Исследование влияний обестатина и его фрагментов на функциональные характеристики крыс

Регуляция пищевого поведения всегда привлекала внимание физиологов и клиницистов, однако в последнее время это направление исследований приобрело особую актуальность в связи с обостряющейся проблемой ожирения. По последним данным Всемирной организации здравоохранения более миллиарда человек на планете имеют лишний вес, эта проблема актуальна даже для стран, в которых немалая часть населения постоянно голодает. В промышленно развитых странах ожирение уже является значительным и серьезным аспектом общественного здоровья. Ожирение сопровождается нарушениями в сердечнососудистой, дыхательной, эндокринной и других системах организма, создает дополнительную нагрузку на опорно-двигательный аппарат, способствуя развитию артрозов, нарушает свертываемость крови и метаболизм холестерина. Часто ожирение сопровождается гипотрофией мышц и гипотонией кишечника. Также на фоне повышенной массы тела нарушается эмоциональный фон, развиваются депрессивные состояния. Все это снижает качество жизни и укорачивает ее продолжительность.

В связи с этим понятен тот интерес, который вызывают последние данные, касающиеся регуляции пищевого поведения и позволяющие прогнозировать новые подходы к решению проблемы нарушения веса.

В нормализации массы тела большое внимание уделяется фармакологической коррекции веса. Однако известно, что многие лекарственные препараты, применяемые с этой целью, оказывают серьезные побочные эффекты и не оправдывают ожидания. Поэтому поиск новых средств, оказывающих заметное анорексигенное действие без нежелательных побочных эффектов, является актуальным. В последнее время в литературе появляется все больше сведений об эндогенных пептидных регуляторах аппетита. Среди них в особое внимание уделяется обестатину («obedere» — поглощать и «statin» — подавлять). Обестатин состоит из 23 аминокисиотных остатков, является продуктом посттрансляционного процессинга препрогрелина и обнаруживается во многих органах и тканях (Aydin et al 2008). В ряде исследований было показано анорексигенное влияние обестатина, приводящее к снижению массы тела, потребления еды и воды (Zhang et al., 2005, Carlini et al., 2007). Анализ содержания обестатина в плазме крови в различных физиологических состояниях показал, что у людей, страдающих ожирением, уровень обестатина существенно ниже, а у больных анорексией — значимо выше, чем у здоровых пациентов (Huda et al., 2008, Zamrazilova et al., 2008). Снижение содержания обестатина связывают с ожирением не только у взрослых, но и у детей (Zou et al., 2009).

Особый интерес представляет изучение эффектов фрагментов обестатина. Наиболее изученными фрагментами являются 1−13 и 11−23. По одним данным наибольшим анорексигенным эффектом обладает фрагмент 1−13 (Nagaraj et al., 2009) по другим — 11−23. (Subasinghage et al., 2010). Анализа действий других фрагментов обестатина практически не проводилось. Кроме того, в литературе не встречается сравнений эффектов различных способов введения обестатина. Практически отсутствуют данные о влиянии пептида на другие физиологические и биохимические показатели кроме массы тела и системы аппетита. В связи с этим очевидна острая необходимость фундаментального изучения физиологических и биохимических процессов, не только лежащих в основе анорексигенного действия обестатина, но и сопровождающих его.

В связи с этим нами была поставлена цель: исследовать влияния обестатина и его фрагментов на функциональные характеристики у самцов крыс. Нами были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Исследовать влияния различных способов однократного введения обестатина на массу тела, потребление корма и воды, поведенческую активность, порог болевой чувствительности, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс;

2. Исследовать влияния однократного введения различных фрагментов обестатина на массу тела, потребление корма и воды, поведенческую активность, порог болевой чувствительности, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс;

3. Оценить эффекты хронического введения обестатина и его фрагментов на массу тела, потребление корма и воды, поведенческую активность, порог болевой чувствительности, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс;

4. Исследовать действие хронического введения обестатина и его фрагментов на модели ожирения на массу тела, потребление корма и воды, поведенческую активность, порог болевой чувствительности, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс.

Научная новизна работы.

В представленном исследовании впервые был показан комплекс плейотропных эффектов обестатина и его фрагментов, не изученных ранее. Комплексное исследование различных способов введения обестатина выявило, что наиболее выраженными эффектами обладает пептид при интраназальном введении. Впервые было показано действие пептида на уровень болевой чувствительности и баланс вегетативной регуляции внутренних органов.

Также впервые было изучено действие таких фрагментов обестатина, как 1 -4, 5−10, 10−15, 16−23 на комплекс физиологических и биохимических показателей. Впервые была предпринята попытка сопоставления эффектов обестатина и его фрагментов после хронического введения не только в норме, но и на фоне патологии, а именно при повышенной массе тела.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Результаты работы имеют как теоретическое, так и практическое значение. Полученные нами данные расширяют представление об эндогенных пептидах регуляторах аппетита не только как о веществах, влияющих на массу тела, но и как об эндогенных регуляторных факторах, действующих на организм в целом.

