Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Протеолитическая активность возбудителя сибирской язвы

Диссертация: Протеолитическая активность возбудителя сибирской язвы
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Между тем, имеется ряд фактов, не укладывающихся в рамки существующих представлений о природе вирулентности В. anthracis. Так, штаммы близкородственных видов таксономической группы САМ, унаследовавшие в результате трансдукци-онной передачи плазмиду рХ02 из высоковирулентного штамма В. anthracis КМ85, не повышали вирулентность для лабораторных животных. Кроме того, были обнаружены штаммы В… Читать ещё >

Содержание

  • ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
  • Глава 1. Современные представления о молекулярных основах патогенности возбудителя сибирской язвы
    • 1. 1. Факторы вирулентности В. апЖгаЫя, кодируемые генами плазмидной локализации
    • 1. 2. Факторы вирулентности, кодируемые хромосомой сибиреязвенного микроба
  • Глава 2. Значение протеолитических ферментов в вирулентности микроорганизмов
  • СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
  • Глава 3. Материалы и методы
    • 3. 1. Штаммы бактерий, питательные среды
    • 3. 2. Тестирование протеолитической активности штаммов В. апЖгаЫя
    • 3. 3. Методы, использованные при изучении Срг — мутантов В. апЖгаЫз
    • 3. 4. Статистическая обработка данных
  • Глава 4. Разработка сред для определения протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза и пигментсорбции возбудителя сибирской язвы
    • 4. 1. Среда для определения протеолитической активности и способности к синтезу желтого диффузного пигмента возбудителем сибирской язвы
    • 4. 2. Среда для регистрации гемолитической активности В. аШкгасгя
    • 4. 3. Среда для детекции пигментсорбции возбудителя сибирской язвы
  • Глава 5. Изучение популяционной изменчивости сибиреязвенного микроба по протеолитической активности и другим признакам, кодируемым генами хромосомной локализации
    • 5. 1. Выделение и характеристика спонтанных мутантов В. агйкгаых с изменением протеолитической активности
    • 5. 2. Корреляционная взаимосвязь между изменением уровня протеолитической активности и выражением гемолитической активности, пигментсинтеза, пигментсорбции и спорообразования
    • 5. 3. Влияние собственных плазмид возбудителя сибирской язвы рХ01 и рХ02 на частоту образования спонтанных мутантов с измененной способностью к деградации казеина

    5.4. Вирулентность спонтанных мутантов В. аШкгаЫя, характеризующихся изменением ассоциированного комплекса признаков протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза, пигментсорбции и спорообразования

    Глава 6. Изучение внеклеточных протеаз спонтанных мутантов В. аШкгасгз с измененной способностью к деградации белковых субстратов

Протеолитическая активность возбудителя сибирской язвы (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы.

Возбудитель сибирской язвы, Bacillus anthracis, впервые обнаруженный Р. Кохом в 1869 г., вызывает тяжелое инфекционное заболевание, которое продолжает представлять серьезную проблему для здравоохранения и животноводства. Эпидемические и эпизоотологические проявления этой инфекции имеют большое социальное и экономическое значение. По данным ВОЗ случаи заболевания сибирской язвой крупного и мелкого рогатого скота официально зарегистрированы в 158 странах (Anthrax: Memorandum ., 1996). При этом, остается достаточно высоким уровень заболеваемости людей на энзоотичных территориях. Только в Российской Федерации за 1997 г. зарегистрировано 26 случаев инфицирования человека, за 1998 г. — 37 случаев (Здоровье населения., 1999).

Определенные успехи, достигнутые в профилактике и диагностике инфекционных болезней свидетельствуют о том, что эти вопросы не могут быть решены без глубокого изучения основ жизнедеятельности микроорганизмов, механизмов, обеспечивающих реализацию их патогенных и иммуногенных свойств.

На сегодняшний день принято считать, что вирулентность В. anthracis связана с продукцией «классических» факторов — трехкомпонентного белкового токсина и по-ли-О-глютаминовой капсулы. Структурные и регуляторные гены синтеза этих детерминантов находятся в составе двух высокомолекулярных плазмид pXOl и рХ02 (Mikesell P. et al., 1983; Green B.D. et al., 1985; Uchida I. et al, 1985, 1986, 1987).

Между тем, имеется ряд фактов, не укладывающихся в рамки существующих представлений о природе вирулентности В. anthracis. Так, штаммы близкородственных видов таксономической группы САМ, унаследовавшие в результате трансдукци-онной передачи плазмиду рХ02 из высоковирулентного штамма В. anthracis КМ85, не повышали вирулентность для лабораторных животных. Кроме того, были обнаружены штаммы В. anthracis, характеризующиеся 10−1000 кратным снижением уровня вирулентности для морских свинок, при сохранении типичных видовых свойств, включая продукцию токсина и капсулы (Степанов A.C. с соавт., 1991). Очевидно, что подобные факты обусловлены наличием детерминантов, кодируемых генами хромосомной локализации. В качестве таковых у многих возбудителей инфекционных заболеваний рассматривают протеолитические ферменты. В настоящее время охарактеризованы внеклеточные и поверхностные протеазы целого ряда микроорганизмов: Streptococcus, Staphylococcus, Clostridium spp., Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Legionella pneumophila, Haemophilus influenzae, Vibrio spp., Yersinia pestis и др. (Finkelstein R.A. et al., 1983; Molla A. et al., 1989; Sodeinde O.A. et al., 1992; Hase C.C., Finkelstein R.A., 1993; Suter S., 1994; Arakawa S., Kuramitsu H.K., 1994; Fletcher H.M. et al., 1994; Moffat J.F. et al., 1994). Бактериальные протеазы выделяют как дополнительные факторы вирулентности, участвующие в патогенезе инфекционного заболевания несколькими возможными механизмами: 1) повреждением тканей хозяина путем лизиса поверхностных клеточных белков, 2) деструкцией тканей через активацию комплекса металлопротеаз или других систем протеазного каскада, 3) инактивацией ключевых белков, важных в защите макроорганизма, 4) активацией собственных бактериальных факторов вирулентности (Booth В.А. et al., 1984; Killian М., Reinholdt J., 1986; Lantz M. S ., et al., 1991; Sorsa T. et al., 1992; Cole M.F. et al., 1994; Neely A.N. et al., 1994).

Несмотря на то, что протеолитические ферменты многих видов Bacillus изучены достаточно хорошо (Siezen R.J., Leunissen J.A.M., 1997), информация о протеазах В. anthracis крайне ограничена, хотя о наличие протеолитической активности у возбудителя сибирской язвы известно давно (Цыганкова О.И., Буравцева Н. П., 1987).

Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности исследований, направленных на изучение признака протеолитической активности В. anthracis.

Цель работы: комплексное исследование признака протеолитической активности возбудителя сибирской язвы, изучение характера популяционной изменчивости и взаимосвязи с другими характеристиками В. anthracis, в том числе коррелирующими с его вирулентностью.

Задачи исследования:

1. Разработать питательную среду для определения протеолитической активности В. anthracis и проведения клонального анализа.

2. Изучить характер популяционной изменчивости В. anthracis по признаку протеолитической активности.

3. Определить корреляционную взаимосвязь изменений протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза, пигментсорбции и спорообразования.

4. Оценить значение собственных плазмид возбудителя сибирской язвы рХ01 и рХ02 для образования спонтанных мутантов с измененной способностью к деградации белковых субстратов.

5. Охарактеризовать внеклеточные протеазы штаммов В. аМкгаЫя с различной протеолитической активностью.

Научная новизна работы.

Установлено, что изменение популяционного состава сибиреязвенного микроба по признаку протеолитической активности происходит с высокой частотой (пхЮ" 3) как в направлении полной утраты фенотипического выражения признака, так и в сторону значительного увеличения уровня протеолиза.

Выявлено, что с изменением протеолитической активности значительно коррелирует выражение таких признаков как гемолитическая активность, пигментсинтез, спорообразование и в умеренной степени пигментсорбция.

Впервые методом зимографии показано, что клоны В. апМгаЫя с измененной способностью к деградации белковых субстратов характеризуются различным составом внеклеточных протеаз.

Предложена однослойная казеиновая среда, позволяющая проводить быстрый, массовый скрининг популяций штаммов В. anth.ra.cis по признаку протеолитической активности. На данной среде кроме протеолиза, возможно регистрировать способность микроба к синтезу желтого диффузного пигмента.

Предложены среды для тестирования пигментсорбции и гемолитической активности В. аШЬгасау.

