Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Исследование синтеза и стабильности амилолитических ферментов мицелиальным грибом Aspergillus niger штамм Л-4

Диссертация: Исследование синтеза и стабильности амилолитических ферментов мицелиальным грибом Aspergillus niger штамм Л-4
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Этим ферментам посвящено множество работ, но такие их свойства, как скорость секреции во внеклеточное пространство, стабильность и механизмы распада внутри и вне клетки, а также сравнительная оценка нативных и индуцированных субстратом амилолитических ферментов до сих пор в литературе не описаны. Подобные исследования имеют большое теоретическое значение и, при этом, практически важны, так как… Читать ещё >

Содержание

  • 1. Обзор литературы
    • 1. 1. Особенности энергетического обмена аспергиллов
    • 1. 2. Характеристика и роль амилолитических ферментов в энергетическом обмене аспергиллов
    • 1. 3. Молекулярно-генетические и биохимические аспекты синтеза амилолитических ферментов
    • 1. 4. Структура и функции грибных амилаз
    • 1. 5. Значение амилаз в промышленности и медицине

Исследование синтеза и стабильности амилолитических ферментов мицелиальным грибом Aspergillus niger штамм Л-4 (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность темы

В настоящее время в пищевой биотехнологии одно из первых мест занимает производство лимонной кислоты из различных сырьевых источников. Ранее традиционно в качестве таковых использовали сахарозу или мелассу, однако в настоящее время наметился переход к использованию недорогого и технологичного крахмалсодержащего сырья.

Лимонная кислота (цитрат) синтезируется и используется в митохондриях в качестве энергетического субстрата. Кроме того, она играет существенную роль в образовании цитозольного ацетил-КоА.

Микробные клетки, как и клетки растений и животных, в физиологических условиях не синтезируют избытки метаболитов. Однако, изменение условий культивирования или соотношения индукции /репрессии генов в геноме клетки приводит к накоплению ряда метаболитов не только не вовлекающихся в реакции обмена веществ, но и мешающие нормальной жизнедеятельности. Клетки стараются избавиться от избытка такого рода метаболитов и элиминировать их в экстрацеллюлярное пространство.

Этот процесс, называемый сверхсинтезом того или иного метаболита, широко используется в биотехнологии для получения целевых продуктов, имеющих промышленное значение. К таким продуктам относится, в частности, лимонная кислота, получаемая в настоящее время с помощью мутантных штаммов грибов Aspergillus niger.

Продуценты лимонной кислоты существенно отличаются от исходных, нативных штаммов по генетическим, молекулярно-биологическим и биохимическим характеристикам и, прежде всего по функционированию цитрат-синтезирующей и цитратэлиминирующей систем. Во ВНИИ пищевых ароматизаторов, кислот и красителей РАСХН путем мутагенеза и вегетативной гибридизации был получен ряд штаммов Aspergillus niger — продуцентов лимонной кислоты, в том числе и промышленный штамм JI4.

При инкубировании продуцента на среде с сахарозой или мелассой глюкоза свободно проходит в клетку и вовлекается в процесс гликолиза. Иная картина наблюдается при переходе на среду с крахмалом, который не способен преодолеть клеточную мембрану.

Для его конверсии продуцентом в лимонную кислоту происходит экспрессия амилолитических ферментов — альфаи глюкоамилаз, которые сек-ретируются во внеклеточное пространство и гидролизуют крахмал до моно-и олигосахаридов. Альфа-амилаза (эндофермент) гидролизует внутренние гликозидные связи полисахаридной цепи, приводя к образованию молекул олигосахаридов различной длиныглюкоамилаза (экзофермент) — отщепляет моносахариды от конца углеводного полимера, в результате чего выделяется, глюкоза.

Этим ферментам посвящено множество работ, но такие их свойства, как скорость секреции во внеклеточное пространство, стабильность и механизмы распада внутри и вне клетки, а также сравнительная оценка нативных и индуцированных субстратом амилолитических ферментов до сих пор в литературе не описаны. Подобные исследования имеют большое теоретическое значение и, при этом, практически важны, так как позволяют осуществлять мониторинг жизнедеятельности продуцента и его биосинтетической способности.

