Диплом, курсовая, контрольная работа
Помощь в написании студенческих работ

Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода

Диссертация: Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода
ДиссертацияПомощь в написанииУзнать стоимостьмоей работы

Актуальность проблемы. Гибель клеток в результате апоптоза — основное свойство практически всех клеток (M.D. Jacobson et al., 1997). Это обязательный процесс нормального развития органов, тканевого гомеостаза, развития нервной системы и регуляции иммунной системы. Недостаточная илк избыточная гибель клеток ведет к различным заболеваниям человека, включая злокачественные образования… Читать ещё >

Содержание

  • ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
    • 1. 1. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов
      • 1. 1. 1. Общая характеристика лимфоцитов
      • 1. 1. 2. Т-лимфоциты.151.1.3. В-лимфоциты
      • 1. 1. 4. Натуральные киллеры
    • 1. 2. Механизмы реализации апоптоза
      • 1. 2. 1. Определение, морфологические признаки, физиологическое значение апоптоза
      • 1. 2. 2. Пути реализации апоптоза
      • 1. 2. 3. Регуляторы апоптоза
    • 1. 3. Структурно-функциональные фотомодификации лимфоцитарных клеток .361.4. Активные формы кислорода: механизмы образования, свойства, утилизация, биологическая роль
  • ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТ
  • ГЛАВА 2. Объект и методы исследования
    • 2. 1. Объект исследования
    • 2. 2. Методы исследования
      • 2. 2. 1. Выделение лимфоцитов из крови доноров
      • 2. 2. 2. Определение жизнеспособности клеток
      • 2. 2. 3. Определение уровня экспрессии Fas-рецепторов лимфоцитов методом иммуноферментного анализа
      • 2. 2. 4. Определение уровня цитохрома с в лизатах лимфоцитов при помощи метода иммуноферментного анализа
      • 2. 2. 5. Определение уровня р53 в лизатах лимфоцитов при помощи метода иммуноферментного анализа
      • 2. 2. 6. Определение активности каспазы-3 лимфоцитов при помощи флуоресцентного метода
      • 2. 2. 7. Выделение ДНК из лимфоцитов и исследование ее структурных свойств методом электрофореза в агарозном, геле
      • 2. 2. 8. Исследование структурного состояния ДНК методом ДНК-комет
      • 2. 2. 9. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов
      • 2. 2. 101. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитов при помощи метода флуоресцентных зондов
      • 2. 2. 11. УФ-облучение исследуемых образцов
      • 2. 2. 12. Системы генерации активных форм кислорода
      • 2. 2. 13. Статистическая обработка результатов
  • ГЛАВА.
    • 3. Исследование рецепторного- каспазозависимого пути апоптоза лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм, кислорода
      • 3. 1. Исследование жизнеспособности лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода
      • 3. 2. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и активных форм кислорода
        • 3. 2. 1. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия УФ-света
        • 3. 2. 2. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия активных форм кислорода
      • 3. 3. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и генерации активных форм кислорода
        • 3. 3. 1. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после воздействия УФ-света
        • 3. 3. 2. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции^ лимфоцитов человека после генерации активных форм кислорода*
      • 3. 4. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода
        • 3. 4. 1. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения
        • 3. 4. 2. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия активных форм кислорода
  • ГЛАВА 4. Исследование р53-зависимого > пути- апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных кислородных метаболитов
    • 4. 1. Структурные модификации ДНК лимфоцитов человека в динамике развития- апоптоза, индуцированного воздействием УФ-излучения и' активных форм кислорода
      • 4. 1. 1. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-света, методом электрофореза в агарозном геле
      • 4. 1. 2. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов, модифицированных воздействием- активных форм кислорода, методом электрофореза в агарозном геле
      • 4. 1. 3. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов. человека при помощи метода ДНК-комет
        • 4. 1. 3. 1. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света, при помощи метода ДНК-комет.ИЗ
        • 4. 1. 3. 2. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов человека, модифицированных воздействием пероксида водорода, при помощи метода ДНК-комет
    • 4. 2. Изменения уровня р53 в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм кислорода
  • ГЛАВА 5. Исследование митохондриального пути апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода
    • 5. 1. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и активных форм кислорода
      • 5. 1. 1. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран УФ-облученных лимфоцитов человека
      • 5. 1. 2. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран после модификации лимфоцитов активными формами кислорода
    • 5. 2. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм кислорода
      • 5. 2. 1. '. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света
      • 5. 2. 2. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека. модифицированных воздействием пероксида водорода

Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода (реферат, курсовая, диплом, контрольная)

Актуальность проблемы. Гибель клеток в результате апоптоза — основное свойство практически всех клеток (M.D. Jacobson et al., 1997). Это обязательный процесс нормального развития органов, тканевого гомеостаза, развития нервной системы и регуляции иммунной системы. Недостаточная илк избыточная гибель клеток ведет к различным заболеваниям человека, включая злокачественные образования, дегенеративные заболевания, иммуноде-фицитные состояния (С.В. Thompson, 1995). Высокая степень координации и стереотипность процессов индуцированной гибели клеток свидетельствуют о том, что клетки активируют типовую программу гибели, к которой сводятся разнообразные пути сигнальной трансдукции (A.M. Chinnaiyan, V.M. Dixit, 1996; E. White, 1996; J. Yang, 1997).

К настоящему времени накоплены обширные сведения о типах программированной клеточной гибели, ее морфологических проявлениях, путях реализации, основных «участниках» и регуляторах апоптоза (Е.Б. Владимирская, 2002).

Вместе с тем отсутствуют детальные представления о взаимосвязи отдельных этапов программированной клеточной смерти, составляющих ее основные независимые фазы: инициацию, эффекторную фазу и деградацию, и оценке их временных характеристик. Не менее значимыми представляются вопросы, касающиеся изучения способов инициации различных путей апоптоза (рецепторопосредованного, митохондриального, каспазонезависимого и др.), выяснения точек («сайтов») их интеграции и возможности целенаправ: ленного регулирования процессов клеточной гибели при помощи физико-химических агентов.

Поскольку апоптоз — физиологическое явление, то в организме должны быть факторы, приводящие к ПКГ. В настоящее время известно, что таковыми могут быть как внутриклеточные сигналы, так и внешние, опосредующие свое действие через рецепторные системы, которые сами по себе не являются токсическими или деструктивными. Это могут быть неспецифические факторы, такие как температура, токсические агенты, оксиданты, свободные радикалы, гаммаи УФ-излучение, бактериальные токсины и др. Во всех этих случаях происходит индукция апоптоза, но при увеличении дозы соответствующего агента развивается некроз клетки (Т.А. Ушакова и др., 2004).

УФ-свет известен как потенциальный индуктор апоптоза в различных типах клеток (И.Ф. Донская и др., 1997). Показано, что УФ-свет может индуцировать апоптоз в клетках некоторых лимфоидных линий. Известно, что апоптоз иммунокомпетентных клеток в условиях УФ-В-излучения запускается С095(РаБ/Аро-1)-рецепторно/лигандной системой (R. Caricchio et al., 1998). Однако молекулярные механизмы этого процесса и последовательность начальных этапов развития клеточной гибели в условиях облучения изучены далеко не полностью. Остаются открытыми вопросы, касающиеся выявления способов запуска различных путей реализации апоптоза в условиях воздействия УФ-света.

Особое внимание в последние годы уделяется изучению роли активированных кислородных метаболитов в развитии апоптоза. Известно, что программированная гибель клеток, как правило, сопровождается образованием значительного количества активных форм кислорода. В то же время АФК способны инициировать апоптоз в различных типах клеток (О.Ю. Плетюш-кина и др., 2006). Показано (В.В. Новицкий и др., 2008), что интенсификация внутриклеточной продукции АФК связана с вовлечением митохондриального и TNFR (tumor necrosis factor гесер! ог)-опосредованного путей. Однако, несмотря на очевидную взаимосвязь окислительного стресса с апоптозом, роль АКМ в саморазрушении клеток неясны (Н.К. Зенков и др., 1999).