Практическая значимость работы.

Разработаны методические рекомендации «По приготовлению и использованию сред для определения протеолитической, гемолитической, пигментсорбирующей и пигментсинтезирующей активностей возбудителя сибирской язвы». Методические рекомендации одобрены Ученым Советом (протокол № 10 от 30 декабря 1997) и утверждены директором РосНИПЧИ «Микроб» .

В коллекции патогенных бактерий РосНИПЧИ «Микроб» депонировано 11 штаммов В. anthracis, представляющих собой систему изогенных производных вирулентного двухплазмидного штамма КМ85 (рХ01+, рХ02+), отличающихся по уровню протеолитической и гемолитической активности, пигментсинтезу, пигментсорбции, спорообразованию и наличию собственных плазмид pXOl и рХ02.

Апробация работы.

Материалы диссертации представлялись на 4-ой международной конференции «Актуальные вопросы Современной Медицины» (г. Бишкек, 1997), VII съезде «Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов» (г. Москва, 1997), научной конференции, посвященной 100-летаю образования противочумной службы России (г. Саратов, 1997), всесоюзной научно — практической конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (г. Саратов, 1998), 3-й международной конференции по сибирской язве (Plymouth, UK, 1998).

Диссертация обсуждена и одобрена на расширенной конференции лаборатории диагностики инфекционных болезней РосНИПЧИ «Микроб» 21 октября 1999 г.

Публикации.

Основное содержание диссертации отражено в 8 опубликованных работах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В популяциях штаммов возбудителя сибирской язвы с высокой частотой о.

Пх10″) образуются спонтанные мутанты, протеолитическая активность которых варьирует от полной неспособности к деградации белковых субстратов, до высокой степени выраженности данного признака.

2. С изменением уровня протеолитической активности коррелирует выражение таких признаков как гемолитическая активность, пигментсинтез, пигмен-тсорбция и спорообразование.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ВЫВОДЫ.

1. Установлен высокий уровень популяционной изменчивости сибиреязвенного микроба по признаку протеолитической активности. С частотой 5.1×10″ 3 происходит образование спонтанных мутантов со сниженной способностью к протео-лизу (вплоть до полной потери признака). Мутанты со значительной степенью выраженности протеолитической активности формируются с частотой 1.8×10″ 3.

2. Выявлена взаимосвязь утраты способности штаммов В. аМкгаш к протеоли-зу со снижением гемолитической активности, пигментсинтеза, пигментсорбции и спорообразования. Мутанты с гиперпротеолитической активностью характеризуются утратой спорообразования и увеличением гемолитической активности. Отмечен значительный уровень корреляционной взаимосвязи между изменением протеолитической активности и Н1у, Ус1р, 8ро — признаками. Между протеолизом и пигментсорбцией установлена средняя степень корреляции.

3. Получены данные, свидетельствующие, что спонтанный мутант КМ86(1)/КМ85 с отсутствием протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза и пигментсорбции характеризуется 10-кратным снижением вирулентности для морских свинок, по сравнению с родительским штаммом В. Шкгаси КМ86(5)/КМ85.

4. В результате экспериментов по элиминации собственных плазмид рХ01 и рХ02 В. аЫкгайз показано, что оба репликона не играют роли в процессе изменчивости микроба по протеолитической активности и ассоциированным с ней признакам.

5. Показано, что выделенный спонтанный мутант КМ86(1)/КМ85 р^ утративший способность к фенотипическому выражению протеолиза, характеризуется снижением активности культурального фильтрата в отношении азоказеина в 2.75 раза, а также изменением профиля протеолитически активных белков: утратой зоны с молекулярной массой 173 000 Да и появлением дополнительных зон с молекулярными массами 91 000 Да, 98 000 Да и 135 000 Да.

6. Предложена однослойная казеиновая среда для проведения клонального анализа штаммов В. аМкгаш по признаку протеолитической активности и способности к пигментсинтезу. Разработаны и оптимизированы составы питательных.

77 сред для тестирования гемолитической активности и пигментсорбции возбуди теля сибирской язвы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

На сегодняшний день принято считать, что вирулентность возбудителя сибирской язвы связана с продукцией «классических» факторов — трехкомпонентного белкового токсина и поли-Б-глютаминовой капсулы. Структурные и регуляторные гены синтеза этих детерминантов локализованы в составе двух высокомолекулярных плаз-мид pXOl и рХ02 (Mikesell P. et al., 1983; Green B.D. et al, 1985; Uchida I. et al, 1985, 1986, 1987).

Однако имеется ряд данных, свидетельствующих о возможности существования важных факторов вирулентности, кодируемых генами хромосомной локализации. В качестве таковых у ряда патогенных и условно патогенных бактерий выделяют про-теолитическую, гемолитическую активность, механизмы, задействованные в транспорте железа, способность к адгезии на поверхности клеток и другие (Sasakawa Ch. et al, 1986; Finlay B. B, Falkow S, 1989; Ivins B.E. et al, 1990; Lantz M. S, 1997). Возбудитель сибирской язвы, В. anthracis, очевидно, в этом отношении также не является исключением.

Первый этап настоящего исследования был посвящен разработке сред для проведения первичного массового скрининга популяций штаммов В. anthracis по признакам протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза и пигментсорб-ции. Необходимость такой работы обусловлена в частности тем, что существующие среды для определения данных признаков не приемлемы для первичного клонального анализа и отбора колоний для последующего изучения.

Для тестирования протеолитической активности нами была предложена простая и удобная в использовании казеиновая среда, разработанная на основе среды «G» (Gollakota K. G, Halvorson Н. О, 1960). Из состава среды «G» была исключена глюкоза, увеличено содержание дрожжевого экстракта (0.4%), добавлен трис (0.01 М, рН 10.0) и казеин до конечной концентрации 0.2%. При данной концентрации формируется максимальная зона лизиса (до 12 мм) с четко выраженной границей перехода. Выбранное значение рН среды, равное 7.3, находилось в диапазоне от 7.2 до 7.4, оптимальном для роста культуры В. anthracis (Бургасов П. Н, с соавт, 1970; Сибирская язва, 1975).

Разработанная однослойная казеиновая среда характеризуется рядом преимуществ: для визуализации активности не требуется обработки поверхности среды раствором ТХУ, как в случае с применяемой ранее двухслойной средой, что дает возможность проведения дальнейшего анализа отобранных клоновкроме того, данная среда эффективно обеспечивает рост В. anthracis и позволяет регистрировать активность небольших колоний и секторов.

Основное преимущество данной среды заключается в том, что с ее помощью возможно проводить массовый клональный анализ популяций штаммов возбудителя сибирской язвы по признаку протеолитической активности.

Помимо протеолитической активности на разработанной нами казеиновой среде также возможно регистрировать синтез желтого пигмента (протокатекуевой кислоты). Пигмент свободно диффундирует в агаровый слой и окрашивает колонию и агар вокруг колонии в светло желтый цвет.

Для определения гемолитической активности нами предложена модифицированная однослойная среда с добавлением взвеси эритроцитов барана, отмытых с помощью буферного раствора ASE (Leppla S.H., 1988). Данный буфер более эффективно смывает с поверхности эритроцитов холестерин, ингибирующий активность гемолизинов В. anthracis. Эритроциты, отмытые буфером ASE, более чувствительны к действию гемолизинов В. anthracis, по сравнению с эритроцитами, отмытыми физиологическим раствором. Проведенные модификации позволили не только упростить способ тестирования гемолитической активности возбудителя сибирской язвы, но и повысить эффективность определения этого признака.

Для регистрации пигментсорбирующей способности колоний В. anthracis, была разработана новая среда, основу которой составил L — агар, смешанный с водным раствором красителя конго красного в конечной концентрации 25 мкг/мл. Данная концентрация красителя не оказывает существенного ингибирующего действия на рост клеток и, в тоже время, позволяет четко дифференцировать сорбирующие и не-сорбирующие пигмент колоний. Среда проста в приготовлении и использовании, что дает возможность проводить быстрый, массовый скрининг популяций штаммов В. anthracis на способность к сорбции пигмента.

Таким образом, были разработаны и оптимизированы составы питательных сред для тестирования протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза и пигментсорбции возбудителя сибирской язвы. С помощью данных сред возможно проводить быстрый первичный массовый скрининг популяций штаммов В. anthracis по данному набору признаков.