Целью нашей работы было изучение механизмов синтеза и контролируемого распада внутриклеточных и секреторных глюкоамилазы и альфа-амилазы, скорость их секреции во внеклеточное пространство, а также влияние субстрата на индукцию синтеза этих ферментов. В рамках этой цели были сформулированы следующие задачи:

1) Изучить закономерности изменения активности альфа и глюкоамилаз в процессе культивирования гриба-продуцента.

2) Получить высокоочищенные нативные и меченые тритием амилолитиче-ские ферменты исследуемого штамма, а также моновалентные антитела к ним.

3) Определить количественные характеристики синтеза и распада амилоли-тических ферментов in vivo, а также механизмы и скорость их секреции во внеклеточное пространство.

4) Провести сравнение количественных показателей кинетики и обмена внутриклеточной и секреторной альфаи глюкоамилаз.

5) Изучить закономерности индукции синтеза глюкоамилазы основным субстратом.

Положения, выносимые на защиту.

1. Исследуемая глюкоамилаза легко выделяется из смеси с другими белками путем препаративного электрофореза в ПААГ с сохранением ферментативной активности.

2. Аминокислотный состав и молекулярная масса глюкоамилазы промышленного штамма JI4 мицеллиального гриба Aspergillus niger существенно отличаются от таковых для фермента из аналогичных природных штаммов.

3. Кинетические свойства и параметры метаболизма исследованных секреторной и внутриклеточной глюкоамилаз различны, что позволяет говорить об их биологической самостоятельности.

4. Синтез как секреторной, так и внутриклеточной глюкоамилаз значительно возрастает при добавлении в питательную среду раствора крахмала.

Научная новизна полученных результатов.

— Впервые дана всесторонняя характеристика метаболизма амилолитических ферментов, участвующих в формировании энергетического потенциала гриба.

Aspergillus niger.

— Разработан новый, эффективный лабораторный метод получения гомогенной глюкоамилазы при помощи препаративного электрофореза в ПААГ. -Впервые исследованы кинетические параметры внеклеточной и внутриклеточной глюкоамилаз, проведена их сравнительная характеристика. -Установлен факт индукции синтеза глюкоамилазы под действием ее основного субстрата — крахмала. Определены количественные показатели этого процесса.

— Впервые для данного промышленного штамма определен аминокислотный состав секреторных альфаи глюкоамилаз. Научно — Практическое значение.

Теоретические аспекты работы связаны, в первую очередь с исследованием метаболизма амилолитических ферментов в Aspergillus niger. Результаты исследования дополняют существующие представления о механизмах углеводного обмена грибов.

Практическая значимость работы определятся возможностью контроля синтеза ферментов связанных с получением одного из наиболее ценных продуктов пищевой биотехнологии — лимонной кислоты. Личный вклад соискателя.

Соискателем были получены гомогенная глюкоамилаза и антитела к ней. Проведена сравнительная оценка кинетических параметров внутриклеточных и секреторных форм амилолитических ферментов, оценка синтеза, стабильности и скоростей секреции альфаи глюкоамилаз в экстрацеллюлярное пространство. В первые достоверно установлен эффект индукции глюкоамилазы крахмалом. Апробация работы.

Часть результатов были доложены на конференции-школе «Формирование конкурентоспособности молодых ученых» (Санкт-Петербург — Пушкин, 26 октября 2006 года).

Структура и объем работы. Текст диссертации изложен на 93 страницах, иллюстрирован 8 таблицами, 31 рисунком. Диссертация включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, экспериментальных данных, их обсуждение, выводов и списка литературы, содержащего 122 наименований работ отечественных и зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ:

1. Разработан новый метод выделения глюкоамилазы из плесневого гриба А. niger, позволяющий в две стадии получить гомогенный фермент с удельной активностью 685 ед/мг ферментативного белка.

