (Nephew К.Р. et al., 2000; Ing N.H. et al., 1999). Как было сказано выше при этом длительном воздействии эстрогенов наблюдается снижение экспрессии эстрогеновых рецепторов и развитие гиперпластичеких процессов, и, напротив, при повышенном уровне экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в матке не наблюдается развитие гиперпластических процессов (Martin J.D. et al., 1983; Но С. К. et al., 1999). В настоящем исследовании прослеживали аналогичную ситуацию: у животных, получавших эстрадиол и глюкокортикоиды, на фоне повышенной экспрессии эстрогеновых рецепторов всегда наблюдали нормальное морфологическое строение матки, а в матке мышей, получавших только эстрадиол, при низком содержании эстрогеновых рецепторов диагностировали гиперпластические процессы. В опытах Zamorano Р. и Rhen Т. показали, что кратковременное при воздействии дексаметазона на фоне введения эстрадиола не происходило изменение вызванного эстрогенами снижения уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов в матке (Zamorano P. et al., 1992; Rhen Т. et al., 2003). Значит, глюкокортикоиды не способны непосредственно влиять на снижение уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов в матке при воздействии эстрогеновых рецепторов, однако в наших опытах прослеживается четкая обратнопропорциональная зависимость: при низком уровне экспрессии эстрогеновых рецепторов развивались гиперпластические процессы, при высокиом уровне эстрогеновых рецепторов наблюдали нормальное строение матки. Следовательно, при действии глюкокортикоидов в матке на фоне воздействия эстрогенов первично изменяется морфологическое строение, и в ответ на эти изменении меняется уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов. Однако, механизмы влияния изменения морфологического строения матки на экспрессию эстрогеновых рецепторов остаются неизвестными. Возможно, одним из путей изменения уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов глюкокортикоидами в матке является изменения активности Wnt-регуляторного клеточного пути, передающего сигналы из цитозоля клеток о клеточном окружении посредством Р-катенина (Miller J.R. et al, 1999; Mericskay M. et al, 2004).

Глюкокортикоиды реализуют свое действие в матке через глюкокор-тикоидные рецепторы, присутствие которых в матке доказано многочисленными исследованиями (Panko W.B. et al, 1981; Izawa M. et al, 1984; Atkinson S. et al, 1988; Ho C.K. et al, 1999). При введении эстрадиола на фоне воздействия дексаметазона наблюдали снижение уровня экспрессии глюкокортикоидных рецепторов в клетках эпителия эндометрия, желез, строме и миоцитах матки, в сравнении с действием только эстрогенов. Снижение уровня рецепторов может быть связанно с повышением их деградации или снижением их синтеза (Schmidt T.J. et al, 1994; Bamberger C.M. et al, 1996). Таким образом, глюкокортикоиды способны понижать уровень собственных рецепторов в матке. Снижение содержания глюкокортикоидных рецепторов в клетках матки неизбежно приведет к снижению силы влияния глюкокортикоидов на матку. При введении глюкокортикоидов снижение экспрессии рецепторов глюкокортикоидов наблюдается и в других органах (Bamberger C.M. et al, 1996; Ray D, 1996). To есть, данный процесс также можно рассматривать как процесс ауторегуляции глюкокортикоид-ного влияния, значение которого сводится к снижению силы действия глюкокортикоидного. Как было показано в нашем исследовании, глюко-кортикоды повышают экспрессию эстрогеновых рецепторов, и, следовательно, силу действия эстрогенов. Однако, одновременно с этим происходит снижение экспрессии глюкокортикоидных рецепторов, а значит, понижается влияние глюкокортикоидов на матку. Биологический смысл этого явления остается не совсем ясным. Данные результаты указывают на сильное ингибирующие влияние глюкокортикоидов на эстрогеновые влияния в матке. Тем не менее, при действии глюкокортикоидов в отсутствии эстрогенов не происходило изменения уровня экспрессии глюкокортикоидных рецепторов. Это указывает на то, что действие глюкокортикоидов опосредованно регуляторным путем эстрогеновых рецепторов. Поэтому действие экзогенных глюкокортикоидов на матку может усиливаться при повышении влияния эстрогенов на матку, в данной эксперементальной модели это происходит за счет увеличения экспрессии эстрогеновых рецепторов. Более того, эстрогеновые, прогестероновые и глюкокортикостеро-идные рецепторы могут конкурировать за одни и те же общие транскрипционные факторы (Beato М., 1991; Hadcock J.R. et al., 1991; Vedeckis W.V. et al., 1992), а значит, и взаимодействовать на одинаковые регуляторные последовательности молекулы ДНК, однако интенсивность такого воздействия будет различной. Так, было показано, что глюкокортикоидные гормоны, опосредованно глюкокортикоидными рецепторами, подавляют экспрессию фактора транскрипции c-fos/c-jun (Bamberger С.М. et al., 1996) — этот транскрипционный фактор участвует в регуляции активности многих факторов роста, эстрогены оказывают на него как прямое, так и непрямое стимулирующее влияние (Umayahara Y. et al., 1994).

Кроме того, глюкокортикоиды изменяют секрецию других гормонов, оказывающих влияние на репродуктивную систему. Они подавляют секрецию гонадотропин-рилизинг-гормона, лютеинизирующего гормона, биосинтез эстрадиола и прогестерона, активность эстрадиола (Chrousos G.P. et al., 1998). Наряду с этим, эстрадиол стимулирует синтез кортикотропин-рилизинг-гормона и секрецию кортизолсвязывающего глобулина (Chrousos G.P. et al., 1998). Данные факты указывают на существование других возможных механизмов реализации эффектов экзогенных глюкокортикоидов — таких, как изменение внутриклеточных регуляторных путей, в том числе Wnt-регуляторного пути.