Полученные результаты могут помочь в поиске путей профилактики и коррекции патологических состояний, связанных с повышенной массой тела и нарушениями аппетита.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Обестатин в дозе 300 нмоль/кг in vitro и in vivo не влиял на осморезистентность эритроцитов, но оказывал ингибирующий эффект на агрегацию тромбоцитов.

2. При однократном интраназальном введении обестатин вызывал выраженные анорексигенные эффекты, сопровождавшиеся изменением поведенческой активности, порога болевой чувствительности и вегетативного баланса.

3. Концевые фрагменты обестатина (1−4, 16−23) обладали сходным действием с целым пептидом на массу тела, потребление пищи и воды и увеличивали уровень тревожности. Все исследуемые фрагменты увеличивали порог болевой чувствительности.

4. При хроническом введении только фрагмент обестатина 1−4 сохранял анорексигенный эффект, обестатин и фрагмент 16−23 вызывали увеличение массы тела.

5. Из исследуемых веществ только фрагмент обестатина 1−4 во всех описанных случаях и при различных функциональных состояниях организма обладал анорексигенным эффектом, как правило, выражавшемся в снижении потреблении пищи и питья и уменьшении массы тела.

Апробация материалов диссертации Результаты диссертационной работы были представлены на конференции «Физиологическая активность регуляторных пептидов», посвященной 85-летию со дня рождения академика РАМН И. П. Ашмарина (Россия, Москва, 2010), V Всероссийской конференции (с международным участием) «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Россия, Москва, 2011), XIX Международной научной конференцияи студентов, аспирантов и молодых ученых JIOMOHOCOB-2012 (Россия, Москва, 2012, 2 работы), IV.

Международной научной конференции «Химия, структура и функция биомолекул», (Белоруссия, Минск, 2012, 2 работы), XX Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых ЛОМОНОСОВ-2013 (Россия, Москва, 2013, 3 работы), 19th Annual International «Stress and Behavior» Neuroscience and Biopsychiatry Conference (Russia, St. Petersburg, 2013), 45th European Brain and Behaviour Society Meeting (Germany, Munich, 2013), 2013XXII Съезде физиологического общества им. И. П. Павлова (Россия, Волгоград, 2013, 3 работы) и на заседании кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ (Россия, Москва, 2013).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ (в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ).

Структура и объем диссертации

.

Диссертация изложена на 177 страницах и включает введение, обзор литературы, описание объектов и методов исследования, результаты, обсуждение, выводы, список цитируемой литературы (содержит 177 источников, в том числе 25 опубликовано в российских изданиях и 152 в зарубежных). Работа иллюстрирована 56 рисунками и содержит 42 таблицы.

1. Ахрем A.A., Андреюк Г. М., Киселева С. И. Определение концентрации гемоглобина в крови с помощью додецилсульфата натрия // Лаб.дело. 1989. №.5. С. 13−15.

2. Ашмарин И. П., Обухова М. Ф. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. Т.51 (4). С. 3−8.

3. Баевский P.M. Прогнозирование состояний на грани нормы и патологии // М.:Изд-во Медицина. 1979,-298с.

4. Баркаган З. С., Идельсон Л. И., Воробьев.А. И. Руководство по гематологии // М.: Медицина, 1985, 367 с.

5. Берковский A. JL, Васильев С. А., Жердева J1.B., Козлов A.A., Мазуров A.B., Сергеева Е. В. Пособие по изучению адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов // М.: Изд. дом «Русский врач», 2001, 28 с.

6. Болдырев A.A. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине // М.: Изд-во МГУ, 1998, 320 с.

7. Буреш Я., Бурешова О., Джозеф П. Х. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения // М.: Высшая школа. 1991, 399 с.

8. Вальдман A.B. Фармакология нейропептидов // М.: Изд. Ин-та фармакологии АМН СССР, 1982, С. 9−30.

9. Гаврилов В. Б., Гаврилова А. Р., Мажуль J1.M. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой // Вопросы медицинской химии. 1987. № 1. С. 118 121.

10. Гайтон А. К., Холл Дж.Э. Медицинская физиология // М.: Логосфера, 2008, -1296 с.

11. Герштейн Л. М., Доведова Е. Л., Узбеков М. Г., Голикова Т. Л., Сергутина A.B., Ашмарин И. П. Пролонгированное действие тетрапептидамида на особенности обмена белков и медиаторов в отдельных микроструктурах мозга//Нейрохимия. 1984. Т. 3 (3). С. 236−243.