2. Глюкоамилаза представлена двумя молекулярными формами с различной электрофоретической подвижностьюоптимум рН гомогенного фермента найден в интервале 4,5−4,7, оптимум температуры — при 50−51°С.

3. Установлен факт индукции синтеза глюкоамилазы под действием крахмала. Содержание в питательной среде 8,5% крахмала приводило к повышению концентрации фермента почти на два порядка по сравнению с контролем.

4. Изучены синтез и стабильность глюкоамилазы внутри грибной клетки, а также количественные характеристики секреции и стабильность ее во внеклеточном пространстве. Было установлено:

— скорость распада внеклеточной глюкоамилазы выше, чем у внутриклеточной в 4,8 раза;

— время полуобновления внеклеточной глюкоамилазы меньше, чем у внутриклеточной в 4,5 раза.

— содержание фермента внутри клетки — 8 мкг/млвне ее — 83,3 мкг/мл.

5. Отличие синтеза и стабильности внутрии внеклеточной глюкоамилазы обусловлены различной интенсивностью амилолитического катализа, а также значительно большим протеолитическим потенциалом вне клетки.

6. Внутриклеточные формы альфа и глюгоамилаз не являются остаточными продуктами транзита во внеклеточное пространство, а представляет собой самостоятельные внутриклеточные белки.

В рамках данной работы были сделаны следующие публикации:

1. Исследование кинетических и каталитических свойств глюкоамилазы, продуцируемой штаммом Aspergillus niger./ Шарова Н. Ю. Кабанов.

A.В.//Сборник тезисов конференции-школы «Формирование конкурентоспособности молодых ученых» (Санкт-Петербург — Пушкин, 2006 год).

2. Амилолитические ферменты гриба Aspergillus niger: выделение и свойства./ Шарова Н. Ю., Никифорова Т. А., Кабанов А. В., Комов.

B.П. //Хранение и переработка сельхозсырья. 2006, № 3, с. 42−44.

3. Синтез и стабильность альфа-амилазы из плесневого гриба Aspergillus niger/ Никифорова Т. А., Шарова Н. Ю., Комов В. П., Кабанов А. В. // Вестник Российской Академии Сельскохозяйственных Наук, 2007, № 1. с. 56−58.

4. Теоретические аспекты синтеза альфа-амилазы мицелиальным грибом-кислотообразователем A. niger/ Никифорова Т. А Шарова Н. Ю Комов В. П. Кабанов А.В.// Хранение и переработка сельхозсырья, 2008, № 8. с. 59−61.

Заключение

.

В работе были исследованы амилолитические ферменты из генетически модифицированного штамма гриба Aspergillus niger. Полученный суперпродуцент лимонной кислоты был внедрен в промышленное производство, а разработчики из ВНИИПАКК РАСХН получили Государственную премию за данную работу. При культивировании на сахарозе штамма гриба Aspergillus niger конститутивные амилазы не играли существенно роли в метаболизме гриба и синтезе лимонной кислоты и синтезировались в незначительном количестве. При переходе на крахмал, а это экономически целесообразно, роль амилаз существенно возрастает. Индуцибельные альфаи глюкоамилазы гидролизуют крахмал до глюкозы, которая проникает в клетку и вовлекается в окислительные процессы, в результате которых образуются макроэрги и метаболиты, в том числе и лимонная кислота. В работе получена новая информация об индукции синтеза амилаз (более чем на два порядка), а также о существенных различиях структур и функций ин-дуцибельных амилаз из генетически модифицированного гриба Aspergillus niger штамм JI4 по сравнению с природными штаммами.

При планировании и выполнении диссертационной работы учитывалось, что во-первых амилазы могут быть маркерами биосинтетической способности промышленного штамма JI-4 и, во-вторых результаты диссертации могут быть внедрены в производственную практику. Были выбраны такие характеристики ферментов, как синтез, скорость секреции во внеклеточное пространство стабильность и контролируемый распад in vivo. Именно эти параметры определяют пул глюкозы в грибной клетке и, как следствие, синтез лимонной кислоты — основного продукта пищевой биотехнологии.