Результаты данного исследования впервые показали, что экспрессия глюкокортикоидных рецепторов в матке претерпевает существенные изменения под влиянием глюкокортикоидных гормонов на фоне действия эстрогенов, по сравнению с уровнем глюкокортикоидных рецепторов в матке мышей, которым вводился только эстрадиол. Таким образом, наблюдаемое изменение уровня экспрессии глюкокортикоидных рецепторов можно рассматривать как самостоятельный механизм изменения эстроген-индуцированного гистогенеза.

Известно, что длительное при воздействии эстрогенов происходит увеличение экспрессии прогестероновых рецепторов (Но С.К. et al., 1999). В настоящем исследовании было выявлено увеличение уровня экспрессии прогестероновых рецепторов во всех структурах матки в условиях длительного воздействия эстрогенов и глюкокортикоидов по сравнению с данными контрольных животных, получавших только эстрадиол. Причем необходимо отметить, что наибольшее увеличение уровня экспрессии прогестероновых рецепторов наблюдали в эпителии желез. Повышение содержания прогестероновых рецепторов вероятно обусловлено либо их повышенным синтезом, либо сниженным распадом. Действие прогестерона напротив снижает уровнь экспрессии рецепторов прогестерона, что может быть связано как с увеличением скорости деградации рецепторов, так и с резким снижением их синтеза (Nardulli A.M. et al., 1988; Nardulli A.M. et al., 1988). На прогестероновые рецепторы в матке может воздействовать не только прогестерон, являющийся главным регулятором действия эстрогенов в матке, но и с намного меньшей специфичностью — другие гормоны, например глюкокортикоиды и эстрогены (Atkinson S. et al., 1988). Однако, было показано, что экзогенный глюкокортикоид дексаметазон способен взаимодействовать только с глюкокортикоидными рецепторами и не способен взаимодействовать с прогестероновыми рецепторами (Issar М. et al., 2006; Davies S. et al., 2006). Также в организме опытных мышей отсутствует прогестерон, так как животные овариоэктомированны, и, в виду сильного угнетения продукции эндогенных глюкокортикоидов надпочечниками, практически отсутствует эндогенный глюкокортикоид кортикостерон, способный взаимодействовать с прогестероновыми рецепторами. Следовательно, повышение экспрессии прогестероновых рецепторов под воздействием дексаметазона можно рассматривать как один из механизмов реализации регуляторного действия экзогенных глюкокортикоидов в матке, который у овариоэктомированных животных этой опытной группы не реализуется.

Под воздействием эстрогенов происходит снижение синтеза и снижение содержания Р-катенина в клетках матки в сравнении с животными без воздействия эстрогенов. Идентичные данные выявлены и в нашем исследовании (Fujimoto J. et al., 1996; Fujimoto J. et al., 1998). При этом увеличение времени воздействия эстрогенов и нарастание развития морфологических изменений с нормального строения эндометрия до атипической гиперплазии происходит постепенное, ступенчатое снижение содержания Р-катенина клеточных мембран, а содержание Р-катенина в ядре напротив увеличивается (Fujimoto J. et al., 1996; Fujimoto J. et al., 1998). Изменение локализации Р-катенина в клетках вызывает нарушение межклеточных контактов и морфологических изменений клеток, происходит накопление Р-катенина в ядрах и повышение его транскрипционной активности, в результате чего стимулируется размножение клеток и увеличивается их способность к инвазии.

У мышей опытной группы животных, получавших дексаметазон на фоне воздействия эстрадиола, содержание Р-катенина и гликоген синтаза киназа-ЗР повышалось в эпителии эндометрия и желез. При этом воздействии в матке выявляли кистозно расширенные железы, хотя и не была выявлена атипическая гиперплазии, поэтому возможно имеется связь между повышенным уровнем Р-катенина и гликоген синтаза киназа-ЗР и развитием простой гиперплазии эндометрия с кистозно расширенными железами. Увеличение содержания Р-катенина и гликоген синтаза киназа-ЗР может быть связано с повышенным синтезом Р-катенина, или со снижением ферментативной активности гликоген синтазы киназы-ЗР, или с тем, что Р-катенин находится в связанном состоянии и не доступен для разрушения гликоген синтазой киназой Зр. Как показали ниши исследования, гликоген синтазу киназу-ЗР выявляли в клетках эпителия желез в виде пояска в апикальной части клеток, там, где располагются адгезионные контакты, в формировании которых участвует Р-катенин, в то время как Р-катенин в клетках эпителия эндометрия и желез был распределен равномерно по цитоплазме. Следовательно гликоген синтаза киназа воздействует преимущественно на Р-катенин адгезионных контактов, такое воздействие должно приводить к изменению межклеточных взаимодействий. Равномерное распределение Р-катенина в цитоплазме клеток, как в опытных, так и контрольных группах, может быть связано с тем, что эстрогеновые гормоны посредством эстрогеновых рецепторов увеличивают экспрессию Wnt4 и Wnt5a генов Wnt-семейства и frizzled-2 из семейства Wnt рецепторов, благодаря этому стабилизируется уровень внутриклеточного Р-катенина (Нои X. et al., 2004). Воздействие на эстрогеновые, глюкокортикоидные и про-гестероновые рецепторы моделирует активность Wnt пути. (Mulholland.

D.J. et al, 2005). Глюкокортикоиды ингибируют фосфолирирование гликоген синтазы киназы-Зр Ser (9) и тем самым увеличивают ее активность, в результате чего понижается концентрация Р-катенина, коактиватора с-Мус, что препятствует прохождению G (l)/S фазы клеточного цикла (Smith.