12. Гомазков О. А. Функциональная биохимия регуляторных пептидов // М.: Наука, 1992,.- 159 с.

13. Зайко Н. Н., Быць Ю. В., Атаман А. В. и др. Патологическая физиология. 2-е изд. // М.: МЕДпресс-информ, 2004. — 635 с.

14. Зинчук В. В. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты // Успехи физиологических наук. 2003. Т. 30 (3). С. 66−76.

15. Кузник Б. И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии. // Чита, 2010, 827 с.

16. Литвицкий П. Ф. Патофизиология. В 2 т. 2-е изд., испр. и доп.// М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. — Т. 1. — 752 с.

17. Манченко Д. М., Глазова Н. Ю., Левицкая Н. Г., Андреева Л. А., Каменский А. А., Мясоедов Н. Ф. Ноотропные и анальгетические эффекты семакса при различных способах введения //Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. 2010. Т. 96 (10). С. 1014−1023.

18. Панков Ю. А., Усватова И. Я. Методы исследования некоторых гормонов и медиаторов // Труды по новой аппаратуре и методикам. 1965. В. III. С. 137−145.

19. Петеркова В. А., Ремизов О. В. Ожирение в детском возрасте. // Ожирение и метаболизм. 2004. Т. 1. С. 17−23.

20. Прилепская В. Н., Цаллагова Е. В. Проблема ожирения и здоровье женщины // CONSILIUM MEDICUM. Т. 10. № 6. С. 21−25.

21. Сиверина О. Б., Басевич В. В., Басова Р. В., Гавриш И. Н., Ярополов А. И. Метод количественного определения церулоплазмина. // Лаб. дело. 1986. №. 10. С. 618−621.

22. Смирнов А. Н. Эндокринная регуляция // М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009, -368 с.

23. Стальная И. Д., Гаришвили Т. Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. М.: Медицина. 1977. С. 66−68.

24. Титов С. А., Каменский А. А. Роль ориентировочного и оборонительного компонентов в поведении белых крыс в условиях «Открытого поля» // Журнал Высшая Нервная Деятельность. 1980. Т. 30 (4). С. 704−707.

25. Шутова В. И., Данилова Л. И. Ожирение, или синдром избыточной массы тела // Медицинские новости. 2004. № 7. С.41−47.

26. Aebi Н. Catalase in vitro. Method // Enzymol. 1984. V. 105. P. 121−126.

27. Aragno M., Mastrocola R., Ghe C., Arnoletti E., Bassino E., Alloatti G., Muccioli G. Obestatin induced recovery of myocardial dysfunction in type 1 diabetic rats: underlying mechanisms // Cardiovasc Diabetol. 2012. V. 11. P. 129.

28. Armario A. The hypothalamic-pituitary-adrenal axis: what can it tell us about stressors? // CNS neurological disorders drug targets. 2006. V. 5 (5). P. 485−501.

29. Ataka K., Inui A., Asakawa A., Kato .1, Fujimiya M. Obestatin inhibits motor activity in the antrum and duodenum in the fed state of conscious rats // Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2008. V. 294 (5). P. G1210−1218.

30. Bang A.S., Soule S.G., Yandle T.G., Richards A.M., Pemberton C.J. Characterisation of proghrelin peptides in mammalian tissue and plasma // J Endocrinol. 2007. V. 192 (2). P. 313−323.

31. Bartness T.J., Keen-Rhinehart E., Dailey M.J., Teubner B.J. Neural and hormonal control of food hoarding // Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2011. V. 301 (3). P. R641−655.

32. Benzie I.F., Strain J.J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of «antioxidant power»: the FRAP assay // Analytical Biochemistry. 1996. V. 239 (1). P. 70−76.

33. Bernstein L.M., Grossman M.I. An experimental test of the glucostatic theory of regulation of food intake // J Clin Invest. 1956. V. 35 (6). P. 627−633.

34. Bernstein L.M., Grossman M.I. An experimental test of the glucostatic theory of regulation of food intake // J Clin Invest. 1956. V. 35 (6). P. 627−633.

35. Bowles L.K., Cooper J.A., Howarth, D. J, Miller G. J, MacCallum P.K. Associations of haemostatic variables with body mass index: a community-based study // Blood Coagulation & Fibrinolysis. 2003. V. 14, (6). P. 569−573.

36. Bray G.A., Popkin B.M. Dietary fat intake does affect obesity! // Am J Clin Nutr. 1998. 68 (6). P. 1157−1173.

37. Bresciani E., Rapetti D., Dona F., Bulgarelli I., Tamiazzo L., Locatelli V., Torsello A. Obestatin inhibits feeding but does not modulate GH and corticosterone secretion in the rat // J Endocrinol Invest. 2006. V. 29 (8). P. 16−18.