В процессе функционирования или хранения штаммов-продуцентов зачастую происходят изменения экспрессии рабочих генов, а также другие мо-лекулярно-биологические или биохимические события, приводящие к уменьшению выхода целевого продукта. Идентификация такого рода изменений представляет большой интерес для генетики и молекулярной биологии так как изучение данных механизмов является основанием для мониторинга соответствующих биотехнологических процессов.

Уменьшение скорости секреции амилолитических ферментов в экстрацеллю-лярное пространство является следствием целого ряда биохимических событий, в частности, снижением экспрессии соответствующих генов и ферментативных белков, их фолдинга, и транспорта вне клетки. Уменьшение времени «полужизни» функционирующих ферментов обусловлено изменением протеолитического потенциала грибной клетки или же связано с режимом каталитического действия изучаемых ферментов. В любом случае разработанные нами методы могут быть использованы в качестве мониторинга продуцентов лимонной или других органических кислот и основанием для более углубленной диагностики состояния данных штаммов.

Что касается внутриклеточных амилолитических ферментов, то их роль в оценке сверх синтеза целевых продуктов маловероятна. Нами было предположено, что внутриклеточная глюкоамилаза необходима для гидролиза попадающих в клетку олигосахаридов, являющихся продуктами неполного гидролиза крахмала вне клетки. В литературе не найдено данных о функциональной значимости этого фермента, внутри клетки, следовательно есть основания для дальнейших исследований в этой области.