E. et al, 2002). Вероятно, глюкокортикоиды снижают активность Wnt-пути также путем увеличения продукции dickkopf-1 (Ohnaka К. et al, 2005). dickkopf является внеклеточным белком, регулирующим активность Wnt-пути, он взаимодействует с внеклеточным доменом рецептора Wnt-пути — LRP, блокируя его для активирующих Wnt-путь лигандов (Мао J. et al, 2001; Nusse R, 2001; Bafico A. et al, 2001; Semenov M.V. et al, 2001). Глюкокортикоиды способны понижать активность Wnt-пути и другим путем. Было показано, что в культуре клеток остеобластов глюкокортикоид дек-саметазон повышал активность гликоген синтазы киназы-ЗР, ингибировал транскрипционную активность LEF/TCF, активировал гистоновую диаце-тилазу HDAC1, которая также ингибирует транскрипционную активность LEF/TCF и уменьшал фосфолирирование протеин киназы B/Akt-Ser (473). Таким образом, ингибирование глюкокортикоидами PI3К/Akt/GSK3 р/р~ catenin/LEF и стимуляция HDAC1 должно ингибировать активность Wnt клеточного пути (Smith Е. et al, 2005) В культуре клеток эпителия рака молочной железы при введении дексаметазона происходило увеличение содержания Р-катенина в мембране клеток снижение его содержание в ядре клеток. (Guan Y. et al, 2004). Воздействие на прогестероновые рецепторы вызывает увеличение содержание Р-катенина в ядрах клеток рака эндометрия и атипического эндометрия, однако при этом происходит снижение экспрессии прогестероновых рецепторов (Saegusa М. et al, 2003). Кроме того, воздействие на прогестероновые рецепторы увеличивает экспрессию мРНК р-катенина в клетка стромы, что также может приводить к изменению уровня пролиферации (Chen G.T. et al, 1998). Таким образом, несмотря на увеличение содержания Р-катенина и Wnt рецепторов в клетках матки активность регуляторного Wnt-пути, вероятно, снижена как за счет повышения уровня гликогенсинтазы киназы-ЗР и стабилизации распределения внутриклеточного Р-катенина, так и за счет других факторов, таких как увеличение продукции dickkopf-1, ингибирование транскрипционной активности LEF/TCF, активации гистоновой диацетилазы HDAC1 и снижение фосфолирирования протеин киназы B/Akt-Ser (473). Возможно поэтому, несмотря на увеличение Р-катенина, в клетках матки не происходит формирование гиперплазий.

Итак, экзогенный глюкокортикоид дексаметазон снижал выявляе-мость гиперплазий эндометрия, что выражалось в снижении желез с патологической формой, таких как конгломераты желез и желез с патологическим типом эпителия, а также атипической гиперплазии эндометрия, которая считается предраковым состоянием. Однако, при воздействии дексаметазона происходило увеличение количества кистозно-расширенных желез. Очевидно, основным механизмом изменения морфологии матки, наблюдаемое и в настоящем исследовании, является ингибирующие влияние глюкокортикоидов на пролиферацию в структурах матки (Gunin A.G. et al., 1998; Gunin A.G. et al., 1999; Gunin A.G. et al., 2000; Gunin A.G. et al., 2001; King K.L. et al., 1998). Однако, необходимо учитывать существование других механизмов влияния глюкокортикоидов на изменение морфологии матки: таких как активация апоптоза и изменение дифференцировки клеток, а также изменение ориентации митозов по отношению к базальной мембране (Gunin A.G. et al., 2001; King K.L. et al., 1998).

Полученные данные изменения уровня эстрогеновых рецепторов, глюкокортикоидных рецепторов, прогестероновых рецепторов, Р-катенина и гликоген синтазы киназы-ЗР убедительно доказывают их участие в изменении морфологического строения и индекса пролиферации в матке при длительном воздействии глюкокортикоидов и эстрогенов в сравнении с действием только эстрогенов.

До проведения настоящего исследования было известно только то, что при действии эстрогеновых гормонов происходит изменение рецепторного аппарата матки, а степень выраженности морфологических изменений и пролиферации в матке коррелирует с уровнем экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов (Но С.К. et al., 1999; Garcia-Palencia P. et al., 2006; Varayoud J. et al.,. 2005). Однако, участие рецепторов других гормонов в формировании гиперплазий матки было малоизученным, также неизученным оставалось влияние совместного воздействия эстрогенов и глюкокортикостероидов на уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов-ос, глюкокортикоидных рецепторов и прогестероновых рецепторов в матке. В наших исследованиях впервые получены данные увеличения уровня экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов, снижение экспрессии глюкокортикоидных рецепторов при совместном воздействии глюкокортикостероидов и эстрогенов.