Следующий этап настоящей работы был посвящен изучению характера популя-ционной изменчивости сибиреязвенного микроба по признаку протеолитической активности. С использованием однослойной казеиновой среды был проведен клональ-ный анализ популяционного состава восьми двухплазмидных штаммов В. anthracis различного происхождения, длительно хранившихся в споровом состоянии.

Изученные штаммы характеризуются значительной гетерогенностью по этому признаку. Доминирующая часть популяций штаммов представлена протеазопозитив-ными (Срг+) колониями (от 88% до 99%). Однако с высокой частотой (до 12%) выявляются колонии со значительным снижением или полным отсутствием способности к деградации казеина (Срг").

Для дальнейшего изучения популяционной изменчивости В. anthracis по признаку протеолитической активности был выбран вирулентный двухплазмидный штамм КМ85, обладающий типичным характером изменчивости по данному признаку.

Помимо протеолитической активности в отношении казеина, колонии также были протестировали на наличие альбуминолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза, пигментсорбции и спорообразования. Установлено, что клон с фенотипом Cpr+Apr+Ydp+Hly+CR+Spo+, выбранный в качестве исходного как представитель доминирующей части популяции штамма КМ85 и обозначенный как КМ86(5)/КМ85, диссоциирует с высокой частотой с образованием двух групп спонтанных мутантов. Спонтанные мутанты неспособные к деградации казеина (Срг"), характеризуются отсутствием альбуминолитической активности (Art"), гемолитической активности (Н1у"), не синтезировали желтый диффузный пигмент (Ydp") и слабо сорбируют краситель конго красный из среды роста (CR"). На L — агаре на 5 сутки роста колонии были средней величины, с выпуклой, шероховатой поверхностью, белого цвета, плотной консистенции. Эффективность образования спонтанных мутантов данного типа составляет 5.1×10″ 3.

Спонтанные мутанты с ярко выраженной протеолитической активностью в отношении казеина (Срг44″) в значительной степени деградируют альбумин (Арг++), ли-зируют эритроциты (Н1у+1, формируют прозрачные зоны лизиса на 2 сутки инкубации с проявлением зелено-коричневой окраски среды), синтезируют пигмент (Ydp+). Кроме того, эти спонтанные мутанты слабо сорбируют конго красный (CR") и не образуют жизнеспособных спор (Spo"). На L — агаре на 5 сутки формируются крупные, плоские, полупрозрачные колонии, желтоватого цвета, с блестящей поверхностью и ели.

•5 зистой консистенцией. Мутанты данного типа образуются с частотой 1.8×10″ .

В процессе дальнейшего изучения выделенных спонтанных мутантов В. anthracis с применением коэффициента корреляции рангов, предложенного Спирме-ном была установлена тесная корреляционная взаимосвязь между изменением проте-олитической активности в отношении казеина и выражением таких признаков как альбуминолитическая, гемолитическая активность, пигментсинтез и спорообразование. Полученные значения коэффициентов корреляции находятся в интервале между 0.5 и 0.7, что соответствует значительной степени взаимосвязи между признаками. Между признаком протеолитической активностью и пигментсорбирующей способностью сибиреязвенного микроба выявлена средняя сила связи.

Полученные данные могут свидетельствовать в пользу того, что генетические локусы, кодирующие эти признаки, расположены в непосредственной близости друг от друга. Не исключена вероятность организации данных генов в виде «острова пато-генности», хорошо известного для многих грам-отрицательных микроорганизмов.

Для установления влияния собственных плазмид pXOl и рХ02 В. anthracis на изменчивость по признаку протеолиза, были проведены эксперименты по элиминации плазмид из клеток микроба и сравнению частот образования спонтанных мутантов у полученных изогенных монои бесплазмидных производных. Показано, что удаление как токсинобразующей плазмиды pXOl, так и плазмиды капсулообразования рХ02 не приводит к статистически достоверным изменениям значений частот образования спонтанных мутантов по протеолитической активности.

Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии влияния со стороны плазмидных репликонов на уровень фенотипической экспрессии и частоту образования спонтанных мутантов с измененной способностью к деградации казеина, альбумина, а также к лизису эритроцитов, пигментсинтезу, пигментсорбции и спорообразованию.

С учетом предполагаемой взаимосвязи вышеназванного комплекса признаков В. anthracis с вирулентностью, следующей задачей настоящего исследования было определение уровня вирулентности выделенных спонтанных мутантов с различной про-теолитической активностью. В экспериментах, проведенных на беспородных белых мышах и морских свинках было установлено, что оба типа спонтанных мутаций приводят к снижению уровня вирулентности В. anthracis для лабораторных животных. В случае возникновения мутаций, приводящих к суперпродукции внеклеточных протеаз (Prt++), снижение вирулентности очевидно связано с утратой признака спорообразования (Spo"), коррелирующего с протеолитической активностью. Снижение вирулентности штаммов с другим типом мутаций, сопровождающихся утратой способности к протеолизу, происходит за счет изменения всего комплекса признаков протеолитической, гемолитической активности, пигментсинтеза и пигментсорбции. Приведенные результаты, очевидно, свидетельствуют в пользу того, что перечисленные характеристики вовлечены в развитие инфекционного процесса при сибирской язве.

Получив данные о характере изменчивости возбудителя сибирской язвы по признаку протеолиза и свойствах штаммов, отличающихся по протеолитической активности, мы провели работу по изучению состава внеклеточных протеаз спонтанного мутанта В. anthracis КМ86(1)/КМ85 в сравнении с исходным штаммом КМ86(5)/КМ85.

Анализ внеклеточных протеаз проводили с использованием метода определения активности протеолитических ферментов с азоказеином в качестве субстрата и методом зимографии после электрофоретического разделения протеаз в полиакриламид-ном геле, связанным с казеином (Proteolytic enzymes: ., 1990).

Было установлено, что культуральные фильтраты спонтанного мутанта КМ86(1)/КМ85 pf и родительского штамма КМ86(5)/КМ85 pf значительно различаются по уровню протеолитической активности в отношении азоказеина, по полипептидным спектрам внеклеточных белков и составу внеклеточных протеаз. Основная масса внеклеточных протеаз исследованных штаммов принадлежит к классу металло-протеаз (Са2± и 7п2±зависимых). Оптимум активности протеолитических ферментов культурального фильтрата штамма КМ86(5)/КМ85 pf находился в пределах значений рН от 7.5 до 8.0. Секретируемые протеазы штамма КМ86(1)/КМ85 pf характеризуются более широким диапазоном действия (рН 7.5−8.5) без ярко выраженного пика активности. По результатам сравнительного анализа, проведенного методом зимографии после электрофоретического разделения белков в ПААГе отмечено, что у спон.

75 тайного мутанта КМ86(1)/КМ85 р£, который отличается снижением вирулентности, отсутствует протеаза с молекулярной массой около 173 000 Да.

Этот факт позволяет высказать предположение о взаимосвязи генетического ло-куса, ответственного за экспрессию данной протеазы с генами, детерминирующими комплекс ассоциированных, одновременно изменяющихся признаков, имеющих отношение к вирулентности возбудителя сибирской язвы.

Таким образом, в результате проведенных исследований изучен характер и направленность популяционной изменчивости по признаку протеолитической активности и комплексу сопряженных с ним характеристик сибиреязвенного микроба: гемолитической активности, пигментсинтезу, пигментсорбции и спорообразованию. Установлено, что происходящие мутации приводят к снижению вирулентности сибиреязвенного микроба для лабораторных животных. Методом зимографии после электрофореза в ПААГе со связанным казеином охарактеризованы различия спектров внеклеточных протеаз спонтанного мутанта КМ86(1)/КМ85 рГ и родительского штамма КМ86(5)/КМ85 р£.

Новые данные о феномене изменчивости штаммов В. аМкгаЫя по протеолитической активности, разработанные в ходе выполнения работы среды для дифференциации клонов по признакам хромосомной детерминации, полученные штаммы, дефектные по синтезу внеклеточных протеаз, гемолизинов, способности к синтезу и сорбции пигментов и спорообразованию — могут быть использованы при проведении дальнейших исследований факторов вирулентности сибиреязвенного микроба, при конструировании продуцентов физиологически-значимых продуктов, создании диагностических препаратов и вакцинных штаммов.