Показать весь текст

Список литературы

  1. В.Г., Ковалева Т. А., Кожокина О. М. и др. Компьютерный анализ пространственной структуры некоторых гидролитических фер-ментов//Биохимия, 2005, т. 70, вып. 10, с. 1318−1327.
  2. В.П., Шведова В. Н. Биохимия: Учебник для вузов.- М.: Дрофа, 2004.- 640 с.
  3. И.П. Амилазы микроорганизмов. Киев: Наукова Думка, 1987.
  4. И.М. Технология ферментных препаратов. М.: Пищевая Промышленность, 1975.
  5. И.М., Кривова А.Ю.Технология микробных ферментных препаратов. М.: Издательство Элевар, 2000, 512 с.
  6. Н.А. Амилолитические ферменты в пищевой промышленности. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984.
  7. Иммобилизованные ферменты: современное состояние и перспективы/Под ред. Березина И. В., Антонова В. К., Мартинека К.- М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976.- 358 с.
  8. B.C. Совещание по применению ферментных препара-тов//Фермент. и спиртовая пром-ность.-1983.- № 7.- С.41−43.
  9. Г. И. Грибные и бактериальные амилазы. Тбилиси: 1984.
  10. Ю.Ковалева Т. А. О механизме действия и строении активного центраглюкоамилазы//Вестник ВГУ. Серия химия, биология. 2000. с. 104−107.
  11. П.Ковалева Т. А., Башарина О. В., Селеменев В.Ф.//Кислотно-основной и температурный гомеостаз: физиология, биохимия и клиника. 1991. Сыктывкар.- с. 37−42.
  12. Т.А., Кожохина О. М., Битюцкая JI.A., Меньшикова Т. Г. Исследование процесса термической инактивации глюкоамила-зы//Вестник ВГУ. Серия химия, биология, фармация.2003, № 1, с. 57−60.
  13. З.Ковалева Т.А.//Биофизика, 2000. Т. 45. С. 439−444.
  14. Т.А. Производство сахаристых продуктов из крахмалсодержа-щего сырья с применением ферментов.- М.: ЦНИИТЭпищепром, 1978.472 с.
  15. Д.Б., Доморникова Т. А., Паценкер Е. С. и др. Действие иммобилизованных препаратов амилаз и протеаз на измельченный яч-мень//Пищ. пром-ность.- 1981.-109, № 3.- С. 45−46.
  16. М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. Т. 2.- 14-е изд., переработ., исп. и доп.- М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2000.- с. 115.
  17. Н.В. Автореферат кандидатской диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Санкт-Петербург, 1999.
  18. Номенклатура ферментов/Под ред. Браунштейна А.Е.- М.: ВИНИТИ, 1979, 320 с.
  19. Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофо-ретическими, иммуноэлектрофоретическими и радиоизотопными методами. М.: «Наука», 1983.- с. 124−127.
  20. С.И. Амилолитические ферменты и их роль в пищевой промышленности.- М.: Наука, 1964, с. 158−169
  21. А.П., Полыгалина Г. В. Методы определения активности гидролитических ферментов.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981.-288 с.
  22. А.Н., Сергеев В. Р., Фирсов Л. М. // Биохимия. 1989. Т. 54. Вып. 10. С. 1725−1731.
  23. Л.С., Жданова Л. А. Динамика гидролиза ячменного бета-глюкана под действием различных ферментных препаратов//Прикл. биохимия и микробиология.- 1974.- 10, № 3.- С. 460−465.
  24. А.С. Ферменты (основы химии и технологии).- Киев: Техника, 1971.-358 с.
  25. А.С., Галич И. П. Биология и технический прогресс. Настоящее и будущее.- Киев: Наукова Думка, 1976, 233 с.
  26. А.Н. Биокатализ и биокатализаторы: Исторический очерк.- М.: Наука, 1971, 196 с.
  27. Н.Ю., Мушникова Л. И., Позднякова Т. А., Никифорова Т. А. Пат. РФ № 2 215 036, МПК С12Р7/48, C12N1/14, 9/28, 9/34// (C12N1/14, C12R1:685). Способ получения лимонной кислоты. Заявлен 23.02.2001, опубл. 27.10.2003, Бюл. № 30.