В связи с вышеизложенным нами были исследованы механизмы и последовательность этапов программированной клеточной гибели лимфоцитов крови доноров в условиях воздействия УФ-света и активных форм кислорода.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью работы явилось выявление путей реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240−390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода). Задачи работы предусматривали:

1. Исследование изменений уровня экспрессии мембранных рецепторов смерти CD95 (Fas) лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и АФК.

2. Исследование изменений функциональной активности эффекторной* каспазы-3 лимфоцитов доноров после УФ-облучения клеток и генера1 ции АФК.

3. Изучение структурных модификаций ДНК лимфоцитов человека в динамике развития апоптоза, индуцированного воздействием УФ-излучения и АФК.

4. Исследование изменений уровня белка р53 в лимфоцитах доноров после У Ф-облучения* клеток и генерации АФК.

5. Исследование изменений уровня цитохрома с в цитозоле и структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитарных клеток после воздействия УФ-света и АФК.

Научная новизна. Впервые изучены изменения структурного состояния ДНК, уровня экспрессии мембранного Fas-рецептора, функциональной активности каспазы-3, концентрации белков р53 и цитохрома с лимфоцитарных клеток человека в динамике развития апоптоза, индуцированного воздействием УФ-света (240−390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода). Установлено, что УФ-свет и АФК индуцируют фрагментацию ДНК лимфоцитов после 20 ч инкубации модифицированных клеток. Показано, что в течение 1 -5 ч после воздействия.

УФ-света и АФК на лимфоциты наблюдается повышение уровня экспрессии мембранных Fas-рецепторов смерти по сравнению с интактными клетками. Обнаружено увеличение функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов через 4 ч после генерации синглетного кислорода, гидроксильного радикала и добавления пероксида водорода, а также через 8и24и6и8ч после УФ-облучения клеток соответственно в дозах 151 и 1510 Дж/м. С использованием метода ДНК-комет выявлено, что повреждения ДНК (двунитевые разрывы) появляются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020.

— О {л.

Дж/м" и добавления пероксида водорода в концентрации 10″ моль/л (кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ). Установлено, что через 6 ч после воздействия пероксида водорода и УФ-света в дозах 1510 и 3020 Дж/м" на лимфоциты происходит повышение уровня р53 в исследуемых клетках. Сделано заключение о ведущей роли рецепторопосредованного (Fas-зависимого)* каспазного и р53-зависимого путей в реализации апоптоза лимфоцитов, индуцированного воздействием УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м и пероксида водорода (10″ моль/л). Предложена схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.

Практическая значимость. Теоретические положения диссертационной работы углубляют современные представления о путях и механизмах реализации апоптоза иммунокомпетентных клеток человека, индуцированного воздействием физико-химических факторов. Они могут быть использованы для разработки способов целенаправленного управления программами жизнедеятельности клеток организма при патологических состояниях, связанных с усилением или ослаблением процессов клеточной гибели. Результаты работы используются в учебном процессе Воронежского государственного университета при проведении занятий по дисциплинам «Биофизика», «Биофизика мембран», «Физико-химические основы межклеточных взаимодействий», «Медицинская биохимия и биофизика», а также в ходе выполнения магистерских и дипломных работ студентами кафедры биофизики и биотехнологии.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005) — 3-й Международной конференции ИНТЕРНАС-2007 «Актуальные проблемы современного естествознания» (Калуга, 2007) — 15-ой Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2008» (Москва, 2008) — Международной научной конференции «Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем» (Беларусь, Минск,.

2008) — 5-ом съезде Российского фотобиологического общества «Преобразование энергии света при фотосинтезе» (Пущино, 2008) — 6-ом Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008). на Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2009» (Москва, 2009) — Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж,.

2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 статей и 8 тезисов, в том числе 2 статьи в журнале системы РАН.

На защиту выносятся следующие положения:

1. В реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240−390 нм) в дозах 151, 1510 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетногб кислорода) ведущая роль принадлежит рецепторопосредованному кас-пазному и р53-зависимому путям. л.

2. В условиях УФ-облучения лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м осуществляются рецепторопосредованный без участия каспазы-3, р53зависимый и каспазонезависимый пути инициации программированной клеточной гибели.

3. Гибель лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света и Н2С>2 происходит через промежуточное состояние С1 с образованием высокомолекулярных фрагментов ДНК (> 300 т.п.н.) и состояние С2, характеризующееся наличием фрагментов ДНК (< 50 т. п.н.) до состояния СЗ, характеризующегося межнуклеосомной фрагментацией ДНК (Nxl80 п. н.).

4. Схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптоти-ческой гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа включает 172 страницы машинописного текста, 4 таблицы, 50 рисунков. Состоит из «Введения», 5 глав, «Заключения», «Выводов» и «Приложения».

Список литературы

содержит 240 источников, из них 88 — отечественных и 152 — зарубежных.

ВЫВОДЫ.

1. Установлено, что в течение 1−5 ч после воздействия УФ-света (240−390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода) наблюдается повышение уровня экспрессии мембранных рецепторов смерти — Fas (CD95) — по сравнению с таковым для интактных клеток.

2. Показано, что увеличение уровня экспрессии CD95 лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-излучения в использованных дозах и пероксида водорода в концентрации 10″ 6 моль/л, обусловлено демаскированием ранее скрытых (предсуществующих) и синтезом новых молекул Fas-рецепторов. Экзогенная генерация в исследуемых образцах синглетного кислорода, супероксидного анион-радикала и гидроксильного радикала индуцировала демаскирование ранее недоступных молекул CD95 лимфоцитарных мембран.

3. Обнаружено повышение функциональной активности эффекторной каспазы-3 по отношению к контролю через 8 и 24 ч- 6 и 8 ч- 4 ч соответственно после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 151- 1510 Дж/м" - воздействия АФК (синглетного кислорода, пероксида водорода, гидроксильного радикала).

4. Выявлена фрагментация ДНК лимфоцитов через 20 ч после воздействия УФ-света в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода).

5. Установлено, что повреждения ДНК (двунитевые разрывы) появляются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020 Дж/м и добавления пероксида водорода в концентрации 10″ 6 моль/л (кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ).

6. Обнаружено, что гибель лимфоцитов по типу апоптоза в условиях воздействия УФ-света и пероксида водорода происходит через промежуточные состояния С1 и С2 с образованием соответственно высокомолекулярных фрагментов ДНК размером > 300 т.п.н. и фрагментов размером < 50 т.п.н. до состояния СЗ, характеризующегося межнуклеосомной фрагментацией ДНК (Nxl80 п.н.).

7. Показано, что через 6 ч после облучения клеток в дозах 1510 и 3020 Дж/м и воздействия пероксида водорода наблюдается повышение уровня белка р53 по сравнению с таковым для интактных лимфоцитов.

8. Увеличение внутриклеточной концентрации цитохрома с по отношению к контролю зарегистрировано через 1,5 ч после УФ-облучения лимфоцитов в дозе 151 Дж/м .

9. Нарушения структурного состояния митохондриальных мембран обнаружены после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м", синглетного кислорода и пероксида водорода.

10. Выявлена ведущая роль рецепторопосредованного каспазного и р53: зависимого путей в реализации апоптоза лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м и активных форм кислорода, в частности, пероксида водорода.

11 .Постулируется возможность инициации рецепторопосредованного без участия каспазы-3, р53-зависимого и каспазонезависимого путей.

2 i апоптоза в условиях УФ-облучения лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м .

12. Предложена схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

При помощи методов иммуноферментного анализа, люминесценции, электрофореза в агарозном геле, ДНК-комет исследованы путиреализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240−390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикалапероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода).