Показать весь текст

Список литературы

  1. М. Бактериофаги /Пер. с англ. М.: Изд-во иностр. лит-ры, 1961. — 527 с.
  2. И.Г., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях М.: Медицина, 1962, — С. 85−93.
  3. Биосинтез микроорганизмами нуклеаз и протеаз /Под ред. A.A. Имшенецкого. -М.: «Наука», 1979.-294 с.
  4. П.Н., Рожков Г. И. Сибиреязвенная инфекция. М.: «Медицина», 1984. -201 с.
  5. П.Н., Черкасский Б. Л., Марчук Л. М., Щербак Ю. Ф. Сибирская язва. -М.: «Медицина», 1970. 124 с.
  6. К.В., Сучков Ю. Г., Щербанюк А. И., Вальков Б. Г. Статистическая оценка микробиологических показателей, основанных на отношении двух случайных величин //Проблемы особо опасных инф. Саратов, 1971. — Вып. 3 (19). — С. 142−148.
  7. Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. М., Медицина, 1985. -240с.
  8. Е.И. Некоторые молекулярно-биологические аспекты патогенности Bacillus anthracis //Проблемы особо опасных инф. Саратов, 1995. — С. 160−170.
  9. Е.И. Биологические и популяционные аспекты патогенности Bacillus anthracis: Автореферат дис. .док-pa мед. наук.- Ставрополь, 1997.- 45 с.
  10. Е.И., Солодовников Б. В., Цыганкова О. И. Изучение почвенных штаммов сибиреязвенного микроба //Совр. аспекты природной очаговости, эпид. ипроф. особо опасных инф. болезней: Тез. Докл. науч. Конф., Омск, октябрь 1993 г. Ставрополь, 1993. С. 197.
  11. Ицкович E. JL, Знаменская Л. В., Балабан Н. П., Ершова Т. А., Лещинская И. Б. Биосинтез щелочной внеклеточной протеиназы Bacillus intermedius //Микробиология.- 1995. Т 64, N 5. — С. 623 — 629.
  12. Г. Ф. Биометрия М.: «Высшая школа», 1980. — 293 с.
  13. Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование /Пер. с англ. -М.: Мир, 1984. 480 с.
  14. Н.И. Разработка экспериментальных подходов к генетическому анализу хромосомы возбудителя сибирской язвы: Автореферат дис. .канд. мед. наук, — Саратов, 1996.- 21 с.
  15. Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование М.: «Наука», 1981. — 286 с.
  16. Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами М.: «Наука», 1983.- 304 с.
  17. A.A. Экзопротеазная активность возбудителя сибирской язвы //Актуальн. вопр. проф. сибирской язвы: Тез. докл. XIII Пленарного заседания
  18. Межведомственной науч. метод, комиссии по борьбе с сибирской язвой, 23−24 октября 1990 г., г. Ташкент. Москва, 1990. — С. 63.
  19. A.A., Степанов A.C. Клональный анализ культур сибиреязвенного микроба на способность продукции экзопротеаз и гемолизинов //Метод, пособие по генетике возбудителя сибирской язвы. Саратов, 1991. — С. 28−30.
  20. П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение /Пер. с англ. JI.A. Остерман, A.JI. Остерман М.: «Мир», 1986. — 398 с.
  21. Сибирская язва /Под ред. проф. Гинсбурга H.H. М.: «Медицина», 1975. — 148 с.
  22. A.C. Разработка основ генетического анализа возбудителя сибирской язвы: Дис. док-pa мед. наук. Саратов, 1992. — 333 с.
  23. A.C. Разработка основ генетического анализа возбудителя сибирской язвы: Автореферат дис. .док-pa мед. наук.- Саратов, 1992.- 40 с.
  24. A.C., Пархоменко A.A. Разработка способа определения протеолитиче-ской активности Bacillus anthracis //Лаб. диагностика и генетика вирулентности возбудителей особо опасных инф. Саратов, 1990. — С. 122−126.
  25. Ю.Г., Дурихин К. В. Статистическая закономерность распределения бактериальных клеток возбудителей чумы и холеры в суспензиях и агаровых слоях //Проблемы особо опасных инф. Саратов, 1969. — Вып. 6. — С. 93−97.
  26. В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях М.: «Медицина», 1975. — 295 с.
  27. О.И., Буравцева Н. П. Некоторые данные по протеолитической активности штаммов возбудителя сибирской язвы //Особо опасные инф. на Кавказе: Тез. докл. 6-ой краевой науч. конф. Ставрополь, 1987ю — С. 249−250.
  28. Allured V.S., Case L.M., Leppla S.H., McKay D.B. Crystallization of the protective antigen protein of Bacillus anthracis //J. Biol. Chem. 1985. -Vol. 260, N 8. — P. 50 125 014.
  29. Anthrax: Memorandum from a WHO meeting //Bulletin of the world health organization. 1996. — Vol. 74, N 5. — P. 453−552.
  30. Arakawa S., Kuramitsu H.K. Cloning and sequence analysis of a chymotrypsinlike protease from Treponema denticola //Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, N 8. — P. 34 243 433.
  31. Arora N., Leppla S.H. Residues 1−254 of anthrax toxin lethal factor are sufficient to cause cellular uptake of fused polypeptides //J. Biol. Chem. 1993. — Vol. 268, N 5. — P. 3334−3341.
  32. Bachman B.J., Low K.B. Linkage map of Escherichia coli K12, edition 6 //Microbial. Rev. 1980. — Vol. 44, N 1. — P. 1 -56.
  33. Baillie L., Moir A., Manchee R. The expression of the protective antigen of Bacillus anthracis in Bacillus subtilis //J. Appl. Microbiol. 1998. — Vol. 84, N 5. — P. 741−746.
  34. Bartkus J.M., Leppla S.H. Transcriptional regulation of the protective antigen gene of Bacillus anthracis //Infect. Immun. 1989. — Vol. 57, N 8. — P. 2295−2300.
  35. Barnard J.P., Friedlander A.M. Vaccination against anthrax with attenuated recombinant strains of Bacillus anthracis that produce protective antigen //Infect. Immun. 1999. — Vol. 67, N 2. — P. 562−567.
  36. Beall F. A., Taylor M. J., Thorne C.B. Rapid lethal effect in rats of a third component found upon fractionating the toxin of Bacillus anthracis //J. Bacterid. 1962. — Vol. 83, N3.-P. 1274−1280.
  37. Biraboim H.C., Doly I. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA //Nucleic Acids Res. 1979. — Vol. 7. — P. 1513.
  38. Booth B.A., Boesman-Finkelstein M., Finkelstein R.A. Vibrio cholerae hemagglutinin/protease nick cholera enterotoxin //Infect. Immun. 1984. — Vol. 45. — P. 558−560.
  39. Boschwitz H., Milner Y., Keynan A., Halvorson H.O., Troll W. Effect of inhibitors of trypsin-like proteolitic enzymes on Bacillus cereus T spore germination //J. Bacteriol. -1983. Vol. 153, N 2. — P. 700−708.
  40. Bragg T.S., Robertson D.L. Nucleotide sequence and analysis of the lethal farcor gene (lef) from Bacillus anthracis //Gene. 1989. — Vol. 81. — P. 45−54.
  41. Brossier F., Sirard J.C., Guidi-Rontani C., Duflot E., Mock M. Functional analysis of the carboxy-terminal domain of Bacillus anthracis protective antigen //Infect. Immun. -1999. Vol. 67, N 2. — P. 964−967.
  42. Bruckner R., Shoseyov O., Doi R.H. Multiple active forms of a novel serine protease from Bacillus subtilis //Mol. Gen. Genetics. 1990. — Vol. 221, N 3. — P. 486−490.
  43. Cataldi A., Fouet A., Mock M. Regulation ofpag gene expression in Bacillus anthracis: use of a pag-lac Z transcriptional fusion //FEMS Microbiology Letters. 1992. — Vol. 98. — P. 89−94.
  44. Cataldi A, Labruyere E, Mock M. Construction and characterization of a protective antigen-deficient Bacillus anthracis strain //Mol. Microbiol. 1990. — Vol. 4, N 7. — P. 1111−1117.
  45. Cole M. F, Evans M, Fitzsimmons S, Johnson J, Pearce Ch, Sheridan M. J, Wientzen R, Bowden G. Pioneer oral Streptococci produce immunoglobulin A1 protease //Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, N 6. — P. 2165−2168.
  46. Coulson N. M, Fulop M, Titball R.W. Bacillus anthracis protective antigen expressed in Salmonella typhimurium SL 3261, affords protection against anthrax spore challenge //Vaccine. 1994. — Vol. 12, N. 15. — P. 1395−1341.