38. Brunetti L., Di Nisio C., Recinella L., Orlando G., Ferrante C., Chiavaroli A., Leone S., Di Michele P., Shohreh R., Vacca M. Obestatin inhibits dopamine release in rat hypothalamus // Eur J Pharmacol. 2010. V. 641 (2−3). P. 142−147.

39. Brunetti L., Leone S., Orlando G., Recinella L., Ferrante C., Chiavaroli A., Di Nisio C., Di Michele P., Vacca M. Effects of obestatin on feeding and body weight after standard or cafeteria diet in the rat // Peptides. 2009. V. 30 (7). P. 1323−1327.

40. Buscher A.K., Cetiner M., Buscher R., Wingen A.M., Hauffa B.P., Hoyer P.F. Obesity in patients with Bardet-Biedl syndrome: influence of appetite-regulating hormones //Pediatr Nephrol. 2012. V. 27 (11). P. 2065;2071.

41. Camina J.P., Campos J.F., Caminos J.E., Dieguez C., Casanueva F.F. Obestatin-mediated proliferation of human retinal pigment epithelial cells: regulatory mechanisms // J Cell Physiol. 2007. V. 211 (1). P. 1−9.

42. Carlini V.P., Schioth H.B., Debarioglio S.R. Obestatin improves memory performance and causes anxiolytic effects in rats // Biochem Biophys Res Commun. 2007. V. 352 (4). P. 907−912.

43. Chanoine J.P., Wong A.C., Barrios V. Obestatin, acylated and total ghrelin concentrations in the perinatal rat pancreas // Horm Res. 2006. V. 66 (2). P. 81−88.

44. Chanoine JP, Wong AC, Barrios V. Obestatin, acylated and total ghrelin concentrations in the perinatal rat pancreas // Horm Res. 2006. V. 66 (2). P. 81−88.

45. Chrousos G.P. The hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune-mediated inflammation//N Engl J Med. 1995. V. 332 (20). P. 1351−1362.

46. Cuesta-Vargas A.I., Gonzalez-Sanchez M. Obesity effect on a multimodal physiotherapy program for low back pain suffers: patient reported outcome // J. Occup Med Toxicol. 2013. V. 8 (1). doi: 10.1186/1745−6673−8-13.

47. D’Amour F.E., Smith D.L. A method for deteminig loss of pain sensation // J. Pharmac. Exp. Ther. 1941. V. 72. P. 74−79.

48. De Kloet E.R., Sutanto W., Rots N., van Haarst A., van den Berg D., Oitzl M., van Eekelen A., Voorhuis D. Plasticity and function of brain corticosteroid receptors during aging // Acta Endocrinol (Copenh). 199. V. 125 Suppl 1. P. 65−72.

49. De Smet B., Thijs T., Peeters T.L., Depoortere I. Effect of peripheral obestatin on gastric emptying and intestinal contractility in rodents // Neurogastroenterol Motil. 2007. V. 19(3). P. 211−217.

50. Depoortere I., Thijs T., Moechars D., De Smet B., Ver Donck L., Peeters T.L. Effect of peripheral obestatin on food intake and gastric emptying in ghrelin-knockout mice // Br J Pharmacol. 2008. V. 153 (7). P. 1550−1557.

51. Dey D.K., Lissner L. Obesity in 70-year-old subjects as a risk factor for 15-year coronary heart disease incidence // Obes Res. 2003. V. 11. P. 817−827.

52. Egido E.M., Hernandez R., Marco J., Silvestre R.A. Effect of obestatin on insulin, glucagon and somatostatin secretion in the perfused rat pancreas // Regul Pept. 2009. V. 152(1−3). P. 61−66.

53. Elander L., Ruud J., Korotkova M., Jakobsson P.J., Blomqvist A. Cyclooxygenase-1 mediates the immediate corticosterone response to peripheral immune challenge induced by lipopolysaccharide //Neuroscience letters. 2010. V. 470 (1). P. 10−12.

54. Elenkov I.J., Webster E.L., Torpy D.J., Chrousos G.P. Stress, corticotropin-releasing hormone, glucocorticoids, and the immune/inflammatory response: acute and chronic effects // Annals Of The New York Academy Of Sciences. 1999. V. 876. P. 1−11.

55. Fontenot E., DeVente J.E., Seidel E.R. Obestatin and ghrelin in obese and in pregnant women // Peptides. 2007. V. 28 (10). P. 1937;1944.

56. Gao X.Y., Kuang H.Y., Liu X.M., Ma Z.B. Decreased gastric body mucosa obestatin expression in overweight and obese patients // Peptides. 2010. V. 31 (2). P. 291−296.