Обнаружено повышение по отношению к контролю уровня экспрессии мембранных рецепторов* апоптотических сигналов CD95 лимфоцитов, суспендированных в питательной среде RPMI-16 401 и растворе Хенкса, в течение 1−5 ч после УФ-облучения клеток в использованных дозах. Установлено, что' увеличение экспрессии Fas-рецепторов^ лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-света, в растворе Хенкса связано не только с демаскированием ранее недоступных (скрытых) молекул CD95, но и с синтезом их новых молекул через 4 и 5 после облучения иммуноцитов. Показано, что динамика исследуемого5 параметра суспензии лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света. обусловлена изменением уровня5 Fas-рецепторов Т-клеток.

Обнаружено повышение уровня функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека по отношению > к, таковому для интактных образцов через 8и24чи6и8ч соответственно после облучения клеток в дозах 151 и.

О О.

1510 Дж/м". УФ-модификация лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м" индуцирует инактивацию каспазы-3.

Установлено, что после 20 ч инкубации лимфоцитов, УФ-облученных в л дозах 151, 1510,' 3020 Дж/м (, происходит фрагментация ДНК, на что указывает совокупность полос («апоптозная лестница») на электрофореграмме, соответствующая фрагментам ДНК меньшего* размера по сравнению с контролем.

Повреждения ДНК (двунитевые разрывы) обнаруживаются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020 Дж/м2 (ДНК-кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ). Вероятно, двунитевые разрывы ДНК являются сигналом к запуску апоптоза, осуществляющегося с участием транкрипционного фактора р53, проапоптозного белка Вах и других митохондриальных факторов апоптоза. Изменения структурного состояния митохондриальных мембран были обнаружены нами после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м" .

Через 20 ч после облучения лимфоцитов в дозе 151 Дж/м обнаружены фрагменты ДНК с размерами 6000 п.н. и менее 1500 п.н. Использование метода ДНК-комет в этих условиях позволило выявить кометы класса С2, характерные для предапоптотических клеток (фрагменты ДНК < 50 т.п.н.).

Через 20 ч после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозе 1510 Дж/м зарегистрировано образование фрагментов ДНК менее 1500 п.н. и ДНК-комет СЗ-класса, что указывает на межнуклеосомную фрагментацию ДНК, характерную для погибающих клеток.

Через 20 ч после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозе 3020 Дж/м" обнаружены фрагменты ДНК размером примерно 5000 п.н. и менее 1500 п.н., кометы СЗи С4-классов. В этих же условиях наблюдалась инактивация каспазы-3. По-видимому, эти результаты указывают на возможность реализации р53-зависимого пути апоптоза, сопровождающегося выходом из митохондрий AIF — фактора, индуцирующего апоптоз, и индукцией каспазонезависимого пути программированной клеточной смерти. В то же время ингибирование каспаз и снижение уровня АТФ в клетке могут приводить к блокированию фазы деградации апоптоза, переходу апоптоза во вторичный некроз.

Предположение о возможности участия р53 в осуществлении апоптоза лимфоцитов было подтверждено нами после обнаружения (по сравнению с интактными иммуноцитами) более высокого уровня этого белка через 6 ч «после облучения клеток в дозах 1510 и 3020 Дж/м2.

На основании результатов определения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов через 1,5 и 4 ч после УФ-облучения клеток предполагается* возможность участия цитохрома с в осуществлении программированной клеточной смерти лимфоцитов человека, индуцированной воздействием УФ-света в минимальной из использованных доз (151 Дж/м).

Полученные нами результаты позволили сделать заключение о ведущей роли рецепторопосредованного (Fas-зависимого) каспазного пути в реализации апоптоза лимфоцитов после воздействия УФ-света в дозах 151 й 1510 Дж/м~ (рис. 50). УФ-облучение индуцирует активациюг мембранных рецепторов смерти CD95, что приводит к запуску каспазного каскадаи активации эффекторной каспазы-3, следствием чего является фрагментация ДНК. Через 6 ч после облучения клеток, когда выявляется, максимальный уровень повреждений ДНК и рост количества р53 в лимфоцитах по сравнению с контрольными образцами, дополнительно запускается р53-зависимый путь программированной клеточной! смерти, также завершающийся фрагментацией ДНК. В случае УФ-облучения исследуемых клеток в дозе 3020 Дж/м" можно предположить участие рецепторопосредованного без участия каспазы-3 (с участием каспазы-12), р53-зависимого и каспазонезависимого путей реализации1 апоптоза лимфоцитов.

Нельзя исключить и роль ионов кальция в инициации апоптоза (рис. 50), так как обнаружено (М.А. Наквасина и др., 2008)" повышение внутриклеточной концентрации этого иона1 после УФ-облучения лимфоцитов.

При исследовании структурно-функциональных модификаций лимфоцитов человека в динамике развития" апоптоза, индуцированного воздействием АФК, выявлено повышение по сравнению с контролем уровня экспрессии Fas-рецепторов иммуноцитов, суспендированных в среде RPMI-1640, растворе Хенкса, а также их Т-клеточной суспензии.

Через 4 ч после генерации синглетного кислорода, гидроксильного радикала и добавления пероксида водорода к лимфоцитам наблюдалось повышение функциональной активности каспазы-3 по отношению к таковому для контрольных образцов.

После 20 часов инкубации лимфоцитов, модифицированных воздействием пероксида водорода (10*6 моль/л) происходит образование фрагментов ДНК, размеры которых составляют 1500−4000 п. н. После обработки лимфоцитов раствором пероксида водорода наблюдали образование комет класса С1, через 6 и 20 ч инкубации модифицированных клеток соответственно — комет С2/СЗ и СЗ/С4 классов. Наибольший объем, повреждений ДНК приходился на время 6 ч после обработки лимфоцитов Н2О2. Через 6 ч регистрировали также повышение уровня р53 в лимфоцитах, модифицированных воздействием пероксида водорода.

Следовательно, полученные результаты свидетельствуют в пользу представления о реализации рецепторопосредованного. каспазного и р53-зависимого путей апоптоза лимфоцитов в условиях воздействия АФК и, в частности, пероксида водорода. По-видимому, структурно-функциональные модификации-лимфоцитов под влиянием АФК вносят определенный вклад в. реализацию последовательности внутриклеточных событий, приводящих к программированной клеточной смерти иммуноцитов в условиях воздействия УФ-света.

Освобождение (мобилизация) Fas-L.

Активация фосфоинозитидного пути передачи информации.

Повышение уровня Са2+ в цитозоле.

Активация каспазы-12.

УФ-свет.

Плазматическая мембрана лимфоцита.

Активация Fas (демаскирование, синтез de novo).

Запуск рецепторного пути апоптоза.

Активация каспаз (в т.ч. каспазы-3).

Образование радикальных соединений (в т. ч. АФК).

ДНК 1.

Образование разрывов ДНК.

Сенсорные белки.

Активация киназы ATM.

Трансактивация Fas.

Активация Вах.

Каспазонезависимый путь апоптоза.

Экспрессия генов PIG Репрессия гена Bcl-2.

Оксидативный стресс.

Изменения структурного состояния митохондриальных мембран.

Выход AIF.

Выход цитохрома с.

Повышение уровня цитохрома с.

Цитохром-с Снижение независимый <�— уровня путь апоптоза цитохрома с.

Рис. 50. Схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения: > - через промежуточные стадииL -1 — вклад автора (результаты собственных исследований).