В проведенном исследовании впервые показана связь между развитием гиперплазий в матке и снижением экспрессии эстрогеновых рецепторов при действии эстрогенов, снижением выраженности морфологических изменений и увеличением экспрессии эстрогеновых рецепторов при совместном действии дексаметазона и эстрогенов. Анализируя литературные данные, мы пришли к выводу о том, что дексаметазон не способен непосредственно изменять уровень эстрогеновых рецепторов, а изменение экспрессии рецепторов эстрогенов зависит от морфологического строения матки и возможно опосредуется Wnt-регуляторным клеточным путем (Но С.К. et al., 1999). Кроме того, впервые показано, что при действии дексаметазона увеличивалась экспрессия прогестероновых рецепторов. Однако, в организме овариоэктомированных животных, получавших дексаметазон, нет биологически активных веществ, способных сколь либо существенно взаимодействовать с прогестероновыми рецепторами и влиять на морфологическое строение маткипоэтому действие экзогенного глюкокорти-коида дексаметазона опосредуется главным образом глюкокортикоидными рецепторами (Atkinson S. et al., 1988, Но С. К. et al., 1999). Таким образом, одним из механизмов регуляции экзогенными глюкокортикоидами выраженности морфологических проявлений и пролиферации при воздействии эстрогенов является изменение уровня экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов. Также показано, что действие экзогенного глюко-кортикоида дексаметазона связано с действием эстрогенов и может усиливаться при усилении влияния эстрогенов. Помимо этого, в экспериментах прослеживалась связь между увеличением экспрессии прогестероновых рецепторов в эпителии желез и формированием кисозно-расширеных желез с развитием простой гиперплазии эндометрия, что по видимому, связа-ной с тем, что дексаметазон не способен воздействовать на механизм регуляции, связанный с прогестероновыми рецепторами. Эта мысль подтверждается отсутствием эстроген-индуцированной кистозно-расширенных желез и как следствие простой гиперплазии при действии АКТГ, когда за-действуется механизм регуляции связанный с прогестероновыми рецепторами.

В проведенных исследованиях уровень экспрессии глюкокортикоидных рецепторов увеличивался при воздействии эстрогенов, при этом наблюдали возрастание выраженности эстроген-индуцированных морфологических изменений и пролиферации в тканях матки. Напротив, уровень экспрессии глюкокортикоидных рецепторов снижался при воздействии глюкокортикоидов и эстрогенов, при этом снижается выраженность эстроген-индуцированных морфологических проявлений. Общеизвестно, что сила действия гормонов зависит от количества рецепторов на клетках мишенях, поэтому сила действия глюкокортикоидов на матку должна снижаться при снижении уровня экспрессии глюкокортикоидных рецепторов.

Следовательно, при снижении выраженности эстроген-индуцированных морфологических изменений и пролиферации наблюдается снижении экспрессии глюкокортикоидных рецепторов во всех структурах матки и снижение силы влияния глюкокортикоидов. Поэтому, снижение экспрессии глюкокортикоидных рецепторов можно рассматривать как процесс ауторе-гуляции, в результате которого снижается влияние глюкокортикоидов на матку с нормальным морфологическим строением (Bamberger С.М. et al., 1996; Ray D, 1996).

Воздействии дексаметазана на глюкокортикоидные рецепторы на фоне воздействия эстрогенов на эстрогеновые рецепторы в клетках матки повышало уровень (3-катенина и гликоген синтазы киназы-3(3 в эпителии эндометрия железоднако, при этом понижалась активность Wnt регулятор-ного клеточного пути. В свою очередь Wnt путь изменяет активность специфических генов и ориентацию митозов и может влиять на уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов. Высокое содержание (3-катенина в ядрах отмечается при формировании гиперплазий и опухолей матки (Abu-Jawdeh G. et al., 1999; Nei H. et al., 1999) — однако, в наших исследованиях выявляемость гиперплазий матки снижается. Это может быть связано с понижением активности Wnt пути и стабилизацией распределения внутриклеточного Р-катенина в цитоплазме, опосредованное воздействием на глюкокортикоидные рецепторы. Также возможно, что р-катенин оказывает влияние на развитие только определенных типов опухолей матки. Кроме того, преимущественное распределение гликоген синтазы киназы-ЗР в цитоплазме клеток эпителия матки в виде пояска как раз там, где располагаются адгезионные контакты, в построении которых участвует р-катенин, должно приводить к изменению межклеточных взаимодействий, что возможно и приводит к развитию кистозно-расширенных желез и простой гиперплазии эндоментрия. Таким образом, результатом повышения уровня.

Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр и понижения активности регуляторного Wnt-пути являлось изменение уровня пролиферативной активности клеток и гистоархитектоники матки.

Таким образом, в настоящем исследовании впервые выявлено торможение эстрадиол-индуцированных процессов в матке под воздействием экзогенного глюкокортикоида дексаметазона, выражающееся в снижении индекса пролиферации в эпителии эндометрия, желез, клетках стромы и миоцитах и выявляемое&tradeнеатипической комплексной и атипических ги-перплазий эндометрия, а также увеличение выявляемое&tradeпростой неатипической гиперплазии эндометрия. Впервые выявлены ранее неизвестные механизмы реализации эффектов экзогенных глюкокортикоидов в матке, такие как увеличение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов, снижение экспрессии глюкокортикоидных рецепторов и увеличение содержание Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр.

1.3. ИЗМЕНЕНИЯ В МАТКЕ В УСЛОВИЯХ ДЛИТЕЛЬНОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭСТРАДИОЛА И АКТГ.

Исследование роли эндогенных глюкокортикостероидов в изменении эстроген-индуцированной пролиферации и морфологического строения матки производили на второй экспериментальной модели, которая предусматривала внутримышечное введение АКТГ и эстрадиола дипропионата.

В проведенных опытах использовался АКТГ пролонгированного действия — синактен депо (АКТГ1″ 24). Известно, что АКТГ является главным регулятором секреции глюкокортикоидов надпочечниками. Его действие заключается в активации секреции глюкокортикоидов надпочечниками, при этом в организме животных формируется хроническое гиперкортико-стероидное состояние.