  47. Couturier M, Bex F, Bergquist P. L, Maas W.K. Identification and classification of bacterial plasmids //Microbiol. Rev. 1988. — Vol. 52. — P. 375−395.
  48. Dai Z, Sirard J.-C, Mock M, Koehler T.M. The atxA gene product activates transcription of the anthrax toxin genes and is essential for virulence //Mol. Microbiol. -1995.-Vol. 16, N6.-P. 1171−1181.
  49. Demerec M, Adelberg E. A, Clark A. J, Hartman P.E. A proposal for uniform nomenclature in bacterial genetics //Genetics. 1966. — Vol. 54. — P. 61−76.
  50. Escuyer V, Collier J.R. Anthrax protective antigen interacts with a specific receptor on the surface of CHO-K1 cells //Infect. Immun. 1991. — Vol. 59, N 10. — P. 3381−3386.
  51. Escuyer V, Duflot E, Sezer O, Danchin A, Mock M. Structural homology between virulence-associated bacterial adenylate cyclases //Gene. 1988. — Vol. 71. — P. 293−298.
  52. Etienne-Toumelin I, Sirard J.-C, Duflot E, Mock M, Fouet A. Characterization of the Bacillus anthracis S-layer: cloning and sequencing of the structural gene //J. Bacteriol. -1995. Vol. 177, N 3. — P. 614−620.
  53. Ezzell J. W, Abshire T.G. Immunological analysis of cell-associated antigens of Bacillus anthracis //Infect. Immun. 1988. — Vol. 56, N 2. — P. 349−356.
  54. Ezzell J. W, Abshire T.G. Serum protease cleavage of Bacillus anthracis protective antigen //J. Gen. Microbiol. 1992. — Vol. 138. — P. 543−549.
  55. Farchaus J.W., Ribot W.J., Downs M.B., Ezzell E.W. Purification and characterization of the major surface array protein from the avirulent Bacillus anthracis delta Sterne-1 //J. Bacteriol. 1995. — Vol. 177, N 9. — P. 2481−2489.
  56. Felmlee T., Pellett S., Welch R.A. Nucleotide sequence of an Escherichia coli chromosomal hemalysin // J. Bacteriol. 1985. — Vol. 163. — P. 94−105.
  57. Finkelstein R.A., Boesman-Finkelstein M., Holt P. Vibrio cholerae hemagglutinin/lectin/protease hydrolyzes fibronectin and ovomucin //Proc. Natl. Acad. Sci. 1983. — Vol. 80. — P. 1092−1095.
  58. Finlay B.B., Falkow S. Common themes in microbial pathogenicity //Microbiol. Rev. -1989.-Vol. 53.-P. 210−230.
  59. Fletcher H.M., Schenkein H.A., Macrina F.L. Cloning and characterization of a new protease gene (prtH) from Porphyromonas gingivalis //Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, N 10. — P. 4279−4286.
  60. Fouet A., Mesnage S., Tosi-Couture E., Gounon P., Mock M. Bacillus anthracis S-layer //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998.-P. 16.
  61. Friedlander A.M. Macrophages are sensitive to anthrax lethal toxin through an acid-dependent process //J. Biol. Chem. 1986. — Vol. 261, N 16. — P. 7123−7126.
  62. Fuchs H., Wallich R., Simon M.M., Kramer M.D. The outer surface protein A of the spirochete Borrelia burgdorferi is a plasmin (ogen) receptor IIProc. Natl. Acad. Sci. -1994. Vol. 91. — P. 12 594−12 598.
  63. Furba E.S. Nonproteolytic, avirulent Bacillus anthracis as a live vaccine //J. Bacteriol. -1966. Vol. 91, N 3. — P. 930−933.
  64. Glaser P., Ladant D., Sezer O., Pichot F., Ullmann A., Danchin A. The calmodulin-sensitive adenylate cyclase of Bordetella pertussis: cloning and expression in Escherichia colillMolec. Microbiol. 1988. — Vol. 2. — P. 19−30.
  65. Goguen J.D., Hoe N.P., Subrahmanyam B.K. Proteases and bacterial virulence: a view from the trenches //Infect. Agents. Dis. 1995. — Vol. 4. — P. 47−54.
  66. Gollakota K.G., Halvorson H.O. Biochemical changes occurring during sporulation of Bacillus cereus. Inhibition of sporulation by a-picolinic acid //J. Bacteriol. 1960. -Vol. 79, N 1. — P. 1−8.
  67. Gordon V.M., Klimpel K.R., Arora N., Henderson M.A., Leppla S.H. Proteolitic activation of bacterial toxins by eukaryotic cells is performed by furin and by additional cellular proteases //Infect. Immun. 1995. — Vol. 63, N 1. — P. 82−87.
  68. Gordon V.M., Leppla S.H. Proteolytic activation of bacterial toxins: role of bacterial and host call proteases //Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, N 2. — P. 000−000. (a-h)
  69. Gordon V.M., Rehemtulla A., Leppla S.H. A role for PACE4 in the proteolytic activation of anthrax toxin protective antigen //Infect. Immun. 1997. — Vol. 65, N 8. -P. 3370−3375.
  70. Green B.D., Battisti L., Koehler T.M., Thorne C.B., Ivins B.D. Demonstration of a capsule plasmid in Bacillus anthracis //Infect. Immun. 1985. — Vol. 49, N 2. — P. 291 297.
  71. Guidi-Rontani C., Pereira Y., Ruffle S., Sirard j.C., Weber-Levy M., Mock M. Identification and characterization of a germination operon on the virulence plasmid pXOl of Bacillus anthracis //Mol. Microbiol. 1999. — Vol. 33, N 2. — P. 407−414.
  72. Guidi-Rontani C., Weber-Levy M., Labruyere E., Mock M. Spatio-temporal dynamics of in vivo Bacillus anthracis germination in murine alveolar macrophages //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. -1998.-P. 49.
  73. Hacker J., Blum-Oehler G., Muhldorfer I., Tschape H. Pathogenicity islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbial evolution //Mol. Microbiol. 1997. -Vol. 23, N6.-P. 1089−1097.
  74. Hammond S.E., Hanna P.C. Lethal factor active-site mutations affect catalytic activity in vitro IIInfect. Immun. 1998. — Vol. 66, N 5. — P. 2374−2378.
  75. Hanna P.C., Acosta D., Collier R.J. On the role of macrophages in anthrax //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. — Vol. 90. — P. 10 198−10 201.
  76. Hanna P.C., Kochi S., Collier R.J. Biochemical and physiological changes induced by anthrax lethal toxin in J774 macrophage-like cells //Mol. Biol. Cell. 1992. — Vol. 3. — P. 1269−1277.
  77. Hanna P.C., Kruskal B.A., Ezekowitz R.A.B., Bloom B.R., Collier R.J. Role of macrophage oxidative burst in the action of anthrax lethal toxin //Mol. Med. 1994. -Vol. 1, N 1. — P. 7−18.
  78. Hase C.C., Finkelstein R.A. Bacterial extracellular zinc-containing metalloproteases //Microbiol. Rev. 1993. — Vol. 57. — P. 823−837.
  79. He X.-S., Bruckner R., Doi R.H. The protease genes of Bacillus subtilis //Res. Microbiol. 1991. — Vol. 142. — P. 797−803.
  80. Hee-Bok Oh, Young-Mia Park, Won-Keun Seong. Expression and secretion of Bacillus anthracis protective antigen in Bacillus brevis //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 64.
  81. Hornung J.M., Thorne C.B. Insertion mutations affecting pXOl-associated toxin production in Bacillus anthracis //Abstr. 91st Annul. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1991. -Vol. 98.-P. 98. Abstr. D-121.
  82. John W., Ezzell Jr. The capsule of B. anthracis //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 15.
  83. Kaspar R.L., Robertson D.L. Purification and physical analysis of Bacillus anthracis plasmids pXOl and pX02 //Biochemical and Biophysical Research Communications. -1987. Vol. 149, N 2. — P. 362−368.
  84. Kearney J.F., Shu F. Bacillus spore-specific antibodies //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 53.
  85. Kelleher P.J., Juliano R.G. Detection of proteases in polyacrylamide gels containing covalently bound substrates //Anal. Biochem. 1984. — Vol. 136. — P. 470−479.