  28. Н.Ю., Мушникова JI.H., Кулёв Д. Х., Зенькевич В. Б., Чиванов В. Н., Старевский А. В. Пат. № 2 233 882 РФ, МПК7 C12N/48. Способ получения лимонной кислоты заявл. 05.11.2001, опубл. 10.08.2004, Бюл. № 22.
  29. Akoh С.С., Chang S.W., Lee G.C., Shaw J.F.//J. Agric. Food Chem., 2008, 56, 10 445−10 451.
  30. Alazard D., Raimbault M. Comparative study of amylolytic enzymes production by Aspergillus niger in liquid and solid state cultivation. European Journal of Applied Microbiology and Biotechnology, 1981, 12:113−117.
  31. Aleshin A., Firsov L., Harris E., and Honzatko R.//Biochem., 1993. 32.1618−1626.
  32. Aleshin A.E., Hoffinan C., Firsov L.M. et al.//J. Mol. Biol. 1994. V. 238. P. 575−591.
  33. Archer D.B., Mackenzie D.A., Jeenes D.J., Roberts I.N.//Biotechnol. Lett. 1992, 14: 357−362.
  34. Arias I.M., Doile D, Shimke R. Studies of endoplasmic reticulum of rat liver// J. Biol. Chem. 1969, № 12, p. 3303−3315.
  35. Ashikari Т., Nakamura N., Tanaka Y. et. al. //Arg. Biol. Chem. 1986. Vol. 50(4). P. 957−964.
  36. Atia K.S., Ismail S.A., El-Arnaouty M.B., Dessouki A.M. //Biotechnol. Prog, 2003, vol. 19, 853−857.
  37. Beech S.C. Acetone-butanol fermentation of starches.//Appl. Microbiol, 1953,2: 85−95.
  38. Belshaw N. J, Williamson G. //FEBS Lett. 1990, 269, 350−353.
  39. Bennetzen J. L, Hall B.D.// J. Biol. Chem, 1982, 257, 3018−3025.
  40. Berka R. M, Ward M, Wilson L. J, Hayenga K. J, Kodama K. H, Carlom-gno L. P, Thomson S.A. // Gene 1990, 86: 153−162.
  41. Boel E, Hjort I, Svensson B, Norris F, Norris K.E. and Fiil N.P. Glucoa-mylases Gi and G2 from Aspergillus niger are synthesized from two different but closely related mRNAs//The EMBO Journal, 1984, vol.3 no.5 pp. 1097−1102.
  42. Broekhuijsen M. P, Mattern I.E., Contreras R, Kinghorn J. R, van den Hon-del C.A.M.J.J.//J. Biotechnol. 1993, 31: 135−145.
  43. Clamp J. R, Dawson G, Spragg B. P. //Biochem. J, 1968,106, 16 P.
  44. Cunningham E.B. Biochemistry: Mechanism of Metabolism. New York: McGrow-Hill, Inc., 1978.
  45. De Vries R. P, Visser J. Aspergillus Enzymes Involved in Degradation of Plant Cell Wall Polysaccharides/ZMICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY REVIEWS, 2001, Vol. 65, No. 4, p. 497−522.
  46. Devis P.V. Disc electrophoresis. 11 methods and application to human serum proteins .//Ann. N.Y. Acad. Sci, 1964, v. 121, p. 404−427.
  47. Dubey A. K, Suresh C, Kavitha R, Karanth N. G, Umesh-Kumar S. Evidence that the glucoamylases and K-amylase secreted by Aspergillus nigerare proteolytically processed products of a precursor enzyme// FEBS Letters 471 (2000) 251−255.
  48. Errat J.A., Douglas P.E., Moranelli F., Seligy V.L. The induction of alpha-amylase by starch in Aspergillus oryzae: evidence for controlled mRNA expression/Can. J. Biochem. Cell Biol. 1984. V. 62, P. 678−690.
  49. Faye G., Leung D.W., Tatchell K., Hall B.D., Smith M.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, 78, 2258−2262.
  50. Fernando S., Adhikari S., Chandrapal C., Murali N.//Energ.Fuel, 2006, 20, 1727−1737.
  51. L.P., Hosek R., Callan M., Joens F.T. //J. Food Technol., 1981vol. 35,38−43.
  52. Harada W., Tokuya N. Bacterial isoamylase and pullulanase.//J. Jap. Soc. Starch Sci.- 1984, 31, № 2, p. 38−47.
  53. Hayachida S., Nakamura K., Kanlayakrit W. et al.//Agr. Biol. Chem. 1989. V. 53. P. 143−149.
  54. Hayashida S., Yoshino E.//Agric. Biol. Chem., 1978, 42, 927−933.
  55. Hiromi K., Ohnishi M. Some comments about amylase classification//Ibid.-1984, 31, № 2, p. 74−82.
