Материалы и методы

Микроорганизмы

Продуцентами пектиназы были использованы Aspergillus awamory 16 и Penicillium cyclopium. Все культуры поддерживались на агаровых косяках со средой Чапека. Посевным материалом служили суспензия спор 5−7 дневной культуры разбавленная в стерильной дистиллированной воде при концентрации спор 1,3×107 клеток/мл.

Среды

Среда Чапека содержала: NaNO₃ — 0,15 г; сахароза — 2,0 г; KH₂PO₄ — 0,1 г; MgSO₄ — 0,05 г; KCl — 0,05 г; FeSO₄ — 0,001 г на 1 литр.

Среда для Aspergillus awamory 16 содержала: глюкоза — 2 г; (NH₄)₂SO₄ — 0,15 г; MgSO₄ — 0,05 г; KCl — 0,05 г; KH₂PO₄ — 0,1 г; FeSO₄ — 0,001 г на 100 мл.

Среда для Asp.oryzae 3−9-15 содержала: сахароза — 2 г; NaNO₃ — 0,15 г; KH₂PO₄ — 0,1 г; MgSO₄ — 0,05 г; KCl — 0,05 г; FeSO₄ — 0,001 г на 100 мл.

Образование ферментов.

Для образования ферментов использовали качалочные колбы на 750 мл со 100 мл питательной среды, которую засевали суспензией спор в количестве 2 мл 5−7 дневной культуры выращенной на косяках со средой Чапека. Культивировали на качалке (280 об/мин при 28⁰С). В течении длительного времени с заменой питательной среды через каждые 3 суток и в последующее при 1−2 суток.

Определение ферментативных активностей.

Активность б-амилазы определяли двумя методами: по способности фермента производит гидролиз крахмала до конечных декстринов, не опрашивающихся йодом (в единицах АС) и по осахаривающий способности (в единицах ОС).

Определение пектолитической активности (ПкА) проводили по количеству нерасщепленного пектина до и после воздействия на него пектинрасщепляющих ферментов (ПГ и ПЛ). Количественное определение пектина основано на получении медной соли пектиновой кислоты.