Показать весь текст

Список литературы

  1. Апоптоз клеток Hela и антиапоптозное действие онкобелка Bcl-2 не зависят от дыхания и мембранного потенциала митохондрий / J1. А. Щепина и др. // Биохимия. 2002. — Т. 67, вып. 2. — С. 265−270:
  2. В.Г. Оптические методы анализа интактных й модифицированных биологических систем / В. Г. Артюхов, О. В. Путинцева. — Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. 240 с.
  3. АртюховВ.Г. Структурно-функциональное состояние биомембран и межклеточные взаимодействия / В. Г. Артюхов, М. А. Наквасина. Воронеж. -2008. — 156 с.
  4. А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А. Ю. Барышников, Ю. В. Шишкин. М.: Эдитореал УРСС, 2002. — 320 с.
  5. Л. Б- Медицинская- микробиология, вирусология, иммунология / Л. Б. Борисов. М.: Медицинское информационное агентство, 2001. — 736 с.
  6. Бра М. Митохондрии в программированной гибели клетки: различные механизмы гибели / М. Бра, Б. Квинан, С. А. Сузин // Биохимия. 2005. — Т. 70, вып. 2.-С. 284−293.
  7. .Д. Молекулярные и клеточные аспекты иммунологического рас-познвания / Б. Д. Брондз, О. В. Рохлин. — М.: Наука, 1978. — 336 с.
  8. Влияние ультрафиолетового света и дексаметазона на функциональные свойства лимфоцитов и нейтрофилов В. Г. Артюхов и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2005. — Т. 45, № 2. — С. 196−200.
  9. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н. К. Зенков и и др. // Успехи современной биологии. 1999. — Т. 119, № 5. — С. 440−450.
  10. Е.В. Влияние УФ-облучения в терапевтической дозе и УФ-облученной крови на пролиферативную и рецепторную- активность ауто-логичных лимфоцитов / Е. В. Волгарева // Цитология. 1991. — № 9. — С~ 59.-
  11. Е.В. Влияние УФ-облучения и УФ-облученной аутологичной крови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека / Е. В. Волгарева, А. П. Волгарев, К. А. Самойлова // Цитология. — 1990. -№ 12.-С. 1217−1223.
  12. Н.Н. Влияние супероксидного радикала на пролиферацию лимфоцитов, стимулированную митогеном / Н. Н. Вольский, Н. В. Кашлакова, В. А. Козлов // Цитология. — 1988. — Т. 30, № 7. — С. 898—902.
  13. В.Г. Иммунология / В. Г. Галактионов. М.: Изд-во МГУ, 1998.-480 с.
  14. И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула / И. А. Гамалей, И. В. Клюбин // Цитология. 1996. — Т. 38, № 12. — С. 1233−1247.
  15. Е.А. Структурно-функциональное состояние иммуноцитов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной-системы в условиях УФ-облучения: дис.. канд. биол. наук / Е. А. Двурекова. — Воронеж, 2005.-208 с.
  16. Е.В. Модуляция структурно-функциональных изменений- мемт бран Т- и В-лимфоцитов крови человека некоторыми химическими и физическими агентами: дис.. канд. биол. наук / Е. В. Дмитриев. — Воронеж, 2003. — 161 с.
  17. Иммунология / Е. С. Воронин и др.- Под ред. Е. С. Воронина. — М.: Колос-Пресс, 2002 .- 405 с.
  18. И. А. Клиническая гематология / И. А. Кассирский, Г. А. Алексеев. М.: Медгиз, 1955. — С. 61−88.
  19. С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С. А. Кетлинский // Иммунология. — 2002. — N22. С. 77−79.
  20. Клинико-иммунологические параллели при лечении больных аутотранс-фузией УФ-облученной крови / А. Ф. Гаврилова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на- организм человека и животных. Л., 1986. — С. 74−79.
  21. И.А. Исследование структурно-функционального состояния Т-лимфоцитов крови человека при модификации а-интерфероном. и в условиях УФ-облучения: Автореф. дис.. канд. биол. наук / И. А. Колтаков. — Воронеж, 2007. 24 с.
  22. В.А. Хемилюминесцентные методы в оценке свободноради-кальных реакций / В. А. Косолапов, О. В. Островский, А. А. Спасов // Клин, и лаб: диагност. 1999. — № 9. — С. 41.
  23. Красновский^А.А. Синглетный молекулярный кислород: механизмы образования и пути дезактивации в фотосинтетических системах / А.А. Крас-новский // Биофизика. — 1994: — Т. 39, вып. 2. — С. 236—250.
  24. В.А. Электронно-микроскопическое исследование поверхности необлученных и УФ-облученных лимфоцитов крови человека / В. А. Крыленков, М. С. Брудная, Я. Ю. Комиссарчик // Цитология. — 1983. Т. 25, № 4.-С. 476−481.
  25. Е. М. сАМФ-зависимая сигнальная трансдукциЯ|В контроле активации Т-лимфоцитов / Е. М. Куклина, С. В. Ширшев // Биохимия, 2000. — Т. 65, вып. 6.-С. 741−752.
  26. А .Я. Молекулярная иммунология / А. Я. Кульберг. — М.: Высш. шк., 1985.-287 с.
  27. М.П. Участие протеаз в апоптозе / М. П. Куцый, Е. А. Кузнецова,
  28. A.И. Газиев // Биохимия 1999: — Т. 64, № 2. — С. 149−163.
  29. Лимфоциты: методы / Под ред. Дж. Клауса. — М.: Мир, 1990 — 395 с.
  30. И.А. Индукция и подавление апоптоза в тимоцитах крысы ультрафиолетовым облучением / И. А. Лонская, В. Н. Афанасьев, В. А. Печатников // Биофизика. 1997. — Т.42, вып. 3. — С. 680−685.
  31. Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т-лимфоцитов / Е. А. Мартынова // Биохимия. 1998. -Т.63, № 1. — С. 122−132.
  32. А.Н. Реактивность и медиаторные функции интестинальных эпителиоцитов в системе мукозального гомеостаза / А. Н. Маянский, И. В: Маянская // Иммунология. 2004. — № 3. — С. 185−192.
  33. Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е. Б. Меныци: кова, Н. К. Зенков // Успехи современной биологии. — 1997. — Т. 117, вып. 2.-С. 155−157.
  34. Е.А. Модуляция физико-химическими- агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека: дис.. канд. биол. наук / Е. А. Михилева. Воронеж, 2006. — 20 Г с.
  35. Модуляция апоптоза мононуклеаров в условиях окислительного стресса /
  36. B.В. Новицкий, и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. — Т. 45, № 3.-С. 251−254.
  37. Молекулярная биология клетки: В 5 т. / Б. Албертс, Д- Брей, Дж. Льюис, М. Рэфф, К. Роберте, Дж. Уотсон — Пер. с англ. под ред. Р. П. Георгиева. — М.: Мир, 1986.
  38. Н.К. Взаимодействие «гидрофобной пробы» 1-анилин-8-нафталинсульфоната с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой / Р.А.
  39. Асриянц // Доклады АН СССР.-1971.-Т. 199,№ 2.- С. 474−477.
  40. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. Е. Б. Меньшикова и др. М.: Слово. — 2006. — 556 с.
  41. А.Н. Активированные формы кислорода и их роль в организме / А. Н. Осипов, О. А. Азизова, Ю. А. Владимиров // Успехи биол. химии. -1990.-Т. 31.-С. 180−208.
  42. Пероксид водорода, образуемый внутри митохондрий- участвует в neper даче апоптозного сигнала от клетки к клетке / О. Ю. Плетюшкина и др. // Биохимия. 2006. — Т. 71, № 1, С. 75−84.
  43. Р.В. Иммунология / Р. В. Петров. М.: Медицина, 1987. — 416 с.
  44. Пол У. Иммунология: в 3 т. / У. Пол, А. Сильверстайн, М. Купер и др.- перевод* с англ. Т. И. Власик- под ред. У. Пола.-М.: Мир, 1987-Т. 1. 476 с.