  56. Hiromi K., Ohnishi M., Tanaka A.//Mol. Cell. Biochem. 1983., 51, 79−95. 58. Inokuchi N., Iwama M., Takahashi T.//J. Biochem., 1982, 89, 125−134.
  57. Jamai L., Ettayebi K., El Yamani J., Ettayebi M.//Bioresour. Technol., 2007, vol. 98, 2765−2770.
  58. Kariya M., Shigemi Y., Yano M., Takii Y. Purification and properties of a-amylase from Aspergillus oryzae MIBA316// J. Biol. Macromol., 2003, 3 (2), pp. 57−60.
  59. Lineback D.R., Aira L. A., Harner R. L.//Cereal Chem., 1972, 49, 283.
  60. Lineback D.R., Russel I.J., Rasmussen C.//Arch. Biochem. Biophys., 1969, 134, 539−553.
  61. О. Н. Protein measurement with the Folin phenol reagent/Louiy O.H., HosebroughN.J. et al.//J. Biol. Chem.- 1951.- Vol. 1.- P.265−270.
  62. Maneshwari R., Bharadwaj G., Bhat M. K. Thermophilic Fungi: Their Physiology and Emymes/ZMICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY REVIEWS, 2000, Vol. 64, No. 3, p. 461−488.
  63. Manjunath P., Raghavendra Rao M. R. (1) Studies on carbohydrate moieties of Aspergillus niger glucoamylase II: Isolation, purification and characterization of glycopeptides.//J. Biosci., 1981, Vol. 3, № 4.- 333−342.
  64. Manjunath P., Raghavendra Rao M. R. (2) Studies on carbohydrate moieties of the glycoprotein, glucoamylase II of Aspergillus niger: Nature of carbo-hydratepeptide linkage and structure of oligosaccharides// J. Biosci., 1981, Vol. 3, № 4, pp. 343−360.
  65. Manjunath P., Raghavendra Rao M. R.// J. Biocsci., 1979,1, 409.
  66. Marshal L.M., van der Laar A.M., Goetheer E., Schimmelpennink E.B., Bergsma J., Beeftink H.H., Tramper J.// Biotechnol. Bioeng., 1999, 63, 344 355.
  67. Marshall R. D., Neuberger A. in Glycoproteins, their composition, structure and function (ed. A. Gottschalk), (Amsterdam: Elsevier Publishing Company), 1972, Vol. 5B, p. 732.
  68. Mashell G. Production and application of lactic acid.//Ind. Eng. Chem., 1959, 35:283−290.
  69. Matsumoto M., Fukushi O., Miyanaga M., Kakihara K., Nakajima E., Yashi-sumi M. Industrialization of non-cooking systems for alcoholic fermentation from grains. Agric. Biol. Chem., 1982, 46:1549−1558.
  70. Matsuura Y., Kusunoki M., Tanaka H. X-Ray structure and catalytic mechanism of Taka-amylase A// J. Jap. Soc. Starch Sci. 1983. 30. № 2. p. 141−147.
  71. McCleary B.V., Anderson M.A.//Carbohydr. Res., 1980, 86, 77−86.
  72. McKelvy J.F., Lee Y.C.//Arch. Biochem. Biophys. 1969, 132, 99−110.
  73. Meyer H.-P., Canevascini G. Separation and some properties of two intracellular beta-glucosidases of Sporotrichum (Chiysosporum) thermophile. Appl. Environ. Microbiol., 1981, 41: 924−931.
  74. Money N.P.// Exp. Mycol., 1990, 14: 234−242.
  75. Montgomery R. in Glycoproteins, their composition, structure and function (ed. A. Gottschalk). Amsterdam: Elsveir Publishing Company, 1972, Vol. 5A, p. 518.
  76. Morita Т., Kiriyama S.//J. Food Sci., 1993, vol. 58, 1393−1396.
  77. Mount, S.M.//Nucleic Acids Res., 1982, 10, 459−472.
  78. Nigam P., Singh D. Enzyme and microbial systems involved in starch proc-essing.//Enzyme Microb. Technol., 1995, 17: 770−778.
  79. Nishio N., Tai K., Nagai S. Hydrolase production by Aspergillus niger in solid state cultivation. European Journal Microbiology and Biotechnology, 1979, 8:263−270.
  80. Noda Т., Furuta S., Suda I.//Carbohyd. Polym., 2001, vol. 44, 189−195.
  81. A. //Starch-Starke, 1995, 47, 439−445.
  82. Pazur J.H., Knull H.R. Cepure A.//Carbohydr. Res., 1971, 20, 83−96.
  83. Raimbault M. General and microbiological aspects of solid substrate fermentation. REVIEW ARTICLE// EJB Electronic Journal of Biotechnology Vol.1 No.3, Issue of August 15, 1998.