  86. Killian M., Reinholdt J. Interference with IgA defence mechanisms by extracellular bacterial enzymes //In Medical microbiology, Easmon C.S.F., Jeljaszewics J. (Eds.). London: Academic Press. 1986. — Vol. 5. — P. 173−208.
  87. Klimpel K.R., Arora N., Leppla S.H. Anthrax toxin lethal factor has homology to the thermolisin-like proteases and displays proteolytic activity //Abstr. 93rd Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1993. — B-l 11. — P. 45.
  88. Klimpel K.R., Arora N., Leppla S.H. Anthrax toxin lethal factor contains a zinc metalloprotease consensus sequence which is required for lethal toxin activity //Mol. Microbiol. 1994. — Vol. 13, N 6. — P. 1093−1100.
  89. Kochi S.K., Schiavo G., Mock M., Montecucco C. Zinc content of the Bacillus anthracis lethal factor //FEMS Microbiology Letters. 1994. — Vol. 124. — P. 343−348.
  90. Koehler T.M., Collier R.J. Anthrax toxin protective antigen: low-pH-induced hydrophobicity and channel formation in liposomes //Mol. Microbiol. 1991. — Vol. 5, N6.-P. 1501−1506.
  91. Koehler T.M., Dai Z., Kaufman-Yarbray M. Regulation of the Bacillus anthracis protective antigen gene: C02 and trans-activate transcription from one of two promoters //J. Bacteriol. 1994. — Vol. 176, N 3. — P. 586−595.
  92. Koehler T.M., Pasha R., Williams R.P. Protocatechuic acid production by Bacillus anthracis //Abstr. 92nd Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1992. — B-125. — P. 46.
  93. Koehler T.M., Ruhfel R.E., Greem B.D., Thorne C.B. Plasmid-related differences in capsule production by Bacillus anthracis //Abst. Annu. Meet. Amer. Soc. Microbiol. 86th Annu. Meet. Washington D.C. 23−28th March 1986. H. 178. — P. 157.
  94. Koide Y., Nakamura A., Uozumi T., Beppu T. Cloning and sequencing of the major intracellular serine protease gene of Bacillus subtilis 111. Bacteriol. 1986. — Vol. 167, N l.-P. 110−116.
  95. Lantz M.S. Are bacterial proteases important virulence factors? HI. Periodont. Res. -1997.-Vol. 32.-P. 126−132.
  96. Lantz M.S., Allen R.D., Duck W., Blume J.L., Switalski L.M., Hook M. Identification of Porphyromonas gingivalis components that mediate its interactions with fibronectin //J. Bacteriol. 1991. — Vol. 173. — P. 4263−4270.
  97. Leppla S.H. Anthrax toxin edema factor: a bacterial adenylate cyclase that increases cyclin AMP concentrations in eukaryotic cells //Proc. Natl. Acad. Sci. US. 1982. -Vol. 79.-P. 3162−3166.
  98. Leppla S.H. Bacillus anthracis calmodulin-dependent adenylate cyclase: chemical and enzymatic propeties and interactions with eucaryotic cells //Adv. Cycl. Nucl. and Protein phosphorilat: Res. New York, 1984. Vol. 17. — P. 189−198.
  99. Leppla S.H. Agar plate methods for screening B. anthracis for mutants //Bacteriology Division. 1988. — Vol. 301. — P. 663−677.
  100. Leppla S.H. The anthrax toxins complex //In Sourcebook of Bacterial Protein Toxins, Alouf J. E, Freer J, (Eds.), Academic Press Limited, Newk, NY. 1991. — P. 277−302.
  101. Leppla S.H. Anthrax toxins //In Bacterial toxins and virulence factors in disease, Moss J, Iglewski B, Vaughan M, Tu A. T, (Eds.), New York, Basel, Hong Kong. 1995. -P. 543−572.
  102. Levisohn S, Aronson A.I. Regulation of extracellular protease production in Bacillus cereus //J. Bacteriol. 1967. — Vol. 93, N 3. — P. 1023−1030.
  103. Liddington R., Pannifer A., Hanna P., Leppla S., Collier R.J. Crystallographic studies of the anthrax lethal toxin //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 23.
  104. Little S.F., Leppla S.H., Cora E. Production and characterization of monoclonal antibodies to the protective antigen component of Bacillus anthracis toxin //Infect. Immun. 1988. — Vol. 56, N 7. — P. 1807−1813.
  105. Little S.F., Lowe J.R. Location of receptor-binding region of protective antigen from Bacillus anthracis //Biochemical and Biophysical Research Communications. 1991. -Vol. 180, N2.-P. 531−537.
  106. Lo R.Y.C., Strathdee C.A., Shewen P.E. Nucleotide sequence of the leukotoxin genes of Pasteur e lla haemolytica A1 //Infect. Immun. 1987. — Vol. 55. — P. 1987−1996.
  107. Lottenberg R., Minning-Wenz D., Boyle M.D.P. Capturing host plasmin (ogen): a common mechanism for invasive pathogens? //Trends. Microbiol. 1994. — Vol. 2. — P. 20−24.
  108. Makino S.-I., Sasakawa Ch., Uchida N., Terakado N., Yoshikawa M. Cloning and C02-dependent expression of the genetic region for encapsulation from Bacillus anthracis //Mol. Microbiol. 1988. — Vol. 2, N 3. — P. 371−376.
  109. Makino S.-I., Uchida N., Terakado N., Sasakawa Ch., Yoshikawa M. Molecular characterization and protein analysis of the cap region which is essential for encapsulation in Bacillus anthracis //J. Bacteriol. 1989. — Vol. 171. — P. 722−730.
  110. Maurelli A.T., Blackmon B., Curtiss R. Loss of pigmentation in Shigella flexneri 2a is correlated with loss of virulence and virulence-associated plasmid //Infect. Immun. -1984. Vol. 43, N 1. — P. 397−401.
  111. McBride B.W., Mogg A., Telfer J.L., Lever M.S., Miller J., Turnbull P.C., Baillie L. //Vaccine. 1998. — Vol. 16, N 8. — P. 810−817.
  112. Mekalason J J. Environmental signals controlling expression of virulence determinants in bacteria //J. Bacteriol. 1992. — Vol. 174. — P. 1−7.
  113. Meynell G.G. The biosynthesis of poly D-glutamic acid, the capsular material of Bacillus anthracis //J. Gen. Microbiol. 1966. — Vol. 43. — P. 119−138.
  114. Mikesell P., Ivins B.E., Ristroph J.D., Dreier Th.M. Evidence for plasmid-mediated toxin production in Bacillus anthracis //Infect. Immun. 1983. — Vol. 39, N 1. — P. 371 376.
  115. Miller J., McBride B.W., Manchee R.J., Moore P., Baillie L.W.J. Production and purification of recombinant protective antigen and protective efficacy against Bacillus anthracis //Letters in Applied Microbiology. 1998. — Vol. 26. — P. 56−60.
  116. Miller J., Petosa C., Liddington R.C., Baillie L.WJ. Crystal structure of recombinant protective antigen and comparison with the wildtype structure //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 62.
  117. Milne J.C., Collier R.J. pH-dependent permeabilization of the plasma membrane of mammalian cells by anthrax protective antigen //Mol. Microbiol. 1993. — Vol. 10. — P. 647−653.
  118. Milne J.C., Furlong D., Hanna Ph.C., Wall J.S., Collier RJ. Anthrax protective antigen forms oligomers during intoxication of mammalian cells //J. Biol. Chem. 1994. — Vol. 269.-P. 20 607−20 612.
  119. Mock M., Labruyere E., Glaser Ph., Danchin A., Ullmann A. Cloning and expression of the calmodulin-sensitive Bacillus anthracis adenylate cyclase in Escherichia coli //Gene. 1988. — Vol. 64. — P. 277−284.
  120. Moffat J.F., Black W.J., Tompkins L.S. Further molecular characterization of the cloned Legionella pneumophila zinc metalloprotease //Infect. Immun. 1994. — Vol. 62, N2.-P. 751−753.
  121. Molla A., Yamamoto T., Akaike T., Miyoshi S., Maeda H. Activation of Hageman factor and prekallikrein and generation of kinin by various microbial proteinases //J. Biol. Chem. 1989. — Vol. 264. — P. 10 589−10 594.
  122. Neely A.N., Miller R.G., Holder I.A. Proteolytic activity and fotal gram-negative sepsis in burned mice: effect of exogenous proteinase inhibition //Infect. Immun. -1994. Vol. 62, N 6. — P. 2158−2164.