  45. Практикум по иммунологии / И. А. Кондратьева и др.- Подг ред. И. А. Кондратьевой, В. Д. Самуилова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 2001. — С. 3031.
  46. С.Д. Кислород — элементарные формы и свойства / С. Д. Разумовский. -М.: Химия, 1979. 126 с.
  47. М.В. Морфология и метаболизм лимфоцитов / М. В. Робинсон, А. Б. Топоркова, В. А. Труфакин. Новосибирск: Наука, 1986. — 128 с.
  48. А. Основы иммунологии / А. Ройт / Пер. с англ. М.: Мир, 1991. — 328 с.
  49. И.Е. Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов. Автореф. дис.. канд. биол. наук. Воронеж, 2005. 23 с.
  50. К. А. Выход веществ* из лимфоцитов периферической крови человека, облученных коротковолновыми УФ-лучами / К. А. Самойлова, А. П. Миронова, Г. А. Арцишевская // Цитология. — 1984. — Т. 26, № 1. С. 102−107.
  51. В.Д. Программируемая клеточная смерть / В. Д. Самилов, А. В. Олескин, Е. М. Лагунова // Биохимия. 2000. — Т. 65, вып. 8. — С. 10 291 046.
  52. Свободные радикалы в биологии: в 2-х т. / Под ред. У. Прайора. — М.: Мир, 1979.—Т. 1. —320 с.
  53. Е.П. Биохемилюминесценция клеток при опухолевом процессе / Е. П. Сидорик, Е. А. Баглей, М. И. Данко. — Киев: Наукова думка, 1989. —г 218 с.
  54. Е.В. Субпопуляции В-лимфоцитов и их функциональная роль / Е.В. Сидорова// Успехи современной биологии. 2002. — Т. 122, № 5. — С. 467−479.
  55. Стимулирующее действие УФ-излучения на активность антител и комплемента крови человека / К. А. Самойлова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных Л., 1986. — С. 226−237.
  56. Теория и практика иммуноферментного анализа / Под ред. В. А. Егорова. М.: Высшая школа, 1991. — 288 с.
  57. В. А. Метод ДНК-комет индивидуальных клеток. Принцип и применение метода / В. А. Тронов, И. И. Пелевина // Цитология. 1996. — Т.38, № 4/5. С. 631−641.
  58. В.А. Механизм радиационной гибели лимфоцитов периферической крови человека, оцениваемой методом ДНК-комет / В. А. Тронов, Д. Г. Терещенко, М! А. Коноплянников // Биофизика. — 1998. — Т. 43, № 1. -С. 115−124.
  59. В.А. Репарация ДНК и апоптоз. / В. А. Тронов // Цитология. — 1999. -Т. 41, № 5.-С. 405−411.
  60. В.А. Репарация ДНК и гибель покоящихся лимфоцитов крови человека, индуцированные перекисью водорода / В. А. Тронов, В. М. Константинов // Биохимия. — 2000. — Т.65, вып.1. — С. 1516−1524.
  61. К.Т. Активные формы-кислорода и регуляция экспрессии генов / К. Т. Турпаев // Биохимия. 2002. — Т. 67. — С. 281−292.
  62. , А.Г. Глоба // Комбустиология, электронная версия, 2004. № 14.
  63. .Б. Опыт применения аутотрансфузии УФ-облученной крови в детской дерматологии / Б. Б. Финкельштейн, Ф. А. Зверькова, Ю.В.ч i
  64. Попов // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных. JL, 1986. — С. 122−132.
  65. Фотобиология и мембранная биофизика / Под ред. И. Д. Волотовского. —-Минск.: Технопринт, 1999. 352 с.
  66. И.С. Иммунная система и ее дефекты: руководство для врачей / И. С. Фрейдлин. — СПб: НТФФ: «Полисан», 1998. 113 с.
  67. P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г. А. Игнатьева, И. Г. Сидорович. М.: Медицина, 2000. — 432 с.
  68. P.M. Иммунология : учебник для вузов с компакт-диском: учебник для студ. мед. вузов / P.M. Хаитов. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. — 311 с.
  69. P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин- Х. И. Истамов. М.: Изд — во ВНИРО, 1995. — 219 с.
  70. А. А. Основы иммунологии : Учебник для студ. мед. вузов / А. А. Ярилин. М.: Медицина, 1999. — 606 с.
  71. A hemopoietic specific gene encoding a smallGTP binding protein is overex-pressed during T cell activation"/ L. Reibel et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1991. — V. 175. — P. 451−458.
  72. Adams JiM. The Bcl-2 Protein Family: Arbiters of Cell Survival / J.M. Adams, S. Cory // Science. 1998.- V. 281. -P. 1322−1326.
  73. Adenosine: an endogenous inhibitor of neutrophil-mediated injury to endothelial cells / B.N. Cronstein et al. // J. Clin. Invest. 1986. — V. 78. — P. 760 770.
  74. Albina J.E. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis / J.E. Albina and J.S. Reichner // Cancer and Metastasis Reviews. — 1998.-V. 17.-P. 39−53.
  75. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrite: Implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide / Beckman J.S. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. — V. 87.-P. 1620 -1624.
  76. Aravind L. The domains of death: evolution of the apoptosis machinery / L. Aravind, V.M. Dixit, E.V. Koonin // Trends Biochem Sci. 1999. — V. 24, № 2. -P. 47−53.
  77. Bandy B. Mitochondrial mutations may increase oxidative stress — Implications for carcinogenesis and aging / B. Bandy, A.J. Davison // Free Radical Biol, and Med. 1990. — V. 8. — P. 523−535.
  78. Bast A. Oxidants and antioxidants: State of the art / A. Bast, G.R.M.M. Haenen,
  79. C.J.A. Doelman // Amer. J. Med. 1991. -V. 91. — P. 2S-13S.
  80. Basu-Modak S., Tyrell R.M. Singlet oxygen: a primary effector in the ultraviolet A / near-visible light induction of the human heme oxygenase gene / S. Basu-Modak, R.M. Tyrell // Cancer Res. 1993. — V. 53. — P.4510−4550.
  81. Berki T. Photo-immunotargeting with haematoporphyrin conjugates activated by a lowpower He-Ne laser / T. Berki- P. Nemeth // Cancer Immunol, and Im-munother. 1992. — V. 35. — P. 69−74.
  82. Bokoch G.M. The role of small GTP-binding proteins in leukocyte function / G.M. Bokoch, U.G. Knaus // Curr. Opin. Immunol. 1994. — V. 6. — P. 98−105.
  83. Bossy-Wetzel E. Mitochondrial cytochrome с release in apoptosis occurs upstream of DEVD-specific caspase activation and independently of mitochondrial transmembrane depolarization / E. Bossy-Wetzel, D. D Newmeyer,
  84. D.R. Green // EMBO J. 1998.-V. 17.- P. 37−49.
  85. Cadenas E. Low-level chemiluminescence of biological systems / E. Cade-nas, A. Boveris, Bv. Chance // Methods in Enzymology. 1984. — V. 105. — P. 211−242.
  86. Caricchio R. Fas/Fas Ligand Interactions Are Involved in Ultraviolet-B-Induced Human Lymphocyte Apoptosis / R. Caricchio, E.A. Reap, P.L. Cohen // The Journal of Immunology. 1998. — V. 161. — P. 241−251.
  87. Cell Surface Trafficking of Fas: A Rapid Mechanism of p53-Mediated Apoptosis / M. Bennett et al. // Science. 1998. — V. 282. — P.290−293.
  88. Chemiluminescence determination of hydroperoxides following radiolysis and photolysis of free amino acids / S. Robinson et al. // FEBS Lett. 1998. -V. 430, № 3.- P. 297−300.
  89. Chinnaiyan A.M. The cell-death machine / A.M. Chinnaiyan, V.M. Dixit // Curr. Biol. 1996. — V. 6. — P. 555−562.
  90. Cohen G.M. Caspases: the executioners of apoptosis / G.M. Cohen // Bio-chem. J. 1997.-V. 326.-P. 1−16.