57. Germain N., Galusca B., Grouselle D., Frere D., Billard S., Epelbaum J., Estour B. Ghrelin and obestatin circadian levels differentiate bingeing-purging from restrictive anorexia nervosa // J Clin Endocrinol Metab. 2010. V. 95 (6). P. 30 573 062.

58. Goppelt-Struebe M., Schaefer D., Habenicht A.J. Differential regulation of cyclo-oxygenase-2 and 5-lipoxygenase-activating protein (FLAP) expression by glucocorticoids in monocytic cells // Br J Pharmacol. 1997. V. 122 (4). P. 619−624.

59. Goyal R., Singhai M., Faizy A.F. Glutathione peroxidase activity in obese and nonobese diabetic patients and role of hyperglycemia in oxidative stress // J Midlife Health. 2011. V. 2 (2). P. 72−76.

60. Gravel A., Vijayan M.M. Salicylate disrupts interrenal steroidogenesis and brain glucocorticoid receptor expression in rainbow trout. // Toxicological sciences ?: an official journal of the Society of Toxicology. 2006. V. 93 (1). P. 41⁹.

61. Green B.D., Irwin N., Flatt P.R. Direct and indirect effects of obestatin peptides on food intake and the regulation of glucose homeostasis and insulin secretion in mice // Peptides. 2007. V. 28 (5). P. 981−987.

62. Guerin P., El Mouatassim S., Menezo Y. Oxidative stress and protection against reactive oxygen species in the pre-implantation embryo and its surroundings // Hum Reprod Update. 2001. V. 7 (2). P. 175−189.

63. Gulec G., Isbil-Buyukcoskun N., Kahveci N. Effects of centrally-injected glucagon-like peptide-1 on pilocarpine-induced seizures, anxiety and locomotor and exploratory activity in rat // Neuropeptides. 2010. V. 44 (4). P. 285−291.

64. Guneli E., Gumustekin M., Ates M. Possible involvement of ghrelin on pain threshold in obesity // Med Hypotheses. 2010. V. 74 (3). P. 452−454.

65. Hagberg I.A., Solvik U.0., Opdahl H., Roald H.E., Lyberg T. Inhalation of nitric oxide inhibits ADP-induced platelet aggregation and alpha-granule release //Platelets. 1999. V. 10 (6). P. 382−390.

66. Hommel J.D., Trinko R., Sears R.M., Georgescu D., Liu Z.W., Gao X.B., Thurmon J.J., Marinelli M., DiLeone R.J. Leptin receptor signaling in midbrain dopamine neurons regulates feeding //Neuron. 2006. V. 51 (6). P. 801−810.

67. J Vergote V., Baert B., Vandermeulen E., Peremans K., van Bree H., Siegers G., Burvenich C., De Spiegeleer B. LC-UV/MS characterization and DOE optimization of the iodinated peptide obestatin // Pharm Biomed Anal. 2008. V. 46 (1). P. 127−136.

68. Jackson V.R., Nothacker H.P., Civelli O. GPR39 receptor expression in the mouse brain//Neuroreport. 2006. V. 17 (8). P. 813−816.

69. Janssen I., Katzmarzyk P.T., Ross R. Body Mass Index, Waist Circumference, and Health RiskEvidence in Support of Current National Institutes of Health Guidelines // Arch Intern Med. 2002. V. 162 (18). 2074;2079.

70. King N.A., Gibbons C.H., Martins C. Ghrelin and obestatin concentrations during puberty: relationships with adiposity, nutrition and physical activity // Med Sport Sci. 2010. V. 55. P. 69−81.

71. Lacquaniti A., Donato V., Chirico V., Buemi A., Buemi M. Obestatin: an interesting but controversial gut hormone // Ann Nutr Metab. 2011. V. 59 (2−4). P. 193−199.

72. Lagaud G.J., Young A., Acena A., Morton M.F., Barrett T.D., Shankley N.P. Obestatin reduces food intake and suppresses body weight gain in rodents // Biochem Biophys Res Commun. 2007. V. 357 (1). P. 264−269.

73. Lauwers E., Landuyt B., Arckens L., Schoofs L., Luyten W. Obestatin does not activate orphan G protein-coupled receptor GPR39 // Biochem Biophys Res Commun. 2006. V. 351 (1). P. 21−25.

74. Lean M.E. Obesity-what are the current treatment options? // Exp Clin Endocrinol Diabetes. 1998. V. 106 Suppl 2. P. 22−26.

75. Li J.B., Asakawa A., Cheng K., Li Y., Chaolu H., Tsai M., Inui A. Biological effects of obestatin // Endocrine. 2011. V. 39 (3). P. 205−211.