  123. Novak J.M., Stein M.-P., Little S.F., Leppla S.H., Friedlander A.M. Functional characterization of protease-treated Bacillus anthracis protective antigen //J. Biol. Chem. 1992. — Vol. 267, N 24. — P. 17 186−17 193.
  124. O’Brien J., Friedlander A., Dreier T., Ezzell J., Leppla S. Effects of anthrax toxin components on human neutrophils //Infect. Immun. 1985. — Vol. 47. — P. 306−310.
  125. Park Y.-M., Seong W.-K., Oh H.-B. Monoclonal antibody against spore surface antigen of B. anthracis //3rd International Conference on Anthrax. 7−10th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 66.
  126. Payne S.M., Finkelstein R.A. Detection and differentiation of iron-responsive avirulent mutants on congo red agar //Infect. Immun. 1977. — Vol. 18, N 1. — P. 94−98.
  127. Paul R., Quinn C.P., Baillie L.W.J. The expression of the protective antigen of Bacillus anthracis from Bacillus brevis //3rd International Conference on Anthrax. 710th September 1998. Plymouth, England. 1998. — P. 70.
  128. Perella S., Scalzo S., Kochi S., Mock M., Popoff M.R. Immunological and functional comparison between Clostridium perfringens iota toxin, C. spiroforme toxin, and anthrax toxins //FEMS Microbiol. Letters. 1997. — Vol. 146. — P. 117−121.
  129. Petosa C., Collier R.J., Klimpel K.R., Leppla S.H., Liddington R.C. Crystal structure of the anthrax toxin protective antigen //Nature. 1997. — Vol. 385, N 6619. — P. 833 838.
  130. Pezard C., Weber M., Sirard J.-C., Berche P., Mock M. Protective immunity induced by Bacillus anthracis toxin-deficient strains //Infect. Immun. 1995. — Vol. 63, N 4. -P. 1369−1372.
  131. Phillips A.P., Ezzell J.W. Identification of Bacillus anthracis by polyclonal antibodies against extracted vegetative cell antigens //J. Appl. Bacteriol. 1989. — Vol. 66. — P. 419−432.
  132. Proteolytic enzymes: a practical approach/ Edited by RJ. Beynon, J. S, Bond IRL Press at Oxford University Press 1990. P. 259.
  133. Ristroph J.D., Ivins B.E. Elaboration of Bacillus anthracis antigen in new defined culture medium //Infect. Immun. 1989. — Vol. 39, N 1. — P. 483−486.
  134. Robertson D.L. Mapping and characterization of the Bacillus anthracis plasmids pXOl and pX02 //Inter. Workshop on anthrax. 11−13 april 1989. Winchester, England. 1989. — P. 58.
  135. Robertson D.L., Leppla, S.H. Molecular cloning and expression in Escherichia coli of the lethal factor gene of Bacillus anthracis //Gene. 1986. — Vol. 44. — P. 71−78.
  136. Robertson D.L., Tippetts M.T., Leppla S.H. Nucleotide sequence of the Bacillus anthracis edema factor gene (cya) — a calmodulin-dependent adenylate cyclase //Gene. -1988.-Vol. 73.-P. 363−371.
  137. Ruhfel R.E., Robillard N.I., Thorne C.B. Interspecies transduction of plasmids among B. anthracis, B. cereus and B. thuringiensis //J. Bacteriol. 1984. — Vol. 157, N 3. — P. 708−711.
  138. Ruppen M.E., Van Alstine G.L., Band L. Control of intracellular serine protease expression in Bacillus subtilis //J. Bacteriol. 1988. — Vol. 170, N 1. — P. 136−140.
  139. Sarath G., Motte R., Wagner F.W. Protease assay methods //In Proteolytic enzymes a practical approach, Beynon R.J., Bond J.S. (Eds.), Oxford University Press, Oxford, New York, Tokyo. 1990. — P. 25−55.
  140. Sastry K.J., Srivastava O.P., Millet J., Fitzjames P.C., Aronson A.I. Characterization of Bacillus subtilis mutants with a temperature-sensitive intracellular protease //J. Bacteriol. 1983. — Vol. 153, N 1. — P. 511−519.
  141. Schill W.B., Schumacher G.F.B. Radial diffusion in gel for micro determination of enzymes. I. Muramidase, «-amylase, DNase I, RNase A, acid phosphatase, and alkaline phosphatase //Anal. Biochem. 1972. — Vol. 46. — P. 502−533.
  142. Schumacher G.F.B., Schill W.B. Radial diffusion in gel for micro determination of enzymes. II. Plasminogen activator, elastase, and nonspecific proteases //Anal. Biochem. 1972. — Vol. 48. — P. 9−26.
  143. Sheehan S.N., Switzer R.L. Intracellular serine protease 1 of Bacillus subtilis is formed in vivo as on anprocessed, active protease in stationary cells //J. Bacteriol. -1990. Vol. 172. — P. 473−476.
  144. Shin S., Kim Y.B., Hur G.H. Involvement of phospholipase A2 activation in anthrax lethal toxin-induced cytotoxicity //Cell. Biol. Toxicol.- 1999. Vol. 15, N 1. — p. 1929.
  145. Siezen R.J., Leunissen J.A.M. Subtilases: the superfamily of subtilisin-like serine proteases //Ptotein Science. 1997. — Vol. 6. — P. 501−523.
  146. Singh Y., Chaudhery V.K., Leppla S.H. A deleted variant of Bacillus anthracis protective antigen is non-toxic and blocks anthrax toxin action in vivo //J. Biol. Chem. 1989. Vol. 264, N 32. — P. 19 103−19 107.
  147. Singh Y., Klimpel K.R., Quinn C.P., Chaudhary V.K., Leppla S.H. The carboxyl-terminal end of protective antigen is required for receptor binding and anthrax toxin activity //J. Biol. Chem. 1991. — Vol. 266, N 23. — P. 15 493−15 497.
  148. Singh Y, Klimpel K. R, Goel S, Swain P. K, Leppla S.H. Oligomerization of anthrax toxin protective antigen and binding of lethal factor during endocytic uptake into mammalian cells //Infect. Immun. 1999. — Vol. 67, N 4. — P. 1853−1859.
  149. Singh Y, Leppla S. H, Bhatnagar R, Friedlander A.M. Internalization and processing of Bacillus anthracis lethal toxin by toxin-sensitive and -resistant cells //J. Biol. Chem.- 1989. Vol. 264, N 19. — P. 11 099−11 102.
  150. Sirard J.-C, Mock M, Fouet A. The three Bacillus anthracis toxin genes are coordinately regulated by bicarbonate an temperature //J. Bacteriol. 1994. — Vol. 176. -P. 5188−5192.
  151. Sleytr U. B, Messner P, Pum D, Sara M. Crystalline bacterial cell surface layers //Mol. Microbiol. 1993. — Vol. 10. — P. 911−916.
  152. Sloma A, Ally A, Ally D, Pero J. Gene encoding a minor extracellular protease in Bacillus subtilis IIJ. Bacteriol. 1988. — Vol. 170, N 12. — P. 5557−5563.
  153. Sloma A, Rudolph C. F, Rufo G. A, Jr., Sullivan B. J, Theriault K. A, Ally D, Pero J. Gene encoding a novel extracellular metalloprotease in Bacillus subtilis //J. Bacteriol.- 1990. Vol. 172, N 2. — P. 1024−1029.
  154. Sloma A, Rufo G. A, Jr., Rudolph C. F, Sullivan B. J, Theriault K. A, Pero J. Bacillopeptidase F of Bacillus subtilis: purification of the protein and cloning of the gene //J. Bacteriol. 1990. — Vol. 172, N 3. — P. 1470−1477.
  155. Smith H. L, Jr., Goodner K. Detection of bacterial gelatinases by gelatin-agar plate methods //J. Bacteriol. 1958. — Vol. 76. — P. 662−665.
  156. Smith H, Keppier J. Observation on experimental anthrax: demonstration of a specific lethal factor produced in vivo by Bacillus anthracis //Nature. 1954. — Vol. 173. — P. 689−690.
  157. Smith H, Stoner H.B. Anthrax toxin complex IIFed. Proc. 1967. — Vol. 26. — P. 15 541 557.
  158. Sodeinde O.A., Subrahmanyam Y.V.B.K., Stark K., Quan T., Bao Y., Goguen J.D. A surface protease and the invasive character of plague //Science 1992. — Vol. 258. — P. 1004−1007.
  159. Sokol P.A., Ohman D.E., Igleeski B.H. A more sensitive plate assay for detection of protease production by Pseudomonas aeruginosa //J. Clin. Microbiol. 1979. — Vol. 9. -P. 583−540.