  91. Collier J. Endothelium-derived relaxing factor is an endogenous vasodilator in man / J. Collier, P. Vallanse // British. J. Pharmacol. 1989. — V. 97. — P. 639−641.
  92. Cornwell D.G. Fatty acid paradoxes in the control of cell proliferation: Prostaglandins, lipid peroxides, and cooxidation reactions / D.G. Cornwell, N. Morisaki // Free Radicals in Biology. 1984. — V. 6. — P. 96−149.
  93. Do human neutrophils form hydroxyl radical? Evaluation of an unresolved controversy / M.S. Cohen et al. // Free Radical Biol, and Med. 1988. — V. 5. -P. 81−88.
  94. Kulms D. Molecular mechanisms of UV-induced apoptosis / D. Kulms, T. Schwarz // Photodermatol Photoimmunol Photomed. 2000. — V. 16. — P. 195−201.
  95. Ashkenazi A. Death Receptors: Signaling and Modulation / A. Ashkenazi, V.M. Dixit//Science. 1998.-V.281.-P. 1305−1308.
  96. Differential requirement for caspase-9 in apoptotic pathways in vivo / R. Hakem et al. // Cell. 1998. — V. 94, № 3. — P.339−52.
  97. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function / W. Droge // Physiol. Rev. 2002. — V. 82. — P. 47−95.
  98. Dougherty T.J. Photodynamic therapy / T.J. Dougherty, S.L. Marcus // Eun J. Cancer. -1992. V. 28A. — P. 1734−1742.
  99. Dysregulated Fas and Bcl-2 expression leading to enhanced apoptosis in T-cell of multiple myeloma patients / M. Massaia et al. // Blood. — 1995. V. 85.-P. 3679−3687.
  100. Earnshaw W.C. Mammalian caspases: Structure, activation, substrates and functions during apoptosis / W.C. Earnshaw, L.M. Martins, S.H. Kaufmann // Annu. Rev. Biochem. 1999. -V. 68. — P. 383−424.
  101. Engel P. Expression of bcl-2 in fetal thymus, thymomas and thymic carcinomas. Association with p53 expression and review of the literature / P. Engel", D. Francis, N. Graem // APMIS. 1998 — V. 106. — P 449 — 455.
  102. Ermak G. Calcium and oxidative stress: from cell signaling to cell death / G. Ermak, K.J. Davies // Mol. Immunol. 2002. — V. 38, № 10. — P. 713−721.
  103. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages / V. A. Fadok et al. // J: Im Munol. 1992. — V. 148, № 7. — P. 2207−2216.
  104. Free radicals and other reactive oxygen metabolites in inflammatory bowel disease / M.L. Harris et al. // Pharmacol, and Therapy. 1992. — V. 53. — P. 375−408.
  105. Freeman B.A. Biology of disease: free radicals and tissue injury / B.A. Freeman, J.D. Crapo // Lab Invest, (1982). 47, 412−426.
  106. Frei B. Ascorbate is an outstanding antioxidant in human plasma / B. Frei, L. England, B.N. Ames//PNAS USA-1989.-V. 86.-P. 6337−6381.
  107. Goeptar A.R. Oxygen and xenobiotic reductase activities of cytochrome P450 / A.R.Goeptar, H. Scheerens, N.P. Vermeulen // Crit. Rev. Toxicol. -1995.-V. 25.-P. 25−65.
  108. Golstein P. Cell death: TRAIL and its receptors / P. Golstein // Current Biol. 1997. — V. 7. — P. R750-R753.
  109. Goldstein S. Mannitol as an OH" scavenger in aqueous solutions and in biological systems / S. Goldstein, G. Czapski // Int. J. Radiat. Biol. 1984. — V. 46. — P. 725−729.
  110. Green D. R. Apoptosis. Death deceiver / D.R. Green // Nature. 1998.-V. 396. — P. 629−630.
  111. Green D. R. Apoptotic pathways: the roads to ruin / D.R. Green // Cell. -1998.-V. 94, № 6-P. 695−698.
  112. Green D.R. Mitochondria and Apoptosis / D.R. Green, J. Reed // Science. -1998.-V. 281.-P. 1309−1312.
  113. Green D.R. T cell development: some cells get all the breaks / D.R. Green, M. Schuler // Nat. Immunol. 2000. — V. 1. — P. 15−17.
  114. Gross A. BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis / A. Gross, J. M. McDonnell, S. Korsmeyer // Genes Dev. 1999. — V. 13. — P. 1899−1911.
  115. Hamers M.N. Oxidative stress in human neutrophilic granulocytes: Host defense and self-defense / M.N. Hamers, D. Roos // Oxidative stress. 1985. — V. 145.-P. 351−381.
  116. Hansen R. p53- from inductive signal to cellular effect / R. Hansen, M. Oren // Curr. Opin. Genet. Develop. 1997. — V. 7, № 1. — P.46−51.
  117. Harman D. Free radicals theory of aging / D. Harman // Mutat. Res. 1992. — V. 275. — P. 257−266.
  118. Haunstetter A. Apoptosis: Basic mechanisms and implications for cardiovascular disease/ A. Haunstetter, S. Izumo // Circ. Res. 1998. — V. 82. — P. 1111−1129.
  119. Hengartner M. Apoptosis. Death by crowd control / M. Hengartner // Science. 1998. — V. 281.-P. 1298−1299.
  120. Huppertz B. The apoptosis cascade morphological and immunohistochemi-cal methods for its visualization / B. Huppertz, H.-G. Frank, P. Kaufmann // Anat. Embryol. — 1999. — V. 200. — P. 1−18.
  121. Imlay J.A. Assay of metabolic superoxide production in Escherichia coli / J. A. Imlay, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1991. — V. 266. — P.6957−6965.
  122. Jacobson M.D. Programmed cell death in animal development / M.D. Jacob-son, M. Weil, M.C. Raff// Cell. 1997. — V. 88. — P. 347−354.
  123. Juond A.F. Effects of oxygen intermediates on cellular functions / A.F. Juond // Amer. Revs. Respir. Dis. 1987. — V. 135. — P. S32-S34.
  124. Kanofsky J! R. Singlet oxygen production by biological systems / J.R. Kanofsky // Chem.-Biol. Interact. 1989. — V. 70. — P. 1−8.
  125. Kidd VJ. Proteolytic activities that mediate apoptosis / V.J. Kidd // Annu. Rev. Physiol. 1998. — V. 60. — P.533−573.
  126. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: contribution to the microbicidal activity of intact leukocytes / S.J. Klebanoff// Science. 1970. — V. 169. — P. 1095−1097.
  127. Koga S. Mechanism for the generation of superoxide anion and singlet oxygen during heme compound-catalyzed linoleic acid hydroperoxide decomposition / S. Koga, M. Nakano, K. Uehara // Arch. Biochem. and Biophys. — 1991. — V. 289. P. 223−229.
  128. Kohler C. Evaluation of caspase activity in apoptotic cells / C. Kohler, S. Orrenius, B. Zhivotovsky // J. Immunol. Methods. 2002. — V. 265. — P. 97 110.
  129. Koppenol W.H. The Centennial of the Fenton reaction / Koppenol W.H. // Free Rad. Biol. Med.- 1993. V. 15. — P. 645−651.
  130. Kroemer G. The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis / G. Kroemer // Nature Med. 1997. — V. 3. — P. 614−620.
  131. Kroemer G. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis / G. Kroemer, B. Dallaporta, M. Resche-Rigon // Annu. Rev. Physiol. 1998. -V. 60. P. 619−642.
  132. Kroemer G. Mitochondrial control of apoptosis / G. Kroemer, N. Zamzami, S.A. Susin. Immunol. Today. — 1997. -V. 18. P. 44−51.
  133. Krueger 312-nanometer Ultraviolet В Light (Narrow-Band UVB) Induces Apoptosis of T Cells within Psoriatic Lesions Exp / M. Ozawa et al. // Med — 1999. V. 189, № 4. — P.711−718.