76. Li Z.F., Guo Z.F., Cao J., Hu J.Q., Zhao X.X., Xu R.L., Huang X.M., Qin Y.W., Zheng X. Plasma ghrelin and obestatin levels are increased in spontaneously hypertensive rats // Peptides. 2010. V. 31 (2). P. 297−300.

77. Li Z.F., Song S.W., Qin Y.W., Zhang J.L., Zhao X.X., Zhang B.L., Ren A.J., Guo Z.F., Zheng X. Bolus intravenous injection of obestatin does not change blood pressure level of spontaneously hypertensive rat // Peptides. 2009. V. 30 (10). P. 1928;1930.

78. Lindenau J., Noack H., Possel H., Asayama K., Wolf G. Cellular distribution of superoxide dismutases in the rat CNS // Glia. 2000. V. 29 (1). P. 25−34.

79. Liptak N., Dochnal R., Csabafi K., Szakacs J., Szabo G. Obestatin prevents analgesic tolerance to morphine and reverses the effects of mild morphine withdrawal in mice // Regul Pept. 2013. V. 186. P. 77−82.

80. Markowska A., Ziolkowska A., Jaszczynska-Nowinka K., Madry R., Malendowicz L.K. Elevated blood plasma concentrations of active ghrelin and obestatin in benign ovarian neoplasms and ovarian cancers // Eur J Gynaecol Oncol. 2009. V. 30 (5). P. 518−522.

81. Mayer E.A. Gut feeling: the emerging biology of gut-brain communication // Nat RevNeurosci. 2011. V. 12. P. 453−466.

82. Mayer J., Bates M.W. Blood glucose and food intake in normal and hypophysectomized, alloxan-treated rats // Am J Physiol. 1952. V. 168 (3). P. 812 819.

83. Mayer J., Bates M.W. Blood glucose and food intake in normal and hypophysectomized, alloxan-treated rats // Am J Physiol. 1952. V. 168 (3). P. 812 819.

84. McTigue K.M., Hess R., Ziouras J. Obesity in older adults: a systematic review of the evidence for diagnosis and treatment // Obesity (Silver Spring). 2006. V. 14 (9). P. 1485−1497.

85. Meszarosova M., Sirotkin A.V., Grossmann R., Darlak K., Valenzuela F. The effect of obestatin on porcine ovarian granulosa cells // Anim Reprod Sci. 2008. V. 108 (1−2). P. 196−207.

86. Mondal M.S., Toshinai K., Ueno H., Koshinaka K., Nakazato M. Characterization of obestatin in rat and human stomach and plasma, and its lack of acute effect on feeding behavior in rodents // J Endocrinol. 2008. V. 198 (2). P. 339−346.

87. Morley J.E., Farr S.A., Sell R.L., Hileman S.M., Banks W.A. Nitric oxide is a central component in neuropeptide regulation of appetite. // Peptides. 2011. V. 32 (4). P. 776−780.

88. Nagaraj S., Peddha M.S., Manjappara U.V. Fragments of obestatin as modulators of feed intake, circulating lipids, and stored fat // Biochem Biophys Res Commun. 2008. V. 366 (3). P. 731−737.

89. Nichols D.C., Tursky B. Body image, anxiety, and tolerance for experimental pain // Psychosom Med. 1967. V. 29 (2). P. 103−110.

90. Olanov C.W. A radical hypothesis of neurodegeneration.// Trends Neurosci. 1993. V. 16. P. 439−444.

91. Pacheco-Pantoja E.L., Ranganath L.R., Gallagher J.A., Wilson P.J., Fraser W.D. Receptors and effects of gut hormones in three osteoblastic cell lines // BMC Physiol. 2011. V. 11. P. 11.

92. Pamukcu O., Kumral Z.N., Ercan F., Yegen B.C., Ertem D. Anti-inflammatory Effect of Obestatin and Ghrelin in Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis in Rats // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2013. V. 57 (2). P. 211−218.

93. Pan W., Tu H., Kastin A.J. Differential BBB interactions of three ingestive peptides: obestatin, ghrelin, and adiponectin // Peptides. V. 27. P. 911−916.

94. Price R.C., Asenjo J.F., Christou N.V., Backman S.B., Schweinhardt P. The role of excess subcutaneous fat in pain and sensory sensitivity in obesity // Eur J Pain. 2013. doi: 10.1002/j. 1532−2149.2013.315.x.

95. Reinehr T., de Sousa G., Roth C.L. Obestatin and ghrelin levels in obese children and adolescents before and after reduction of overweight // Clin Endocrinol (Oxf). 2008. V. 68 (2). P. 304−310.