При введении АКТГ происходит уменьшение массы тимуса и увеличение массы надпочечников. Увеличение массы надпочечников является следствием прямого влияния АКТГ. Это действие опосредуется через стимуляцию цАМФ-зависимых протеинкиназ, которые, осуществляя фосфо-рилирование белков рибосом, увеличивают синтез белка, необходимого для активирования РНК-полимеразы. Стимулируется синтез ДНК, РНК и новых белков, необходимых для образования новых клеток в надпочечниках. Этим механизмом АКТГ влияет на увеличение массы надпочечников, в основном за счет увеличения массы сетчатой и пучковой зон. Исследования in vivo показали, что для роста клеток коры надпочечников необходимы низкие концентрации АКТГ, но даже небольшой избыток этого гормона подавляет клеточную пролиферацию клеток коры надпочечников (Zwermann О. et al., 2005).

Поэтому, использованная в опытах доза АКТГ по своему действию на надпочечники физиологична и не была завышенной, и вместе с тем не являлась и заниженной.

Уменьшение массы тимуса является следствием его ускоренной инволюции, происходящей под воздействием повышенных концентраций эндогенных кортикостероидов (Чеботарев В.Ф. и др., 1979).

Таким образом, данные массы надпочечников и тимуса животных, получавших АКТГ, полученные в данном исследовании, аналогичны литературным данным.

При введении эстрадиола и АКТГ происходило уменьшение массы матки по сравнению с таковыми данными контрольных мышей, получавших только эстрадиол, что может являться следствием уменьшения количества или размеров клеток матки. В контрольной группе животных, которым вводился только АКТГ без эстрадиола не происходило изменения массы маткиданный факт указывает на тесную связь действия АКТГ и эстрадиола в матке. Полученные сведения являются впервые выявленным эффектом АКТГ на матку в организме животных и схожи с данными влияния экзогенных глюкокортикоидов на массу матки. Поэтому, снижение массы матки, опосредованно в основном влиянием глюкокортикоидов, при действии которых масса матки также снижается.

Воздействие АКТГ на фоне введения эстрадиола предотвращало формирование эстроген-индуцированных гиперплазий матки, в том числе атипической и неатипической простой гиперплазии. Более того, в матке мышей опытной группы, получавших АКТГ, все железы были нормального строения. Таким образом, АКТГ тормозит развитие эстрогеновых влияний на матку, что проявляется снижением выявляемое&tradeпредраковых форм гиперплазии эндометрия. Длительное введение экзогенных глюкокортикоидов, также приводило к предотвращению формирования атипической гиперплазии, но в отдельных случаях наблюдали формирование простой не атипической гиперплагии эндометрия, что не наблюдали при введении АКТГ (Gunin A.G. et al., 2001). Следовательно, действие АКТГ на эстро-ген-индуцируемый морфогенез в матке отличается от действия, производимым глюкокортикоидами, и является впервые выявленным, ранее не известным эффектом АКТГ на изменение хода эстрогенового морфологиги-ческого процесса в матке мышей. Снижение эстрадиол-индуцируемых изменений морфологии матки, наблюдаемое под влиянием АКТГ, может быть обусловлено различными путями.

Введение

АКТГ снижало индекс пролиферации и количество и BrdU-положительных клеток в поверхностном эпителии, эпителии желез и мио-цитах и увеличивало эти параметры в клетках стромы. Данная ситуация также отличается от той, которая наблюдается при введении экзогенных глюкокортикоидов, где снижение уровня пролиферации и BrdU-индексов наблюдали во всех структурах матки (Gunin A.G. et al., 2001). При этом действие АКТГ на уровень пролиферации схоже с эффектами прогестерона, при введении которого пролиферация также понижается в клетках эпителия эндометрия и железах и увеличивается в клетках стромы и миоцитах (Martin L. et al., 1973; Tong W. et al., 1999). Полученные данные показывают, что эффект АКТГ на уровень пролиферации клеток матки зависит главным образом от эффектов воздействия на прогестероновые рецепторы. С прогестероновыми рецепторами может взаимодействовать эндогенный глюкокортикоид кортикостерон, который является основным глюкокорти-коидом у мышей и проявляет минералои глюкокортикоидную активность (Panko W.B. et al., 1981; Handa R.J. et al., 1994), а также способен взаимодействовать как с глюкокортикоидными, так и с прогестероновыми рецепторами (Panko W.B. et al., 1981; Handa R.J. et al., 1994). Кроме того, предотвращение формирования вызываемых эстрадиолом гиперплазий матки при действии АКТГ также подобно эффекту совместного действия прогестерона и эстрогенов на морфологию матки.

Изменения индекса пролиферации и морфологического строения матки под действием адренокортикотропного гормона было зарегистрировано только у мышей, получавших эстрадиол, но не у контрольных групп, которым вводили оливковое масло вместо эстрадиола и где эффекты данного препарата отсутствовали. Следовательно, в случае действия АКТГ и эстрогенов на матку имеет место ситуация, аналогичная той, которая наблюдается при совместном воздействии дексаметазона и эстрадиола, а именно: действие АКТГ связано с влиянием эстрадиола. Наиболее вероятный путь, посредством которого реализуются эффекты АКТГ в матке опосредуется кортикотропином, и менее возможно непосредственное действие АКТГ на ткани матки. В свою очередь воздействие кортикотропина приводит к нарушению звеньев в механизме действия эстрогенов в матке, что и проявляется торможением развития их морфологических эффектов пролиферации.