  134. Krutmann J. Involvement of cytokines, DNA damage, and reactive oxygen intermediates in ultraviolet radiation — induced modulation of intercellular adhesion molecule-1 expression / J. Krutmann, M. Grewe // J. Invest. Dermatol. -1995.-V. 105.-P. 67−70.
  135. Kulms D: Molecular mechanisms of UV-induced apoptosis / D. Kulms- T. Schwarz // Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 2000. — V. 16. — P. 195−201.
  136. Kumar S. Prodomains, adaptors, oligomerization: the pursuit of caspase activation in apoptosis / S. Kumar, P.A. Colussi // Trends Biochem. Sci. 1999. -V. 24.-P. 14.
  137. Cytochrome с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade / P. Li et al. // Cell. — 1997. V. 91. P. 479−489.
  138. Liang H. Three-dimensional structures of proteins involved in programmed cell death / H. Liang, S.W. Fesik // J. Mol. Biol. 1997. — V. 274, № 3. — P. 291−302.
  139. Role of tissue glutation in prevention of surgical trauma / P.T. Liu et al. // Xenobiotica. 1993. — V. 23. — P. 899−911.
  140. Induction of the apoptotic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome с / X. Liu et al. // Cell. 1996. — V. 86. P. 147−157.
  141. Apoptosis inducing factor (AIF): a phylogenetically old, caspase-independent effector of cell death / Lorenzo H.K. et al. // Cell Death Differ.1999.-V. 6.-P. 516−524.
  142. Cytochrome с is rapidly released from the cell upon apoptosis induction: a new marker for cell death in vivo / M. Los et al. // IFES Congress, Poland, 2000.
  143. Loss of Function of Cytochrome с in Jurkat Cells Undergoing Fas-mediated Apoptosis / A. Krippner et al. //jbc online. 1996. — V. 271, № 35. — P. 2 162 921 636.
  144. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoper-oxidase/SCN7H2C>2 / E. Lovaas // Free Radical Biol, and Med. 1992. — V. 13. -P. 187−195.
  145. The Caspase-3 Precursor Has a Cytosolic and Mitochondrial Distribution: Implications for Apoptotic Signaling / M. Mancini et al. // JCB. 1998. — V. 140.-P. 1485−1495.
  146. Martin S.J. Ultraviolet В Irradiation of Human Leukaemia HL-60 Cells in Vitro Induces Apoptosis / S.J. Martin, T.G. Gotter // Int. J. Radiat. Biol. -1991. -V.59.-P. 1001−1016.
  147. McCordJ. M. Superoxide dismutase. An enzymic function for erythrocu-prein (hemocuprein) / J.M. McCord, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1969. -V. 244.-P. 6049−6055.
  148. McCaughan J.S. Photodynamic therapy: a review / J.S. McCaughan // Drugs Aging. 1999. — V. 15. — P. 49−68.
  149. Mehmet H. Apoptosis Caspases find a new place to hide / H. Mehmet // NATURE. — 2000. — V.403. — P. 29−30.
  150. Meikrantz W. Apoptosis and the cell cycle / W. Meikrantz, R. Schlegel // J. Cell. Biochem., 1995.-V.-58.-P. 160−174.167. p53 Phosphorylation: biochemical and functional consequences / G.J. Milczarek et al.//Life Sci. 1997. V. 60, № l.-P.l-ll
  151. Milner J. Structures and functions of the tumor suppressor p53 / J. Milner Pathol. Biol. (Paris). 1997. — V. 45, № 10. — P. 797−803.
  152. Moncada S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology / S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs // Pharmacol. Revs. 1991. — V. 43. -P. 109−142.
  153. Mullarkey C.J. Free radical generation by early glycation products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabetes / C.J. Mullarkey, D. Edelstein, M. Brownlee // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1990. — V. 173, № 3. P. 932−939.
  154. An induced proximity model for caspase-8 activation / M. Muzio et al. // J. Biol. Chem. 1998. — V. 273. — P. 2926−2930.
  155. Nagata S. Apoptosis by death factor / S. Nagata // Cell. 1997. — V. 88. — P. 355−365.
  156. Caspase-12 mediates endoplasmic reticulum-specific apoptosis and cytotoxicity by amyloid-b / T. Nakagawa et al. // Nature. 2000. -V. 403. — P. 98 103.
  157. Biological Sources of Reduced Oxygen Species. In: Analysis of Free Radicals in Biological Systems. / A.E. Favier et al. // eds., Basel, Boston, Berlin: Birkhauser.- 1995.-P. 11−19.
  158. Noronha-Dutra A.A. Reaction of nitric oxide with hydrogen peroxide as a model for nitric oxide-mediated killing / A.A. Noronha-Dutra, M.M. Epperlein, N. Woolf // FEBS Lett. 1993. — V. 321. — P. 59−62.
  159. Optical measurement of the catalase-hydrogen peroxide intermediate (Compound I) in the liver of anaesthetized rats and its implication to hydrogen peroxide production in situ / N. Oshino et al. // Biochem J. 1975. — V. 146, № 1. -P. 67−77.
  160. Protective role of vitamin E in biological systems / L. Parker // Am. J. Clin. Nutrition.-1991.-V. 53.-P. 150S-1055S.
  161. Perez H.D. Generation of a chemotactic lipid from arachidonic acid by exposure to a superoxidegenerating system / H.D. Perez // Inflammation. 1980. -V. 4.-P. 313−328.
  162. Perspectives on the mitochondrial permeability transition / P. Bernardi et al. // Biochim. Biophys. V. 1365. — P. 200−206.
  163. Peter M.E. Advances in apoptosis research / M.E. Peter, A. E Heufelder, M.O. Hengartner // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. — V. 94. — P. 12 736−12 737.
  164. Free radicals and inflammation: superoxidedependent activation of a neutrophil chemotactic factor in plasma / W.F. Petrone et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. — V. 77. — P. 1159−1163.
  165. Physico-chemical modeling the role of free radicals in photodynamic therapy / A. Nemeth et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. — 1999i — V. 255, № 2. -P. 360−366.
  166. Physiological production of singlet molecular oxygen in the myeloperoxi-dase-H202-chloride system / C. Kiryu et al. // FEBS Lett. 1999. — V. 443. -P. 154−158.
  167. Popov I. Photochemiluminescent detection of antiradical activity / I. Popov, G. Levin//Luminescence. 1999. -V. 14, № 3.-P. 169−174.
  168. Possible contribution of apoptosis-inducing factor (AIF) and reactive oxygen species (ROS) to UVB-induced caspase-independent cell death in the T cell line Jurkat / H. Murahashi et al. // Journal of Leukocyte Biology. 2003. -V.73. — P.399−406.
  169. Prodczacy J.J. Reduction of iodonitrotetrazolium violet by superoxide radicals / J.J. Prodczacy, R. Wei // Biochem. and Biophys. Res. Comm. 1988. — V. 150.-P. 1294−1301.
  170. Pooled analysis of p53 mutations in hematological malignancies. M. Proko-cimer et al. Hum. Mutat. — 1998.-V. 12, № l.-P. 4−18.
  171. Pryor W.A. Oxy-radicals and related species: their formation, lifetimes, and reactions / W.A. Pryor // Ann. Rev. Physiol. 1986. — V. 48. — P. 657−667.
  172. M. (1998). Cell suicide for beginners / M. Raff"// Nature. V. 396. — P. 119−122.