96. Ren A.J., Guo Z.F., Wang Y.K., Wang L.G., Wang W.Z., Lin L., Zheng X., Yuan W.J. Inhibitory effect of obestatin on glucose-induced insulin secretion in rats // Biochem Biophys Res Commun. 2008. V. 369 (3). P. 969−972.

97. Reul J., Holsboer F. Corticotropin-releasing factor receptors 1 and 2 in anxiety and depression // Current Opinion in Pharmacology. 2002. V. 2 (1). P. 23−33.

98. Roth C.L., Reinehr T., Schernthaner G.H., Kopp H.P., Kriwanek S., Schernthaner G. Ghrelin and obestatin levels in severely obese women before and after weight loss after Roux-en-Y gastric bypass surgery // Obes Surg. 2009. V. 19 (1). P. 2935.

99. Rouwette T., Klemann K., Gaszner B., Scheffer G.J., Roubos E.W., Scheenen W.J., Vissers K., Kozicz T. Differential responses of corticotropin-releasing factor and urocortin 1 to acute pain stress in the rat brain // Neuroscience. 2011. 183. P. 15−24.

100. Rouwette T., Vanelderen P., Roubos E.W., Kozicz T., Vissers K. The amygdala, a relay station for switching on and off pain // Eur J Pain. 2012. V. 16 (6). P. 782 792.

101. Samson W.K., White M.M., Price C., Ferguson A.V. Obestatin acts in brain to inhibit thirst // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2007. V. 292 (1). P. 637−643.

102. Samson W.K., Yosten G.L. C., Chang J.-K., Ferguson A.V., White M.M. Obestatin inhibits vasopressin secretion: evidence for a physiological action in the control of fluid homeostasis // The Journal of endocrinology. 2008. V. 196 (3). P. 559−564.

103. Samuel K. Medical management of obesity // Surgical Clinics of North America. 2001. V. 81. P. 1−6.

104. Satoh N., Ogawa Y., Katsuura G., Hayase M., Tsuji T., Imagawa K., Yoshimasa Y., Nishi S., Hosoda K., Nakao K. The arcuate nucleus as a primary site of satiety effect of leptin in rats // Neurosci Lett. 1997. V. 224 (3). P. 149−152.

105. Savino F., Benetti S., Lupica M.M., Petrucci E., Palumeri E., Cordero di Montezemolo L. Ghrelin and obestatin in infants, lactating mothers and breast milk // Horm Res Paediatr. 2012. V. 78 (5−6). P. 297−303.

106. Schacterle G.R., Pollack R.L. A simplified method for the quantitative assay of small amounts of protein in biologic material // Anal. Biochem. 1973. V. 51 (2). P. 654−655.

107. Sedlak J., Lindsay R. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissues with Ellman’s reagent // Analitical Biochemistry. 1968. V. 1. P. 192−205.

108. Seidell J., Flegal K. Assessing obesity: classification and epidemiology // Br. Med. Bull. 1997. V. 53. P. 238−252.

109. Seidell J.C. The impact of obesity on health status: some implications for health care costs // Int J Obes Relat Metab Disord. 1995. V. 19 (6). P. 13−16.

110. Seim I., Walpole C., Amorim L., Josh P., Herington A., Chopin L. The expanding roles of the ghrelin-gene derived peptide obestatin in health and disease // Mol Cell Endocrinol. 2011. V. 340 (1). P. 111−117.

111. Seoane L.M., Al-Massadi O., Pazos Y., Pagotto U., Casanueva F.F. Central obestatin administration does not modify either spontaneous or ghrelin-induced food intake in rats // Peptides. 2008. V. 29 (8). P. 1354−1361.

112. Shen C., Yu T., Tang Z.H., Wu K.M. Changes in Ghrelin and Obestatin Levels before and after a Meal in Children with Simple Obesity and Anorexia // Horm Res Paediatr. 2013. V. 79 (6). P. 341−346.

113. Shi J.B., Guo Z.F., Zheng X., Wang Z.B., Ma Y.J. Circulating obestatin is increased in patients with cardiorenal syndrome and positively correlated with vasopressin // Peptides. 2012. V. 38 (2). P. 377−80.

114. Shipman W.G., Plesset M.R. Anxiety and depression in obese dieters // Arch Gen Psychiatry. 1963. V. 8. P. 530−535.

115. Simon R.I. Obesity as a depressive equivalent // JAMA. 1963. V. 183. P. 208−210.

116. Sousa G.T., Lira F.S., Rosa J.C., de Oliveira E.P., Oyama L.M., Santos R.V., Pimentel G.D. Dietary whey protein lessens several risk factors for metabolic diseases: a review // Lipids Health Dis. 2012. V. 10. P. 11−67.