Уровень экспрессии эстрогеновых рецепторов-а в опытных группах также снижался. Аналогичная ситуация наблюдается при введении некоторых глюкокортикоидов (Atkinson S. et al., 1988; Zamorano P. et al., 1992). Но данная ситуация отличается от той, что возникает при введении дексаметазона. Показано, что эндогенный глюкокортикоид кортикостерон способен взаимодействовать также на прогестероновые рецепторы, в свою очередь, при воздействии на прогестероновые рецепторы происходит снижение экспрессии эстрогеновых рецепторов-а (Panko W.B. et al., 1981; Handa R.J. et al, 1994; Wathes D.C. et al., 1996; Ho C.K. et al, 1999). Следовательно, эти данные не противоречат нашим предыдущим утверждениям о том, что при низком уровне эстрогеновых рецепторов наблюдается развитие гиперпластических процессов в матки, в силу того, что при воздействии эстрогенов и АКТГ снижение экспрессии эстрогеновых рецепторов связано не с изменением морфологического строения, а с мощным влиянием кортикостерона на прогестероновые рецепторы. Однако точные механизмы влияния АКТГ на изменение уровня эстогеновых рецепторов остаются неясными.

Введение

АКТГ понижало уровень экспрессии глюкокортикоидных рецепторов во всех структурах матки. Такой же эффект наблюдался в других органах при введении глюкокортикоидов (Bamberger С.М. et al., 1996; Ray D., 1996). Снижение концентрации рецепторов глюкокортикоидов может быть связано с повышением их деградации или снижением их синтеза (Schmidt T.J. et al., 1994; Bamberger С.М. et al., 1996).

Уровень экспрессии прогестероновых рецепторов повышался в эпителии эндометрия, эпителии желез, клетках стромы и миоцитах матки у животных опытной группы которым вводился эстрадиол и АКТГ по сравнению с группами мышей, получавших только эстрадиол. Известно, что с прогестероновыми рецепторы может взаимодействовать не только прогестерон, но и с меньшей специфичностью кортикостерон (Panko W.B. et al., 1981; Handa R.J. et al., 1994). Поэтому, повышение экспрессии прогестероновых рецепторов может снижать влияние эстрогенов в условиях гиперпродукции кортикостерона надпочечниками, даже в отсутствии продукции прогестерона яичникамичто имело место в проведенных опытах у животных, получавших АКТГ. Следовательно, понижение уровня пролиферации и снижение выявляемое&tradeатипической гиперплазии эндометрия при действии эндогенных глюкокортикоидов также опосредуется прогестероно-выми рецепторами. При воздействии прогестерона происходит снижение содержания циклинов D1 и D3 в ядрах эпителиальных клеток, в результате чего, клетки не делятся в ответ на воздействие эстрогеноводновременно с этими событиями в ядрах клеток стромы под воздействием прогестерона накапливаются циклины D1 и D3, содержание которых в ядре коррелирует с количеством клеток, вступивших в S фазу (Rider V. et al., 2003). Увеличивается количество синхронно делящихся клеток стромыоднако, для возвращения клеток стромы в клеточный цикл необходимы эстрогены. (Rider V. et al., 1994). Таким образом, повышение экспрессии прогестероновых рецепторов под воздействием глюкокортикоидов можно рассматривать как один из механизмов реализации регуляторного действия глюкокортикоидов в матке. р-катенин — ключевой компонент, участвующий в формировании адгезионных контактов клеток и Wnt регуляторного пути (Miller J.R. et al., 1999). Уровень р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр в опытных группах снижался в эпителии эндометрия и желез. Снижение содержания р-катенина в этом случае может быть не связано с повышением его распада под действием гликоген синтазы киназы-ЗР, так как ее уровень тоже снижался, а с понижением биосинтеза р-катенина. Весьма вероятно, что механизм снижения синтеза р-катенина, наблюдаемый при действии АКТГ и при стрессах аналогичны. При стрессах происходит активация белка р53 и задействуется дополнительный механизм деградации Р-катенина, связанный с повышением экспрессии белка Siahl. Снижение содержания гликоген синтазы киназы-Зр можно рассматривать как компенсаторную реакцию на снижение содержания р-катенина. При введении экзогенных глюкокортикоидов происходит увеличение уровня р-катенина и гликоген синтазы киназы-ЗР, при этом воздействии в матке не формировалась атипическая гиперплазия, хотя и выявляли кистозно-расширенные железы. В отличие от эффекта экзогенных глюкокортикоидов, при введение АКТГ не происходит формирование кистозно-расширенных желез. Следовательно, различия в действии экзогенных глюкокортикоидов и АКТГ на формирование гиперплазии, вызываемой эстрогенами, могут быть связаны с изменением содержания Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр. Возможно, изменениям в содержании Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр способствуют эффекты этих гормонов. В данном исследовании уровень Р-катенина в эпителии эндометрия и желез понижался, и понижалась выяв-ляемость предраковых изменений в матке мышей опытной группыно имеются исследования, в которых указывается противоопухолевый эффект Р-катенина (Fujimoto J. et al, 1998; Miyamoto S. et al, 2000). Однако, при действии экзогенных глюкокортикоидов содержание Р-катенина в клетках повышается, а выявляемость гиперплазий матки снижается. По-видимому, в формировании гиперплазий матки играет роль не столько изменение концентрации Р-катенина в клетках матки, сколько снижение активности Wnt-клеточного пути — снижении активности Wnt-клеточного препятствует формированию гиперплазий эндометрия.

Кроме того, имеются различия в действии экзогенных и эндогенных глюкокортикоидов на распределение гликоген синтазы киназы-Зр в клетках эпителия эндометрия матки. Так, при действии эндогенных глюкокортикоидов гликоген синтаза киназа-Зр распределялась в цитоплазме клеток эпителия желез матки равномерно, и не наблюдали формирование гиперплазий эндометрия, а при действии экзогенных глюкокортикоидов гликоген синтаза киназа-ЗР в цитоплазме клеток эпителия матки распределяется в виде пояскапри этом наблюдали развитие кистозно-расширенных желез и простой гиперплазии эндометрия. Кроме того, кортикостерон взаимодействуя с прогестероновыми рецепторами приводил к ингибированию вызываемой эстрогенами повышение активности фосфоинозитид 3-киназы, активирующей фосфокиназу В/АКТ, препятствующей фосфолирированию гликоген синтазы киназы-3 (3, кроме того, ингибируется фосфолирирование pRB, что приводит к изменению перераспределения циклина D1 из ядра клеток в цитоплазму и ингибированию пролиферации (Chen et al., 2005).