  84. Reilly P.J.//Appl. Biochem. Bioeng. 1979, 2, 185−206.
  85. Sharon, N.//Scientific American, 1974, 230, 78.
  86. Shaw J.F. Production of high-maltose syrup and high-protein byproduct from materials that contain starch and protein by enzymatic process US Patent 5,312,739, TW Patent 19 742, 1994.
  87. Shaw J.F., Sheu J.R.//Biosci. Biotech. Biochem. 1992, vol. 56, 1071−1073.
  88. Shewale S.D., Pandit A.B.//Carbohyd. Res., 2007, vol. 342, 997−1008.
  89. Shimke R.T. Control of enzyme levels in mammalian tissues// Achv. Enzy-mol. 1973, v. 37, p. 135−137.
  90. Solovicova A., Gasperik J., Hostinova E.//Biochem. Biophys. Res. Com-mun. 1996, 224, 790−795.
  91. Spiro R.G.//Ann. Rev. Biochem., 1970, 39, 599
  92. Spiro, R.G.//Adv. Protein Chem., 1973, 27, 350.
  93. Stein, E.A., Junge, J.M., Fischer, E.H.// J. Biol. Chem., 1960, vol. 235, #2 pp. 371−378.
  94. Stewart G.G., Russel I. The interface between technology and economics. In: Dansky J.P., Wolnak B. (eds) Enzymes: modern brewery biotechnology. New York: Dekker, 1978.- pp 335−381.
  95. Stoffer В., Frandsen T.P., Busk P.K. et.al. Production, purification and characterization of the catalytic domain of glucoamylase from Aspergillus niger //Biochem. J. 1993. V. 292. P. 197 202.
  96. Sugama S., Okazaki N. Growth estimation of Aspergillus oryzae cultured on solid media. Journal of Fermentation Technology, 1979, 57: 408 412.
  97. Suresh C., Dubey A.K., Srikanta S., Umesh Kumar S., Karanth N.G. Characterization of a starch-hydrolyzing enzyme of Aspergillus ni-ger//Appl. Microbiol. Biotechnol. 1999 V. 51, P. 673−675.
  98. Svensson В., Larsen K., Svendsen I., Boel E.// Carlsberg Res. Com-mun., 1983,48, 529−544.
  99. Svensson В., Pedersen T.G., Svendsen I., Sakai Т., Ottesen M.//Carlsberg Res. Commun., 1982, 47, 55−69.
  100. Takahashi Т., Inokuchi N., Irie M.// J. Biochem., 1981, 89, 125−134. Takahashi et al., 1981.
  101. Takahashi Т., Tsuchida Y., Irie M.// J. Biochem., 1982, 92, 16 231 633.
  102. Troitskaya L.A., Komov V.P., Kirillova N.V. Peroxidase turnover in Ginseng Strains under Standart Conditions and Temperature Stress/J. Plant Physiol., 1999, Vol. 155. pp. 281−284.
  103. Turner P., Mamo G., Karlsson E.N.//Microb. Cell Fact., 2007, vol. 6, 1−23.
  104. S. Ohba R., Kano S. //Staerke, 1974, 26, p. 374−378.
  105. Ueda S., Zenin C.T., Monteiro D.A., Park Y.K.A. //Biotechnol. Bio-eng., 1981,23:291−299.
  106. Ueda S.//Trends Biochem. Sci., 1981, 6, 89−90.
  107. VamashitaI., Suzuki K., Fukui S. // J. Bacteriol. 1985. V. 161. № 2. P. 567- 573.
  108. Van der Veen M.E.- Veelaert S., Van der Goot A.J.- Boom R.M.//J. Food Eng., 2006, vol. 75, 178−186.113. von Heijne G.//Eur. J. Biochem., 1983, vol. 133, 17−21.
  109. К. //J. Biochem. (Tokyo), 1976, vol. 80, 379.
  110. K., Fukimbara T. (1)//Agri. Biol. Chem., 1974, vol. 38, 1643.
  111. K., Fukimbara T. (2)//Agri. Biol. Chem., 1974, vol. 38, 1973.
  112. Watanabe K., Fukimbara T.//Agri. Biol. Chem., 1975, vol. 39,1711.
  113. G., Belshaw N.J., Williamson M.P. //Biochem. J. 1992.vol. 282. part 2 P. 423 428.
  114. Wosten H.A.B., Moukha M.S., Sietsma J.H., Wessels J.G.H. //J, Gen.
  115. Microbiol., 1991, vol. 137: 2017−2023.
  116. Yoshino S, Hayashida E.//J. Ferment Technol, 1978, vol. 56, 289 295.
  117. Yould G. W, Bell G.I.//Trends Biochem. Sci. 1990, vol. 15. p.18 23.
  118. Zalkin, H, Yanofsky, C.//J. Biol. Chem., 1982, vol. 257, 1491−1500.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!