117. Subasinghage A.P., Green B.D., Flatt P.R., Irwin N., Hewage C.M. Metabolic and structural properties of human obestatin {1−23} and two fragment peptides // Peptides. 2010. V. 31 (9). P. 1697−1705.

118. Sung M., Zigman S. An improved spectrophotometric assay for superoxide dismutase based on epinephrine autoxidation // Analitical biohemestry.1978. V. 90. P. 81−89.

119. Szentirmai E., Krueger J.M. Obestatin alters sleep in rats //Neurosci Lett. 2006. V. 404 (1−2). P. 222−226.

120. Tsigos C., Chrousos G.P. Hypothalamic-pituitary-adrenal axis, neuroendocrine factors and stress // Journal of psychosomatic research. 2002. V. 53 (4). P. 865 871.

121. Tsigos C., Chrousos G.P. Physiology of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis in health and dysregulation in psychiatric and autoimmune disorders // Endocrinology And Metabolism Clinics Of North America. 1994. V. 23 (3). P. 451−466.

122. Ulasoglu C., Isbilen B., Doganay L., Ozen F., Kiziltas S., Tuncer I. Effect of Helicobacter pylori eradication on serum ghrelin and obestatin levels // World J Gastroenterol. 2013. V. 19 (15). P. 2388−2394.

123. Unniappan S., Speck M., Kieffer T.J. Metabolic effects of chronic obestatin infusion in rats // J Endocrinol Invest. 2006. V. 29 (8). P. RC13−15.

124. Unniappan S., Speck M., Kieffer T.J. Metabolic effects of chronic obestatin infusion in rats // Peptides. 2008. V. 29 (8). P. 1354−1361.

125. Van Dijck A., Van Dam D., Vergote V., De Spiegeleer B., Luyten W., Schoofs L., De Deyn P.P. Central administration of obestatin fails to show inhibitory effects on food and water intake in mice // Regul Pept. 2009. V. 156 (1−3). P. 77−82.

126. Vicennati V., Genghini S., De Iasio R., Pasqui F., Pagotto U., Pasquali R. Circulating obestatin levels and the ghrelin/obestatin ratio in obese women // Eur J Endocrinol. 2007. V. 157 (3). P. 295−301.

127. WHO Expert Committee Physical Status: the use and interpretation of anthropometry // Geneva: WHO Technical Report Series, 1995, № 854. 463p.

128. Xin X., Ren A. J, Zheng X, Qin Y. W, Zhao X.X., Yuan W. J, Guo Z.F. Disturbance of circulating ghrelin and obestatin in chronic heart failure patients especially in those with cachexia // Peptides. 2009. V. 30 (12). P. 2281−2285.

129. Zamrazilova H, Hainer V, Sedlackova D, Papezova H, Kunesova M, Bellisle F, Hill M, Nedvidkova J. Plasma obestatin levels in normal weight, obese and anorectic women // Physiol Res. 2008. V. 57 (1). P.49−55.

130. Zborowski M. Cultural components in responses to pain // J. Soc Issues. 1952. V. 8. P. 16.

131. Zhan M, Yuan F, Liu H, Chen H, Qiu X, Fang W. Inhibition of proliferation and apoptosis of vascular smooth muscle cells by ghrelin // Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2008. V. 40 (9). P. 769−776.

132. Zhang J. V, Ren P.-G, Avsian-Kretchmer O, Luo C.-W, Rauch R, Klein C, Hsueh A.J.W. Obestatin, a peptide encoded by the ghrelin gene, opposes ghrelin’s effects on food intake // Science. 2005. V. 310 (5750). P. 996−999.

133. Zhang N, Yuan C, Li Z, Li J, Li X, Li C, Li R, Wang S.R. Meta-analysis of the relationship between obestatin and ghrelin levels and the ghrelin/obestatin ratio with respect to obesity//Am J Med Sci. 2011. V. 341 (1). P. 48−55.

134. Zhao Z., Sakai T. Characteristic features of ghrelin cells in the gastrointestinal tract and the regulation of stomach ghrelin expression and production // World J Gastroenterol. 2008. 14 (41). P. 6306−6311.

135. Zizzari P., Longchamps R., Epelbaum J., Bluet-Pajot M.T. Obestatin partially affects ghrelin stimulation of food intake and growth hormone secretion in rodents //Endocrinology. 2007. V. 148 (4). P. 1648−1653.

136. Zou C.C., Liang L., Wang C.L., Fu J.F., Zhao Z.Y. The change in ghrelin and obestatin levels in obese children after weight reduction //Acta Paediatr. 2009. V. 98(1). P. 159−165.

137. Zou C.C., Liang L., Wang C.L., Fu J.F., Zhao Z.Y. The change in ghrelin and obestatin levels in obese children after weight reduction // Acta Paediatr. 2009. V. 98(1). P. 159−165.