Известно, что в некоторых клетках матки, а именно — децидуальных клетках и клетках стромы, синтезируется белок проопиомеланокортин (Gravanis A. et al., 1999; Fadalti М. et al., 2000), который распадается на (3-эндорфин и а-меланоцитостимулирующий гормон, АКТГ и действуют по типу паракринной регуляции. Однако, Clifton V.L. и Gravanis А. не выявили АКТГ в беременной и не беременной матке человека в течение секреторной и пролиферативной фаз (Clifton V.L. et al., 1998; Gravanis A. et al., 1999). Таким образом, АКТГ, образующийся в матке из белка-предшественника проопиомеланокортина, иммуногистохимическим методом не выявляется. Этому явлению может быть дано два объяснения: первое — АКТГ в матке разрушается сразу после образования и не успевает участвовать в регуляции физиологических процессов матки, что наиболее вероятновторое — АКТГ влияет на гистофизиологические процессы в матке, поэтому сразу после образования АКТГ соединяется со своими рецепторами в матке, в результате чего антигенные детерминанты АКТГ становятся недоступными для антител. Эта мысль подтверждается данными других исследований, в которых показано изменение распределения иейтрофилов в эндометрии матки без изменения распределения лимфоцитов и макрофагов под влиянием АКТГ (Kaeoket К. et al., 2002). Florio P. выявил увеличение секреции АКТГ в клетках плаценты под действием урокортина — нейропептида биологически родственного кортикоторопин-релизинг фактору, который совместно с простагландинами и ативином, А может стимулировать сократительную активность миометрия (Florio P. et al., 2004). Таким образом, современные научные данные не исключают возможности непосредственного влияния АКТГ на морфогенез в матке.

Итак, известно, что имеются различия в фармакодинамике экзогенного глюкокортикоида дексаметазона и эндогенных глюкокортикоидов, таких как кортикостерон (Issar М. et al., 2006; Davies S. et al., 2006). Эндогенный глюкокортикоид дексаметазон, действуя на фоне введения эстрадиола, воздействовал только на глюкокортикоидные рецепторы матки, в результате чего снижается экспрессия глюкокортикоидных рецепторов, увеличивалась экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов, повышался уровень экспрессии (3-катенина и гликоген синтазы киназы-3(3 в эпителии эндометрия и желез по сравнению с данными у контрольных мышей, получавших только эстрадиол. Несмотря на повышение уровня Р-катенина в клетках матки активность Wnt регуляторного клеточного пути при воздействии глюкокортикоидов снижается. Итогом этих событий, являлось снижение митотической активности клеток эпителия эндометрия, желез, клеток стромы и миоцитов и изменение морфологического строения матки мышей, что выражалось в снижении выявляемое&tradeатипической гиперплазии эндометрия и увеличении частоты случаев формирования простой неатипической гиперплазии эндометрия, в сравнении с показателями контрольных мышей, которым вводился только эстрадиол. Кроме того, возможны другие пути снижения эстрогенового влияния на маткутак, было показано снижение концентрации эстрадиола в тканях матки под воздействием глюкокортикостероидов (Atkinson S. etal., 1988).

Различия в действии совместного действия эстрогенов и экзогенных или эндогенных глюкокортикоидов могут быть связаны с их действием на различные рецепторы матки. Эффекты экзогенного глюкокортикоида дексаметазона на эстроген-идуцированные изменения в матке специфичны и опосредуются его действием только на глюкокортикоидные рецепторы (Atkinson S. et al., 1988, Но C.K. et al., 1999). Основной эндогенный глюкокортикоид мышей кортикостерон, вырабатываемый в надпочечниках в ответ на введение АКТГ, воздействует в матке на глюкокортикоидные и ми-нералокортикоидные рецепторыоднако с меньшей специфичностью способен взаимодействовать с прогестероновыми рецепторами (Panko W.B. et al., 1981; Handa R.J. et al., 1994). Кроме того, различия в действии экзогенных и эндогенных глюкокортикоидов на матку могут быть связаны с различной аффиностью экзогенных и эндогенных глкжокортикодов к различным типам глюкокортикоидных рецепторов. Установлено наличие 2 типов рецепторов к глюкокортикоидам. Рецепторы 1-го типа имеют наибольшую аффинность к кортикостерону и далее аффинность снижается к альдосте-рону и еще ниже к дексаметазону, тогда как рецепторы 2-го типа имеют наибольшую аффинность к дексаметазону, снижаясь к кортикостерону и еще меньше к альдостерону.

При действии АКТГ в матке опытных животных снижался уровень экспрессии глюкокортикоидных и эстрогеновых рецепторов-а, и увеличивалась экспрессия прогестероновых рецепторов во всех структурах матки, причем наибольшее повышение уровня экспрессии прогестероновых рецепторов происходило в эпителии эндометрия. Также наблюдали снижение уровеня экспрессии р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр в эпителии эндометрия и желез в опытных группах. Опосредованно указанным выше измененем уровня экспрессии эстрогеновых рецепторов-а, глюкокортикоидных, прогестероновых рецепторов, р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр эндогенные глюкокортикоиды происходит снижение количества митозов и BrdU-положительных клеток в клетках эндометрия, эпителии желез и миоцитах и увеличению этих параметров в клетках стромы, а также торможению развития эстрогеновых влияний на морфологию матку, что проявляется снижением выявляемое&tradeвсех форм гиперплазии эндометрия.