  160. Sorsa T., Ingman T., Suomalainen K., et al. Identification of proteases from periodontopathogenic bacteria as activators of latent human neutrophil and fibroblast type interstitial collagenases //Infect. Immun. 1992. — Vol. 60. — P. 4491−4495.
  161. Srivastava O.P., Aronson A.I. Isolation and characterization of a unique protease from sporulation cells of Bacillus subtilis //Arch. Microbiol. 1981. — Vol. 129. — P. 227 232.
  162. Stahl M.L., Ferrari E. Replacement of the Bacillus subtilis subtilisin structural gene with an in vitro-derived deletion mutation //J. Bacteriol. 1984. — Vol. 158, N 2. — P. 411−418.
  163. Stepanov A.S., Klimpel K.R., Leppla S.H. Extracellular proteases in Bacillus anthracis //Abstr. 95th Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1995. — B-345. — P. 229.
  164. Stepanov A.S., Leppla S.H. Macrophages are killed by intracellular growth of Bacillus anthracis //Abstr. 95th Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1995. B-335. — P. 224.
  165. Stepanov A.S., Mikshis N., Bolotnikova M. Chromosome borne differences in Bacillus anthracis for mice and guinea pigs //Abstr. 95th Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. — 1995. — B-331. — P. 223.
  166. Stretton S., Goodman A.E. Carbon dioxide as a regulator of gene expression in microorganisms //Antonie Van Leeuwenhoek International Journal of General and Molecular Microbiology 1998. — Vol. 73, N 1. — P. 79−85.
  167. Surgalla M.J., Beesley E.D. Congo red-agar plating medium for detection pigmentation in Pasteurellapestis //Appl. Microbiol. 1969. — Vol. 18. — P. 834−837.
  168. Suter S. The role of bacterial proteases in the pathogenesis of cystic fibrosis //Am. J. Respir. Crit. Care. Met. 1994. — Vol. 150. — P. S118-S122.
  169. Tippetts M.T., Robertson D.L. Molecular cloning and expression of the Bacillus anthracis edema factor toxin gene: a calmodulin-dependent adenylate cyclase //J. Bacteriol. 1988. — Vol. 170, N 5. — P. 2263−2266.
  170. Thorne C.B. Biochemical properties of virulent and avirulent strains of Bacillus anthracis //Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1960. — Vol. 88. — P. 1024−1033.
  171. Thorne C.B. Transduction in Bacillus cereus and Bacillus anthracis //J. Virol. 1968. -Vol. 2.-N7.-P. 657−662.
  172. Thorne C.B. Genetics of Bacillus anthracis //In Leive L. (Ed.). Microbiology-1985. Amer. Soc. Microbiol., Washington D.C. 1985. — P. 56−62.
  173. Thorne C.B. Genetic and physiological studies of Bacillus anthracis related to development of an improved vaccine //Annu. Progr. Rep. Univ. Mass. 1989. — P. 158.
  174. Toma S., Del Bue M., Pirola A., Grandi G. nprRl and nprR2 regulatory regions for neutral protease expression in Bacillus subtilis //J. Bacteriol. 1986. — Vol. 167, N 2. -P. 740−743.
  175. Turnbull P.C.B. Thoroughly modern anthrax //Abstr. Hyg. Trop. Dis. 1986. — Vol. 61, N 9. — P. R1-R13.
  176. Turnbull P.C.B., Leppla S.H., Broster M.G., Quinn C.P., Melling J. Antibodies to anthrax toxin in humans and guinea pigs and their relevance to protective immunity //Med. Microbiol. Immunol. 1988. — Vol. 177. — P. 293−303.
  177. Uchida I., Hashimoto K., Makino S.-I., Sasakawa C., Yoshikawa M., Terakado N. Restriction map of a capsule plasmid of Bacillus anthracis //Plasmid. 1987. Vol. 18. -P. 178−181.
  178. Uchida I., Hashimoto K., Terakado N. Virulence and immunogenicity in experimental animals of Bacillus anthracis strains harbouring or lacking 110 MDa and 60 MDa plasmids //J. Gen. Microbiol. 1986. — Vol. 132. — P. 557−559.
  179. Uchida I., Hornung J.M., Thorne C.B., Klimpel K.R., Leppla S.H. Cloning and characterization of a gene whose product is a trans-activator of anthrax toxin synthesis //J. Bacteriol. 1993. — Vol. 175, N 17. — P. 5329−5338.
  180. Uchida I., Sekizaki T., Hashimoto K., Terakado N. Association of the encapsulation of Bacillus anthracis which a 60 megadalton plasmid //J. Gen. Microbiol. 1985. — Vol. 131. — P. 363−367.
  181. Ullberg M., Kronvall G., Karlsson I., Wiman B. Receptors for human plasminogen on gram negative bacteria //Infect. Immun. 1990. — Vol. 58. — P. 21−25.
  182. Varughese M., Teixeira A.V., Liu S., Leppla S.H. Identification of a receptor-binding region within domain 4 of the protective antigen component of anthrax toxin //Infect. Immun. 1999. — Vol. 67, N 4. — P. 1860−1865.
  183. Vodkin M.H., Leppla S.H. Cloning of the protective antigen gene of Bacillus anthracis //Cell. 1983. — Vol. 34. — P. 693−697.
  184. Vietri N.J., Marrero R., Hoover T.A., Welkos S.L. Identification and characterization of a /raws-activator involved in the regulation of encapsulation by Bacillus anthracis //Gene. 1995. — Vol. 152. — P. 1−9.
  185. Wandersman C. Secretion, processing and activation of bacterial extracellular proteases //Mol. Microbiol. 1989. — Vol. 3, N 12. — P. 1825−1831.
  186. Wang X.M., Wattiez R., Brossier F., Mock M., Falmagne P., Ruysschaert J.M., Cabiaux V. Use of a photoactivatable lipid to probe the topology of PA63 of Bacillus anthracis in lipid membranes //Eur. J. Biochem. 1998. — Vol. 256, N 1. — P. 179−183.
  187. Watson J., Manchee R.J. Spore coat proteins of Bacillus anthracis //Proc. Inter. Workshop on anthrax. Winchester, England, April 11−13, 1989. Salisbury Med. Bull., P.C.B. Turnbull, Ed. 1990. — N. 68. — Spec. Spit. — P. 102.
  188. Welkos S.L. Plasmid-associated virulence factors of non-toxigenic (pXOl-) Bacillus anthracis //Microbiol. Pathogenesis. 1991. — Vol. 10. — P. 183−198.
  189. Welkos S.L., Friedlander A.M. Comparative safety and efficacy against Bacillus anthracis of protective antigen and live vaccines in mice //Microbial. Pathogenesis. -1988.-Vol. 5.-P. 127−139.
  190. Welkos S.L., Ivins B. Plasmid pX02-associated differences in virulence of Bacillus anthracis strains Vollum IB and Ames //Abstr. 91st Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. -1991.-P. 75.
  191. Welkos S.L., Lowe J.R., Eden-McCutchan F., Vodkin M., Leppla S.H., Schmidt J.J. Sequence and analysis of the DNA encoding protective antigen of Bacillus anthracis //Gene. 1988. — Vol. 69. — P. 287−300.
  192. Wesche J., Elliott J.L., Falnes P.O., Olsnes S., Collier R.J. Characterization of membrane translocation by anthrax protective antigen //Biochem. 1998. — Vol. 37, N 45.-P. 15 737−15 746.
  193. Wong S.-L., Doi R.H. Determination of the signal peptide cleavage sate in the preprosubtilisin of Bacillus subtilis //J. Biol. Chem. 1986. — Vol. 261. — P. 1 017 610 181.
  194. Wong S.-L., Doi R.H., Band L. Use of the Bacillus subtilis subtilisin signal peptide for efficient secretion of TEM /^-lactamase during growth //J. Bacteriol. 1986. — Vol. 168, N2.-P. 1005−1009.
  195. Worsham P.L., Ivins B.E., Sowers M.R. Virulence studies of Bacillus anthracis Congo red mutants //Abstr. 92nd Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1992. — B-337. — P. 82.
  196. Worsham P.L., Sowers M.R. Resistance of Bacillus anthracis to cationic proteins //Abstr. 93rd Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol. 1993. — B-l 13. — P. 46.
  197. Zhao J., Milne J.C., Collier R.J. Effect of anthrax toxin’s lethal factor on ion channels formed by the protective antigen //J. Biol. Chem. 1995. — Vol. 270, N 31. — P. 18 626
Заполнить форму текущей работой

На отлично!