  173. Reed J.C. Bcl-2 family proteins and mitochondria / J.C. Reed, J.M. Jur-gensmeier, S. Matsuyama // Biochim. Biophys. Acta. 1998. — V. 1366. P. 127−137.
  174. Reed, J.C. Cytochrome c: can’t live with it -can't live without it / J.C. Reed. Cell. — 1997. — V. 91, № 5. — P. 559−62.
  175. Regulation of apoptotic protease activating factor—1 oligomerization and apoptosis by the WD-40 repeat region / Adrain C. et. al. // J. Biol. Chem. — 1999. V. 274. P. 20 855−20 860.
  176. Riley J.C.M. Oxygen radicals and reactive oxygen species in reproduction / J.C.M. Riley, H.R. Behrman // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1991. — V. 198.-P. 781−791.
  177. RGD peptides induce apoptosis by direct caspase-3 activation / C.D. Buckley et al. // Nature. V.397. — P. 534−539.
  178. Caricchio R. Fas/Fas Ligand Interactions Are Involved in Ultraviolet-B-Induced Human Lymphocyte Apoptosis / R. Caricchio, E.A. Reap, P.L. Cohen //The Journal of Immunology. 1998. — V. 161. — P. 241−251.
  179. Role of cytochrome с and dATP/ATP hydrolysis in Apaf-1-mediated'cas-pase-9 activation and apoptosis/ Y. Hu et al.'// EMBO J. 1999. — V. 18, № 18.-P. 3586−3595.
  180. Rubanyi C. M: Vascular effects, of oxygen-derived free radicals / C.M. Rubanyi // Free Radical Biol, and, Med. 1988: — V. 4. — P. 107−121.
  181. Ruoslahti R. A new way to active caspases / R. Ruoslahti, J. Reed // Nature. 1999. — V. 397. — P. 479−480.
  182. Sajithal G.B. The role of metalcatalysed oxidation in the formation of advanced glycation end products: an in vitro study on. collagen,/ G.B. Sajithal, P. Chithra, G. Chandrakasan // Free Radic. Biol'. Med. 1998. — V. 25. — P. 264 269.
  183. Saran M. Radical functions in vivo: a critical review of current concepts and hypotheses / M. Saran, C. Michel, W. Bors // Naturforsch С. 1998. — V. 53, № 3−4.-P. 210−227.
  184. Servomaa К. UV light and ionizing radiations cause programmed death of rat chlorleukemia cells by inducing retropositions of a mobile DNA element (LIRn) / K. Servomaa, T. Rytomaa // Int. J. Radiat. Biol. 1990. — V. 57, № 2. -P. 331−343.
  185. Shaw P.H. The role of p53 in cell cycle regulation / P.H. Shaw Pathol. Res. Pract. 1996. -V. 192, № 7. — P. 669−675.
  186. Singlet oxygen ('Ag 02) as the principal oxidant in myeloperoxidase-mediated bacterial killing in neutriphil phagosome / H. Tatsuzawa et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1999. — V. 262. — P.' 647−650.
  187. Sjoodin B. Biochemical1 mechanisms for oxygen free radical formation during exercise / B. Sjoodin, Y.H. Westing, E.S. Apple // Sports Med. 1990. — V. 10.-P. 236−254.
  188. Skulachev V.P. Cytochrome с in the apoptotic and antioxidant cascades / V.P. Skulachev // FEBS Lett. 1998.- V. 423.- P. 275−280.
  189. Ordering the cytochrome c- initiated caspase cascade: hierarchical activation of caspases-2,-3, — 6,-7,-8, and -10 in a caspase-9-dependent manner / E.A. Slee et ah. // J. Cell Biol. 1999. — V. 144, № 2. — P.281−292.
  190. The WD repeat: a common architecture for diverse functions / T.F. Smith et al. // Trends Biochem. Sci. 1999. — V. 24. — P. 181−185.2091 p53: prospects for cancer gene therapy / Soddu S. et al. // Cytokines Cell Mol. Ther. 1998. — V. 4,№ 3.-P. 177−185.
  191. The p53 tumour suppressor gene // Steele R.J. et al. // Br. J. Surg. 1998. -V. 85, № 11.-P. 1460−1467.
  192. Steinbeck M.J. Intracellular singlet oxygen generation by phagocytosing neutrophils in response to particles coated with a chemical trap / M. J Steinbeck, A.U. Khan, M.G. Karnovsky // J. Biol. Chem. 1992. — V. 267. — P. 1 342 513 423.
  193. Sundqvist T. Bovine aortic endothelial cells release hydrogen peroxide / T. Sundqvist//J. Cell. Physiol.-1991.-V. 148.-P. 152−156.
  194. Mitochondrial release of caspase-2 and -9 during the apoptotic process / SusinS.A. et al. //J. Exp. Med. 1999.-V. 189. — P. 381−394.
  195. Takahama U. Hydrogen peroxide-dependent generation of singlet molecular oxygen by human saliva: Its detection by chemiluminescence from a cypridina luciferin analog / U. Takahama // Photochem. and Photobiol. — 1993. V. 57. -P. 376−379.
  196. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis / R.M. Kluck // Science. 1997. — V. 275: — P. 11 321 136.
  197. The* superoxide generating system of В cell lines. Structural homology with the phagocytic oxidase and triggering' via surface Ig / F.E. Maly et al.- // J. Immunol. 1988. — V. 140. — P. 2334−2339.
  198. Thompson C. B: Apoptosis in the pathogenesis and’treatment of disease i C.B. Thompson // Science. 1995. — V. 267. — P. 1456−1462.
  199. Thombery N.A. Caspases: Enemies Within / N.A. Thombery, Y. Lazebnik // Science. 1998-.-V. 281.-P. 1312−1316.219: p53 from basic research to clinical applications / O. Tominaga et al. Crit. Rev. Oncog. 1992. — V. 3, № 3. — P. 257−282.
  200. The* fight of viruses against apoptosis / J. Tschopp et al. // Curr. Opin. Gen. Develop. 1998. — V. 8, № 1. — P. 82−87.
  201. Tumor-suppressor p53: implications for tumor development and prognosis / Kirsch D.G. et al. / J. Clin. Oncol. 1998. -V. 16, № 9. — P. 3158−3168.
  202. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radikals and blood cells in the pato-genesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia /B.S. Vanasbeck // Appl. Car-diopulm. and Pathophysiol. 1991.- V. 4.-P. 127−138.
  203. Vaux DiL. Cell death in development / D.L. Vaux, S.J. Korsmeyer // Cell. — 1999.-V. 96.-P. 245−254.
  204. Voeikov V.L. Reactive Oxygen Species, Water, Photons, and Life / Voeikov V.L.// Rivista di Biologia / Biology Forum 2001. V. 94: — P. 193−214.
  205. Walsh G. Enzymatic reaction mechanisms / C. Walsh-// W. H- Freeman and: Company, San-Francisco. 1979. — P. 978.
  206. Weisfeldt M.L. Oxygen-derived free radicals and’myocardial ischemic injury / M.L. Weisfeldt, J.L. Zweier, J.T. Flaherty // Heart Dis. 1988. — № 3. -P. 60−72.
  207. White E. Life, death and the pursuit, of apoptosis / E. White // Genes Dev. -1996. -V. 10.-P. 1−15.
  208. Wu- S. M: Mechanism of hypochlorite-mediated inactivation of proteinase inhibition by alpha 2-macroglobulin / S.M. Wu, S.V. Pizzo // Biochemistry. -1999. V. 38.-P. 13 983−13 990.
  209. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome с from mitochondria blocked / J. Yang et al. // Science. 1997.-V. 275. — P. 1129−1132.
  210. Yu B.R. Cellular defenses against damage from" reactive oxygen? species / B.R. Yu // Physiol: Revs. 1994. — V. 74. — P. 139−162.
  211. R., Travers P. // T-cell Receptors. Oxford, 1995 — P. 46−49.
  212. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3 / H. Zou et al. // Cell. -1997.-V. 90.-P. 405−413.
Заполнить форму текущей работой

На отлично!