Таким образом, действие эндогенных глюкокортикоидов на изменение экспрессии глюкокортикоидных и прогестероновых рецепторов сходно с действием экзогенных глюкокортикоидов. Однако, имеются различия в действии эндогенных и экзогенных глюкокортикоидов на эстроген-индуцированную пролиферацию и морфологию и изменение экспрессии эстрогеновых рецепторов-а, Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр. Так, введение АКТГ снижало индекс пролиферации и BrdU-индексов в поверхностном эпителии эндометрия, эпителии желез и миоцитах и увеличивало эти параметры в клетках стромы. Данная ситуация отличается от той, которая наблюдается при введении экзогенных глюкокортикоидов, где снижение индекса пролиферации и BrdU-индексов наблюдали во всех структурах матки. При этом действие АКТГ на пролиферацию похоже на эффекты прогестерона, при введении которого индекс пролиферации также понижается в клетках эпителия эндометрия и железах и увеличивается в клетках стромы и миоцитах (Martin L. et al., 1973; Tong W. et al., 1999). АКТГ тормозит развитие эстрогеновых влияний на матку, что проявляется снижением выявляемое&tradeпредраковых форм гиперплазии эндометриятогда как, длительное введение экзогенных глюкокортикоидов предотвращает формирование атипичной гиперплазии, но в отдельных случаях происходит формирование простой неатипической гиперплазии эндометрия, что не наблюдается при введении АКТГ. Следовательно, действие АКТГ на эс-троген-индуцируемый морфогенез в матке отличается от действия, производимого глюкокортикоидами. По-видимому, эффекты эндогенных глюкокортикоидов в матке опосредуются и суммируются из эффектов их действия на глюкокортикоидные и прогестероновые рецепторы. Это наглядно подтверждают результаты настоящего исследования.

Введение

дексаметазона, в отличие от введения АКТГ не предотвращало развития простой неатипической гиперплазии. Данное явление может быть объяснено следующим образом: при воздействии дексаметазона на глюкокортикоидные рецепторы происходит повышение уровня экспрессии прогестероновых рецепторов в эпителии желез матки, причем более значительное по сравнению с другими структурами матки. Повышение экспрессии прогестероновых рецепторов происходило в эпителии желез, однако дексаметазон не способен действовать на прогестеронове рецепторы и, вследствие этого, предотвращать формирование эстроген-индуцированной простой неатипической гиперплазии эндометрия. Снижение экспрессии эстрогеновых рецепторов при действии АКТГ также связано с воздействием кортикостеро-на на прогестероновые рецепторы. Кроме того на развитие кистозно расширенных желез и как следствие этогопростой неатипической гиперплазии эндоментрия матки оказывает влияние повышение экспрессии и изменение распределения в клетках эпителия матки Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр в цитоплазме клеток и как следствие этого изменение межклеточных взаимодействий клеток эпителия желез матки. Следовательно, предотвращение формирования простой неатипической гиперплазии при действии эндогенных глюкокортикоидов связано с их действием на прогестероновые рецепторы эпителия желез, в отличие от действия экзогенного глюкокортикоида дексаметазона, который не способен взаимодействовать с прогестероновыми рецепторами и предотвращать развитие простой неатипической гиперплазии эндометрия, а также связанно с изменением уровня экспрессии и распределения в клетках эпителия матки Р-катенина и гликоген синтазы киназы-Зр.

Проведенная работа впервые выявила ранее неизвестные морфологические изменения, возникающие в матке при сочетанном влиянии эстрадиола и экзогенного глюкокортикоида дексаметазона. Также было впервые исследовано действие АКТГ, вызывающего увеличение концентрации эндогенных глюкокортикоидов в организме животных на морфологию матки. Впервые наглядно показаны различия в действии эндогенных и экзогенных глюкокортикоидов на матку, исследованы возможные пути, реализации действия глюкокортикоидов в матке. Эстрогеновые гормоны помимо своих основных, физиологических эффектов в органах репродукции, обладают выраженной способностью индуцировать развитие в них злокачественных новообразований и поэтому изучение любых механизмов, регулирующих действие эстрогенов в тканях-мишенях уже само по себе важно. Поэтому, данные этой работы по эффектам АКТГ — снижение интенсивности пролиферации и снижение выявляемое&tradeпредраковых форм гиперплазии эндометрия, могут быть использованы при разработке программ профилактики предраковых процессах в матке. Кроме того, данная работа позволяет разрабатывать новые рекомендации в применении различных глюкокортикостероидных препаратов в зависимости от морфо-функционального состояния эндометрия. Помимо этого, довольно часто встречаются состояния, при которых в организме повышен уровень эндогенных глюкокортикоидов, такие как эндокринные заболевания (например, синдром Иценко-Кушинга), хронические стрессы, индуцирующие серьезные сдвиги в секреции глюкокортикостероидов, введение извне АКТГвведение экзогенных глюкокортикоидов, наблюдаемое при использовании глюкокортикоидов в качестве медикаментозных препаратов при различных заболеваниях. Поэтому важно знать, как влияют глюкокортикоиды на изменение эстроген-индуцированных морфологических изменений матки. Результатами данной научной работы явились новые теоретические знания о формировании морфологических изменений, возникающих в матке при совместном действии эстрогенов и глюкокортикоидных гормонов, а также возникающих при этом изменений рецепторного аппарата матки и активности регуляторных клеточных путей.